摘要
以川芎咖啡酸-3-O-甲基转移酶基因(LCCOMT)为表达对象,将含有6*His标签的LCCOMT基因连接pET28a表达载体后转化大肠杆菌BL21,采用原核表达的方法,优化了LCCOMT基因的表达条件。结果表明:当诱导时间为4h,IPTG终浓度为2.0mmol·L-1,诱导温度为37℃时,重组LCCOMT蛋白的表达量达到最大。溶解性检测结果表明,LCCOMT重组蛋白以可溶性蛋白的形式存在,占总蛋白的9%,该试验可为LCCOMT的大规模表达纯化奠定基础。
In order to efficiently express Ligusticum chuanxiongcaffeic acid 3-O-methyltransferase（LCCOMT）in E.coli,pET28a-LCCOMT expression vector,which contained LCCOMTgene with 6＊His labels,was transformed into E.coli BL21.The expression conditions of LCCOMTgene were optimized.The results showed that when the induction time was4 hours,IPTG concentration was 2.0mmol·L^-1 and temperature was 37 ℃,the expression of LCCOMT recombinant protein might reach the maximum.Furthermore,solubility test results showed that the LCCOMT recombinant protein existed in the form of soluble protein.Therefore,this research laid a foundation for the future large-scale expression and purification of LCCOMT protein.
作者
宋婧
朱建全
张泉宝
张赶
周嘉裕
SONG Jing ZHU Jianquan ZHANG Quanbao ZHANG Gan ZHOU Jiayu(College of Life Sciences and Engineering,Southwest Jiaotong University,Chengdu,Sichuan 610031)
出处
《北方园艺》
CAS
北大核心
2016年第18期107-110,共4页
Northern Horticulture
基金
国家自然科学基金资助项目(31371232
31500276)
成都市科技技术研发资助项目(2015-HM01-00051-SF)
国家级大学生创新创业训练计划资助项目(201510613063)
关键词
川芎
咖啡酸-3-O-甲基转移酶
原核表达
条件优化
Ligusticum chuanxiong
caffeic acid 3-O-methyltransferase
prokaryotic expression
conditions optimization
