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三角酵母D-氨基酸氧化酶的固定化研究 被引量：8
1
作者 陈少欣 吴文琼 +1 位作者 刘晨 史炳照 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期69-72,共4页
通过共价结合的方法把三角酵母 D-氨基酸氧化酶 (DAO)分别固定在三种大孔高聚物和二种多糖的载体上 ,结果表明多糖类载体壳聚糖和 Sepharose4B比高聚物更能有效地固定化 DAO。经过固定化后 ,壳聚糖和环氧载体Epecust固定化酶对温度和 p ... 通过共价结合的方法把三角酵母 D-氨基酸氧化酶 (DAO)分别固定在三种大孔高聚物和二种多糖的载体上 ,结果表明多糖类载体壳聚糖和 Sepharose4B比高聚物更能有效地固定化 DAO。经过固定化后 ,壳聚糖和环氧载体Epecust固定化酶对温度和 p H的稳定性提高 ,表观米氏常数增大。在分批式头孢菌素 C氧化脱氨的反应中 ,固定化酶表现出良好的操作稳定性 ,戊二酸单酰基 - 7-氨基头孢霉烷酸的得率为 93%。 展开更多
关键词 三角酵母 d-氨基酸氧化酶 固定化 DAO 大孔高聚物 多糖类 载体 壳聚糖
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D-氨基酸氧化酶/D-丙氨酸系统杀伤K562e细胞的作用机制探讨 被引量：6
2
作者 翟勇平 王健民 +1 位作者 张雨生 吕书晴 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期163-165,共3页
目的 :探讨 D-氨基酸氧化酶 (DAAO) / D-丙氨酸 (D - Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制。方法 :以 D- Ala杀伤稳定表达 DAAO和绿荧光蛋白 (GFP)的高致瘤性 K 5 6 2 e单克隆细胞 KDf Gd、KDf GC,应用 MTT法检测细胞存活率 ,并... 目的 :探讨 D-氨基酸氧化酶 (DAAO) / D-丙氨酸 (D - Ala)系统用作自杀基因治疗白血病的作用机制。方法 :以 D- Ala杀伤稳定表达 DAAO和绿荧光蛋白 (GFP)的高致瘤性 K 5 6 2 e单克隆细胞 KDf Gd、KDf GC,应用 MTT法检测细胞存活率 ,并用酚红氧化法测定培养上清 H2 O2 和 L owry法测定细胞蛋白数量 ,流式细胞仪测定细胞 GFP的荧光强度。结果 :在 2 5 m mol/ L D-Ala作用下 2 4 h即可完全杀死 KDf Gd细胞 ,当 D- Ala为 2 0 mmol/ L 时延长作用时间至 4 8h,杀伤率由 6 4 %增加至 96 .8% ,而D- Ala≤ 15 mm ol/ L 时杀伤率增加不明显。低于 2 0 m mol/ L,D- Ala对 K5 6 2 e几乎无杀伤作用。培养上清的 H2 O2 变化与杀伤转基因细胞作用相一致。 结论 :DAAO/ D- Ala系统可能是通过产生 H2 O2 发挥杀伤转基因 K5 6 2 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 d-丙氨酸 过氧化氢 白血病 K562e细胞
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D-氨基酸氧化酶在不同毕赤酵母宿主菌中的表达比较 被引量：4
3
作者 冯美卿 黄海 +3 位作者 史训龙 余志良 袁中一 周珮 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期572-577,共6页
D 氨基酸氧化酶 (DAAO)在转化头孢菌素C生产 7 ACA和转化DL 氨基酸制备α 酮酸和L 氨基酸上起着重要的作用。采用DNA操作技术 ,将来源于三角酵母的DAAO基因连接至表达载体pPIC3 5K上 ,再将表达质粒pPIC3 5K DAAO分别整合P .pastoris的... D 氨基酸氧化酶 (DAAO)在转化头孢菌素C生产 7 ACA和转化DL 氨基酸制备α 酮酸和L 氨基酸上起着重要的作用。采用DNA操作技术 ,将来源于三角酵母的DAAO基因连接至表达载体pPIC3 5K上 ,再将表达质粒pPIC3 5K DAAO分别整合P .pastoris的宿主细胞KM71和GS1 1 5 ,经筛选获得阳性重组菌PDK1 3(MutS)和PD2 7(Mut+ )。重点对两种突变菌的表达条件进行了比较。结果显示 :PDK1 3(MutS)株比PD2 7(Mut+ )株消耗甲醇慢、诱导时间长 ,但对通气量要求低、表达水平高 ,摇瓶活力分别达到 2 70 0和 2 5 0 0IU L ,1 4L发酵罐内活力分别达到 1 0 1 4 0和 84 6 3IU L。初步探索了DAAO对DL 苯丙氨酸的拆分 ,结果显示基因工程菌表达的DAAO具有良好的转化DL 苯丙氨酸制备苯丙酮酸和L 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 甲醇酵母 不同宿主菌 表达比较 DL-苯丙氨酸 拆分
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D-氨基酸氧化酶与麦芽糖结合蛋白和透明颤菌血红蛋白的融合表达 被引量：5
4
作者 于慧敏 马现锋 +2 位作者 罗晖 文程 沈忠耀 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期1004-1009,共6页
D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种重要的工业酶。为了进一步提高DAAO在大肠杆菌中的可溶性和活性表达,分别构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)和透明颤菌血红蛋白与三角酵母DAAO(TvDAAO)的N-端融合蛋白。其中,MBP融合蛋白MBP-TvDAAO在组成型(JM105/pM... D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种重要的工业酶。为了进一步提高DAAO在大肠杆菌中的可溶性和活性表达,分别构建了麦芽糖结合蛋白(MBP)和透明颤菌血红蛋白与三角酵母DAAO(TvDAAO)的N-端融合蛋白。其中,MBP融合蛋白MBP-TvDAAO在组成型(JM105/pMKC-DAAO)和诱导型菌株(JM105/pMKL-DAAO)中表达时,目标蛋白的可溶性表达量分别达到全细胞蛋白表达量的28%以上和17%左右,比无MBP融合的对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO分别提高3.7和1.8倍;但其酶活水平显著下降。VHb融合蛋白VHb-TvDAAO在重组菌BL21(DE3)/pET-VDAAO中摇瓶诱导表达时,DAAO酶活达到了3.24u/mL,比对照菌株BL21(DE3)/pET-DAAO提高了约90%。 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 大肠杆菌麦芽糖结合蛋白 透明颤菌血红蛋白 融合表达
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D-氨基酸氧化酶基因多态性与精神分裂症的关联研究 被引量：5
5
作者 李悦 陈元堂 +3 位作者 胡江 魏腊梅 高海玲 许昌泰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期2142-2144,2147,共4页
目的探讨D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术,收集符合美国DSM-Ⅳ精神分裂症诊断标准的112个先证者及其父母组成的核心家系,对DAAO基因的rs3741775、rs382... 目的探讨D-氨基酸氧化酶(DAAO)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法运用聚合酶链反应扩增及单核苷酸多态性的分子生物学技术,收集符合美国DSM-Ⅳ精神分裂症诊断标准的112个先证者及其父母组成的核心家系,对DAAO基因的rs3741775、rs3825251、rs3918347、rs4964770多态性分型,进行精神分裂症的DAAO基因多态性的关联分析和单体型相对风险率分析。结果 rs3918347等位基因与精神分裂症相关联(P=0.014),其中等位基因A是保护因素(Z=-2.37),G为危险因素(Z=2.37),A等位基因频率为0.41,G为0.59;rs3741775、rs3825251、rs4964770与精神分裂症无关联。三种单体型rs3825251-rs3918347的C/G、rs3918347-rs4964770的G/T、rs3825251-rs3918347-rs4964770中的C/G/T与精神分裂症有关联(P值分别为0.021、0.036、0.028,基因型频率分别为0.33、0.28、0.15)。结论 DAAO基因与精神分裂症相关联。 展开更多
关键词 精神分裂症 d-氨基酸氧化酶 基因多态性 关联分析
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三角酵母D-氨基酸氧化酶基因在大肠杆菌中的克隆和表达 被引量：4
6
作者 罗晖 童忆舟 +2 位作者 李强 于慧敏 沈忠耀 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期336-339,共4页
从三角酵母中提取总RNA ,反转录后进行PCR扩增得到D 氨基酸氧化酶 (D AminoAcidOxidase ,DAAO)基因 ,经测序可知 ,与文献中三角酵母的DAAO基因序列的同源性在 99%以上。将DAAO基因用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,与相同酶切的大肠杆菌表达载... 从三角酵母中提取总RNA ,反转录后进行PCR扩增得到D 氨基酸氧化酶 (D AminoAcidOxidase ,DAAO)基因 ,经测序可知 ,与文献中三角酵母的DAAO基因序列的同源性在 99%以上。将DAAO基因用NcoⅠ和BamHⅠ双酶切后 ,与相同酶切的大肠杆菌表达载体pET 2 8a连接 ,转化大肠杆菌TOP 1 0F′,并筛选得到重组质粒pET DAAO ,转化BL2 1 (DE3)感受态细胞 ,得到重组大肠杆菌BL2 1 (DE3) pET DAAO。对重组大肠杆菌中的D 氨基酸氧化酶进行了诱导表达 ,考察了诱导温度、菌浓度、诱导剂IPTG用量以及溶氧等因素对酶活的影响。结果表明 ,在 2 8℃、菌浓度 (OD6 0 0 ) 1 0、IPTG浓度 1mmol L时 ,DAAO酶活最高达 2 3 3U mL。研究进一步显示 ,用廉价无毒的乳糖可以替代IPTG进行诱导 ,当乳糖浓度为 2mmol L ,DAAO酶活可达 2 2 7U mL。经过补料分批培养和乳糖诱导 ,DAAO酶活可以达到 1 75U mL。 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 三角酵母 大肠杆菌 乳糖
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中国汉族男性人群D-氨基酸氧化酶激活剂基因多态性与精神分裂症的关联研究 被引量：3
7
作者 韩燕 宁启兰 +5 位作者 张欢 王淑红 张富军 马雪红 高成阁 马捷 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期600-602,共3页
目的研究中国男性群体中D-氨基酸氧化酶激活剂(DAOA)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法采用等位基因特性PCR方法对272例男性精神分裂症患者和206例对照DAOA基因区域的3个单核苷酸多态性位点(SNP:rs778294,rs778293和rs3918342)进行... 目的研究中国男性群体中D-氨基酸氧化酶激活剂(DAOA)基因多态性与精神分裂症的相关性。方法采用等位基因特性PCR方法对272例男性精神分裂症患者和206例对照DAOA基因区域的3个单核苷酸多态性位点(SNP:rs778294,rs778293和rs3918342)进行基因分型和统计分析。结果 DAOA基因区域rs778294的一个等位基因(C)与精神分裂症显著相关(P=0.03)。由3个SNP构建的单倍型分析表明,单倍型CAT在病例-对照组中表现出显著的差异。结论在中国汉族男性群体中,DAOA基因可能是精神分裂症的一个易感基因,NMDA受体途径可能是发生精神分裂症的一个重要潜在因素。 展开更多
关键词 精神分裂症 d-氨基酸氧化酶激活剂 单核苷酸多态性 连锁不平衡 关联
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基因工程酵母菌来源的D-氨基酸氧化酶分离纯化 被引量：2
8
作者 史训龙 冯美卿 +2 位作者 贺佳音 袁中一 周珮 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期71-74,85,共5页
目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等... 目的 以基因工程酵母表达的胞内D-氨基酸氧化酶(DAAO)为原料,通过破细胞,分离纯化DAAO。 方法 采用机械研磨,反复冻溶,超声波等多种方法破细胞,获得粗酶液,硫酸铵分段沉淀。沉淀透析后,经 DEAE Sephadex A-50,DEAE-DE52,Q-sepharose等离子交换柱进行第一步分离,获得的含酶粗品,再经Sephaciyl S-100分子筛进一步纯化获得电泳纯的DAAO。结果 超声波破壁为最佳的破壁方法,得到的每毫升酶液所含 的酶活力是其他破壁方法的两倍以上,最高达到12 000 U／mi,。两步硫酸铵沉淀能粗分DAAO,50％硫酸铵沉 淀酶回收率可达85％以上。用Q-sepharose、Sephacryl S-100分子筛柱层析两步纯化,酶活力回收率最高可达 90％,SDS-PAGE显示单一蛋白条带。结论 本实验方法能得到电泳纯的DAAO,总回收率约为40％。 展开更多
关键词 S-100 细胞 法能 透析 分离纯化 电泳 表达 硫酸铵沉淀 基因工程酵母 d-氨基酸氧化酶
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固定化D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸 被引量：3
9
作者 陈少欣 吴文琼 +1 位作者 刘晨 史炳照 《化学反应工程与工艺》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期242-247,共6页
　部分纯化的变异三角酵母D-氨基酸氧化酶(DAO)在碱性条件下变性过氧化氢酶,再与大孔聚甲基丙烯酸缩水甘油酯高聚物共价交联。与游离酶相比,固定化酶的最适反应温度升高,最适pH范围变宽,对温度和pH的稳定性都有明显的提高。固定化DAO在... 　部分纯化的变异三角酵母D-氨基酸氧化酶(DAO)在碱性条件下变性过氧化氢酶,再与大孔聚甲基丙烯酸缩水甘油酯高聚物共价交联。与游离酶相比,固定化酶的最适反应温度升高,最适pH范围变宽,对温度和pH的稳定性都有明显的提高。固定化DAO在搅拌反应器中催化头孢霉素C(CPC)转化为戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸(Gl-7-ACA)。以0.03g/mL的CPC为底物,在温度25℃、pH7.2条件下,产物的得率>93%,副产物得率<5%。经过110批反应后,固定化酶保持64%的初始活力。 展开更多
关键词 固定化酶 d-氨基酸氧化酶 转化酶 头孢菌素C 戊二酰基-7-氨基头孢霉烷酸 抗生素 合成
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D-氨基酸氧化酶在毕赤酵母中的表达及快速纯化 被引量：2
10
作者 冯美卿 史训龙 +2 位作者 孙传文 周伟 周珮 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期622-625,共4页
目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受... 目的建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA)。方法通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌。结果高表达重组菌(PHD12)摇瓶发酵单位达到2 000 IU/L,发酵罐内达到22 500 IU/L。并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60%的总收率获得纯化产物。纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性。结论利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序。 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 毕赤酵母 表达 快速纯化
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IRES序列连接的D-氨基酸氧化酶与绿色荧光蛋白基因导入K562e细胞的表达 被引量：2
11
作者 翟勇平 王健民 +2 位作者 张雨生 周虹 吕书晴 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2002年第3期209-211,共3页
内部核糖体进入位点 (IRES)序列来源于脑心肌炎病毒 ,它可翻译一条mRNA上的两个开放读框 ,由其连接的两个基因的表达率相同。本实验应用以IRES序列连接D 氨基酸氧化酶 (DAAO)和绿色荧光 (GFP)基因构建的逆转录病毒载体 ,转染K5 6 2e细... 内部核糖体进入位点 (IRES)序列来源于脑心肌炎病毒 ,它可翻译一条mRNA上的两个开放读框 ,由其连接的两个基因的表达率相同。本实验应用以IRES序列连接D 氨基酸氧化酶 (DAAO)和绿色荧光 (GFP)基因构建的逆转录病毒载体 ,转染K5 6 2e细胞获得稳定表达GFP的单克隆细胞KDfGC和KDfGd,测定转基因细胞的荧光阳性率以及荧光强度 ,用D 丙氨酸 (D Ala)作用DAAO+细胞 ,并用酚红氧化法测定培养上清H2 O2 。结果表明 ,KDfGC和KDfGd细胞的荧光阳性率分别为 94 .6 4 % ,96 .31% ;2× 10 4细胞的荧光强度分别为 2 0 2U和 174U。GFP荧光强度与H2 O2 的产量间呈指数相关。结论 :IRES序列调控的双基因可同时表达 ,GFP的荧光强度可以间接地反映DAAO基因的表达水平 ,为了解目的基因表达水平高低提供了新的方法。 展开更多
关键词 IRES序列 d-氨基酸氧化酶基因 绿色荧光蛋白基因 K562e细胞系 白血病 病理学 基因转移
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D-氨基酸氧化酶的分离纯化及固定化研究 被引量：2
12
作者 王筱兰 孙兵兵 杨志平 《南昌大学学报（工科版）》 CAS 2008年第2期112-115,共4页
利用自制的亲和载体EPI-30-ARG-IDA-Co2+对带有6个组氨酸的重组D-氨基酸氧化酶(DAAO)进行分离纯化,其纯化倍数为10倍,酶活回收率达38.35%,SDS-PAGE显示为单一条带。经过Eupergit C载体固定化后,固定化酶对温度和pH的稳定性提高,表观米... 利用自制的亲和载体EPI-30-ARG-IDA-Co2+对带有6个组氨酸的重组D-氨基酸氧化酶(DAAO)进行分离纯化,其纯化倍数为10倍,酶活回收率达38.35%,SDS-PAGE显示为单一条带。经过Eupergit C载体固定化后,固定化酶对温度和pH的稳定性提高,表观米氏常数增大,固定化酶活力回收高达42.44%。 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 分离 纯化 固定化
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D-氨基酸氧化酶在巴斯德毕赤酵母中的表达研究 被引量：1
13
作者 冯美卿 史训龙 +2 位作者 于建 袁中一 周珮 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期397-401,共5页
用分子生物学方法获得了D-氨基酸氧化酶(DAAO)的表达质粒(pPIC3.5k-DAAO),用其电转化巴斯德毕赤酵母GS115获得重组菌,经筛选获得高表达菌株PD27,并对其高密度培养和诱导条件进行了优化。PD27工程菌经250ml摇瓶发酵得到的DAAO活力达到250... 用分子生物学方法获得了D-氨基酸氧化酶(DAAO)的表达质粒(pPIC3.5k-DAAO),用其电转化巴斯德毕赤酵母GS115获得重组菌,经筛选获得高表达菌株PD27,并对其高密度培养和诱导条件进行了优化。PD27工程菌经250ml摇瓶发酵得到的DAAO活力达到2500～2600IU/L,在14L发酵罐中的表达水平优于其它表达系统。 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 巴斯德毕赤酵母 表达
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D-氨基酸氧化酶的研究进展 被引量：3
14
作者 孙兵兵 王筱兰 杨志平 《化学与生物工程》 CAS 2007年第2期8-11,共4页
D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的典型的黄素蛋白酶类。DAAO可氧化D-氨基酸生成相应的酮酸和氨。介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状,包括在自然界的分布、生理功能、生物学特性、催化机理、基因克隆和序列分析以及基... D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤(FAD)为辅基的典型的黄素蛋白酶类。DAAO可氧化D-氨基酸生成相应的酮酸和氨。介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状,包括在自然界的分布、生理功能、生物学特性、催化机理、基因克隆和序列分析以及基因表达。 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 生物学特性 分离 纯化 基因表达
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D-氨基酸氧化酶基因重组逆转录病毒载体的构建及表达 被引量：1
15
作者 翟勇平 王健民 +1 位作者 周虹 张雨生 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第1期52-54,共3页
目的 :构建含D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因的重组逆转录病毒载体 ,初步观察DAAO基因的功能。方法 :利用重组DNA技术将DAAOcDNA亚克隆至逆转录病毒载体 (pLDAAOSN)中 ,以磷酸钙沉淀法介导转染包装细胞ΦXNA ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,将... 目的 :构建含D 氨基酸氧化酶 (DAAO)基因的重组逆转录病毒载体 ,初步观察DAAO基因的功能。方法 :利用重组DNA技术将DAAOcDNA亚克隆至逆转录病毒载体 (pLDAAOSN)中 ,以磷酸钙沉淀法介导转染包装细胞ΦXNA ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度 ,将重组逆转录病毒感染K5 6 2白血病细胞 ,G418筛选出抗性克隆 ,命名为KDAAO。PCR、原位杂交分析外源基因整合和表达 ,观察 5 0mm/LD 丙氨酸对KDAAO杀伤作用。结果 :经酶切鉴定和DNA测序证明重组逆转录病毒载体中含有完整的DAAO基因。包装细胞产生了高滴度病毒 (5 .2× 10 6CFU/ml)。PCR、原位杂交分析证明DAAO基因已整合至KDAAO基因组中 ,并在mRNA水平表达。初步观察到D 丙氨酸能明显杀伤KDAAO。结论 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 DAAO基因 白血病细胞系 d-氨基酸氧化酶
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过氧化氢对D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为戊二酰-7-氨基头孢烯酸反应的影响 被引量：1
16
作者 于海军 陈立功 +3 位作者 李阳 闫喜龙 白国义 段学民 《高校化学工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第1期79-84,共6页
在D-氨基酸氧化酶D1AAO转化头孢菌素C(CPC)为戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(Gl-7-ACA)的反应中,所生成的过氧化氢同时与CPC和Gl-7-ACA发生的氧化副反应是造成目标产物收率损失的关键因素之一。通过联用溶氧电极和过氧化氢电极,测定了DAAO转化... 在D-氨基酸氧化酶D1AAO转化头孢菌素C(CPC)为戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(Gl-7-ACA)的反应中,所生成的过氧化氢同时与CPC和Gl-7-ACA发生的氧化副反应是造成目标产物收率损失的关键因素之一。通过联用溶氧电极和过氧化氢电极,测定了DAAO转化CPC为Gl-7-ACA的反应体系内溶氧浓度与相应的过氧化氢浓度的变化曲线,测知反应体系中过氧化氢浓度积累最高可达5mmol·L-1。模拟该反应条件下过氧化氢的氧化反应可知,在过氧化氢浓度较低时,溶液的酸性可加速该氧化反应。在中性条件下,过氧化氢浓度为5mmol·L-1时,反应1h后,CPC的氧化损失为2%,Gl-7-ACA的氧化损失为3%。通过改进氧气分布器、搅拌转速和并调控氧气流量以控制溶液中溶解氧的浓度,来适度地降低物系中过氧化氢积累浓度,使反应收率提高了2.2%。 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶(DAAO) 头孢菌素C(CPC) 过氧化氢 戊二酰基-7-氨基头孢烯酸(G1-7-ACA)
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中枢神经系统D-氨基酸氧化酶的研究进展 被引量：2
17
作者 赵文娟 殷明 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期64-66,共3页
新近研究证实,哺乳动物神经系统中存在内源性D-氨基酸氧化酶,参与脑内D-氨基酸的代谢。遗传学研究发现,D-氨基酸氧化酶基因与精神分裂症的发生密切相关。分子生物学研究表明,在D-氨基酸氧化酶基因启动子区域存在一些转录因子的结合位点... 新近研究证实,哺乳动物神经系统中存在内源性D-氨基酸氧化酶,参与脑内D-氨基酸的代谢。遗传学研究发现,D-氨基酸氧化酶基因与精神分裂症的发生密切相关。分子生物学研究表明,在D-氨基酸氧化酶基因启动子区域存在一些转录因子的结合位点。这些研究结果提示,中枢神经系统的D-氨基酸氧化酶除了参与D-氨基酸的代谢以外,可能还具有其它的生理功能。本文就中枢神经系统D-氨基酸氧化酶的研究进展作一综述。 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 d-氨基酸 中枢神经系统 疼痛 精神分裂症
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D-氨基酸氧化酶基因在大肠杆菌中的诱导表达 被引量：1
18
作者 王筱兰 孙兵兵 杨志平 《南昌大学学报（理科版）》 CAS 北大核心 2008年第4期401-404,共4页
利用乳糖代替IPTG作为诱导剂,对重组大肠杆菌BL21(DE3)/pWY中的D-氨基酸氧化酶进行诱导表达。分别研究了乳糖浓度、菌体浓度、诱导温度、诱导时间对DAAO酶活的影响。结果显示,当菌浓OD600达1.0左右、乳糖浓度为10 g/L、28℃下诱导约6 h... 利用乳糖代替IPTG作为诱导剂,对重组大肠杆菌BL21(DE3)/pWY中的D-氨基酸氧化酶进行诱导表达。分别研究了乳糖浓度、菌体浓度、诱导温度、诱导时间对DAAO酶活的影响。结果显示,当菌浓OD600达1.0左右、乳糖浓度为10 g/L、28℃下诱导约6 h,摇瓶发酵得到的DAAO酶活高达2 400 IU/L,在5 L自控式发酵罐上酶活达3784.32 IU/L,比摇瓶提高了1.57倍。 展开更多
关键词 d-氨基酸氧化酶 大肠杆菌 表达 乳糖
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应用固定化D-氨基酸氧化酶转化头孢菌素C为7-ACA 被引量：1
19
作者 张小飞 曹树祥 莫章桦 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第12期846-848,共3页
D-氨基酸氧化酶(DAAO)是两步酶法催化头孢菌素C(CPC)生成7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)的重要酶之一。利用固定化DAAO催化CPC的转化液中,酮酸中间体随批次的增加逐渐减少,反应至第13批时,转化基本完全。当转化液pH由7.2升至7.6时,终止反应,... D-氨基酸氧化酶(DAAO)是两步酶法催化头孢菌素C(CPC)生成7-氨基头孢霉烷酸(7-ACA)的重要酶之一。利用固定化DAAO催化CPC的转化液中,酮酸中间体随批次的增加逐渐减少,反应至第13批时,转化基本完全。当转化液pH由7.2升至7.6时,终止反应,转化率和收率分别达99.6%和93%。分次补加固定化DAAO,可连续转化132批。 展开更多
关键词 固定化d-氨基酸氧化酶 转化 酮酸中间体 头孢菌素C
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D-氨基酸氧化酶性质研究 被引量：1
20
作者 韩北忠 周竞扬 《中国酿造》 CAS 北大核心 2006年第3期1-3,共3页
D-氨基酸氧化酶(DAAO)是一种以黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)为辅基的典型黄素酶。它催化D-氨基酸生成相应的-α酮酸和氨。该文介绍了D-氨基酸氧化酶的研究现状及其特性,包括它的生理功能、基本特性、结构特性、光学动力学特性。
关键词 d-氨基酸氧化酶 特性
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