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表达牛乳铁蛋白肽的罗伊氏乳杆菌分泌型信号肽的筛选及鉴定
1
作者 赵文悦 杨景 +5 位作者 邵怡岚 李佳璇 姜艳平 崔文 王晓娜 唐丽杰 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第3期1431-1440,共10页
本研究旨在构建一株高效表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌,通过筛选不同信号肽的方式提高牛乳铁蛋白肽的分泌表达水平,提高重组菌株的应用效率。对实验室分离的一株罗伊氏乳杆菌进行全基因组测序,筛选分泌蛋白的信号肽基因,构建表达... 本研究旨在构建一株高效表达牛乳铁蛋白肽的重组罗伊氏乳杆菌,通过筛选不同信号肽的方式提高牛乳铁蛋白肽的分泌表达水平,提高重组菌株的应用效率。对实验室分离的一株罗伊氏乳杆菌进行全基因组测序,筛选分泌蛋白的信号肽基因,构建表达牛乳铁蛋白肽(LFCA)的重组菌株,通过Western blot、ELISA、激光共聚焦等技术分析和比较信号肽分泌LFCA的效果,对重组菌分泌的LFCA对金黄色葡萄球菌增殖抑制作用及其半数最低抑菌浓度进行检测。结果显示,A2、A3、A4和A8信号肽能够表达LFCA,其中A3和A8能够使LFCA分泌到培养上清中,且A3信号肽使LFCA的分泌表达水平提高了近2倍,对宿主菌株的生长性能无显著影响,重组菌株分泌的LFCA对金黄色葡萄球菌的半数最低抑菌浓度为97.50μg·mL^(-1)。本研究成功筛选出能够高效分泌牛乳铁蛋白肽的信号肽,重组菌株的抑菌效率得到显著提高。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白肽 罗伊氏乳杆菌 重组蛋白分泌表达信号肽 抑菌活性
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牛乳铁蛋白对幽门螺杆菌根除作用的实验研究
2
作者 葛超毅 董锦沛 +2 位作者 胡伏莲 张继新 李江 《胃肠病学和肝病学杂志》 CAS 2024年第5期495-501,共7页
目的从体外和动物实验评价牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin,bLF)对H.pylori的作用。方法将bLF分别与H.pylori标准菌株及临床耐药菌株共培养,记录bLF对H.pylori的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。构建H.pylori感... 目的从体外和动物实验评价牛乳铁蛋白(bovine lactoferrin,bLF)对H.pylori的作用。方法将bLF分别与H.pylori标准菌株及临床耐药菌株共培养,记录bLF对H.pylori的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)值。构建H.pylori感染小鼠模型,评价加用bLF治疗后小鼠H.pylori根除情况及胃黏膜损伤程度、炎症因子及细胞间紧密连接蛋白变化情况。结果在bLF为1.5 g/L的浓度下能够抑制H.pylori标准菌株的生长,同时bLF在该浓度下能与抗生素协同抑制H.pylori耐药菌株生长;bLF能够减轻H.pylori感染小鼠胃黏膜炎症损伤程度,能够降低炎症因子TNF-α的水平,减少紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的破坏。结论bLF具有一定的抗H.pylori作用,改善H.pylori造成的胃黏膜炎症程度,对胃黏膜细胞间紧密连接具有保护性作用。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 幽门螺杆菌 胃炎 根除治疗
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牛乳铁蛋白功能片段在大肠埃希菌中的表达及其抑菌活性验证
3
作者 戴珊 赵燕 +2 位作者 刘芬 滕慧 张学文 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期38-43,共6页
以pET-30a和pEGX为出发载体,构建牛乳铁蛋白功能片段(BlfFf)基因工程表达的非融合性表达质粒(pET-BlfFf)和融合性表达质粒(pEGX-BlfFf),并在大肠埃希菌BL21中诱导了蛋白表达。SDS-PAGE分析结果表明,pET-BlfFf表达的目标蛋白主要以包涵... 以pET-30a和pEGX为出发载体,构建牛乳铁蛋白功能片段(BlfFf)基因工程表达的非融合性表达质粒(pET-BlfFf)和融合性表达质粒(pEGX-BlfFf),并在大肠埃希菌BL21中诱导了蛋白表达。SDS-PAGE分析结果表明,pET-BlfFf表达的目标蛋白主要以包涵体形式存在,而pEGX-BlfFf表达的目标蛋白则可大量溶于细胞破碎上清液中,说明后者更适合表达可溶性目标蛋白。pEGX-BlfFf诱导表达产物经GST标签填料柱亲和层析纯化后,可制备出可溶性融合蛋白GST-BlfFf,其产量约为60 mg/L。该蛋白经凝血酶去除GST标签,获得纯化的目标肽。BlfFf的生物活性试验结果表明,经过胃蛋白酶水解后的多肽对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌均具有抗菌活性。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白功能片段 大肠埃希菌表达 蛋白纯化 抑菌活性
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牛乳铁蛋白肽基因LfcinB的合成及真核表达载体的构建 被引量：3
4
作者 孙东波 林云成 +4 位作者 郭东华 王建发 张敏 林玉才 武瑞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第5期95-98,共4页
根据APD抗菌肽数据库报道的牛乳铁蛋白肽LfcinB氨基酸序列,合成编码LfcinB基因的2条互补的寡核苷酸链,退火后在5′端和3′端分别形成含有BamHI和XhoI位点粘性末端的双链DNA。真核表达载体pcDNA3.1(+)经BamHI和XhoI限制性内切酶双酶切处... 根据APD抗菌肽数据库报道的牛乳铁蛋白肽LfcinB氨基酸序列,合成编码LfcinB基因的2条互补的寡核苷酸链,退火后在5′端和3′端分别形成含有BamHI和XhoI位点粘性末端的双链DNA。真核表达载体pcDNA3.1(+)经BamHI和XhoI限制性内切酶双酶切处理后与合成的LfcinB基因进行连接,连接产物转化E.coliDH5α感受态细胞,提取质粒DNA进行测序。测序结果显示,牛乳铁蛋白肽LfcinB基因成功克隆到pcDNA3.1(+)真核表达载体中,为进一步表达和抗菌活性研究奠定物质基础。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 牛乳铁蛋白肽 真核表达载体
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高效液相色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱分离鉴定牛乳铁蛋白素 被引量：4
5
作者 安美忱 刘宁 《色谱》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期180-184,共5页
建立了高效液相色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分离鉴定牛乳铁蛋白素(bovine lactoferricin,LfcinB)的方法。采用胃蛋白酶酶解牛乳铁蛋白,酶解液离心后取上清液,经过离子交换色谱、反相液相色谱、透析等... 建立了高效液相色谱-基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分离鉴定牛乳铁蛋白素(bovine lactoferricin,LfcinB)的方法。采用胃蛋白酶酶解牛乳铁蛋白,酶解液离心后取上清液,经过离子交换色谱、反相液相色谱、透析等技术分离,对分离得到的目标产物进行抗菌活性分析、蛋白含量测定和MALDI-TOF/TOF MS鉴定。分离得到高活性的LfcinB,其相对分子质量为3124.89,蛋白含量为18.20μg/mL。本方法具有精度高、分析速度快和分辨能力强等优点,是其他传统的分析鉴定LfcinB方法所无法比拟的,为进一步研究LfcinB奠定了基础。 展开更多
关键词 高效液相色谱 基质辅助激光解吸电离串联飞行时间质谱 牛乳铁蛋白素 牛乳铁蛋白
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荧光法研究氧氟沙星与牛乳铁蛋白的相互结合作用 被引量：11
6
作者 商志才 范成平 +1 位作者 郭明 俞庆森 《物理化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第8期864-867,共4页
用荧光光谱法研究了稀水溶液中牛乳铁蛋白与氧氟沙星分子之间的结合作用机制.以荧光猝灭法测定了该反应的结合常数K,结合位点数n;并依据Frster偶极-偶极无辐射能量转移机制,得到氧氟沙星和牛乳铁蛋白色氨酸残基之间结合距离r和能量转移... 用荧光光谱法研究了稀水溶液中牛乳铁蛋白与氧氟沙星分子之间的结合作用机制.以荧光猝灭法测定了该反应的结合常数K,结合位点数n;并依据Frster偶极-偶极无辐射能量转移机制,得到氧氟沙星和牛乳铁蛋白色氨酸残基之间结合距离r和能量转移效率E;并用同步荧光技术考察了氧氟沙星对牛乳铁蛋白构象的影响;牛乳铁蛋白与氧氟沙星分子之间有较强的结合作用,而且氧氟沙星对牛乳铁蛋白的构象有一定的影响. 展开更多
关键词 氧氟沙星 牛乳铁蛋白 荧光猝灭 能量转移
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重组牛乳铁蛋白素在大肠杆菌中的表达 被引量：8
7
作者 邢芳芳 印遇龙 +4 位作者 黄瑞林 孔祥峰 李铁军 唐志如 张友明 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第4期221-224,共4页
将牛乳铁蛋白素(lactoferricin B)基因克隆到表达载体pET28a后,转化到BL21大肠杆菌表达系统,筛选表达温度和诱导剂IPTG的浓度,使其在原核表达系统中表达,将诱导表达的产物进行Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳及抑菌活性检测,证明该表达产物是... 将牛乳铁蛋白素(lactoferricin B)基因克隆到表达载体pET28a后,转化到BL21大肠杆菌表达系统,筛选表达温度和诱导剂IPTG的浓度,使其在原核表达系统中表达,将诱导表达的产物进行Tricine-SDS-PAGE蛋白电泳及抑菌活性检测,证明该表达产物是乳铁蛋白素。实验结果表明,LactoferricinB基因能够在原核表达系统中表达,表达量约占细菌总蛋白的21%,而且表达的蛋白质具有生物学活性。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白素基因 原核表达系统 Tricine-SDS-PAGE 抑菌活性
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牛乳铁蛋白的反相高效液相色谱法含量测定 被引量：11
8
作者 许宁 李士敏 +1 位作者 吴筱丹 臧荣春 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期49-51,共3页
目的:运用反相高效液相色谱法分离测定牛乳铁蛋白(BLF)的含量。方法:采用Vydac C4色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),柱温为25℃,检测波长为220 nm,流动相A为0.1%三氟乙酸(TFA)水溶液;B为乙腈-水-TFA(95:5:0.1),梯度洗脱,流速为1.0 mL&#... 目的:运用反相高效液相色谱法分离测定牛乳铁蛋白(BLF)的含量。方法:采用Vydac C4色谱柱(250 mm ×4.6 mm,5μm),柱温为25℃,检测波长为220 nm,流动相A为0.1%三氟乙酸(TFA)水溶液;B为乙腈-水-TFA(95:5:0.1),梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1。结果:牛乳铁蛋白的浓度在25～1000μg·mL-1,r=0.9999。结论:本法操作简便,精密度好,结果准确可靠。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 反相高效液相色谱法 含量 测定
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荧光法研究加替沙星与牛乳铁蛋白的相互结合作用 被引量：12
9
作者 范成平 商志才 +1 位作者 郭明 俞庆森 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期62-65,共4页
用荧光光谱法研究了稀水溶液中牛乳铁蛋白与加替沙星分子之间的结合作用机制.以荧光猝灭法测定了该反应的结合常数K,结合位点数n;并依据Forster偶极-偶极无辐射能量转移机制,得到加替沙星和牛乳铁蛋白色氨酸残基之间结合距离r和能量... 用荧光光谱法研究了稀水溶液中牛乳铁蛋白与加替沙星分子之间的结合作用机制.以荧光猝灭法测定了该反应的结合常数K,结合位点数n;并依据Forster偶极-偶极无辐射能量转移机制,得到加替沙星和牛乳铁蛋白色氨酸残基之间结合距离r和能量转移效率E;并用同步荧光技术考察了加替沙星对牛乳铁蛋白构象的影响;牛乳铁蛋白与加替沙星分子之间有较强的结合作用,而且加替沙星对牛乳铁蛋白的构象有一定影响. 展开更多
关键词 加替沙星 牛乳铁蛋白 荧光猝灭
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牛乳铁蛋白的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法的建立 被引量：12
10
作者 林成招 张彦明 +1 位作者 邹思湘 陈伟华 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2003年第4期44-46,共3页
用牛乳铁蛋白(Bovine Lactoferrin,BLf)、纯品免疫新西兰白兔制得兔抗BLf的多克隆抗体,琼扩效价最高为1:64。经ELISA方法检测,该抗体与牛乳中的主要蛋白质:α-乳清蛋白、β-乳球蛋白、血清白蛋白以及酪蛋白之间不存在免疫交叉性,说明抗... 用牛乳铁蛋白(Bovine Lactoferrin,BLf)、纯品免疫新西兰白兔制得兔抗BLf的多克隆抗体,琼扩效价最高为1:64。经ELISA方法检测,该抗体与牛乳中的主要蛋白质:α-乳清蛋白、β-乳球蛋白、血清白蛋白以及酪蛋白之间不存在免疫交叉性,说明抗体特异性良好。以BLf纯品为包被抗原,自制抗体为一抗,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔IgG为二抗,邻苯二胺(OPD)为底物,建立了BLf的竞争抑制性ELISA方法。包被抗原及抗体的浓度均由方阵稀释实验确定。所建立的ELISA方法孔间误差1.6％,板间误差4.3％,灵敏度25μg/L,检测范围25～800μg/L。标准曲线线性方程(Logit)Y=-1.488 lg C+3.811 6,相关系数R=0.990。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 酶联免疫吸咐分析法 检测 多克隆抗体 食品
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牛乳铁蛋白肽及其衍生肽生物活性与研究进展 被引量：8
11
作者 郭爱珍 吕自力 +2 位作者 钟浩 胡曼 王亮 《中国乳品工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期22-27,共6页
牛乳铁蛋白肽(Lfcin B)是牛乳铁蛋白N-端在正常的消化环境下水解产生的25个氨基酸残基的短肽,具有广谱高效的抗细菌性,抗病毒,抗肿瘤等多种生物活性。作为一种新型抗菌肽,Lfcin B及其衍生肽具有很大的研究价值和潜在的应用价值。对其结... 牛乳铁蛋白肽(Lfcin B)是牛乳铁蛋白N-端在正常的消化环境下水解产生的25个氨基酸残基的短肽,具有广谱高效的抗细菌性,抗病毒,抗肿瘤等多种生物活性。作为一种新型抗菌肽,Lfcin B及其衍生肽具有很大的研究价值和潜在的应用价值。对其结构及生物学活性进行介绍,并对近年来采用基因工程技术表达Lfcin B及其衍生肽的方法技术进行了综述。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白肽 衍生肽 生物活性 基因工程
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牛乳铁蛋白素-马盖宁杂合抗菌肽的设计、合成及抑菌活性 被引量：8
12
作者 冯兴军 李静 +2 位作者 赵晓宇 宋雪莹 许文杉 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期105-109,共5页
根据抗菌肽牛乳铁蛋白素(Lfcin B)与马盖宁(Magainin)的核心功能序列,将Lfcin B(1-15)和Magainin(1-12)二者连接起来,设计一种新型杂合抗菌肽LFB15-MA12,采用固相化学合成法合成获得纯度大于95%的LFB15-MA12。微量肉汤稀释法测得LFB15-M... 根据抗菌肽牛乳铁蛋白素(Lfcin B)与马盖宁(Magainin)的核心功能序列,将Lfcin B(1-15)和Magainin(1-12)二者连接起来,设计一种新型杂合抗菌肽LFB15-MA12,采用固相化学合成法合成获得纯度大于95%的LFB15-MA12。微量肉汤稀释法测得LFB15-MA12对金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠杆菌ATCC25922、绿脓杆菌ATCC27853、鼠伤寒沙门氏菌C77-31四种细菌的最小抑菌浓度(Minimal inhibition concentration,MIC)分别为16、64、64和32μg·mL-1,在抑菌浓度范围内未表现出溶血活性。获得了一种具有较高抗菌活性且安全无毒的新型抗菌肽,为研究开发理想的新型抗菌肽分子提供了新思路。 展开更多
关键词 杂合抗菌肽 牛乳铁蛋白素 马盖宁
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牛乳铁蛋白抗菌活性的研究 被引量：10
13
作者 刘萍 王彦 张东送 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期49-52,共4页
研究表明,牛乳铁蛋白对大肠杆菌的最小抑菌浓度为2mg/mL,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.6mg/mL;牛乳铁蛋白与溶菌酶联合作用能增强其抗菌效果;葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)素、硫酸铵在0～10mg/、尿mL,乳糖、可溶性淀... 研究表明,牛乳铁蛋白对大肠杆菌的最小抑菌浓度为2mg/mL,对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为1.6mg/mL;牛乳铁蛋白与溶菌酶联合作用能增强其抗菌效果;葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、牛血清白蛋白(BSA)素、硫酸铵在0～10mg/、尿mL,乳糖、可溶性淀粉在0～4mg/mL,酪蛋白在0～1.2mg/mL的质量浓度范围内,对牛乳铁蛋白的抗菌活性影响不大;当NaCl或KCl的浓度为25～100mmol/L,MgCl2或CaCl2的浓度为1.0～5.0mmol/L时,牛乳铁蛋白的抗菌活性就会大大降低;随着缓冲盐浓度和有机酸浓度(25～100mmol/L)的增大,牛乳铁蛋白的抗菌活性呈下降趋势,且在微碱性pH环境下牛乳铁蛋白表现出较强的抗菌活力;在巴氏杀菌温度范围内,加热对牛乳铁蛋白抗菌活性影响不大,过高的温度(90～120℃)会使牛乳铁蛋白变性,从而使其抗菌活性大大下降。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 抗菌作用 影响因素
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不同浓度牛乳铁蛋白对成骨细胞与破骨细胞共培养的影响 被引量：4
14
作者 刘猛 樊凤娇 +3 位作者 石璞洁 涂茂林 于翠平 杜明 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2017年第24期1-6,共6页
研究证实牛乳铁蛋白具有成骨活性功能,既能刺激成骨细胞增殖,也能诱导破骨细胞凋亡。骨骼的生长发育是一动态平衡的生物过程,是通过成骨细胞诱导的骨生成和破骨细胞诱导的骨吸收所调节的。采用成骨细胞MC3T3-E1细胞与破骨前体细胞RAW26... 研究证实牛乳铁蛋白具有成骨活性功能,既能刺激成骨细胞增殖,也能诱导破骨细胞凋亡。骨骼的生长发育是一动态平衡的生物过程,是通过成骨细胞诱导的骨生成和破骨细胞诱导的骨吸收所调节的。采用成骨细胞MC3T3-E1细胞与破骨前体细胞RAW264.7细胞1∶1的比例直接接触的共培养方式,研究不同浓度(20、100、500μg/m L)的牛乳铁蛋白对共培养中成骨细胞和破骨细胞活性以及破骨细胞骨吸收功能的影响。首先,通过碱性磷酸酶(ALP)活性检测试剂盒检测共培养上清中的ALP活性,发现低浓度的牛乳铁蛋白能够抑制成骨细胞的ALP活性,而中高浓度的牛乳铁蛋白能够显著地促进成骨细胞的ALP活性。利用TRAP活性检测试剂盒及ELISA检测试剂盒,则发现低中浓度的牛乳铁蛋白能够促进破骨细胞的TRAP活性,而高浓度的牛乳铁蛋白能够显著地抑制破骨细胞的TRAP活性和共培养体系RANKL/OPG的比值。最后,通过骨吸收陷窝实验,证实了中高浓度组的牛乳铁蛋白能够显著地抑制破骨细胞的骨吸收功能。结果表明了高浓度的牛乳铁蛋白在共培养体系中不仅能够促进成骨细胞的活性,并且对破骨细胞具有抑制活性及功能的作用。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 成骨细胞 破骨细胞 共培养
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牛乳铁蛋白十肽的基因改造、克隆及表达 被引量：3
15
作者 姚海燕 韩跃武 +1 位作者 张雪燕 谢俊秋 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2008年第7期568-571,共4页
目的克隆并表达牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因。方法参照大肠杆菌偏爱密码子,分别针对牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,设计并合成两个具有相同黏性末端的DNA片段,同时在其基因前后分别加上天冬酰胺和甘氨酸的密码子,构成羟... 目的克隆并表达牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因。方法参照大肠杆菌偏爱密码子,分别针对牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,设计并合成两个具有相同黏性末端的DNA片段,同时在其基因前后分别加上天冬酰胺和甘氨酸的密码子,构成羟胺裂解位点,通过连接获得其二拷贝基因同向串联体。分别将该串联体克隆至载体pUC18上,经双酶切、PCR及测序鉴定后,构建重组表达质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物纯化后,用凝血酶切割及羟胺裂解。结果获得了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2二拷贝基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达出相对分子质量约29000的目的蛋白条带,纯化后的蛋白经凝血酶切割后,相对分子质量约29000的目的蛋白条带消失。结论已成功克隆并表达了牛乳铁蛋白十肽及其突变体M1和M2基因,为基因工程抗真菌肽的制备奠定了基础。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白十肽 抗真菌肽 基因改造 基因克隆 表达
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重组牛乳铁蛋白肽包含体的复性与纯化 被引量：4
16
作者 林少华 罗红霞 +2 位作者 郭慧媛 任发政 罗云波 《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2006年第1期9-12,共4页
通过分析透析液pH值,包含体蛋白浓度,DTT浓度3个参数对复性率的影响,确定了重组牛乳铁蛋白N-末端多肽(pGEX-4T1/rbLF-N)包含体透析复性的最佳条件和复性后蛋白纯化的适宜方法。采用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B柱(Glutathione SapharoseTM 4B)... 通过分析透析液pH值,包含体蛋白浓度,DTT浓度3个参数对复性率的影响,确定了重组牛乳铁蛋白N-末端多肽(pGEX-4T1/rbLF-N)包含体透析复性的最佳条件和复性后蛋白纯化的适宜方法。采用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B柱(Glutathione SapharoseTM 4B)对复性后的蛋白溶液进行纯化,纯化后的融和蛋白经胃蛋白酶酶解并检测其酶解产物的抗菌活性。试验表明包涵体蛋白可以部分复性。当pH值为8.5,包含体蛋白质量浓度为100mg/L,DTT浓度为24 mmol/L时,包含体的复性率最高。纯化后的融合蛋白酶解产物具有抗菌作用。 展开更多
关键词 重组牛乳铁蛋白肽rbLF—N 包含体 透析复性 纯化
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高效毛细管电泳法测定牛乳铁蛋白的含量及杂蛋白的方法学研究 被引量：3
17
作者 李士敏 许宁 +1 位作者 吴筱丹 臧荣春 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期68-70,共3页
目的:采用高效毛细管电泳法(HPCE)的毛细管区带电泳模式(CZE)分离测定牛乳铁蛋白(BLF)的含量。方法:熔融石英毛细管柱67cm(有效长度55cm)×50μm;运行缓冲液为33mmol·L^(-1)磷酸二氢钾-10mmol·L^(-1)磷酸溶液(pH=2.50);... 目的:采用高效毛细管电泳法(HPCE)的毛细管区带电泳模式(CZE)分离测定牛乳铁蛋白(BLF)的含量。方法:熔融石英毛细管柱67cm(有效长度55cm)×50μm;运行缓冲液为33mmol·L^(-1)磷酸二氢钾-10mmol·L^(-1)磷酸溶液(pH=2.50);压力进样6.9 kPa×5s;运行电压25kV;检测波长λ=214nm;毛细管柱温为25℃。结果:乳铁蛋白进样浓度在100.0-600.0μg·mL^(-1)范围内线性关系良好(r=0.9995),最低检测限为25μg·mL^(-1)。结论:采用HPCE测定乳铁蛋白及杂蛋白的方法简便,结果可靠。 展开更多
关键词 高效毛细管电泳法 含量 方法学研究 牛乳铁蛋白 HPCE 白及 毛细管区带电泳 进样 柱温 毛细管柱
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重组牛乳铁蛋白N末端多肽对真空包装猪肉品质的影响 被引量：2
18
作者 罗红霞 林少华 +3 位作者 任发政 陈历水 陈雅松 田寒友 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第6期237-241,共5页
以Nisin和乳酸作为参照,采用本试验室获得的重组牛乳铁蛋白肽对生鲜猪肉进行保藏试验。生鲜猪肉浸沾并真空包装后置于4℃下存放,测定肉样的微生物数、抗氧化值(TBA)、pH值、肉的红度值(Huntera)及感官评价。结果显示,重组的牛乳铁蛋白... 以Nisin和乳酸作为参照,采用本试验室获得的重组牛乳铁蛋白肽对生鲜猪肉进行保藏试验。生鲜猪肉浸沾并真空包装后置于4℃下存放,测定肉样的微生物数、抗氧化值(TBA)、pH值、肉的红度值(Huntera)及感官评价。结果显示,重组的牛乳铁蛋白肽保鲜效果优于Nisin组,接近乳酸组。其保鲜期可达到19d。 展开更多
关键词 重组牛乳铁蛋白肽 猪肉 真空包装 品质
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牛乳铁蛋白对幽门螺杆菌感染大鼠的治疗实验 被引量：4
19
作者 朱婉萍 孔繁智 陈小囡 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期85-87,共3页
目的观察牛乳铁蛋白（bLf）对感染HP的Wistar大鼠的治疗作用。方法建立Wistar大鼠脾虚动物模型后，空腹灌胃1×10^9efu·mL^-1的Hp混悬液，隔日一次，共三次。于造模后第17天给予bLf进行治疗，并以丽珠得乐和安必仙（抗生素氨... 目的观察牛乳铁蛋白（bLf）对感染HP的Wistar大鼠的治疗作用。方法建立Wistar大鼠脾虚动物模型后，空腹灌胃1×10^9efu·mL^-1的Hp混悬液，隔日一次，共三次。于造模后第17天给予bLf进行治疗，并以丽珠得乐和安必仙（抗生素氨苄西林）作为阳性对照药物。结果根据Hp培养、快速尿素酶试验和W—S银染三种检测方法对幽门螺杆菌的检出率，将bLf治疗组和对照组进行比较，不用药的感染对照组Hp检出率在84％-96％范围，丽珠得乐和安必仙二阳性药物对照组Hp检出率在58％～76％和40％-50％范围，bLf治疗高剂量组和中剂量组Hp检出率分别在30％-40％和30％～50％范围，此结果与不用药的对照组比较检出率显著降低，结果显示bLf高、中剂量10d治疗有较好的清除Hp作用。结论bLf在一定剂量下对感染大鼠胃中Hp具有抑制作用。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白 幽门螺杆菌感染大鼠 治疗
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用甲酸水解制备重组牛乳铁蛋白肽LfcinB(17-41) 被引量：2
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作者 沈克飞 王孝友 +5 位作者 曹兰 袁树楷 陈静 彭帅 张素辉 易强 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第4期28-31,共4页
根据大肠埃希菌密码子偏嗜性合成了LfcinB(17-41)的基因序列,将该序列亚克隆到pGEX-4T-1载体中,在大肠埃希菌BL21菌株中用IPTG诱导表达。LfcinB与GST融合,两者之间加入了甲酸裂解位点。BL21在30℃下培养融合蛋白GST-LfcinB可溶性表达较... 根据大肠埃希菌密码子偏嗜性合成了LfcinB(17-41)的基因序列,将该序列亚克隆到pGEX-4T-1载体中,在大肠埃希菌BL21菌株中用IPTG诱导表达。LfcinB与GST融合,两者之间加入了甲酸裂解位点。BL21在30℃下培养融合蛋白GST-LfcinB可溶性表达较好。纯化的GST-LfcinB用甲酸水解释放P1-LfcinB。抑菌试验显示P1-LfcinB对兔源致病性大肠埃希菌有抗菌活性。 展开更多
关键词 牛乳铁蛋白肽 融合蛋白 甲酸 水解位点
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