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化学发光技术在蛋白质组学研究中的应用
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作者 姚富丽 严冬梅 +2 位作者 尹康 张姿 李洪 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2008年第4期387-389,共3页
目的:探讨在蛋白质组学研究中应用化学发光技术分析鉴定蛋白质的方法和价值。方法:采用细胞培养、双向电泳及银染等技术建立小鼠神经元蛋白质组图谱,再用PDQuest 2D分析软件和免疫印迹持久性化学发光技术选择性地鉴定三种小鼠神经元蛋白... 目的:探讨在蛋白质组学研究中应用化学发光技术分析鉴定蛋白质的方法和价值。方法:采用细胞培养、双向电泳及银染等技术建立小鼠神经元蛋白质组图谱,再用PDQuest 2D分析软件和免疫印迹持久性化学发光技术选择性地鉴定三种小鼠神经元蛋白质-PI3Kr3、MEK1、PKCα。结果:三种蛋白质的双向电泳化学发光图谱上均只出现了1个特异蛋白质斑点,信号强,背景低。结论:利用化学发光技术鉴定蛋白质简单、实用、灵敏、高效,可为蛋白质组学的研究提供有力的技术支持。 展开更多
关键词 神经组织蛋白质/分离和提纯 化学发光 印迹法 蛋白质
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大豆分离蛋白对果蝇寿命的影响(英文) 被引量:2
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作者 韩加 付德润 +3 位作者 徐臻荣 郭伟 吐尔逊江 王运诚 《中国临床康复》 CSCD 北大核心 2005年第11期202-203,共2页
背景:大豆蛋白具有降血脂、抑制肿瘤以及雌激素样作用等各种保健功效,但有关大豆分离蛋白对机体寿命影响的研究少见报道。目的:观察大豆分离蛋白对果蝇寿命的影响,以探讨其抗衰老与抗氧化作用机制。设计:以果蝇为研究对象的对照实验研... 背景:大豆蛋白具有降血脂、抑制肿瘤以及雌激素样作用等各种保健功效,但有关大豆分离蛋白对机体寿命影响的研究少见报道。目的:观察大豆分离蛋白对果蝇寿命的影响,以探讨其抗衰老与抗氧化作用机制。设计:以果蝇为研究对象的对照实验研究。单位:一所大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室。材料:实验于2002-03/06在新疆医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室果蝇室完成。美国野生型黑腹果蝇400只,雌、雄各半,由新疆医科大学公共卫生学院营养与食品卫生教研室提供。方法:将400只果蝇分为1个对照组普通培养基和3个剂量组(分别()为基础培养基含0.2%,1.0%,5.0%大豆分离蛋白)。从实验第2天起,每天观察记录果蝇生存数和死亡数,直到全部果蝇死亡为止。计算果蝇平均寿命、半数死亡期和最高寿命。主要观察指标:果蝇平均寿命、半数死亡期和最高寿命。结果:与对照组相比,大豆分离蛋白明显延长了雌雄果蝇寿命,并呈剂量反应关系,以高剂量组作用明显,其中雌雄果蝇平均寿命分别延长24.5%和20.7%;半数死亡时间分别延长27.1%和22.0%;最高寿命分别延长13.9%和10.6%。结论:大豆分离蛋白能延长果蝇寿命,可能具有一定的延缓衰老作用。 展开更多
关键词 黄豆/化学 植物蛋白质类/分离和提纯 果蝇 黑腹/药物作用 衰老
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重组葡激酶-水蛭素融合蛋白的分离纯化工艺建立 被引量:3
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作者 张光满 秦宜德 于爱平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第4期567-569,共3页
目的建立大肠杆菌高密度表达的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白(STH)分离纯化工艺。方法高密度培养重组大肠杆菌并诱导表达STH,离心收集菌体,反复冻融后收集上清液经超滤、两步阴离子交换层析,分离纯化STH目的蛋白。结果纯化后的STH纯度为98... 目的建立大肠杆菌高密度表达的重组葡激酶-水蛭素融合蛋白(STH)分离纯化工艺。方法高密度培养重组大肠杆菌并诱导表达STH,离心收集菌体,反复冻融后收集上清液经超滤、两步阴离子交换层析,分离纯化STH目的蛋白。结果纯化后的STH纯度为98%以上,纤溶比活性2.6×104IU/mg,活性回收率56%。结论建立了STH的纯化工艺,该纯化工艺简便,时程短,重复性好,适合于大规模生产。 展开更多
关键词 重组融合蛋白质/分离和提纯 色谱法 离子交换
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尿IgG亚类的分离纯化和鉴定 被引量:1
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作者 梁伟 陈伟英 +4 位作者 余学清 方芳 彭晖 李晓艳 董秀清 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期2078-2080,共3页
目的:建立一种简便快捷的分离纯化肾病患者尿IgG亚类的方法。方法:收集的肾病患者24h尿液经硫酸铵盐析、DEAE-cellu lose离子交换层析和葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析等3步分离纯化,即可得到IgG1、IgG2、IgG3、IgG44种亚类,最后用W estern... 目的:建立一种简便快捷的分离纯化肾病患者尿IgG亚类的方法。方法:收集的肾病患者24h尿液经硫酸铵盐析、DEAE-cellu lose离子交换层析和葡萄球菌A蛋白(SPA)亲和层析等3步分离纯化,即可得到IgG1、IgG2、IgG3、IgG44种亚类,最后用W estern b lotting和SDS-PAGE电泳的方法鉴定样品及其纯度。结果:SPA亲和层析洗脱曲线显示有4个独立的洗脱峰,W estern b lotting和SDS-PAGE方法鉴定表明提纯的样品为高纯度的IgG1、IgG2、IgG3、IgG4。结论:本方法通过3步即可一次性将样品中的4种不同的IgG亚类全部分离纯化,且纯度高,简便快捷,效果良好。 展开更多
关键词 IGG亚 分离和提纯 葡萄球菌蛋白质A 色谱法 亲和
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地鳖虫纤溶活性蛋白组分的提取及对肿瘤细胞的抑制作用 被引量:16
5
作者 林静华 吴映娥 +2 位作者 蔡应木 李兴暖 韩雅莉 《国际检验医学杂志》 CAS 2007年第12期1088-1090,1093,共4页
目的探讨地鳖虫纤溶活性蛋白组分的提取及对肿瘤细胞的抑制作用。方法使用硫酸铵沉淀、DEAE离子交换层析和SephadexG75凝胶层析的方法,从地鳖虫体内提取出纤溶活性蛋白并检测其活性,研究其体外抗肿瘤的作用;并通过噻唑蓝(MTT)法和... 目的探讨地鳖虫纤溶活性蛋白组分的提取及对肿瘤细胞的抑制作用。方法使用硫酸铵沉淀、DEAE离子交换层析和SephadexG75凝胶层析的方法,从地鳖虫体内提取出纤溶活性蛋白并检测其活性,研究其体外抗肿瘤的作用;并通过噻唑蓝(MTT)法和流式细胞术检测地鳖虫纤溶活性蛋白对2种肿瘤细胞(人食管癌细胞株Eca109和人宫颈癌细胞株HeLa)的增殖抑制及周期的影响。结果(1)地鳖虫体内存在具有纤溶活性的纤溶活性蛋白;(2)地鳖虫纤溶活性蛋白对肿瘤细胞的增殖抑制率与剂量和时间密切相关;(3)随着地鳖虫纤溶活性蛋白浓度的增加,G1期细胞数量明显减少,G2/M期的细胞数量有所增加。结论地鳖虫纤溶活性蛋白具有体外抑制肿瘤细胞的作用。 展开更多
关键词 蜚蠊目 蛋白质 分离和提纯 抗肿瘤药
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RBX诱骨活性成分的分离与纯化 被引量:5
6
作者 杨柳 胡蕴玉 +1 位作者 吕荣 颉强 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第10期922-925,共4页
目的 重组合异种骨 (RBX)作为一种新型植骨材料在临床治疗骨缺损、骨不连等病例中取得了显著疗效 .需进一步研究重组合异种骨中诱骨活性蛋白的相对分子质量范围 .方法 采用肝素亲和层析技术纯化 RBX中诱骨活性蛋白即骨形态发生蛋白 (B... 目的 重组合异种骨 (RBX)作为一种新型植骨材料在临床治疗骨缺损、骨不连等病例中取得了显著疗效 .需进一步研究重组合异种骨中诱骨活性蛋白的相对分子质量范围 .方法 采用肝素亲和层析技术纯化 RBX中诱骨活性蛋白即骨形态发生蛋白 (BMP) ,利用小鼠肌袋实验检测其骨诱导活性 ,再用聚丙烯酰胺电泳 (SDS- PAGE)测量 RBX中诱骨活性蛋白纯化后的相对分子质量 .结果 在纯化近 2 0倍后 ,获得 8.2 3m g高度纯化的蛋白质 ,组织学观察其活性发现植入小鼠股部第 10日 ,有大量软骨细胞及软骨岛的出现 ,在局部区域还可见到条索状骨小梁出现 ,SDS- PAGE电泳发现这种蛋白质的相对分子质量为 35× 10 3,经还原后单体的相对分子质量为 2 2× 10 3.结论 重组合异种骨 (RBX)中 35× 10 3的蛋白质经还原后为 2 2× 10 3,其单独使用具有异位成骨活性 ,为 RBX的临床应用提供了理论依据 . 展开更多
关键词 骨折愈合 蛋白质 分离 提纯 重组合异种骨
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重组蛋白MSH-Ang的构建表达和纯化分析 被引量:1
7
作者 周维国 赵丽波 +1 位作者 朱冬冬 杨占泉 《中国耳鼻咽喉颅底外科杂志》 CAS 2006年第1期14-17,共4页
目的对重组蛋白促黑激素-血管生成素(Melanocyte stimulating hormone-Angiogenin,MSH-Ang)的表达条件、发酵条件和纯化方法进行研究。方法通过化学方法偶联或基因融合表达的方法将靶向物质与毒性分子的蛋白连接起来制备融合蛋白。结果... 目的对重组蛋白促黑激素-血管生成素(Melanocyte stimulating hormone-Angiogenin,MSH-Ang)的表达条件、发酵条件和纯化方法进行研究。方法通过化学方法偶联或基因融合表达的方法将靶向物质与毒性分子的蛋白连接起来制备融合蛋白。结果重组蛋白MSH-Ang在表达菌BL21(DE3)中以可溶的形式存在,需要诱导表达条件。结论经过层析和纯化可以提高表达率。 展开更多
关键词 重组蛋白质/分离和提纯 MSH ANG 基因工程
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重组人Tum-5融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定 被引量:1
8
作者 马楠 张英起 颜真 《第四军医大学学报》 北大核心 2005年第14期1279-1281,共3页
目的:构建人肿瘤抑素(tumstatin)活性片段Tum5的融合重组表达载体并对其进行诱导表达和蛋白纯化以获得大量重组融合蛋白.方法:人工合成Tum5基因,进行测序分析,将该基因克隆入原核表达载体pQE30中,转化感受态细胞DH5α,经IPTG诱导表达重... 目的:构建人肿瘤抑素(tumstatin)活性片段Tum5的融合重组表达载体并对其进行诱导表达和蛋白纯化以获得大量重组融合蛋白.方法:人工合成Tum5基因,进行测序分析,将该基因克隆入原核表达载体pQE30中,转化感受态细胞DH5α,经IPTG诱导表达重组融合蛋白,对表达产物进行TricineSDSPAGE电泳分析和WesternBlot检测分析.结果构建了重组融合表达质粒pQE30Tum5,表达的蛋白经TricineSDSPAGE电泳分析,在约Mr10×103处出现了一条新生的蛋白条带,经灰度扫描检测,表达量约占菌体总蛋白的40%,纯化后的蛋白灰度扫描检测,纯度为95%.结论:成功地构建了人Tum5基因的原核表达载体,并纯化了该基因的原核表达产物. 展开更多
关键词 TUMSTATIN Tum-5 重组融合蛋白质/分离和提纯 pQE载体
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L-乳酸菌酸菜发酵液中小肽类天然防腐剂的研究 被引量:6
9
作者 雷虹 李秀凉 +3 位作者 平文祥 周东坡 贾树彪 庄海霁 《中国林副特产》 2005年第2期44-45,共2页
对具有较长货架期的L-乳酸菌酸菜的发酵液进行浓缩和抑菌试验,验证L-乳酸菌酸菜发酵液中确实存在具有抑菌活性的非酸类物质;经酶解试验验证其具有蛋白质性质;经进一步分离提纯,获得抑菌物质的纯品;经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量,... 对具有较长货架期的L-乳酸菌酸菜的发酵液进行浓缩和抑菌试验,验证L-乳酸菌酸菜发酵液中确实存在具有抑菌活性的非酸类物质;经酶解试验验证其具有蛋白质性质;经进一步分离提纯,获得抑菌物质的纯品;经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定分子量,证明为肽类物质。 展开更多
关键词 发酵液 天然防腐剂 酸菜 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 乳酸菌 L-乳酸 长货架期 物质 试验验证 分离提纯 蛋白质 分子量 酶解
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NH小鼠S180肉瘤热休克蛋白70的纯化 被引量:1
10
作者 汤宇 崔雪梅 +2 位作者 袁玫 卢世璧 朱克顺 《肿瘤防治杂志》 2004年第6期579-581,共3页
目的 :建立热休克蛋白 70 (heatshockprotein 70 ,HSP70 ) /肽复合物分离、纯化和鉴定的技术平台。方法 :NH小鼠接种S180肉瘤细胞 ,将肉瘤组织热休克处理后经Sephacry1S 2 0 0HR分子筛、ConA和ADP柱序列层析进行分离 ,所得蛋白经电泳及W... 目的 :建立热休克蛋白 70 (heatshockprotein 70 ,HSP70 ) /肽复合物分离、纯化和鉴定的技术平台。方法 :NH小鼠接种S180肉瘤细胞 ,将肉瘤组织热休克处理后经Sephacry1S 2 0 0HR分子筛、ConA和ADP柱序列层析进行分离 ,所得蛋白经电泳及Westernblot进行相对分子质量及性质鉴定 ,用Lowry标准曲线法对各阶段洗脱液进行蛋白定量分析 ,并计算蛋白得率。结果 :纯化蛋白经鉴定确系相对分子质量为 70× 10 3 的HSP70蛋白 ;每克湿重瘤组织可纯化约 5 0mgHSP70。结论 :用上述蛋白层析法可分离获得较纯的HSP70蛋白 ,为临床实际应用提供基础。 展开更多
关键词 肉瘤180 热休克蛋白质70分离和提纯 动物实验
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1PEP-1-p27mt融合蛋白的原核表达及纯化
11
作者 周龙 王立林 +3 位作者 朱明磊 王家宁 黄永章 严世荣 《陕西医学杂志》 CAS 北大核心 2008年第5期539-542,共4页
目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测... 目的:构建融合蛋白PEP-1-p27mt的原核表达质粒,并进行诱导表达和蛋白纯化。方法:通过PCR方法自pORF9-hp27mtv21质粒中扩增p27mt基因,克隆入中间载体pGEM-TEasy Vector。经XhoI和BamH1双酶切后,构建原核表达载体pET15b-pep-1-p27mt,经测序证实构建成功后转化EcoliBL21(DE3)pLysS,表达PEP-1-p27mt融合蛋白,经Ni-NTA树脂亲合层析,纯化产物进行SDS-PAGE及Western Blot分析鉴定。结果:成功构建PEP-1-p27mt融合蛋白原核表达载体,表达并纯化了相对分子量为32×103的PEP-1-p27mt融合蛋白。结论:PEP-1-p27mt融合蛋白表达载体的构建及目的蛋白的表达纯化,为体内应用细胞周期抑制蛋白诱导肿瘤细胞凋亡的研究提供了理论基础。 展开更多
关键词 蛋白质 分离方法 提纯方法 双酶 载体
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人成釉蛋白C端肽的大量表达及纯化
12
作者 田宇 鲁红 +4 位作者 倪龙兴 肖明振 余擎 蒲勤 路凡 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期219-221,共3页
目的:获得高纯度的重组人成釉蛋白C端肽。方法:实验于2001-01/2004-06在解放军第四军医大学口腔内科实验室解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学实验室完成。①转化pRSET-A/成釉蛋白原核表达质粒入BL21(DE3)细菌进行大量培养,... 目的:获得高纯度的重组人成釉蛋白C端肽。方法:实验于2001-01/2004-06在解放军第四军医大学口腔内科实验室解放军第四军医大学基础部生物化学与分子生物学实验室完成。①转化pRSET-A/成釉蛋白原核表达质粒入BL21(DE3)细菌进行大量培养,加入诱导剂IPTG至终浓度为0.1mmol/L,32℃继续振荡诱导培养5h,收集细菌,诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱Ni-NTA结合蛋白,收集洗脱蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定。②离子交换层析缓冲液(pH 7.4,50 mmol/L Tris·Cl)平衡Q SapharoseHP层析柱,将初步纯化的蛋白样品加在Q Sapharose HP凝胶介质上,梯度洗脱结合的蛋白,收集洗脱峰,制样,聚丙烯酰胺凝胶电泳法鉴定洗脱蛋白。结果:①表达重组人成釉蛋白C端肽的金属螯合亲和层析结果:诱导菌体的裂解上清经金属螯合亲和层析,洗脱下Ni-NTA结合蛋白,经聚丙烯酰胺凝胶电泳法电泳证实获得初步纯化的重组人成釉蛋白C端肽,其中仍含一些杂蛋白。②重组人成釉蛋白C端肽的离子交换层析结果:获得多个蛋白洗脱峰,聚丙烯酰胺凝胶电泳法证实获得纯化的重组人成釉蛋白C端肽。结论:获得了纯化的人成釉蛋白重组蛋白。 展开更多
关键词 牙釉质蛋白质/分离和提纯 色谱法 亲和 色谱法 离子交换
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人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化与鉴定 被引量:3
13
作者 季鹏 顾春荣 +3 位作者 卞智萍 陈相健 张寄南 杨笛 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第27期5387-5390,共4页
目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法。方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。①实验材料:人心室肌由南京医科... 目的:以往的心脏型脂肪酸结合蛋白多来自牛、鼠等动物心肌组织,本实验构建了人左心室心肌组织纯化心脏型脂肪酸结合蛋白的新方法。方法:实验于2005-01/03在南京医科大学第一附属医院心血管病研究所完成。①实验材料:人心室肌由南京医科大学第一附属医院心血管病研究所提供。②实验过程:取20g人左心室肌在缓冲液中匀浆,多步骤离心后以(NH4)2SO4进行盐析→再次离心→沉淀缓冲液重悬透析得蛋白粗提液→Sephadex G-75凝胶过滤→电泳确定主要蛋白条带的收集管号合并收集→QSepharose Fast Flow阴离子交换层析→聚乙二醇浓缩→缓冲液透析得人心脏型脂肪酸结合蛋白。③实验评估:以SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白为对照标准品;以Tricine-SDS-PAGE电泳鉴定相对分子质量;以鼠抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体及羊抗鼠IgG对其进行Western印迹检测鉴定其特异性。结果:①Sephadex G-75凝胶过滤柱层析结果:各组分经Tricine-SDS-PAGE电泳检测证实,部分收集管中存在相对分子质量约14400的人心脏型脂肪酸结合蛋白。②阴离子交换柱层析结果:在洗脱液NaCl浓度达6mmol/L时,出现蛋白峰,人心脏型脂肪酸结合蛋白被洗脱;NaCl浓度达20mmol/L时,蛋白峰降至基线,蛋白洗脱结束。③纯化的人心脏型脂肪酸结合蛋白鉴定结果:经电泳显示其相对分子质量约为14000,纯度约为90%;Western印迹证实其可被抗人脂肪酸结合蛋白单克隆抗体特异识别,与对照标准品SIGMA公司人心脏型脂肪酸结合蛋白结果一致。实验从20g湿重心室肌中共纯化得到15.4mg心脏型脂肪酸结合蛋白,得率为0.77mg/g。结论:Sephadex G-75凝胶过滤柱层析及阴离子交换柱层析相结合,可用于人心脏型脂肪酸结合蛋白的纯化。 展开更多
关键词 载体蛋白质 分离和提纯 组织构建
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结核分支杆菌HSP70原核表达载体的构建和表达及蛋白纯化 被引量:2
14
作者 史洪博 段秀梅 +7 位作者 李树蕾 许淑芬 车媛媛 刘小林 刘力华 姜艳芳 方艳秋 谭岩 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期989-992,999,共5页
目的:构建结核分支杆菌HSP70原核表达载体并诱导其表达和纯化及鉴定目的蛋白。方法:利用PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增出Mtb HSP70 DNA序列,构建重组质粒pGEM-Mtb HSP70,经酶切、PCR和测序鉴定后,将Mtb HSP70基因亚克隆到原核... 目的:构建结核分支杆菌HSP70原核表达载体并诱导其表达和纯化及鉴定目的蛋白。方法:利用PCR技术从牛型结核分支杆菌基因组中扩增出Mtb HSP70 DNA序列,构建重组质粒pGEM-Mtb HSP70,经酶切、PCR和测序鉴定后,将Mtb HSP70基因亚克隆到原核表达质粒PQE30,构建重组表达质粒PQE30-MtbHSP70,在大肠杆菌M15中诱导表达。用镍凝胶亲和层析的方法纯化目的蛋白,Western blotting杂交鉴定纯化蛋白。结果:经测序证实,获得的目的基因与GenBank中公布的结核杆菌Mtb HSP70基因序列一致。构建的原核表达载体PQE30-Mtb HSP70在大肠杆菌M15中经1 mmol.L-1IPTG诱导后表达出相对分子质量约为70 400的蛋白,镍柱纯化后经抗组氨酸单克隆抗体进行Western blotting,在相对分子质量约70 400处可见特异性着色带。结论:成功构建原核表达载体PQE30-Mtb HSP70,并成功诱导Mtb HSP70蛋白的表达,通过镍凝胶亲和层析法获得纯度较高的Mtb HSP70蛋白。 展开更多
关键词 分支杆菌 结核 热休克蛋白质70 基因表达 原核细胞 蛋白质/分离提纯
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小鼠ERA蛋白在大肠杆菌中的表达及其纯化
15
作者 杜孟刚 陈苏民 +3 位作者 吴元明 董珂 陈南春 郑玉 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第8期684-687,共4页
目的 :对小鼠ERA蛋白 (mERA)进行表达、纯化 ,为真核生物ERA功能研究奠定基础 .方法 :构建MBP mER A融合表达载体 .在大肠杆菌中诱导表达融合的小鼠ERA蛋白 ,经直链淀粉亲和层析纯化 ,WesternBlotting鉴定所表达纯化的蛋白 .结果 :表达... 目的 :对小鼠ERA蛋白 (mERA)进行表达、纯化 ,为真核生物ERA功能研究奠定基础 .方法 :构建MBP mER A融合表达载体 .在大肠杆菌中诱导表达融合的小鼠ERA蛋白 ,经直链淀粉亲和层析纯化 ,WesternBlotting鉴定所表达纯化的蛋白 .结果 :表达的MBP mERA融合蛋白占菌体总蛋白的 1 8% ;纯化后的融合蛋白纯度为 70 % ;WesternBlotting证实了mERA蛋白的表达 .结论 :利用基因重组技术 ,在大肠杆菌中高表达了mera基因 ,并对融合蛋白进行了初步纯化 . 展开更多
关键词 小鼠 ERA基因 基因表达 蛋白质 分离和提纯
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重组人C22orf37融合蛋白的克隆、表达、纯化及鉴定
16
作者 叶星明 姜昌丽 张英起 《第四军医大学学报》 北大核心 2009年第12期1057-1059,共3页
目的:构建人C22orf37基因的原核表达载体,表达并纯化C22orf37重组蛋白.方法:应用PCR方法从人外周血白细胞cDNA文库中获得人C22orf37基因,成功构建人C22orf37融合表达载体,诱导表达His-C22orf37融合表达蛋白并对表达产物进行SDS-PAGE电... 目的:构建人C22orf37基因的原核表达载体,表达并纯化C22orf37重组蛋白.方法:应用PCR方法从人外周血白细胞cDNA文库中获得人C22orf37基因,成功构建人C22orf37融合表达载体,诱导表达His-C22orf37融合表达蛋白并对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析和Western Blot鉴定.应用镍螯合层析法纯化重组融合蛋白,并对纯化产物进行纯度分析.结果:成功构建了人C22orf37重组融合载体pQE30-C22orf37,工程菌pQE30-C22orf37/DH5α经IPTG诱导后的菌体蛋白经SDS-PAGE电泳分析,在Mr约18 000处出现了一条新生的蛋白条带,Western Blot结果显示该条带能够与His抗体特异性结合.应用Ni-NTA层纯化出目的蛋白,纯化后的蛋白经Primer Premier软件分析纯度约80%.结论:成功构建了人C22orf37的融合蛋白原核表达载体并成功表达与纯化了人C22orf37的融合蛋白,为下一步的C22orf37 mAb的制备和C22orf37蛋白表达的组织分布及功能研究奠定了基础. 展开更多
关键词 人C22orf37基因 原核表达 重组融合蛋白质/分离和提纯
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HSA/IL1ra融合蛋白的纯化及生物学活性研究
17
作者 沈其 陈枢青 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期260-264,共5页
目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测。方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用。结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra... 目的:纯化HSA/IL1ra融合蛋白并对其生物学活性进行检测。方法:采用亲和层析及离子交换层析分离纯化HSA/IL1ra融合蛋白,检测其对IL1引起的对A375 S2的杀伤保护作用。结果:获得的HSA/IL1ra融合蛋白HPLC纯度在98%以上,并且具有与天然IL1ra相似的、对IL1杀伤A375 S2细胞的保护作用。结论:获得高纯度的HSA/IL1ra融合蛋白并且具有相应的生物学活性。 展开更多
关键词 受体 白细胞介素1/拮抗剂和抑制剂 血清白蛋白 重组融合蛋白质/分离和提纯 重组融合蛋白质类/生物合成 黑色素瘤
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利用大孔吸附树脂提取西洋参果肉总皂苷 被引量:6
18
作者 刘继华 朱涛 +2 位作者 卢丹 刘金平 李平亚 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期819-820,共2页
目的 :选择合理的工艺条件分离西洋参果肉总皂苷。方法 :西洋参果肉水提取液 ,经 D4 0 2 0 大孔吸附树脂吸附 ,分别经水洗和 70 %乙醇洗脱 ,收集乙醇洗脱液 ,回收乙醇即得西洋参果肉总皂苷。结果 :西洋参果肉水提取液 15 0 0 0 m L ,经 ... 目的 :选择合理的工艺条件分离西洋参果肉总皂苷。方法 :西洋参果肉水提取液 ,经 D4 0 2 0 大孔吸附树脂吸附 ,分别经水洗和 70 %乙醇洗脱 ,收集乙醇洗脱液 ,回收乙醇即得西洋参果肉总皂苷。结果 :西洋参果肉水提取液 15 0 0 0 m L ,经 D4 0 2 0 大孔吸附树脂 2 5 0 g吸附 ,用水洗至无色后 ,继用 70 %乙醇 15 0 0 0 m L洗脱 ,回收乙醇即得西洋参果肉总皂苷。结论 :利用大孔吸附树脂提取西洋参果肉总皂苷 ,产品中总皂苷含量超过 5 0 % ,是简便、可行的提取方法。 展开更多
关键词 皂苷 西洋参 植物提取物 分离提纯 大孔吸附树脂
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艾滋病合并分枝杆菌感染患者分枝杆菌菌种鉴定 被引量:10
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作者 宋炜 刘莉 卢洪洲 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期243-248,共6页
目的:对艾滋病合并分枝杆菌感染患者菌株标本进行菌种鉴定,评价MPB64抗原胶体金法快速检测试剂盒鉴别分枝杆菌的价值。方法:对艾滋病患者临床标本中培养出的140株分枝杆菌菌株用16SrDNA测序的方法进行菌种鉴定,分析艾滋病患者中常... 目的:对艾滋病合并分枝杆菌感染患者菌株标本进行菌种鉴定,评价MPB64抗原胶体金法快速检测试剂盒鉴别分枝杆菌的价值。方法:对艾滋病患者临床标本中培养出的140株分枝杆菌菌株用16SrDNA测序的方法进行菌种鉴定,分析艾滋病患者中常见非结核性分枝杆菌(NTM)菌种,同时对这些标本用MPB64抗原免疫胶体金法进行菌株鉴定,分析后者的敏感性和特异性。结果:以16SrDNA测序结果为金标准,MPB64抗原胶体金法快速检测区分结核分枝杆菌(MTB)与NTM的敏感性和特异性分别为96.00%和96.84%。共有114份标本(114/140,81.43%)获得明确鉴定结果,其中50份(43.86%)为MTB,63份标本(55.26%)鉴定为NTM。最常见的NTM菌种为戈登分枝杆菌、鸟分枝杆菌和堪萨斯分枝杆菌。结论:MPB64抗原胶体金法检测分枝杆菌菌种具有较好的特异性,且快速、经济、简便,适合用于临床对MTB及NTM的初步鉴别。艾滋病合并结核患者中NTM的比例较高,需进行菌种鉴定以指导临床治疗。 展开更多
关键词 获得性免疫缺陷综合征 分枝杆菌 结核/分离和提纯 分枝杆菌属/分 寡核苷酸序列分析 细菌蛋白质类/遗传学 胶体金 试剂盒 诊断
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睫状神经营养因子工程菌产物纯化工艺的建立 被引量:1
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作者 王玉兰 马红雨 +1 位作者 朱美才 蔡庆 《空军总医院学报》 2001年第4期243-244,共3页
关键词 神经生长因子 基因表达 蛋白质/分离和提纯
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