目的探讨HOXA4在人胶质瘤中的表达水平以及对胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法通过生物信息学分析HOXA4在人胶质瘤中表达情况。选取胶质瘤细胞U251转染HOXA4 siR NA作为si-HOXA4组,抑制HOXA4基因的表达,同时转染阴性对照慢病毒...目的探讨HOXA4在人胶质瘤中的表达水平以及对胶质瘤细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法通过生物信息学分析HOXA4在人胶质瘤中表达情况。选取胶质瘤细胞U251转染HOXA4 siR NA作为si-HOXA4组,抑制HOXA4基因的表达,同时转染阴性对照慢病毒载体作为si-NC组。q RT-PCR和Western blot检测转染后HOXA4基因和蛋白的表达水平。MTT实验、细胞克隆实验、Transwell实验和流式细胞术分别检测抑制HOXA4基因表达对细胞增殖、侵袭、周期和凋亡的影响。Western blot分析HOXA4下游凋亡蛋白P53、Bcl-2、Cytochrome C、Caspase-3的表达。结果与正常脑组织比较,人胶质瘤中HOXA4表达水平明显升高(P<0.001)。与si-NC组比较,si-HOXA4组U251细胞的OD值从转染后第4天明显下降(P<0.01),第7天下降更为显著(P<0.001)。si-HOXA4组U251细胞较si-NC组侵袭细胞数明显减少(P<0.01),G0/G1期比例显著升高(P<0.05),凋亡率明显升高(P<0.05),凋亡蛋白P53、Cytochrome C、Caspase-3表达明显升高,Bcl-2明显下降(P<0.05)。结论HOXA4基因在人胶质瘤中高表达,可能通过影响细胞增殖、侵袭、凋亡等生物功能对胶质瘤的发生发展起重要作用。展开更多
[目的]体外建立紫杉醇(Taxol)耐药的人肝癌细胞株Hep3B/TAX,并以此为模型对凋亡抵抗现象与紫杉醇耐药的相关性进行研究。[方法]采用浓度梯度间歇刺激法建立Hep3B/TAX耐药细胞株,MTT法检测Hep3B/TAX对紫杉醇的耐药性,流式细胞术检测Hep3B...[目的]体外建立紫杉醇(Taxol)耐药的人肝癌细胞株Hep3B/TAX,并以此为模型对凋亡抵抗现象与紫杉醇耐药的相关性进行研究。[方法]采用浓度梯度间歇刺激法建立Hep3B/TAX耐药细胞株,MTT法检测Hep3B/TAX对紫杉醇的耐药性,流式细胞术检测Hep3B/TAX的细胞凋亡水平,荧光定量PCR检测Hep3B和Hep3B/TAX细胞株中Bcl-2、Bax、caspase3、caspase8和caspase9基因的表达水平,蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测Hep3B、Hep3B/TAX细胞株中Bcl-2、Bax、caspase3、caspase8和caspase9的蛋白表达。[结果]Hep3B细胞对紫杉醇的IC50为0.2mΜ,而耐药细胞株Hep3B/TAX对紫杉醇的IC50升为4.33μM。耐药指数(RI)为21.65。流式细胞术结果显示,0.1μM、0.2μM紫杉醇处理24h后,亲本细胞Hep3B的凋亡率显著高于耐药细胞株Hep3B/TAX。RT-PCR结果显示,与Hep3B细胞株相比,Hep3B/TAX细胞株中Bcl-2 m RNA的表达量显著升高(P<0.01),而caspase3、caspase8、caspase9和Bax m RNA的表达量显著降低(P<0.01)。Western-blot实验结果显示,与Hep3B细胞株相比,Hep3B/TAX耐药细胞株的抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著升高,相关促凋亡蛋白caspase3、caspase8、caspase9和Bax的表达量降低。[结论]成功建立紫杉醇耐药的人肝癌细胞株Hep3B/TAX,人肝癌细胞株Hep3B对紫杉醇耐药的产生与改变凋亡相关因子的表达而导致的凋亡抵抗现象有关。展开更多
文摘[目的]体外建立紫杉醇(Taxol)耐药的人肝癌细胞株Hep3B/TAX,并以此为模型对凋亡抵抗现象与紫杉醇耐药的相关性进行研究。[方法]采用浓度梯度间歇刺激法建立Hep3B/TAX耐药细胞株,MTT法检测Hep3B/TAX对紫杉醇的耐药性,流式细胞术检测Hep3B/TAX的细胞凋亡水平,荧光定量PCR检测Hep3B和Hep3B/TAX细胞株中Bcl-2、Bax、caspase3、caspase8和caspase9基因的表达水平,蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测Hep3B、Hep3B/TAX细胞株中Bcl-2、Bax、caspase3、caspase8和caspase9的蛋白表达。[结果]Hep3B细胞对紫杉醇的IC50为0.2mΜ,而耐药细胞株Hep3B/TAX对紫杉醇的IC50升为4.33μM。耐药指数(RI)为21.65。流式细胞术结果显示,0.1μM、0.2μM紫杉醇处理24h后,亲本细胞Hep3B的凋亡率显著高于耐药细胞株Hep3B/TAX。RT-PCR结果显示,与Hep3B细胞株相比,Hep3B/TAX细胞株中Bcl-2 m RNA的表达量显著升高(P<0.01),而caspase3、caspase8、caspase9和Bax m RNA的表达量显著降低(P<0.01)。Western-blot实验结果显示,与Hep3B细胞株相比,Hep3B/TAX耐药细胞株的抗凋亡蛋白Bcl-2的表达量显著升高,相关促凋亡蛋白caspase3、caspase8、caspase9和Bax的表达量降低。[结论]成功建立紫杉醇耐药的人肝癌细胞株Hep3B/TAX,人肝癌细胞株Hep3B对紫杉醇耐药的产生与改变凋亡相关因子的表达而导致的凋亡抵抗现象有关。
