摘要
目的:探讨氧化应激的代表物质过氧化氢(H_2O_2)对人支气管上皮细胞(16-HBE)VEGF表达的影响及可能的调控机制。方法:过氧化氢部分为7组(0~500μmol·L^(-1)),NAC部分为3组(10~50 mmol·L^(-1))。Real time-PCR法检测不同H_2O_2浓度对16-HBE VEGF/β-actin基因表达水平的影响,并观察不同浓度NAC作用下H_2O_2(100μmol·L^(-1))对16-HBE表达VEGF基因的影响。应用ELISA法检测上述刺激组中细胞培养上清中VEGF的含量。结果:H_2O_2在50μmol·L^(-1)至200μmol·L^(-1)之间均能上调VEGF(165)的基因和蛋白的表达,以H_2O_2(100μmol·L^(-1))组上调最高,差异有统计学意义(P<0.05)。H_2O_2(100μmol·L^(-1))+LY294002(10μmol·L^(-1))较H_2O_2(100μmol·L^(-1))组VEGF基因和蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05)。H_2O_2(100μmol·L^(-1))+NAC(10 mmol·L^(-1)L)组、H_2O_2(100μmol·L^(-1))+NAC(20 mmol·L^(-1))组、H_2O_2(100μmol·L^(-1))+NAC(50 mmol·L^(-1))组较H_2O_2(100μmol·L^(-1))组VEGF基因和蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.001)。H_2O_2(100μmol·L^(-1))+NAC(50 mmol·L^(-1))组较H_2O_2(100μmol·L^(-1))+NAC(10 mmol·L^(-1))组VEGF表达下降明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:过氧化氢(H_2O_2)在一定浓度范围内能在基因和蛋白水平上调16-HBEVEGF(165)的表达,且能够被PI3K通路特异阻断剂LY294002所抑制,过氧化氢可经由PI3K通路上调16-HBEVEGF的表达;NAC在不影响细胞活力的情况下能够逆转由过氧化氢导致的16-HBE VEGF基因和蛋白水平的表达上调。
Objective： To investigate Effect of Hydrogen dioxide as a representative substance of oxidative stress on the expression of vascular endothelial growth factor in human bronchiolar epithelial cell （HBE）. Methods： There were 7 groups in the Hydrogen dioxide group （0-500 μmol·L^-1 ）, stimulated 16-HBE 12 for hours. There were 3 groups in the NAC groups（10-50 mmol·L^-1 ）, stimulated 16-HBE 12 for hours. Real time-PCR was applied to detect VEGF gene expression of 16-HBE under the different concentrations of H 2O 2, LY294002, and NAC. Application of enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） were applied to detect the cell culture supernatant of VEGF protein expression. Results： H 2O 2（50 μmol·L^-1 ） group, H 2O 2 （100 μmol·L^-1 ） group, H 2O 2（150 μmol·L^-1 ） group, H 2O 2（200 μmol·L^-1 ） group increased VEGF （165） gene and protein expression compared with the normal control group, with statistically significance （ P 〈0.05）; compared with other groups, the H 2O 2 （100 μmol·L^-1 ） group expressed the highest VEGF, with statistically significance （ P 〈0.05）. H 2O 2 （100 μmol·L^-1 ）＋ LY294002 （10 μmol·L^-1 ） decreased VEGF gene and protein expression compared with H 2O 2 （100 μmol·L^-1 ） group, with statistically significance （ P 〈0.05 ; H 2O 2（100 μmol·L^-1 ）＋ NAC（10 mmol·L^-1 ）group、H 2O 2（100 μmol·L^-1 ）＋NAC（20 mmol·L^-1 ）group、H 2O 2（100 μmol·L^-1 ）＋NAC （50 mmol·L^-1 ）group decreased VEGF gene and protein expression compared with H 2O 2（100 μmol·L^-1 ） group, with statistically significance（ P 〈0.001）; The H 2O 2（100 μmol·L^-1 ）＋NAC（50 mmol·L^-1 ）group decreased VEGF gene and protein expression compared with H 2O 2 （100 μmol·L^-1 ）＋NAC（10 mmol·L^-1 ）group,with statistically significance （ P 〈0.05）. Conclusion： Hydrogen dioxide can increased the gene and protein expression of VEGF（165） in human bronchiolar epithelium cell（16-HBE） under certain concentrations, and these concentration did not affect the Cell viability; The H 2O 2（100μmol·L^-1 ） expressed the highst VEGF, and can be inhibited by PI3K pathway specific inhibitor LY294002; Hydrogen dioxide increases VEGF expression in 16-HBE via PI3K pathway, which can be reversed by NAC in certain concentration, and these concentration did not affect the Cell viability.
作者
沈湘波
李小玲
赵海金
蔡绍曦
SHEN Xiang-bo;LI Xiao-ling;ZHAO Hai-jin;CAI Shao-xi(Department of Respiratory,Changsha Central Hospital,Changsha,Hunan 410004;Department of Respiratory,Ping Xiang People＇s Hospital,Pingxiang,Jiangxi 337000;Department of Respiratory and Critical Care Medicine,Nanfang Hospital,Southern Medical University,Guangzhou,Guangdong 510515)
出处
《赣南医学院学报》
2018年第6期523-529,558,共8页
JOURNAL OF GANNAN MEDICAL UNIVERSITY
