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肝细胞癌中MAPK和Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达的关系 被引量:2
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作者 冯德云 郑晖 +1 位作者 谭怡 程瑞雪 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1262-1266,共5页
目的:探讨肝细胞癌中MAPK和Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达的关系。方法:利用SP免疫组织化学技术检测55例肝细胞癌(hepatocellulancarcinoma,HCC)及其癌旁肝组织中p42/44MAPK、p-Stat3、c-fos和c-jun蛋白的表达。结果:HCC组织中p42/... 目的:探讨肝细胞癌中MAPK和Stat3磷酸化与c-fos和c-jun蛋白表达的关系。方法:利用SP免疫组织化学技术检测55例肝细胞癌(hepatocellulancarcinoma,HCC)及其癌旁肝组织中p42/44MAPK、p-Stat3、c-fos和c-jun蛋白的表达。结果:HCC组织中p42/44MAPK、p-Stat3、c-fos和c-jun蛋白的阳性率和阳性信号强度显著高于癌旁肝组织(P<0.01);在HCC和癌旁肝组织中p42/44MAPK和c-fos蛋白表达强度呈正相关;p-Stat3与c-jun蛋白亦呈正相关;但p42/44MAPK和p-Stat3信号强度之间均无明显相关性。结论:本资料提示Ras/Raf/MAPK和JAKs/Stat3信号级联异常可能在细胞恶性转化中均起重要作用;癌旁组织中呈p42/44MAPK和p-Stat3阳性的肝细胞可能是具有恶性潜能的癌前细胞群,推测MAPK和Stat3激活可能是HCC发生的早期事件。 展开更多
关键词 肝肿瘤 丝裂原激活 蛋白激酶 磷酸化 转录激活因子3 信号传导 癌基因
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日本血吸虫新抗原基因的筛选、克隆、表达和免疫效果研究 被引量:7
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作者 陈利玉 易新元 +2 位作者 曾宪芳 蔡春 L.McREYNOLDS 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2005年第4期331-337,共7页
为了寻找日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj) 新的疫苗候选基因并进行免疫效果研究,用Sj雌虫抗原免疫家兔制备血清,对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的新基因(命名为Sj-F1,GenBank登录号为AY261995) 克隆入原核表达载体pTWIN1和... 为了寻找日本血吸虫(Schistosomajaponicum,Sj) 新的疫苗候选基因并进行免疫效果研究,用Sj雌虫抗原免疫家兔制备血清,对Sj成虫cDNA文库进行免疫筛选,将获得的新基因(命名为Sj-F1,GenBank登录号为AY261995) 克隆入原核表达载体pTWIN1和真核表达载体pcDNA3,经PCR、限制性酶切筛选和鉴定阳性重组子. 将pTWIN1/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2566,在低温和低IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白(rSj-F1/intein2),并经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blot)分析鉴定. 将pcDNA3/Sj-F1质粒转化大肠杆菌ER2502,大量制备DNA疫苗. 用重组融合蛋白和DNA疫苗免疫小鼠,末次免疫后2周用Sj尾蚴进行攻击感染. 感染后42天剖杀冲虫,计算减虫率和减卵率. 感染前采血用ELISA法检测抗体. 免疫保护效果测定显示:重组蛋白疫苗以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经粘膜免疫分别获得了28.07%、24.69%的减虫率和48.30%、46.38%的减卵率;DNA疫苗(pcDNA3/Sj-F1)单独免疫获得了18.47%的减虫率和35.06%的减卵率;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经皮下加强免疫,减虫率和减卵率分别提高到了40.42%和56.17%;用DNA疫苗启动免疫后用重组蛋白疫苗经黏膜加强免疫,减虫率和减卵率增高更明显,分别提高到了42.38%和62. 展开更多
关键词 日本血吸虫 免疫筛选 雌虫 Sj-F1 免疫
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日本血吸虫新基因SjF1的克隆、表达及免疫保护效果研究 被引量:5
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作者 陈利玉 易新元 +2 位作者 曾宪芳 张顺科 Larry McReynolds 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第6期467-470,共4页
目的 构建日本血吸虫中国大陆株SjF1原核表达重组质粒,并进行免疫保护效果测定。方法 用聚合酶链反应(PCR)法将SjF1基因从已剪切阳性克隆中扩增出来,克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端,经PCR和限制性酶切筛选阳性重组子。将阳性... 目的 构建日本血吸虫中国大陆株SjF1原核表达重组质粒,并进行免疫保护效果测定。方法 用聚合酶链反应(PCR)法将SjF1基因从已剪切阳性克隆中扩增出来,克隆入原核表达载体pTWIN1上intein2的N端,经PCR和限制性酶切筛选阳性重组子。将阳性重组子转化大肠杆菌,在低温和低IPTG浓度下诱导表达可溶性重组融合蛋白。经鉴定后分别以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经黏膜免疫昆明鼠,观察诱导产生的减虫和减卵效果。感染前采血和唾液用ELISA法检测抗体。结果 成功克隆并表达了rSjF1。rSjF1以FCA作佐剂经皮下免疫获得了29.92%的减虫率和51.08%的减卵率;rSjF1以壳聚糖作佐剂经滴鼻免疫获得了25.74%的减虫率和44.04%的减卵率。结论 获得了rSjF1,该蛋白以FCA作佐剂经皮下免疫和以壳聚糖作佐剂经黏膜免疫均能诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。 展开更多
关键词 日本血吸虫 基因 SjF1 克隆 表达 免疫
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日本血吸虫组织蛋白酶B DNA疫苗的免疫保护效果研究 被引量:4
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作者 张冉 易新元 +2 位作者 曾宪芳 张顺科 Larry Mc Reynolds 《寄生虫与医学昆虫学报》 CAS 2004年第3期139-143,共5页
目的 :观察已构建日本血吸虫大陆株 31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31在BALB c小鼠体内的免疫保护效果。方法 :用纯化的空白质粒载体VR1 0 1 2、重组质粒VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31于股四... 目的 :观察已构建日本血吸虫大陆株 31kDa组织蛋白酶BDNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31在BALB c小鼠体内的免疫保护效果。方法 :用纯化的空白质粒载体VR1 0 1 2、重组质粒VR1 0 1 2 Sj31及VR1 0 1 2 SjGST Sj31于股四头肌注射免疫BALB c鼠 :将 36只 6~ 8周龄BALB c鼠随机分为 3组 ,每组 1 2只 ,对照组 (A组 )注射空白质粒载体VR1 0 1 2 ,B组注射重组质粒VR1 0 1 2 Sj31 ,C组注射重组质粒VR1 0 1 2 SjGST Sj31。质粒剂量均为 1 0 0 μg ,每隔 2周免疫 1次 ,共免疫 3次 ,第 3次免疫后第 2 1天 ,每只鼠经腹部感染 1 0条尾蚴 ,4 2天后剖杀计数各小鼠成虫数和每克肝卵数 ,观察诱导产生的减虫和减卵效果 ,并用ELISA分析小鼠血清中的抗体。结果 :ELISA分析表明 ,第 3次免疫后小鼠出现特异性IgG抗体。与空白质粒对照组比较 ,2个实验组的减虫率分别为 2 5 0 %及 30 0 % (P <0 0 5 ) ,肝组织减卵率分别为 5 4 90 %及 6 9 74 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率分别为 4 7 96 %、5 4 6 2 % (P <0 0 0 1 )。与B组相比 ,C组的肝组织减卵率为 32 92 % (P <0 0 0 1 ) ,每雌肝减卵率为 1 2 79% (P <0 0 5 )。结论 :DNA疫苗VR1 0 1 2 Sj31和VR1 0 1 2 SjGST Sj31能诱导小鼠产生一定水平的抗? 展开更多
关键词 日本血吸虫 组织蛋白酶B DNA疫苗 免疫 寄生虫病
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水牛感染血清免疫筛选日本血吸虫成虫cDNA文库 被引量:2
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作者 张冉 易新元 +2 位作者 曾宪芳 黄跃龙 Larry McReynolds 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期549-552,共4页
目的 筛选新的有潜质的日本血吸虫保护性抗原分子编码基因。方法 用水牛感染血清对日本血吸虫(Schistosoma Japonicum,sj)成虫cDNA文库进行免疫筛选,将阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。结果 3轮筛选后,将7个阳性克隆经辅助噬... 目的 筛选新的有潜质的日本血吸虫保护性抗原分子编码基因。方法 用水牛感染血清对日本血吸虫(Schistosoma Japonicum,sj)成虫cDNA文库进行免疫筛选,将阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。结果 3轮筛选后,将7个阳性克隆经辅助噬菌体自动剪切并PCR扩增显示,插入的日本血吸虫cDNA片段大小在0.8-2.0 kb之间,选取其中4个经DNA测序分析,发现2个未曾报道过的日本血吸虫新基因,分别命名为sj-IB1和sj-Rho GTPase-like gene,并在Gene Bank登记注册。结论 水牛感染血清可识别日本血吸虫的特异性抗原分子,这些抗原分子的免疫保护作用值得进一步研究。 展开更多
关键词 水牛 免疫筛选 日本血吸虫 CDNA文库 感染血清 血吸虫病
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日本血吸虫Rho GTPase DNA疫苗及亚单位疫苗的构建和分析 被引量:2
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作者 张冉 易新元 +4 位作者 曾宪芳 黄跃龙 蔡春 张顺科 Larry Mc Reynolds 《中国热带医学》 CAS 2003年第3期279-281,共3页
目的 构建日本血吸虫大陆株Sj -RhoGTPase -like真核及原核表达重组质粒 ,并进行鉴定分析。 方法 用PCR法将Sj -RhoGTPase -like基因从已剪切阳性克隆中扩增出来 ,亚克隆至pcDNA3.1和pGEX -5X -3中 ,分别经PCR、双酶切、测序、SDS -P... 目的 构建日本血吸虫大陆株Sj -RhoGTPase -like真核及原核表达重组质粒 ,并进行鉴定分析。 方法 用PCR法将Sj -RhoGTPase -like基因从已剪切阳性克隆中扩增出来 ,亚克隆至pcDNA3.1和pGEX -5X -3中 ,分别经PCR、双酶切、测序、SDS -PAGE和Westernblot等方法鉴定。 结果 PCR和测序均证明Sj -RhoGTPase -like基因疫苗构建成功 ,重组蛋白经SDS -PAGE电泳可观察到与预期分子量相应的条带 ,转印后可被水牛感染血清识别。 结论 成功构建了Sj -RhoGTPase -like基因的两种重组载体 。 展开更多
关键词 日本血吸虫 RhoGTPaseDNA疫苗 亚单位疫苗 构建 克隆
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日本血吸虫尾蚴抗原免疫血清筛选成虫cDNA文库与新基因分析 被引量:1
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作者 袁仕善 易新元 +4 位作者 曾宪芳 欧阳理 王敏 唐连飞 Larry Mc Reynolds 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期289-292,共4页
目的 筛选与日本血吸虫尾蚴抗原有共同免疫原性的日本血吸虫成虫抗原分子 ,为血吸虫病诊断和疫苗研究提供新的候选分子。 方法 利用日本血吸虫尾蚴可溶性抗原免疫兔血清筛选日本血吸虫 (Schistosomajapon icum ,Sj)成虫cDNA文库 ,对... 目的 筛选与日本血吸虫尾蚴抗原有共同免疫原性的日本血吸虫成虫抗原分子 ,为血吸虫病诊断和疫苗研究提供新的候选分子。 方法 利用日本血吸虫尾蚴可溶性抗原免疫兔血清筛选日本血吸虫 (Schistosomajapon icum ,Sj)成虫cDNA文库 ,对阳性克隆的插入片段进行PCR扩增和序列分析。  结果 共筛选出 13个阳性克隆 ,PCR扩增出特异的插入片段。测序分析获 4个新基因SjCAI、SjCA、SjCAI 2和SjCAI 3 (登录号分别为AF495 883、AF5 15 83 4、AY1180 86和AY12 93 0 3 ) ,分别编码 3 5 3、161、13 7和 72个氨基酸的蛋白。SjCAI蛋白含 6个DNA结合锌指 ,与原肠胚锌指蛋白XLCGF48.2有一定同源性 ;SjCA蛋白、SjCAI 2蛋白和SjCAI 3蛋白含N 糖基化和磷酸化位点。  结论 筛选Sj成虫cDNA文库获得了新的基因序列。 展开更多
关键词 日本血吸虫 尾蚴 抗原 免疫血清筛选 成虫 CDNA文库 新基因分析
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重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染保护力的研究
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作者 黄复深 易新元 +3 位作者 曾宪芳 唐连飞 张顺科 Larry McReynolds 《中国热带医学》 CAS 2003年第6期713-716,共4页
目的 探讨重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。 方法 实验小鼠分成 4组 ,每组 11只 ,包括CTB、rSjGST2 6+CTB、rSjGST -CA +CTB滴鼻免疫组和PBS滴鼻免疫为对照组。在第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 (... 目的 探讨重组日本血吸虫胞质氨基肽酶粘膜免疫诱导小鼠抗攻击感染的保护力。 方法 实验小鼠分成 4组 ,每组 11只 ,包括CTB、rSjGST2 6+CTB、rSjGST -CA +CTB滴鼻免疫组和PBS滴鼻免疫为对照组。在第 3次免疫后 2周 ,每只经腹部感染 (4 0± 1)条尾蚴。 45d宰杀动物 ,观察减虫率和减卵率。在初次免疫前和攻击感染前采集唾液和尾静脉采血 ,ELISA检测血清及唾液内特异抗体水平。 结果 血清特异IgA和IgG及唾液内sIgA水平升高。rSjGST -CA +CTB和rSjGST2 6+CTB滴鼻免疫组减虫率分别为 2 9 62 %和 3 1 5 5 %。每克肝减卵率分别为 45 0 0 %和63 3 4%。 展开更多
关键词 重组日本血吸虫 胞质氨基肽酶 粘膜免疫 诱导 小鼠 保护力 研究
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