目的探讨低幅度机械牵张力对肌成纤维细胞再分化的诱导作用及增生性瘢痕的转归机制。方法体外培养健康人皮肤成纤维细胞,应用10%幅度牵张力诱导构建肌成纤维细胞模型。实验分为阴性对照组、阳性对照组、实验组,以人正常成纤维细胞为阴...目的探讨低幅度机械牵张力对肌成纤维细胞再分化的诱导作用及增生性瘢痕的转归机制。方法体外培养健康人皮肤成纤维细胞,应用10%幅度牵张力诱导构建肌成纤维细胞模型。实验分为阴性对照组、阳性对照组、实验组,以人正常成纤维细胞为阴性对照组,应用2%幅度牵张力体外培养;以肌成纤维细胞作为实验组和阳性对照组,分别应用2%、10%幅度牵张力继续体外培养,诱导细胞再分化。实验第7天,应用CCK-8法检测细胞增殖能力,SYBR Green qPCR法检测整合素β1、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原的mRNA表达,ELISA法检测TGF-β1、Ⅰ型胶原含量;Western-Blot法检测整合素β1、α-SMA蛋白表达量。结果与阴性对照组比较,实验组肌成纤维细胞的增殖能力增高(F=67.75,P<0.05),细胞内TGF-β1、Ⅰ型胶原的蛋白含量、α-SMA的蛋白表达及各指标的mRNA表达水平均增高(F=132.64~981.60,P<0.05),细胞内整合素β1 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);阳性对照组和实验组肌成纤维细胞内α-SMA mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);而阳性对照组肌成纤维细胞内TGF-β1、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白含量与整合素β1的mRNA和蛋白表达水平均较实验组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低幅度牵张力不能诱导肌成纤维细胞再分化,可能存在其他机制介导了张力诱导肌成纤维细胞再分化的过程。展开更多
目的探讨人体不同部位正常皮肤成纤维细胞对机械张力反应的差异。方法取色素痣切除患者自愿捐赠的背部和上臂内侧正常皮肤,应用组织块法体外培养成纤维细胞,取第5～8代细胞进行实验。将背部和上臂内侧正常成纤维细胞分别设实验组和对照...目的探讨人体不同部位正常皮肤成纤维细胞对机械张力反应的差异。方法取色素痣切除患者自愿捐赠的背部和上臂内侧正常皮肤,应用组织块法体外培养成纤维细胞,取第5～8代细胞进行实验。将背部和上臂内侧正常成纤维细胞分别设实验组和对照组,实验组细胞采用多通道细胞应力加载仪加载周期性机械张力24、36、48 h;对照组细胞正常培养。各时间点加载结束后,倒置显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖活性;RT-PCR法检测细胞内整合素β1、P130Ca s（p130Crk-associated substance）、TGF-β1、Ⅰ型胶原a1链（collagen type Iα1 chain,COL1A1）m RNA水平;ELISA法检测Ⅰ型胶原和TGF-β1含量。对照组于培养对应时间取细胞进行以上观察。结果实验组加载后细胞均增殖旺盛,分布密集,排列呈一定方向性。加载24 h后,实验组背部及上臂内侧细胞增殖,整合素β1、P130Cas、TGF-β1 m RNA表达水平和TGF-β1含量比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;加载36、48 h时,背部细胞以上检测指标均显著高于上臂内侧细胞,差异有统计学意义（P〈0.05）。实验组各时间点背部及上臂内侧细胞的COL1A1 m RNA表达水平和Ⅰ型胶原含量比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。对照组各时间点背部及上臂内侧细胞以上指标比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论背部和上臂内侧皮肤成纤维细胞对机械张力的反应不同,提示人体皮肤成纤维细胞的力学特征存在部位差异,可能导致不同部位增生性瘢痕的发生率不同。展开更多
文摘目的探讨低幅度机械牵张力对肌成纤维细胞再分化的诱导作用及增生性瘢痕的转归机制。方法体外培养健康人皮肤成纤维细胞,应用10%幅度牵张力诱导构建肌成纤维细胞模型。实验分为阴性对照组、阳性对照组、实验组,以人正常成纤维细胞为阴性对照组,应用2%幅度牵张力体外培养;以肌成纤维细胞作为实验组和阳性对照组,分别应用2%、10%幅度牵张力继续体外培养,诱导细胞再分化。实验第7天,应用CCK-8法检测细胞增殖能力,SYBR Green qPCR法检测整合素β1、转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原的mRNA表达,ELISA法检测TGF-β1、Ⅰ型胶原含量;Western-Blot法检测整合素β1、α-SMA蛋白表达量。结果与阴性对照组比较,实验组肌成纤维细胞的增殖能力增高(F=67.75,P<0.05),细胞内TGF-β1、Ⅰ型胶原的蛋白含量、α-SMA的蛋白表达及各指标的mRNA表达水平均增高(F=132.64~981.60,P<0.05),细胞内整合素β1 mRNA和蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);阳性对照组和实验组肌成纤维细胞内α-SMA mRNA和蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);而阳性对照组肌成纤维细胞内TGF-β1、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白含量与整合素β1的mRNA和蛋白表达水平均较实验组增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论低幅度牵张力不能诱导肌成纤维细胞再分化,可能存在其他机制介导了张力诱导肌成纤维细胞再分化的过程。
文摘目的探讨人体不同部位正常皮肤成纤维细胞对机械张力反应的差异。方法取色素痣切除患者自愿捐赠的背部和上臂内侧正常皮肤,应用组织块法体外培养成纤维细胞,取第5～8代细胞进行实验。将背部和上臂内侧正常成纤维细胞分别设实验组和对照组,实验组细胞采用多通道细胞应力加载仪加载周期性机械张力24、36、48 h;对照组细胞正常培养。各时间点加载结束后,倒置显微镜下观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞增殖活性;RT-PCR法检测细胞内整合素β1、P130Ca s（p130Crk-associated substance）、TGF-β1、Ⅰ型胶原a1链（collagen type Iα1 chain,COL1A1）m RNA水平;ELISA法检测Ⅰ型胶原和TGF-β1含量。对照组于培养对应时间取细胞进行以上观察。结果实验组加载后细胞均增殖旺盛,分布密集,排列呈一定方向性。加载24 h后,实验组背部及上臂内侧细胞增殖,整合素β1、P130Cas、TGF-β1 m RNA表达水平和TGF-β1含量比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）;加载36、48 h时,背部细胞以上检测指标均显著高于上臂内侧细胞,差异有统计学意义（P〈0.05）。实验组各时间点背部及上臂内侧细胞的COL1A1 m RNA表达水平和Ⅰ型胶原含量比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。对照组各时间点背部及上臂内侧细胞以上指标比较,差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论背部和上臂内侧皮肤成纤维细胞对机械张力的反应不同,提示人体皮肤成纤维细胞的力学特征存在部位差异,可能导致不同部位增生性瘢痕的发生率不同。
