非病毒载体递送微小RNA治疗肿瘤的研究进展 被引量：3

1

作者 崔盼盼 陈超 +4 位作者 赵娟娟 雷良玉 陶弋婧 秦娜琳 徐林 《合肥医学院学报》 2016年第1期92-99,共8页

近年来,微小RNAs(microRNAs,miRNAs)在肿瘤基因治疗方面的研究取得了重要进展,而递送载体则成为miRNAs分子肿瘤基因治疗研究的热点。非病毒递送载体由于高安全性、低免疫原性、高转染效率以及易于制备等优势,具有重要的潜在临床应用价... 近年来,微小RNAs(microRNAs,miRNAs)在肿瘤基因治疗方面的研究取得了重要进展,而递送载体则成为miRNAs分子肿瘤基因治疗研究的热点。非病毒递送载体由于高安全性、低免疫原性、高转染效率以及易于制备等优势,具有重要的潜在临床应用价值。本文就目前代表性非病毒递送载体的种类及其在miRNAs肿瘤基因治疗方面的研究进展进行了综述。 展开更多

关键词 微小RNAS 递送系统 肿瘤 基因治疗

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微小RNA-126基因在CD4＋T细胞介导小鼠自身免疫性肠炎中的作用 被引量：1

2

作者 褚风云 胡燕 +6 位作者 郭萌萌 陈超 赵娟娟 刘云 秦娜琳 郑静 徐林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期767-772,共6页

目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型... 目的研究微小RNA-126(micro RNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)对CD4^+T细胞介导的自身免疫性结肠炎模型的影响并探讨其意义。方法常规利用DSS溶液喂养野生型(WT)和miR-126基因敲减(miR-126KD)小鼠,诱导急性自身免疫性结肠炎模型。HE染色观察小鼠结肠组织病理变化;FACS检测CD4^+T细胞的比例变化及其表面活化分子CD62L、CD44的表达;MACS分选出WT和miR-126KD小鼠脾脏中CD4^+CD62L+T细胞,CFSE染色标记后,分别经尾静脉转输给WT小鼠,再诱导自身免疫性结肠炎模型;HE染色观察结肠组织病理变化;FACS检测CFSE阳性CD4^+T细胞表面活化分子CD62L、CD44的表达变化。结果与对照组相比,miR-126KD小鼠肠组织绒毛缺失不完整,黏膜上皮出现较大溃疡,炎性细胞浸润增加;FACS结果显示,miR-126KD组小鼠CD4^+T细胞比例和总数显著上调(P<0.01);且高表达CD44,低表达CD62L;过继转输实验结果显示,miR-126KD小鼠CD4^+T细胞转输组结肠组织损伤加重;同时,CFSE+细胞高表达CD44,低表达CD62L。结论 miR-126基因敲减加重葡聚糖硫酸钠所致肠炎的病变程度。 展开更多

关键词 微小RNA-126 CD4+T细胞 IBD 肠炎模型 活化

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microRNA-7敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响 被引量：6

3

作者 赵娟娟 徐华林 +7 位作者 郭萌萌 陶弋婧 周涯 陈超 秦娜琳 郑静 田丹 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1257-1261,共5页

目的:观察microRNA-7(miR-7)敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响并探讨其意义。方法:利用脂多糖(LPS)腹腔注射(10 mg/kg体重)野生型(Wild type,WT)小鼠和miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠建立急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)模型... 目的:观察microRNA-7(miR-7)敲减对内毒素诱导小鼠急性肺损伤的影响并探讨其意义。方法:利用脂多糖(LPS)腹腔注射(10 mg/kg体重)野生型(Wild type,WT)小鼠和miR-7基因敲减(Knockdown,KD)小鼠建立急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)模型;HE染色观察肺组织病理学变化;计算肺泡灌洗液(BAL)中的细胞总数;Real-time PCR检测肺组织炎症相关因子表达变化;流式细胞术(FACS)进一步检测BAL中固有免疫细胞γδT细胞、F4/80巨噬细胞(Macrophages,Mφ)和适应性免疫细胞CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的比例和绝对数变化;FACS检测CD4^+T细胞活化相关分子CD62L和CD69的表达水平。结果:相对野生型(Wild type,WT)小鼠,HE染色显示miR-7KD小鼠的肺组织小血管充血和炎性细胞浸润明显减少,病理性损伤明显减轻;Real-time PCR结果显示促炎性细胞因子IL-6的表达水平显著降低(P<0.01),而抗炎性细胞因子IL-4、TGF-β的表达水平明显增加(P<0.05);同时,BAL中总细胞数显著减少(P<0.05);FACS检测进一步显示miR-7KD小鼠的BAL中F4/80^+Mφ细胞的比例及绝对数均明显下调(P<0.05),而γδT细胞的比例上调(P<0.05),但其细胞绝对数无差异(P>0.05);BAL中CD4^+T细胞和CD8^+T细胞的比例及其绝对数均显著降低(P<0.05);最后CD4^+T细胞活化膜分子CD62L的表达水平明显上调(P<0.05),而CD69的表达水平显著下调(P<0.05)。结论:miR-7敲减可减轻ALI模型小鼠的肺部损伤,提示其可能在ALI发生中发挥了重要调控作用。 展开更多

关键词 miR-7基因敲减 急性肺损伤 肺泡灌洗液 免疫细胞

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miR-7敲减CD4+T细胞过继转输对小鼠急性肝损伤模型的影响 被引量：2

4

作者 岳东旭 赵娟娟 +6 位作者 陈慧子 丁涛 胡琳 潘飞飞 郭萌萌 陈超 徐林 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期1660-1665,共6页

目的:观察过继转输微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(knockdown,KD)CD4^+ T细胞对小鼠急性肝损伤模型的影响,并探讨其意义。方法:利用磁珠分选技术分别获得正常野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠脾脏中CD4^+ CD62L^+ T细胞;CFSE染色标记后,... 目的:观察过继转输微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(knockdown,KD)CD4^+ T细胞对小鼠急性肝损伤模型的影响,并探讨其意义。方法:利用磁珠分选技术分别获得正常野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠脾脏中CD4^+ CD62L^+ T细胞;CFSE染色标记后,按每只小鼠2×10~6个细胞,经尾部静脉注射给同系WT小鼠,并利用伴刀豆球蛋白A建立急性肝损伤模型;观察过继转输后2组小鼠肝脏的形态、重量及其重量指数的变化;HE染色观察小鼠肝脏组织的病理学变化;real-time PCR检测小鼠肝脏组织中凋亡相关分子Bax和P53的表达;流式细胞术检测小鼠肝脏组织中CFSE标记的CD4^+ T细胞活化相关膜分子CD62L表达水平以及细胞因子白细胞介素4(IL-4)和干扰素γ(IFN-γ)的表达变化。结果:与对照组相比,过继转输miR-7KD小鼠CD4^+ CD62L^+ T细胞组(miR-7KD转输组)小鼠的肝脏重量明显减轻(P<0.01),但重量指数显著增加(P<0.05);HE染色显示miR-7KD转输组的肝脏细胞损伤增加;real-time PCR结果显示miR-7KD转输组肝脏组织中凋亡相关细胞分子Bax和P53的相对表达水平均明显升高(P<0.05);流式细胞术检测结果进一步显示肝脏组织中的CFSE^+细胞活化相关分子CD62L的表达水平明显降低(P<0.01),细胞因子IFN-γ的表达水平明显增加(P<0.05),而IL-4的表达水平显著降低(P<0.01)。结论:过继转输miR-7敲减CD4^+ T细胞可显著加重急性肝损伤模型小鼠的肝组织损伤。这为后续深入探讨急性肝损伤的发生机制提供了重要的实验基础。 展开更多

关键词 微小RNA-7 急性肝损伤 CD4+T细胞 细胞因子 细胞凋亡

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MicroRNA-7在CD4^+T细胞体外活化中的表达及意义 被引量：1

5

作者 徐华林 赵娟娟 +4 位作者 崔盼盼 郭萌萌 陶弋婧 陈超 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1419-1423,共5页

目的:观察microRNA-7(miR-7)在体外活化CD4^+T细胞中表达的变化,初步探讨其意义。方法:采用免疫磁珠分选法(MACS)获得FVB小鼠脾脏中CD4^+CD62L^+T细胞,经抗CD3/CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测miR-7表达水平,FACS检测活化膜分子CD69... 目的:观察microRNA-7(miR-7)在体外活化CD4^+T细胞中表达的变化,初步探讨其意义。方法:采用免疫磁珠分选法(MACS)获得FVB小鼠脾脏中CD4^+CD62L^+T细胞,经抗CD3/CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测miR-7表达水平,FACS检测活化膜分子CD69的表达变化;进一步观察刺激不同时间点CD4+T细胞中miR-7表达的变化;观察ERK抑制剂PD98059处理后,CD4^+T细胞活化下miR-7表达的变化,同时CCK8法检测细胞增殖变化,FACS检测CD69和CD62L分子的表达变化;最后,Real-time PCR检测各组细胞中IL-6、IL-10和IFN-γ等细胞因子表达水平变化。结果:与对照组相比,抗CD3/CD28抗体刺激后,CD4^+CD62L^+T细胞中miR-7表达水平显著上调,CD69分子的表达明显增加(P<0.05);与刺激0 h组和24 h组相比,48 h组和72 h组miR-7的表达水平显著上调(P<0.05);PD98059处理组中,CD4^+T细胞的miR-7表达水平显著下降(P<0.05),同时,活化膜分子CD69的表达比例明显降低(P<0.05);最后,细胞表达IL-6、IL-10和IFN-γ的水平均显著减弱(P<0.05)。结论:miR-7在活化的CD4+T细胞中明显上调,并与ERK信号相关,为后续探讨miR-7在CD4^+T细胞功能中的作用提供了前期实验基础。 展开更多

关键词 miR-7 CD4+T细胞 ERK信号途径 细胞因子

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微小RNA-7敲减对ConA诱导的小鼠急性肝损伤的影响 被引量：1

6

作者 岳东旭 赵娟娟 +3 位作者 张忆雄 丁涛 陈慧子 徐林 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期1643-1647,共5页

目的:研究微小RNA-7(miR-7)敲减(KD)对急性肝损伤(ALI)模型小鼠的影响。方法:野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠腹腔注射30 mg/kg刀豆蛋白(ConA)建立急性肝损伤模型;48 h后,观察小鼠肝脏的形态、重量及其脏器指数变化;HE染色观察小鼠肝脏组... 目的:研究微小RNA-7(miR-7)敲减(KD)对急性肝损伤(ALI)模型小鼠的影响。方法:野生型(WT)小鼠和miR-7KD小鼠腹腔注射30 mg/kg刀豆蛋白(ConA)建立急性肝损伤模型;48 h后,观察小鼠肝脏的形态、重量及其脏器指数变化;HE染色观察小鼠肝脏组织病理学变化;血清学方法检查血清中谷丙转氨酶(ALT)的水平;ELISA法检测血清中细胞因子IL-4和IFN-γ的水平;流式细胞术检测肝脏组织中CD4^+T细胞的比例及其相关的细胞因子IL-4和IFN-γ的表达变化。结果:与对照组相比,miR-7敲减后急性肝损伤小鼠的肝脏组织颜色变浅,重量减轻,重量指数明显增加(P<0.05);HE染色显示miR-7KD小鼠血清炎症细胞浸润显著增多;血清学方法检测发现急性肝损伤小鼠血清ALT的水平明显上升(P<0.05);ELISA法检测显示miR-7KD小鼠血清中IFN-γ水平明显升高(P<0.01),而IL-4的表达水平则明显降低(P<0.01);流式细胞术检测结果显示,miR-7KD小鼠肝脏中CD4+T细胞比例显著升高(P<0.01),其相关的细胞因子IFN-γ的表达水平也显著上调(P<0.01),而IL-4的水平没有发生明显变化。结论:敲减miR-7基因可明显促进ConA诱导的小鼠急性肝损伤。 展开更多

关键词 微小RNA-7 急性肝损伤 CD4^+T细胞

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基于SYBR Green Ⅰ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7方法的建立 被引量：5

7

作者 赵娟娟 徐华林 +7 位作者 陶弋婧 郭萌萌 周涯 陈超 秦娜琳 郑静 田丹 徐林 《合肥医学院学报》 2015年第6期636-641,共6页

目的本研究旨在利用常规荧光燃料SYBR GreenⅠ,通过茎-环法设计原理,建立有效检测微小RNA-7(miR-7)的Real-time PCR方法。方法利用miRBase数据库获得miR-7的成熟体序列,分别设计1条miR-7特异性反转录引物,以及Real-time PCR上游和下游引... 目的本研究旨在利用常规荧光燃料SYBR GreenⅠ,通过茎-环法设计原理,建立有效检测微小RNA-7(miR-7)的Real-time PCR方法。方法利用miRBase数据库获得miR-7的成熟体序列,分别设计1条miR-7特异性反转录引物,以及Real-time PCR上游和下游引物;观察不同退火温度和不同引物浓度对扩增miR-7的Ct值影响,选择最优的退火温度和引物浓度;测定不同稀释度RNA下Real-time PCR扩增miR-7的效果;并利用该方法检测小鼠4个器官中miR-7的灵敏性和特异性。结果在基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR检测法中,miR-7扩增的最优退火温度为60℃,最优引物浓度为10μmol/L;在不同稀释度RNA下miR-7的Ct值线性关系较好,且在模板RNA低于100 pg的条件下,该方法仍可有效检测miR-7分子;最后有效检测出小鼠4个不同器官中miR-7的差异性表达。结论成功建立基于SYBR GreenⅠ的茎-环Real-time PCR定量检测miRNA-7的方法,可为后续研究miR-7的生物学功能提供了重要工作基础。 展开更多

关键词 茎-环Real-time PCR法 SYBR GreenⅠ 微小RNA-7 表达

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微小RNA-21与NSCLC放化疗抵抗的研究新进展 被引量：6

8

作者 郑文 赵娟娟 +2 位作者 何志旭 陈超 徐林 《合肥医学院学报》 2017年第2期214-217,共4页

近年研究发现,微小RNA(microRNAs,miRNAs)家族成员miRNA-21与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的化疗、放疗抵抗及EGFR-TKI耐药密切相关,提示其可作为NSCLC放化疗的潜在新靶标。本文就其相关研究最新进展作一综述。

关键词 微小RNA-21 非小细胞肺癌 化疗 EGFR-TKI 放疗

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内毒素耐受状态下胸腺细胞TCRβ链CDR3区多态性和长度的变化 被引量：1

9

作者 贾力 陶弋婧 +8 位作者 赵娟娟 郭萌萌 陈超 褚风云 王海嵘 刘云 罗军敏 姚新生 徐林 《合肥医学院学报》 2017年第2期139-142,149,共5页

目的研究内毒素耐受状态下小鼠胸腺T细胞TCRβ链CDR3多态性和长度的变化,并探讨其意义。方法以5mg/kg浓度LPS腹腔注射C57BL/6小鼠建立内毒素耐受模型,5 mg/kg浓度生理盐水腹腔注射72 h后为对照组,提取对照组、模型后72 h实验组和8 d实... 目的研究内毒素耐受状态下小鼠胸腺T细胞TCRβ链CDR3多态性和长度的变化,并探讨其意义。方法以5mg/kg浓度LPS腹腔注射C57BL/6小鼠建立内毒素耐受模型,5 mg/kg浓度生理盐水腹腔注射72 h后为对照组,提取对照组、模型后72 h实验组和8 d实验组的小鼠胸腺组织RNA,并逆转录为c DNA;以22条TRBV基因家族序列设计上游引物,TRBJ1-1基因家族序列设计下游引物,PCR扩增出完整的TCRβ链CDR3区;毛细管电泳技术分析TCRβ链CDR3区的多态性和长度。结果正常小鼠胸腺样本多数呈现中间高两边低的正态性分布的TCRβ链CDR3谱型峰图,少数呈现偏峰、寡峰或低峰;LPS注射后72 h胸腺样本TCRβ链CDR3区呈现数量不等的偏峰、寡峰和低峰;模型8 d胸腺样本大多呈现多峰。此外,与正常组相比,模型72 h和8 d胸腺样本TCRβ链CDR3区产物长度均发生了不同程度的变化。结论内毒素耐受状态下,小鼠胸腺细胞TCRβ链CDR3区的多态性和长度均发生了明显改变,为后续进一步研究该状态下胸腺细胞发育及功能变化提供前期实验基础。 展开更多

关键词 内毒素 胸腺 TCRβ链CDR3区 小鼠

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微小RNA-7慢病毒过表达载体的构建及其作用

10

作者 徐华林 赵娟娟 +4 位作者 褚风云 郭萌萌 何志旭 陈超 徐林 《合肥医学院学报》 2016年第5期449-454,共6页

目的构建miR-7慢病毒过表达载体,并对人肺癌细胞进行感染,观察其影响效果。方法设计引物,PCR法扩增miR-7初级序列;纯化、经BamH I和EcoR I双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将构建成功的pLVX-shRNA-m... 目的构建miR-7慢病毒过表达载体,并对人肺癌细胞进行感染,观察其影响效果。方法设计引物,PCR法扩增miR-7初级序列;纯化、经BamH I和EcoR I双酶切后将其亚克隆入pLVX-shRNA慢病毒表达载体,并进行酶切及测序鉴定;将构建成功的pLVX-shRNA-miR-7（命名为p LV-miR-7）载体体外转染293T细胞进行包装,在48 h收获上清,用Real-time PCR法测定该慢病毒滴度;将制备好的病毒上清体外感染人肺癌95 D细胞后,用Real-time PCR检测各组中miR-7成熟体表达水平;CCK-8法检测95 D细胞生长变化。结果菌液PCR和酶切结果显示miR-7目的片段418 bp成功构入载体pLVX-shRNA;同时结合测序结果证明构建miR-7慢病毒过表达载体成功;慢病毒上清滴度为1.53×10^7copies/mL;该病毒感染人肺癌95 D细胞后可有效表达miR-7成熟体,并显著抑制细胞的体外生长（P〈0.05）。结论成功构建miR-7慢病毒过表达载体,为进一步探究miR-7在肺癌发病机制中的作用提供了重要实验基础。 展开更多

关键词 miR-7 慢病毒载体 肺癌 CCK-8法 95D细胞株

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microRNA-7基因敲减对小鼠CD4^+SP细胞胸腺发育的影响 被引量：6

11

作者 陶弋婧 朱顺飞 +5 位作者 陈超 赵娟娟 郭萌萌 张忆雄 秦娜林 徐林 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1173-1177,共5页

目的:研究microRNA-7(miRNA-7,miR-7)基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响。方法:检测miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)和野生型(Wild-type,WT)小鼠胸腺重量及细胞总数变化;HE染色观察miR-7KD小鼠胸腺的形态学结构改变;FAC... 目的:研究microRNA-7(miRNA-7,miR-7)基因敲减对小鼠CD4+SP细胞胸腺发育的影响。方法:检测miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)和野生型(Wild-type,WT)小鼠胸腺重量及细胞总数变化;HE染色观察miR-7KD小鼠胸腺的形态学结构改变;FACS检测胸腺CD4+单阳性(Single positive,SP)细胞的比例并计算细胞总数,同时检测CD4+SP细胞CD44及CD62L表达变化;核抗原Ki-67染色法检测CD4+SP细胞的增殖情况;FACS检测CD4+SP细胞的凋亡变化;Western blot技术检测胸腺中总ERK1/2和磷酸化ERK1/2表达水平变化。结果:与WT小鼠相比,miR-7KD小鼠胸腺体积、重量以及细胞总数均显著减少,且形态学结构发生改变(P<0.05);FACS结果显示,miR-7KD小鼠胸腺CD4+SP细胞比例明显降低,且细胞总数减少(P<0.05)。此外,CD4+SP细胞的CD44表达水平显著增加,而CD62L表达水平明显减少(P<0.05);同时,CD4+SP细胞增殖及凋亡比例均显著增加(P<0.01);最后,miR-7KD小鼠胸腺中ERK1/2以及磷酸化ERK1/2的表达均明显下调(P<0.05)。结论:miR-7基因敲减后可显著影响CD4+SP细胞的胸腺发育,这可能与细胞活化水平及ERK1/2信号通路改变有关。 展开更多

关键词 微小RNA-7 基因敲减 胸腺 CD4^+SP细胞

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微小RNA-126基因敲减对CD4^+T细胞体外功能的影响

12

作者 褚风云 胡燕 +6 位作者 郭萌萌 李永菊 贾力 王海嵘 周涯 罗军敏 徐林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期158-163,共6页

目的研究微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)后对CD4^+T细胞体外功能的影响并探讨其意义。方法 MACS分选miR-126 KD小鼠脾脏CD4^+CD62L^+T细胞,ConA刺激48h后,Real-time PCR技术检测细胞内miR-126成熟体表达水平... 目的研究微小RNA-126(microRNA-126,miR-126)基因敲减(knock down,KD)后对CD4^+T细胞体外功能的影响并探讨其意义。方法 MACS分选miR-126 KD小鼠脾脏CD4^+CD62L^+T细胞,ConA刺激48h后,Real-time PCR技术检测细胞内miR-126成熟体表达水平;FACS分别检测CD4^+T细胞表面活化分子CD69、CD62L、CD44和增殖相关分子Ki-67,以及细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-17表达变化;Annexin V/PI双染色法检测CD4^+T细胞的凋亡情况。结果与野生型(wide-type,WT)小鼠相比,miR-126KD小鼠的CD4^+T细胞中miR-126成熟体表达显著下调(P<0.001);miR-126 KD小鼠CD4^+T细胞活化后CD62L的表达比例显著减少(P<0.01),而CD69、CD44的比例显著增加(P<0.05);同时Ki-67^+的比例也明显增加(P<0.05);此外,miR-126 KD小鼠CD4^+T细胞的INF-γ表达比例显著上调(P<0.001),IL-4的比例显著下调(P<0.01),而IL-17的比例没有明显变化(P>0.05);最后,CD4^+T细胞的凋亡比例显著减少(P<0.05)。结论 miR-126基因敲减后CD4^+T细胞的活化、增殖和相关细胞因子分泌均明显增强,为后续深入探讨miR-126在免疫应答中的作用及机制提供前期实验基础。 展开更多

关键词 微小RNA-126 CD4+T细胞 活化 增殖 凋亡

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微小RNA-125与乳腺癌关系的研究进展

13

作者 雷良玉 赵娟娟 +5 位作者 卢佳 郑文 徐华林 郭萌萌 陶弋婧 徐林 《国际检验医学杂志》 CAS 2015年第A02期64-65,共2页

微RNA-125（microRNA-125，miR125）是近年来新发现的miRNAs家族成员，其基因定位于染色体11q24上，与线虫lin-4具有较高的同源性。现有的研究显示miR125家族包括三个成员，分别是miR-125a，miR-125b-1和miR-125b-2，这三个成员间序列... 微RNA-125（microRNA-125，miR125）是近年来新发现的miRNAs家族成员，其基因定位于染色体11q24上，与线虫lin-4具有较高的同源性。现有的研究显示miR125家族包括三个成员，分别是miR-125a，miR-125b-1和miR-125b-2，这三个成员间序列存在高度保守性，在功能上与包括内皮细胞在内的多种细胞的发育密切相关。 展开更多

关键词 微小RNA-125 乳腺癌 发生 转移 治疗

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过表达miR-126对人肺癌细胞体外生长的抑制作用和初步机制研究

14

作者 雷良玉 赵娟娟 +1 位作者 陈超 徐林 《现代肿瘤医学》 CAS 2017年第5期701-705,共5页

目的:探讨过表达miR-126对人肺癌95D细胞体外生长的影响。方法:利用PCR技术成功构建pc DNA3.1(-)-pri-miR-126载体(命名为p-miR-126),将p-miR-126重组质粒体外瞬时转染人肺癌95D细胞,Taq Man探针法检测miR-126的相对表达水平,CCK-8(cell... 目的:探讨过表达miR-126对人肺癌95D细胞体外生长的影响。方法:利用PCR技术成功构建pc DNA3.1(-)-pri-miR-126载体(命名为p-miR-126),将p-miR-126重组质粒体外瞬时转染人肺癌95D细胞,Taq Man探针法检测miR-126的相对表达水平,CCK-8(cell counting kit-8)法和划痕法分别检测95D细胞的增殖、迁移能力。Western Blot检测95D细胞中蛋白AKT和磷酸化AKT(phosphorylation AKT,p-AKT)的表达情况。结果:成功构建miR-126真核表达载体,且该载体可上调miR-126表达(P<0.05),抑制95D细胞的生长和迁移能力(P<0.05)。Western Blot结果表明细胞中磷酸化AKT水平显著降低(P<0.05)。结论:通过上调miR-126的表达水平可有效抑制95D细胞的体外生长,其作用机制有可能与AKT信号通路的变化有关,但其具体机制仍需后续深入研究。 展开更多

关键词 MIR-126 真核表达 肺癌 95D细胞

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纳米脂质载体递送微小RNA与肿瘤基因治疗 被引量：1

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作者 王海嵘 陈超 +5 位作者 张忆雄 雷良玉 贾力 褚风云 何志旭 徐林 《现代免疫学》 CSCD 北大核心 2017年第6期517-520,共4页

微小RNA(microRNA,miRNA)由约20个核苷酸序列构成,是一种在转录后水平调控基因表达的非编码小RNA,其在肿瘤细胞的增殖、转移、凋亡和耐药等方面发挥重要生物学功能,是重要的肿瘤基因治疗候选分子。纳米脂质载体(nanostructured lipid ca... 微小RNA(microRNA,miRNA)由约20个核苷酸序列构成,是一种在转录后水平调控基因表达的非编码小RNA,其在肿瘤细胞的增殖、转移、凋亡和耐药等方面发挥重要生物学功能,是重要的肿瘤基因治疗候选分子。纳米脂质载体(nanostructured lipid carrier,NLC)作为一类重要的递送系统,具有低毒、低免疫原性、代谢周期长和易于修饰等特点,在肿瘤基因治疗领域,特别在递送miRNA方面具有重要潜在价值。本文综述了近年来NLC递送miRNA在肿瘤基因治疗中的相关研究进展,并展望了其潜在应用前景。 展开更多

关键词 纳米脂质载体 肿瘤 微小RNA

原文传递

微小RNA-7敲减对小鼠脾脏中T淋巴细胞体外功能的影响 被引量：4

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作者 郑文 赵娟娟 +7 位作者 朱顺飞 徐华林 雷良玉 卢佳 贾力 褚风云 王海嵘 徐林 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期358-363,共6页

观察微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(Knock down,KD)对小鼠脾脏T淋巴细胞体外功能的影响并探讨其意义。常规分离野生型(wild type,WT)小鼠脾脏T淋巴细胞,经CD3和CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测不同时间点(0h;24h;48h)细胞中miR-7... 观察微小RNA-7(microRNA-7,miR-7)敲减(Knock down,KD)对小鼠脾脏T淋巴细胞体外功能的影响并探讨其意义。常规分离野生型(wild type,WT)小鼠脾脏T淋巴细胞,经CD3和CD28抗体刺激后,Real-time PCR检测不同时间点(0h;24h;48h)细胞中miR-7的表达变化;进一步用Con A、CD3和CD28抗体刺激miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞,CCK8检测细胞增殖率;Real-time PCR检测miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α、IFN-γ和IL-10表达的变化;FACS检测CD4+T和CD8+T细胞的数量变化及CD4+T细胞膜分子CD44、CD62L和IL-4、IFN-γ的表达变化。结果显示,WT小鼠脾脏T淋巴细胞活化后,miR-7的表达水平显著上调(P<0.05);与WT小鼠相比,在Con A、CD3和CD28抗体作用下miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞增殖明显增加(P<0.05);miR-7KD小鼠脾脏T淋巴细胞IL-12、IL-4、IL-6、TNF-α和IFN-γ水平均明显上调(P<0.05),而IL-10表达显著下调(P<0.05);FACS检测结果显示CD4+T细胞比例明显上调(P<0.05),而CD8+T细胞的比例变化不显著(P>0.05);CD4+T细胞膜分子CD62L水平显著下降,CD69及IL-4、IFN-γ的表达水平均显著上调(P<0.05)。结果表明,miR-7敲减以后可显著影响小鼠脾脏T淋巴细胞的功能,本实验为后续深入探讨其在T淋巴细胞功能调控中的作用提供实验依据。 展开更多

关键词 miRNA-7 基因敲减 脾脏T淋巴细胞 CD4+T细胞

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微小RNA-21与非小细胞肺癌关系的研究新进展 被引量：3

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作者 郑文 赵娟娟 +6 位作者 崔盼盼 徐华林 雷良玉 卢佳 何志旭 陈超 徐林 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期59-63,共5页

miRNA-21,简称miR-21,是miRNA家族的重要成员之一。近来研究发现,miR-21与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的预后、转移和诊断等密切相关,推测其可作为NSCLC临床诊治的新靶标。本文就miR-21与非小细胞肺癌的相关研究新... miRNA-21,简称miR-21,是miRNA家族的重要成员之一。近来研究发现,miR-21与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的预后、转移和诊断等密切相关,推测其可作为NSCLC临床诊治的新靶标。本文就miR-21与非小细胞肺癌的相关研究新进展进行综述。 展开更多

关键词 微小RNA-21 非小细胞肺癌 预后 转移 诊断

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微小RNA-7基因敲减对LPS诱导的脑部炎症的影响 被引量：2

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作者 岳东旭 赵娟娟 +6 位作者 胡琳 陈慧子 丁涛 潘飞飞 陈超 郭萌萌 徐林 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期366-371,共6页

为研究微小RNA-7(microRNA-7, miR-7)基因敲减(knock down, KD)对LPS诱导的脑部炎症的影响并探讨其意义,课题组用LPS腹腔注射(2.5mg/kg体质量)WT小鼠建立脑部炎性损伤模型;HE染色观察小鼠脑组织病理学变化,real-time PCR探针法检测脑组... 为研究微小RNA-7(microRNA-7, miR-7)基因敲减(knock down, KD)对LPS诱导的脑部炎症的影响并探讨其意义,课题组用LPS腹腔注射(2.5mg/kg体质量)WT小鼠建立脑部炎性损伤模型;HE染色观察小鼠脑组织病理学变化,real-time PCR探针法检测脑组织中miR-7的表达变化;进一步,用LPS腹腔注射(2.5mg/kg体质量)WT小鼠和miR-7KD小鼠;12h后,HE染色观察小鼠脑组织病理学变化;real-time PCR检测脑组织中炎性细胞因子IL-6、TNF-α和TGF-β的mRNA变化水平;ELISA检测脑组织中炎性细胞因子IL-6、TNF-α和TGF-β的变化水平;Western blotting检测信号通路Akt和p-Akt以及炎性信号通路NF-κB和p-NF-κB的表达变化。结果显示小鼠炎性损伤模型脑组织中,HE示WT小鼠在注射LPS后,脑组织中炎性细胞浸润显著增多且miR-7的表达水平显著升高(P<0.01);HE结果示miR-7 KD小鼠脑组织中炎性细胞浸润较WT小鼠显著增多;real-time PCR结果示促炎细胞因子IL-6(P<0.01)和TNF-α(P<0.01)的表达水平均显著升高,而抑炎细胞因子TGF-β(P<0.01)的表达水平显著降低;ELISA结果显示,促炎细胞因子IL-6(P<0.01)和TNF-α(P<0.01)的表达水平均显著升高,而抑炎细胞因子TGF-β的表达水平显著降低(P<0.01); Western blotting结果示miR-7 KD模型小鼠脑组织Akt和p-Akt表达没有明显变化,NF-κB(P<0.05)和p-NF-κB(P<0.01)表达均明显增加。由此miR-7基因敲减显著促进了脑组织炎性损伤的发生,与NF-κB信号通路传递改变相关,本研究为后续深入探讨miR-7在脑部炎症相关疾病的发生机制中的作用提供了前期实验基础。 展开更多

关键词 微小RNA-7 脑部炎症 NF-ΚB 细胞因子

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miR-7基因敲减对LPS诱导巨噬细胞炎症反应的影响 被引量：5

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作者 陈慧子 郭萌萌 +4 位作者 赵娟娟 岳东旭 丁涛 陈超 徐林 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期195-200,216,共7页

观察miR-7基因敲减(knockdown, KD)对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的影响,并初步探讨其机制。分别用0、50、100、200 ng/mL LPS刺激野生型(wild type, WT)小鼠骨髓来源巨噬细胞12 h,经实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitativ... 观察miR-7基因敲减(knockdown, KD)对LPS诱导的巨噬细胞炎症反应的影响,并初步探讨其机制。分别用0、50、100、200 ng/mL LPS刺激野生型(wild type, WT)小鼠骨髓来源巨噬细胞12 h,经实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR, Real-time PCR)检测发现,随着LPS刺激浓度的增加,巨噬细胞中miR-7的表达水平逐渐升高,且在100 ng/mL LPS浓度刺激下miR-7表达最显著(P<0.01)。用100 ng/mL LPS处理miR-7 KD小鼠和WT小鼠骨髓来源巨噬细胞12 h,镜检观察到巨噬细胞形态均由圆形变为长梭形,并伸出长长的伪足。应用流式细胞术检测巨噬细胞表面CD80和CD86分子的表达情况,结果显示,LPS作用后,miR-7 KD小鼠骨髓来源巨噬细胞表面CD80和CD86的比例较WT小鼠显著上调(P<0.05)。Real-time PCR和ELISA结果显示,miR-7 KD小鼠巨噬细胞在LPS刺激后,炎性因子IL-1β、IL-6和TNF-ɑ的表达显著增加(P<0.05)。Western blotting检测结果显示,LPS刺激后,与对照组相比,miR-7 KD小鼠巨噬细胞中NF-κB p65和p-NF-κB p65的蛋白水平显著升高(P<0.01)。以上数据显示,miR-7基因KD可显著增强LPS诱导的巨噬细胞炎症反应,可能与NF-κB信号通路的传递增强有关,提示miR-7在巨噬细胞炎症过程中发挥重要的调控作用。 展开更多

关键词 微小RNA-7 基因敲减 巨噬细胞 炎症

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微小RNA-7的研究进展 被引量：7

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作者 褚风云 郭萌萌 +1 位作者 陈超 徐林 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期345-349,共5页

微小RNA-7(miR-7)是于2001年由Lagos首次报道的一类非编码小分子RNA。在人和小鼠的基因组序列中均有三种不同的DNA序列可以转录加工为成熟的miR-7分子。近来的研究显示,miR-7在大脑、胰腺等器官发育以及相关临床疾病的发生中发挥了重要... 微小RNA-7(miR-7)是于2001年由Lagos首次报道的一类非编码小分子RNA。在人和小鼠的基因组序列中均有三种不同的DNA序列可以转录加工为成熟的miR-7分子。近来的研究显示,miR-7在大脑、胰腺等器官发育以及相关临床疾病的发生中发挥了重要作用。本文中,我们分别从组织器官发育和临床疾病两方面对miR-7相关研究进展进行综述。 展开更多

关键词 微小RNA-7 器官发育 肿瘤 生物治疗

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