目的探讨下调γ-肌动蛋白(ACTG1)对人胃癌细胞(未分化)(HGC-27)凋亡的影响及机制。方法利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲低ACTG1 HGC-27细胞系;通过DNA测序及Western blot验证ACTG1敲低情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋...目的探讨下调γ-肌动蛋白(ACTG1)对人胃癌细胞(未分化)(HGC-27)凋亡的影响及机制。方法利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲低ACTG1 HGC-27细胞系;通过DNA测序及Western blot验证ACTG1敲低情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤2家族蛋白(Bcl2)以及PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)/AKT(蛋白激酶B)通路相关蛋白AKT,p-AKT的表达水平。结果构建稳定敲低ACTG1的HGC-27细胞系。与Control组相比,ACTG1蛋白水平在sgACTG1-1组和sgACTG1-2组显著下降。与Control组细胞凋亡率相比,sgACTG1-1组和sgACTG1-2组细胞凋亡率(10.11%±0.46%,14.67%±0.17%vs 6.54%±0.67%)明显升高,差异具有统计学意义(t=-7.58,-20.28,均P<0.01);与Control组相比,sgACTG1-1组和sgACTG1-2组Bax蛋白水平(0.89±0.02,1.00±0.08 vs 0.71±0.03)显著升高(t=-8.14,-5.87),Bcl2蛋白水平(0.49±0.06,0.39±0.06 vs 0.65±0.07)显著下降(t=3.09,5.35),差异具有统计学意义(均P<0.05)。与Control组相比,sgACTG1-1组和sgACTG1-2组AKT蛋白水平(0.95±0.10,0.43±0.09 vs 1.17±0.06)和p-AKT蛋白水平(0.38±0.08,0.28±0.12 vs 0.70±0.14)显著下降,差异具有统计学意义(t=3.20,12.13;3.44,3.85,均P<0.05)。结论下调ACTG1抑制PI3K/Akt信号通路相关蛋白AKT,p-AKT的表达,促进胃癌细胞HGC-27凋亡。展开更多
文摘目的探讨下调γ-肌动蛋白(ACTG1)对人胃癌细胞(未分化)(HGC-27)凋亡的影响及机制。方法利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲低ACTG1 HGC-27细胞系;通过DNA测序及Western blot验证ACTG1敲低情况;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤2家族蛋白(Bcl2)以及PI3K(磷脂酰肌醇3-激酶)/AKT(蛋白激酶B)通路相关蛋白AKT,p-AKT的表达水平。结果构建稳定敲低ACTG1的HGC-27细胞系。与Control组相比,ACTG1蛋白水平在sgACTG1-1组和sgACTG1-2组显著下降。与Control组细胞凋亡率相比,sgACTG1-1组和sgACTG1-2组细胞凋亡率(10.11%±0.46%,14.67%±0.17%vs 6.54%±0.67%)明显升高,差异具有统计学意义(t=-7.58,-20.28,均P<0.01);与Control组相比,sgACTG1-1组和sgACTG1-2组Bax蛋白水平(0.89±0.02,1.00±0.08 vs 0.71±0.03)显著升高(t=-8.14,-5.87),Bcl2蛋白水平(0.49±0.06,0.39±0.06 vs 0.65±0.07)显著下降(t=3.09,5.35),差异具有统计学意义(均P<0.05)。与Control组相比,sgACTG1-1组和sgACTG1-2组AKT蛋白水平(0.95±0.10,0.43±0.09 vs 1.17±0.06)和p-AKT蛋白水平(0.38±0.08,0.28±0.12 vs 0.70±0.14)显著下降,差异具有统计学意义(t=3.20,12.13;3.44,3.85,均P<0.05)。结论下调ACTG1抑制PI3K/Akt信号通路相关蛋白AKT,p-AKT的表达,促进胃癌细胞HGC-27凋亡。
