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磁珠富集法分离柿微卫星标记 被引量：10
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作者 阮小凤 Gabi Krczal 杨勇 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第5期97-102,共6页
【目的】分离柿属植物的微卫星标记,为柿种质资源的分类、进化等遗传研究奠定基础。【方法】提取磨盘柿（Diospyros kaki）基因组DNA后,用EcoRⅠ和MesⅠ2种内切酶酶切并连接接头,再用接头特异引物进行PCR扩增。扩增产物与生物素标记的... 【目的】分离柿属植物的微卫星标记,为柿种质资源的分类、进化等遗传研究奠定基础。【方法】提取磨盘柿（Diospyros kaki）基因组DNA后,用EcoRⅠ和MesⅠ2种内切酶酶切并连接接头,再用接头特异引物进行PCR扩增。扩增产物与生物素标记的（GA）15和（AC）15探针杂交,杂交复合物用链亲和素包裹磁珠进行结合,得到单链DNA目标片段,经PCR扩增,连接pGEM-T载体,转化入感受态大肠杆菌,得到微卫星富集小插入片段DNA文库。用Colony-PCR法筛选阳性克隆,进行测序分析。【结果】测序96个克隆,54个含微卫星序列,24个为有效微卫星序列,其中完美型（perfect）9个,占37.5%;非完美型（imperfect）7个,占29.2%;混合型（compound）8个,占33.3%（。GA）n重复最为常见。21条含微卫星序列已登录GenBank（Accession Number：EF567396～EF567416）。成功设计21对引物,经初步筛选,14对表现出多态性。【结论】试验方法分离柿基因组微卫星简便有效,得到的多态性引物可用于柿种质资源的遗传研究。 展开更多
关键词 柿 微卫星 磁珠富集
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