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基因重组人骨形成蛋白-2对培养骨髓细胞的生物学效应 被引量：17
1
作者 陈富林 任卫红 +2 位作者 蒲勤 毛天球 杨连甲 《第四军医大学学报》 1999年第2期143-145,共3页
目的：骨髓是机体重要的造血器官，其中的单个核细胞主要是单核细胞和巨噬细胞，骨髓组织在骨损伤修复过程中也发挥重要的作用．为提高骨形成蛋白（BMP）修复骨缺损的能力，方法：本实验观察了基因重组人骨形成蛋白-2（re－combinanthum... 目的：骨髓是机体重要的造血器官，其中的单个核细胞主要是单核细胞和巨噬细胞，骨髓组织在骨损伤修复过程中也发挥重要的作用．为提高骨形成蛋白（BMP）修复骨缺损的能力，方法：本实验观察了基因重组人骨形成蛋白-2（re－combinanthumanBoneMorphogeneticProtein－2，rhBMP2）对培养骨髓细胞生物学活性的影响．结果：低浓度的rhBMP2（＜0．16mg／L）对培养骨髓细胞的碱性磷酸酶活性、蛋白质含量均有明显的促进作用，且呈剂量依赖性，高浓度的rhBMP2（＞0．16mg／L）对培养骨髓细胞的增殖也有一定促进作用结论：本研究的结果进一步证实，骨髓细胞也是BMP重要的靶细胞，BMP不仅促进骨髓细胞向成骨细胞的表型转化，而且可以促进骨髓细胞的增殖，因此在使用复合BMP的植骨材料进行骨缺损修复时，如能辅以骨髓细胞植入，将会大大提高骨缺损的修复效果． 展开更多
关键词 RHBMP2 骨髓细胞 细胞分裂 生物学 骨形成蛋白
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光生物素标记抗体用于人心钠素基因表达的检测 被引量：1
2
作者 刘新平 陈南春 陈苏民 《第四军医大学学报》 1990年第5期333-335,共3页
光生物素与兔抗鼠IgG以不同克分子比在可见光照射下进行标记。标记抗体用于抗原的检测,敏感度可达62.5pg/2μl。用同样方法对大肠杆菌TAP106(pYX40)中心钠素的表达进行了检测,与(125)~Ⅰ标记的兔抗鼠IgG得到一致的结果。
关键词 光生物素 纳利尿肽素 心房
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在实验课教学中进行素质教育的摸索——医学细胞生物学实验课教学思考
3
作者 李军林 张思河 舒青 《山西医科大学学报（基础医学教育版）》 2000年第S1期114-114,共1页
医学实验课教学要求培养学员科学思维方法和综合认知能力等综合素质。结合医学细胞生物学实验课教学浅谈对医学基础实验课教学的思考。 (1)兴趣是最好的老师。 (2 )培养严谨求实、科学创新的求知态度和作风是实验课教学义不容辞的责任。... 医学实验课教学要求培养学员科学思维方法和综合认知能力等综合素质。结合医学细胞生物学实验课教学浅谈对医学基础实验课教学的思考。 (1)兴趣是最好的老师。 (2 )培养严谨求实、科学创新的求知态度和作风是实验课教学义不容辞的责任。 (3) 展开更多
关键词 细胞生物学 实验课教学 素质教育
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微生物表面呈现技术及应用 被引量：1
4
作者 王雨田 胡家露 +1 位作者 陈苏民 杨胜利 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1997年第5期422-426,共5页
微生物表面呈现技术以其广泛的应用前景 ,日益引起关注 .
关键词 微生物 表面呈现 方法技术
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生物化学的教与学 被引量：2
5
作者 赵忠良 《山西医科大学学报（基础医学教育版）》 2002年第4期278-279,共2页
在医学院校中,生物化学被认为是一门最难学的学科.传统的观念认为学习是一件"非常辛苦"的事情,从这种观念出发,导致我们的教学方式完全成为一种强迫性的任务,教师辛苦,学生辛苦.由于突出了这种"苦"字,而将学习的乐... 在医学院校中,生物化学被认为是一门最难学的学科.传统的观念认为学习是一件"非常辛苦"的事情,从这种观念出发,导致我们的教学方式完全成为一种强迫性的任务,教师辛苦,学生辛苦.由于突出了这种"苦"字,而将学习的乐趣掩盖起来了.实际上教和学并非是一件很辛苦的事,本文试图分析在生物化学"教与学"中,从"寓教于乐"和"晓之以理"方面,浅谈几点教学体会. 展开更多
关键词 生物化学 教学方法 教学经验
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自由基与细胞凋亡 被引量：68
6
作者 惠宏襄 赵小宁 +2 位作者 金明 王成济 莫简 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1996年第1期12-16,共5页
细胞凋亡是指细胞在生理和病理情况下的一种死亡模式，广泛涉及到肿瘤、衰老和退行性病变等一系列疾病．最近有实验表明自由基与细胞凋亡有密切的关系．
关键词 细胞凋亡 自由基 病理化学
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紫杉醇诱导食管癌细胞的细胞周期阻断与细胞凋亡 被引量：15
7
作者 彭玮丹 张杰 +3 位作者 曹云新 惠宏襄 金明 王成济 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期402-406,共5页
目的研究紫杉醇对食管癌细胞的细胞周期阻断及诱导凋亡的作用。方法应用形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法对紫杉醇诱导的食管癌细胞系Eca109进行了检测和观察。结果紫杉醇可将食管癌细胞阻断于G0／G1期及G2／M期并诱导其... 目的研究紫杉醇对食管癌细胞的细胞周期阻断及诱导凋亡的作用。方法应用形态学观察、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法对紫杉醇诱导的食管癌细胞系Eca109进行了检测和观察。结果紫杉醇可将食管癌细胞阻断于G0／G1期及G2／M期并诱导其凋亡，凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征，流式细胞仪检测有凋亡峰出现，琼脂糖凝胶电泳显示3nmol·L-1紫杉醇作用72h便可见明显的DNA梯带。100nmol·L-1和1000nmol·L-1浓度的紫杉醇作用于细胞，在形态变化与细胞周期变化上有很大差别。紫杉醇作用短时间（＜2h）去除后再培养比持续性作用更早促使细胞凋亡。结论紫杉醇不仅可以阻断食管癌细胞的分裂，而且对于间期细胞也有很大作用。细胞周期阻断并不直接诱导细胞凋亡，甚至可能抑制细胞凋亡的进程。食管癌细胞中存在多条凋亡途径。 展开更多
关键词 紫杉醇 细胞周期阻断 细胞凋亡 食管癌细胞
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一株人源性抗HBsAg抗体Fab片段的筛选及序列分析 被引量：9
8
作者 高辉 高磊 +7 位作者 纪宗玲 路凡 陈南春 陈苏民 余宙耀 张宜俊 尤玉琴 粟宽源 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1998年第2期155-157,共3页
一株人源性抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段的筛选及序列分析高辉高磊纪宗玲路凡陈南春陈苏民余宙耀张宜俊尤玉琴粟宽源（第四军医大学生物化学教研室，西安７１００３１空军广州医院全军肝病中心）乙型肝炎是我国常见的传染性疾... 一株人源性抗ＨＢｓＡｇ抗体Ｆａｂ片段的筛选及序列分析高辉高磊纪宗玲路凡陈南春陈苏民余宙耀张宜俊尤玉琴粟宽源（第四军医大学生物化学教研室，西安７１００３１空军广州医院全军肝病中心）乙型肝炎是我国常见的传染性疾病，目前尚无特效的治疗手段。研究发... 展开更多
关键词 乙型肝炎 抗HBsAg抗体 FAB片段 筛选 序列分析
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携载rhBMP-2微球的新型可注射自凝固复合人工骨的制备及特性研究 被引量：14
9
作者 费正奇 胡蕴玉 +3 位作者 吴道澄 吴红 白建萍 蒲勤 《中国矫形外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期124-127,138,共5页
[目的]制备一种具有良好降解性和成骨活性、可注射的自凝固新型骨修复材料。[方法]制备携载rh-BMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球,并将其与rhBMP-2/磷酸钙骨水泥(CPC)复合,制备出rhBMP-2/PLGA微球/CPC复合人工骨。探讨了材料的特... [目的]制备一种具有良好降解性和成骨活性、可注射的自凝固新型骨修复材料。[方法]制备携载rh-BMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物(PLGA)微球,并将其与rhBMP-2/磷酸钙骨水泥(CPC)复合,制备出rhBMP-2/PLGA微球/CPC复合人工骨。探讨了材料的特性,包括形貌、固化时间、抗压强度及反映材料体外降解速度的指标—体外降解液Ca、P浓度变化,测定复合材料rhBMP-2的释药速度及体外诱导MSCs细胞成骨分化的能力。[结果]与单纯CPC-rhBMP-2相比,复合材料的固化时间少量增加,抗压强度下降明显。体外降解速度及体外释药明显提高,释放的rhBMP-2具有骨诱导活性。[结论]rhBMP-2/PLGA微球/磷酸钙骨水泥新型复合人工骨是具有良好应用前景的骨修复材料。 展开更多
关键词 聚乳酸与聚乙醇酸共聚物 微球 磷酸钙骨水泥 重组人骨形态蛋白-2 骨替代物
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基因功能的研究方法 被引量：12
10
作者 纪宗玲 刘继中 陈苏民 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期117-120,共4页
人类基因组计划的顺利进行使基因功能研究成为生命科学领域中的重大课题 ,基因转导、反义技术、转基因和基因剔除、染色体转导、RNA干涉等是目前研究基因功能的主要方法 ,新的技术不断涌现 。
关键词 基因功能 研究方法 基因转导 反义核苷酸 转基因 基因剔除 染色体转导 RNA干涉
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阴离子及其通道阻断剂对大鼠主动脉张力的影响 被引量：6
11
作者 马恒 裴建明 +2 位作者 王跃民 杨安钢 周士胜 《中国应用生理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期105-108,共4页
目的 :研究阴离子及其通道阻断剂在去甲肾上腺素 (norepinephrine,NE)引起的血管收缩中的作用。 方法 :常规离体血管灌流法。结果 :阴离子通道阻断剂尼氟灭酸 (niflumicacid ,NFA)和 5 硝基 2 ( 3 苯丙氨基 ) 苯甲酸 [5 nitro 2 ( ... 目的 :研究阴离子及其通道阻断剂在去甲肾上腺素 (norepinephrine,NE)引起的血管收缩中的作用。 方法 :常规离体血管灌流法。结果 :阴离子通道阻断剂尼氟灭酸 (niflumicacid ,NFA)和 5 硝基 2 ( 3 苯丙氨基 ) 苯甲酸 [5 nitro 2 ( 3 phenylpropylamino) benzoicacid ,NPPB]可以抑制去甲肾上腺素NE引起的血管收缩 ;用胆碱替代灌流液中的Na+后血管张力无明显变化 ,而谷氨酸钠替代灌流液中的NaCl后血管张力下降 ,用同族元素Br-替代Cl-后血管张力增加 ,并能被NFA和NPPB所抑制。结论 :阴离子在维持血管张力中的作用比Na+更为重要 ,提示阴离子通道可能在高血压发病中起一定作用。 展开更多
关键词 高血压 阴离子 血管张力 阴离子通道 阻断剂 去甲肾上腺素 尼氟灭酸 NPPB
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抗人CD8单抗κ轻链可变区基因的克隆和序列测定 被引量：8
12
作者 杨安钢 吉昌华 +4 位作者 韩骅 杨立宏 苏成芝 许辉 金伯泉 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1992年第4期286-286,共1页
OK T8杂交瘤细胞株从American typecuhure collection(ATCC)获得,产生抗人CD8分子的单克隆抗体IgG2a(γ2a,κ),为了对这一鼠源性单抗进行基因工程改造,我们首先克隆了该单抗的κ轻链可变区基因,并测定了其碱基序列,现将结果报道如下: ... OK T8杂交瘤细胞株从American typecuhure collection(ATCC)获得,产生抗人CD8分子的单克隆抗体IgG2a(γ2a,κ),为了对这一鼠源性单抗进行基因工程改造,我们首先克隆了该单抗的κ轻链可变区基因,并测定了其碱基序列,现将结果报道如下: 通过计算机查找并分析了已发表的几十株抗体的轻链可变区基因序列,经比较其5’端保守序列和J区序列,设计了一对DNA引物:GTGAATTCATGGACATCCAGATGACCCA- 展开更多
关键词 基因 单克隆抗体 免疫球蛋白
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淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白基因片段原核载体的构建及表达 被引量：6
13
作者 吴兴安 胡刚 +6 位作者 李继业 刘勇 张芳琳 于澜 白文涛 孙修勤 徐志凯 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 2003年第6期78-80,65,共4页
淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV... 淋巴囊肿病病毒感染牙鲆鳃细胞系FG-9307,提取细胞总RNA,采用RT-PCR法成功获得了淋巴囊肿病病毒主要衣壳蛋白0.6kb基因片段。构建其原核表达载体,IPTG诱导表达。结果表明,该融合蛋白分子量约48kD,可与抗LCDV多克隆血清特异反应。为LCDV基因工程疫苗的研制奠定了实验基础。 展开更多
关键词 淋巴囊肿病病毒 主要衣壳蛋白 基因片段 原核载体 虹彩病毒 诱导表达
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人白细胞介素-3基因翻译起始区的改造提高其在大肠杆菌中的表达水平 被引量：7
14
作者 杨立宏 陈常庆 +1 位作者 高冕 苏成芝 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1995年第4期297-303,共7页
为了提高人白细胞介素-3(hIL-3)在大肠杆菌中的表达,在计算机辅助下,设计合成了PCR突变引物,用于改造起始密码AUG上下游序列,并在不改变5＇端氨基酸编码的前提下,尽可能选用大肠杆菌高频使用的密码子。将经改造后的hIL-3cDNA和翻译起始... 为了提高人白细胞介素-3(hIL-3)在大肠杆菌中的表达,在计算机辅助下,设计合成了PCR突变引物,用于改造起始密码AUG上下游序列,并在不改变5＇端氨基酸编码的前提下,尽可能选用大肠杆菌高频使用的密码子。将经改造后的hIL-3cDNA和翻译起始区置于P_L启动子之下,转入大肠杆菌Tap106,经42℃热诱导后,获得表达产物,提高表达水平近一倍,表达量达到菌体总蛋白量的30％左右。表达产物经Western blot验证,经PVDF膜转移后进行N端顺序分析,证明前15个氨基酸正确,产物经包涵体纯化后,纯度提高至80％以上,初步复性后能明显促进hIL-3依赖细胞的生长。 展开更多
关键词 人白细胞介素-3 基因 大肠杆菌 表达 基因工程
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早期牙髓损伤修复中牙本质涎磷蛋白表达的免疫组化研究 被引量：8
15
作者 张蓉 肖明振 +4 位作者 赵守亮 张春宝 吉兰 徐平西 汪平 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2001年第2期89-91,共3页
目的 :初步探讨牙本质涎磷蛋白 (dentinsialophosphoprotein ,DSPP)在早期牙髓损伤修复中的作用。方法 :制备大鼠牙髓损伤模型 ,分别对损伤后 6h、12h ,1d ,2d ,3d ,7d及正常大鼠牙髓标本进行HE和免疫组织化学染色 ,检测各实验组标本中D... 目的 :初步探讨牙本质涎磷蛋白 (dentinsialophosphoprotein ,DSPP)在早期牙髓损伤修复中的作用。方法 :制备大鼠牙髓损伤模型 ,分别对损伤后 6h、12h ,1d ,2d ,3d ,7d及正常大鼠牙髓标本进行HE和免疫组织化学染色 ,检测各实验组标本中DSPP的表达。结果 :正常大鼠牙髓中仅在成牙本质细胞层有DSPP的阳性着色 ;牙髓损伤后 6h ,12h ,DSPP在成牙本质细胞层的染色明显减弱 ;损伤后 1～ 3d ,染色较正常牙增强。此时 ,牙尖及富细胞区的牙髓细胞也有阳性着色 ;损伤后 7d ,染色与正常对照无明显差异。结论 :DSPP在牙髓损伤的早期阶段表达下调 ;随后在成牙本质细胞及富细胞区牙髓细胞中表达增强 ;7d时表达趋于正常。提示 :它可能在牙髓损伤早期的自身修复中起作用。 展开更多
关键词 牙本质涎磷蛋白 牙髓 损伤修复 免疫组化
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封闭负压引流对人慢性创面中基质金属蛋白酶的影响 被引量：15
16
作者 石冰 陈绍宗 +1 位作者 李金清 张萍 《中国美容医学》 CAS 2003年第1期10-13,共4页
目的:研究人慢性创面在经封闭负压引流(Vacuum-assisted-closure V.A.C)治疗前后,创面肉芽组织中基质金属蛋白酶(metalloproteinase,MMp)MMP1、MMP2、MMP13以及金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)TIMP-1... 目的:研究人慢性创面在经封闭负压引流(Vacuum-assisted-closure V.A.C)治疗前后,创面肉芽组织中基质金属蛋白酶(metalloproteinase,MMp)MMP1、MMP2、MMP13以及金属蛋白酶组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)TIMP-1.TIMP-2 mRNA的变化。方法:对9例慢性创面患者给予V.A.C治疗(-120mmHg压力),分别于治疗前和治疗后1、4、7天切取创面中央肉芽组织,提取总RNA,利用RT-PCR方法测定MMP-1、MMP-2、13和TIMP-1、TIMP-2mRNA的表达情况,并对其定量结果进行统计学分析。结果:MMP-1、13mRNA在V.A.C治疗后表达下降,以MMP-13下降趋势尤为明显。MMP-2 mRNA表达呈现波动,但总体为下降趋势;在V.A.C治疗前,检测不到TIMP-1、2mRNA的表达,应用V.A.C后,出现了两者的表达,而且随时间的延长,TIMP-1、2mRNA的表达呈现明显的上升趋势。结论:V.A.C通过抑制MMP-1、2、13mRNA的表达,促进TIMP-1,2mRNA的表达,使更多的MMP与TIMP形成复合物进而抑制胶原和明胶的降解,促进慢性创面的愈合,同时也反向证明慢性创面形成过程中,MMP-1、2、13mRNA的表达增加以及TIMP-1,2mRNA表达下降是重要因素。 展开更多
关键词 封闭负压引流 慢性创面 基质金属蛋白酶 胶原酶 明胶酶 创面愈合
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胶质源性神经营养因子在正常和炎症牙髓组织中的变化 被引量：13
17
作者 陆群 郭敬俊 +1 位作者 吴补领 宋俊峰 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 2000年第4期201-203,共3页
目的 :探讨胶质源性神经营养因子 (GDNF)在牙髓炎症中的表达变化及意义。方法 :应用免疫组织化学方法比较正常和炎症状态下 ,GDNF在牙髓组织中的变化。结果 :正常牙髓组织GDNF染色呈阴性 ,炎性牙髓组织染色GDNF呈阳性 ,其主要分布在牙... 目的 :探讨胶质源性神经营养因子 (GDNF)在牙髓炎症中的表达变化及意义。方法 :应用免疫组织化学方法比较正常和炎症状态下 ,GDNF在牙髓组织中的变化。结果 :正常牙髓组织GDNF染色呈阴性 ,炎性牙髓组织染色GDNF呈阳性 ,其主要分布在牙髓组织成牙本质细胞和成牙本质细胞深层细胞 ,而牙髓神经雪旺氏细胞染色为阴性。结论 :GDNF参与牙髓炎性反应 ,与炎性牙髓组织再生发芽有关。 展开更多
关键词 胶质源性神经营养因子 免疫组化 牙髓炎
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人羧肽酶A的cDNA克隆和原核表达 被引量：5
18
作者 武国军 郝晓柯 +4 位作者 白玉杰 张盈华 药立波 季少平 王吉村 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 1999年第3期165-166,169,共3页
目的:获得人羧肽酶A基因,为进一步构建、表达抗人精浆蛋白单链抗体/羧肽酶A融合蛋白,用于前列腺癌的抗体导向酶-前体药物疗法奠定基础。方法:从人正常肺组织中提取总RNA,经反转录PCR分离人羧肽酶A基因,并克隆入pUC19质粒中,用全自动荧... 目的:获得人羧肽酶A基因,为进一步构建、表达抗人精浆蛋白单链抗体/羧肽酶A融合蛋白,用于前列腺癌的抗体导向酶-前体药物疗法奠定基础。方法:从人正常肺组织中提取总RNA,经反转录PCR分离人羧肽酶A基因,并克隆入pUC19质粒中,用全自动荧光测序仪测定其序列。将该目的基因插入pBV220载体,并转入大肠杆菌DH5α中,经热诱导表达重组蛋白。结果:获得了人羧肽酶A基因(由1251bp组成,可编码417个氨基酸),与国外发表的人羧肽酶AcDNA序列一致。表达的重组蛋白以SDSPAGE分析,在Mr为49000左右处出现1条新生蛋白带,表达量约占菌体总蛋白的17%。结论:成功地克隆人羧肽酶A基因,为构建表达抗人精浆蛋白/羧肽酶A的双功能抗体奠定了基础。 展开更多
关键词 羧肽酶A 基因克隆 测序 前列腺肿瘤 CDNA
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采用定位基因缺失突变技术在大肠杆菌中高效表达肿瘤坏死因子 被引量：7
19
作者 张德震 吴淑华 +5 位作者 张智清 金奇 赵新华 赵小侠 苏成芝 侯云德 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第3期181-187,共7页
肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个... 肿瘤坏死因子α(TNF)为157个氨基酸组成的细胞因子,在克隆的全长cDNA的5'端有480bP的非编码区包括76个氨基酸信号肽编码区。本文采用寡核苷酸指导下的定位基因缺尖突变方法,删除了这一非编码区及信号肽序列,并在成熟TNF分子第一个氨基酸密码前插入一个翻译起始密码(ATG),形成一个限制酶NcoI的识别位点CCATGG。然后取出含有成熟TNF全基因的NcoI-Pst Ⅰ片段,插入到原核表达载体pBV220中,获得了肿瘤坏死因子的高效表达菌株。活性检测结果表明,肿瘤坏死因子的表达量可达3.42×10~8u/L菌液。SDS-PAGE电泳凝胶扫描结果显示,肿瘤坏死因子在大肠杆菌的表达量可占细菌可溶性总蛋白量的22.8%。抗肿瘤坏死因子单克隆抗体可以中和大肠杆菌表达的肿瘤坏死因子对L929细胞的细胞毒性。SD和ATG间插入31个核苷酸可使TNF表达量降低约10倍。 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子 基因定位突变
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培养的大鼠胃壁细胞促性腺激素释放激素的定位、克隆及序列分析 被引量：3
20
作者 陈蕾 孙绪德 +2 位作者 赵晶 杨安钢 黄威权 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期284-288,共5页
目的　研究培养的大鼠胃壁细胞GnRH的定位及其基因序列。　方法　应用免疫组织化学和原位杂交的方法进行定位研究 ;从壁细胞中提取总RNA ,应用RT PCR的方法扩增GnRH基因 ,并对产物进行纯化回收 ,连接入pUC19载体中扩增 ,经PCR和酶切鉴... 目的　研究培养的大鼠胃壁细胞GnRH的定位及其基因序列。　方法　应用免疫组织化学和原位杂交的方法进行定位研究 ;从壁细胞中提取总RNA ,应用RT PCR的方法扩增GnRH基因 ,并对产物进行纯化回收 ,连接入pUC19载体中扩增 ,经PCR和酶切鉴定后进行序列分析。　结果　大鼠胃壁细胞呈GnRH免疫反应性阳性物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;壁细胞内亦可检测到GnRHmRNA杂交信号 ,信号物质位于细胞质 ,细胞核为阴性 ;同样从大鼠胃壁细胞中扩增出GnRH基因的特异性条带 ,经序列分析发现 ,扩增产物的基因序列与文献报道的大鼠下丘脑的完全一致。　结论　大鼠胃粘膜壁细胞能表达GnRH基因 ,其序列和下丘脑的完全一致 ,并能自身合成GnRH ,说明GnRH可能以自分泌或以旁分泌的方式参与胃壁细胞功能的调节。 展开更多
关键词 细胞培养 大鼠 胃壁细胞 促性腺激素释放激素 基因定位 基因克隆 序列分析 基因序列
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