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沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位免疫血清中和活性分析 被引量：1
1
作者 陈昊 巩文词 +6 位作者 陈江 冯娟 吕艳 朱珊丽 陈向敏 薛向阳 张丽芳 《温州医学院学报》 CAS 2012年第1期6-9,共4页
目的:制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性。方法:纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次... 目的:制备高效价E型沙眼衣原体(Ct)主要外膜蛋白(MOMP)168多表位特异性免疫血清并研究其免疫学特性。方法:纯化的Trx-his/Ct MOMP168融合蛋白经弗氏佐剂乳化后,小鼠背部皮下多点免疫注射,间隔2周后加强免疫,共3次,并分别于免疫前和每次免疫后2周取血,采用ELISA法检测血清融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体水平及变化趋势,通过体外中和反应检测多表位特异性血清的免疫学特性。结果:小鼠用Ct MOMP168多表位融合蛋白全程免疫后产生了抗融合蛋白和E型Ct全菌体特异性抗体,ELISA法检测最高滴度达1:500。ELISA和体外中和实验检测结果显示,该抗体能特异性识别MOMP多表位蛋白和E型Ct全菌体,并能有效抑制E型Ct感染Hela229细胞。结论:沙眼衣原体MOMP多表位融合蛋白免疫血清可特异性结合并中和E型Ct。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 主要外膜蛋白 表位 中和作用
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沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位重组DNA诱导小鼠体液免疫有效剂量的探讨
2
作者 饶品欢 石朝晖 +4 位作者 李文姝 吕艳 陈向敏 朱珊丽 张丽芳 《温州医学院学报》 CAS 2012年第2期103-106,共4页
目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据。方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化... 目的:探讨沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位(Ct MOMP168)重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168免疫小鼠的有效免疫剂量,为体内免疫学效应的研究提供实验依据。方法:在重组真核表达质粒pcDNA3.1(+)/Ct MOMP168构建成功的基础上,抽提纯化质粒,分3个免疫剂量组,即50、100和150μg剂量组,同时设PBS对照组。肌肉注射免疫BALB/c小鼠3次,间隔2周,于免疫的0、2、4、6、8周分别尾静脉取血,分离血清,间接ELISA法检测小鼠血清中Ct MOMP多表位特异性抗体IgG的生成量,并于0、1、3、5、7周取小鼠阴道冲洗物,检测Ct MOMP多表位特异性SIgA的生成量,分别进行统计学分析。结果:3个不同免疫剂量组,血清特异性抗体IgG生成量于免疫第4周后均开始随免疫时间延长而逐步增加,150μg剂量组抗体IgG的生成水平高于其他剂量组(P<0.05)。免疫小鼠阴道分泌物中特异性抗体SIgA生成较快,免疫开始后1周,150μg剂量组SIgA的产生水平高于其他组,7周后SIgA开始下降,但150μg剂量组抗体水平仍高于其他剂量组(P<0.05)。结论:重组质粒DNA免疫小鼠的特异性抗体生成显示了剂量依赖关系,高剂量(150μg)免疫组小鼠血清特异性抗体IgG和阴道分泌性特异性抗体SIgA生成水平优势显著。 展开更多
关键词 沙眼衣原体 主要外膜蛋白 DNA免疫 免疫剂量 小鼠
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沙眼衣原体主要外膜蛋白多表位基因的免疫原性研究
3
作者 朱珊丽 石朝辉 +2 位作者 李文姝 陈俊 张丽芳 《中华预防医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期232-236,共5页
目的构建包含沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）主要外膜蛋白（major outer membrane protein，MOMP）多表位基因的真核表达质粒pcDNA3．1-CtMOMP168，检测其诱导BALB／c小鼠产生CtMOMP特异性体液和细胞免疫反应的水平。方法构... 目的构建包含沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）主要外膜蛋白（major outer membrane protein，MOMP）多表位基因的真核表达质粒pcDNA3．1-CtMOMP168，检测其诱导BALB／c小鼠产生CtMOMP特异性体液和细胞免疫反应的水平。方法构建包含CtMOMP多表位基因的重组质粒pcDNA3．1，CtMOMP168并以肌肉注射方式免疫BALB／c小鼠，同时设置pcDNA3．1组和PBS组对照（每组12只，每只100μg/次）。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、乳酸脱氢酶释放法及细胞内细胞因子染色-流式细胞术（ICS—FACS）分别检测免疫小鼠血清中CtMOMP特异性抗体的滴度及其抗体亚型、脾脏中细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的杀伤活性及特异性分泌细胞因子，如γ-干扰素-（IFN-1）、白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-10（IL-10）等的CD3^＋T细胞的水平。结果同pcDNA3．1（A490=0．180±0．025）和PBS免疫（A490=0．110±0．015）相比，pcDNA3．1-CtMOMP168免疫可刺激小鼠产生高效价0特异性IgG抗体（A490=0．973±0．136；血清滴度1：1000），且抗体亚型以IgG2a为主，差异有统计学意义（F=106．884，P〈0．05）；pcDNA3．1-CtMOMP168免疫组小鼠脾细胞中CTL杀伤活性（41．71％±8．34％）高于pcDNA3．1组（18．40％±3．45％）和PBS组（14．50％±2．42％），差异有统计学意义（F=22．315，P〈0．05；效靶比为50：1）；pcDNA3．1-CtMOMPl68免疫组小鼠的脾细胞中CtMOMP特异性CD3^＋IFN-γ^＋T细胞的水平（1．15％±0．16％）高于pcDNA3．1组（0．12％±0．08％）和PBS组（0．09％±0．03％），差异有统计学意义（F=99．638，P〈0．05），而pcDNA3．1-CtMOMP168组IL4^＋CD3^＋T细胞（0．13％±0．08％）和IL-10^＋CD3^＋T细胞（0．14％±0．08％）的水平与pcDNA3．1（0．07％±0．05％，0．13％±0．06％）和PBS（0．08％±0．04％，0．07％±0．04％）组比较差异无统计学意义（F值分别为0．886、1．112，P值均〉0．05）。结论pcDNA3．1-CtMOMP168重组质粒能诱导BALB／c小鼠产生CtMOMP特异性的体液免疫和细胞免疫应答。 展开更多
关键词 衣原体 沙眼 细菌外膜蛋白质类 表位 疫苗
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人乳头瘤病毒L2氨基端蛋白的同源性及其交叉反应特性研究
4
作者 李玲玲 赵朋云 +4 位作者 王佳 周珠哈 朱珊丽 薛向阳 张丽芳 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期848-852,共5页
目的 研究人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白（L2）在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法 采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈... 目的 研究人乳头瘤病毒（HPV）次要衣壳蛋白（L2）在临床常见HPV感染型别中的同源性及其交叉反应特性.方法 采用生物信息学方法对临床常见HPV感染型别中的L2氨基酸序列进行比对,发现其氨基端1～200序列具有高度同源性.采用PCR法从宫颈癌患者组织DNA中扩增HPV16 L2（1～200）肽段的碱基序列,将其克隆至原核表达载体PGEX-4T-1得到重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）.将测序鉴定正确的重组质粒转入E.coli BL21（DF3）中,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定;进一步通过Western blot检测HPV16L2（1～200）融合蛋白与HPV6、11、16和18型DNA检测阳性临床患者血清的特异性结合能力;以镍螯合亲和层析柱（Ni-NTA Agarose）纯化的HPV16 L2（1～200）融合蛋白作为包被抗原,采用间接ELISA法对98例尖锐湿疣患者、135例宫颈癌患者及96例健康对照者血清进行特异性血清IgG抗体检测.结果 在HPV6、11、18、35等14个临床常见型别中,与HPV16 L2的1～200间的氨基酸序列比较,同源性达到52.7%～74.3%;成功构建了含有HPV16 L2（1～200）的重组质粒PGEX-4T-1-HPV16 L2（1～200）,含有HPV16 L2（1～200）的融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达,表达量占总蛋白的22.6%;表达产物的相对分子质量（Mr）约49×103,与预期Mr相符;以HPV6、11、16和18 DNA阳性患者血清为一抗进行Western blot分析,结果显示,在Mr约49×103处出现特异性条带.ELISA结果显示,尖锐湿疣组、宫颈癌组患者血清及健康对照者血清抗体均值分别为0.753±0.262、0.756±0.274和0.178±0.157,阳性率分别为89.8%、88.9%和9.4%.三组间血清抗体均值及阳性率比较差异均具有统计学意义（P均＜0.001）,而尖锐湿疣组和宫颈癌组间的血清抗体均值比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 HPV L2 N端1～200氨基酸序列具有高度同源性,并在HPV6、11、16和18型别间具有交叉反应. 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒 次要衣壳蛋白 同源性 交叉反应
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密码子优化的HPV6b L1 DNA诱导BALB／c小鼠产生增强的免疫应答
5
作者 陆丽君 石朝辉 +3 位作者 孟锐锋 朱珊丽 肖敏 张丽芳 《国际生物制品学杂志》 CAS 2009年第4期169-174,共6页
目的探讨真核细胞偏好密码子优化对人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）6b型L1 DNA诱导BALB／c小鼠特异性体液和细胞免疫应答的增强效应。方法利用PCR从尖锐湿疣组织中扩增HPV6b L1基因，将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1（＋）... 目的探讨真核细胞偏好密码子优化对人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）6b型L1 DNA诱导BALB／c小鼠特异性体液和细胞免疫应答的增强效应。方法利用PCR从尖锐湿疣组织中扩增HPV6b L1基因，将其克隆至真核表达质粒pcDNA3．1（＋），构建野生型pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）并进行鉴定；同时，对HPV6b L1基因进行真核细胞偏好密码子优化，进一步通过重叠PCR的方法获得全长基因，构建密码子优化的重组质粒pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（rood．）并进行鉴定。将6～8周龄雌性BALB／c小鼠分成4组，分别肌肉注射3次pcDNA3．1（＋）／HPV6bLI（mod．）、pcDNA3．1（＋）／HPV6bL1（wt）、pcDNA3．1（＋）载体和PBS，间隔2周，每次剂量为150μg／鼠。分别于免疫前和免疫后每隔2周，收集血清，用间接ELISA检测血清IgG抗体；并于第8周取小鼠脾细胞，采用乳酸脱氢酶释放法，按效应细胞与靶细胞之比（E：T）为5：1、10：1、20：1进行免疫小鼠特异性CTL杀伤活性检测。结果成功构建了密码子优化的HPV6b L1重组质粒。小鼠免疫后血清特异性IgG抗体水平随着免疫时间和次数的增加而升高。pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（mod．）组血清IgG抗体在第8周达到高峰，与pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）、载体和PBS对照组相比差异均有统计学意义（t=18．138、t=29．140、t=30．840，P值均〈0．01）；而pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）组与载体和PBS组比较差异也有统计学意义（t=20．072、t=22，457，P值均〈0．01）。在特异性CTL杀伤实验中，当E：T分别为5：1、10：1、20：1时，pcDNA3．1（＋）／HPV6bLI（mod．）组的脾细胞特异性CTL杀伤率明显高于pcDNA3．1（＋）／HPV6bLl（wt）组（t=11．892、t=15．329、t=2．911，P值均〈0．05）、载体组（t=12．936、t=16．613、t=13．901，P值均〈0．01）和PBS对照组（t=14．768、t=18．935、t：10．925，P值均〈0．01）。结论密码子优化的HPV6b L1 DNA可诱导BALB／c小鼠产生增强的特异性体液和细胞免疫应答。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒6 衣壳蛋白质类 密码子 抗体生成 免疫 细胞
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Dicer干预对HPV18 E6/E7基因表达的影响 被引量：1
6
作者 林茂 卢徐涟 +5 位作者 胡飞红 胡芝 吕艳 冯娟 张丽芳 薛向阳 《温州医学院学报》 CAS 2013年第2期101-105,共5页
目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响。方法:设计并合成三条Dicer基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dice... 目的:探讨Dicer干预对高危型HPV18 E6、E7基因表达的影响。方法:设计并合成三条Dicer基因的siRNA,采用定量PCR分析siRNA在不同浓度(40 nmol/L、60 nmol/L及80 nmol/L)、不同时间(24 h、48 h及72 h)干预效果的基础上,通过定量PCR分析Dicer被干预后对HPV18 E6、E7及miR-16基因表达的影响。结果:本研究建立的定量PCR能特异地检测Dicer、HPV18 E6、E7及miR-16基因的表达。设计的三种siRNA均明显下调Dicer基因表达,40 nmol/L的siRNA干预24 h即可获得明显效果。在此基础上分析对miR-16及高危型HPV18 E6、E7表达的影响,结果显示,40 nmol/L的Dicer siRNA干预可明显下调HPV18 E6、E7及miR-16基因表达(P<0.05)。生物信息学分析提示,HPV18 E6、E7基因编码区存在miR-16的结合位点。结论:Dicer siRNA干预能明显下调高危型HPV18E6、E7基因表达,miR-16可能参与HPV18E6、E7基因表达调控。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 人乳头瘤病毒 早期基因 微RNA
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尖锐湿疣患者血清及宫颈分泌物HPV6bE7抗体检测方法的建立及流行病学意义 被引量：2
7
作者 钟晓芝 陈韶 +4 位作者 朱珊丽 薛向阳 李文妹 王乐丹 张丽芳 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期199-203,共5页
目的建立尖锐湿疣（CA）患者血清和宫颈分泌物人乳头瘤病毒（HPV）6b型E7特异性抗体检测方法。方法利用PCR扩增HPV6bE7全长基因，构建重组原核表达质粒pET32a（＋）／HPV6bE7，原核表达产物采用SDS—PAGE和Western blot进行鉴定。进一... 目的建立尖锐湿疣（CA）患者血清和宫颈分泌物人乳头瘤病毒（HPV）6b型E7特异性抗体检测方法。方法利用PCR扩增HPV6bE7全长基因，构建重组原核表达质粒pET32a（＋）／HPV6bE7，原核表达产物采用SDS—PAGE和Western blot进行鉴定。进一步经镍螯合亲和层析法（Ni—NTAAgarose）纯化后作为包被抗原，以间接ELISA方法分别对56例CA患者、81名健康对照者的血清和宫颈分泌物标本巾的特异性抗体进行检测，另取43例宫颈癌患者的血清标本作为对照；同时用PCR方法对56例CA组织标本进行HPV6bDNA的检测。结果从CA组织标本中扩增的HPV6bE7全长基因与标准序列（GenBank登录号：NC001355）同源性为99．5％。HPV6bE7融合蛋白在原核表达系统中得到了较高效的表达（40μg／ml）。经间接ELISA检测，CA组血清特异性IgG抗体水平明显高于宫颈癌组和健康对照组（P〈O．05），吸光度（A）均值分别为1．82±0．48、1．36±0．39和1．39±0．27。CA组宫颈分泌物特异性slgA抗体水平亦显著高于健康对照组（P〈0．05），A值分别为O．63±0．26和0．53±0．06。经PCR检测，CA患者组织HPV6bE7DNA阳性率为78．6％（44／56）。与PCR检测结果比较，HPV6bE7特异性IgG和sIgA抗体用于检测CA患者HPV6b感染的敏感性分别为68．2％（30／44）、54．6％（24／44），特异性均为100％（12／12）。结论CA患者血清和宫颈分泌物HPV6bE7特异性抗体，用于诊断HPV6b感染具有一定的敏感性和较高的特异性，可用于HPV6b感染的流行病学调查。 展开更多
关键词 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒 血清 宫颈分泌物 6b E7抗体
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