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药物分析几种新技术的应用进展 被引量：5
1
作者 郭常川 曾苏 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期1-6,共6页
评述药物分析的几种新技术,包括时间分辨荧光分析法、流动注射分析和液相色谱?质谱联用技术。其中时间分辨荧光分析法作为一种新的非同位素标记分析技术,具有灵敏度高、选择性好、无放射性污染等优点,能有效消除杂质与背景荧光以提高信... 评述药物分析的几种新技术,包括时间分辨荧光分析法、流动注射分析和液相色谱?质谱联用技术。其中时间分辨荧光分析法作为一种新的非同位素标记分析技术,具有灵敏度高、选择性好、无放射性污染等优点,能有效消除杂质与背景荧光以提高信噪比,目前广泛用于药物含量测定、酶活性测定、DNA检测和时间分辨荧光免疫分析;流动注射分析是一种新型的微量、高速和自动化的分析技术,具有分析速度快、样品和试剂消耗量少、设备与操作简单、分析效率高等特点,可与各种检测器联用,检测手段灵活多样,适用性广泛,目前在药物分析领域主要用于药物含量测定和生物内源性物质的分析;液相色谱-质谱联用技术集液相色谱的高分离效能与质谱的高选择性、高灵敏检测能力于一体,是组分复杂样品和微量/痕量样品分离分析的最有力的研究手段,是药物分析相关领域中不可或缺的重要工具,目前广泛用于药物及天然产物化学成分分析、药物代谢研究、残留物分析等。 展开更多
关键词 药用制剂/分析 时间分辨荧光 流动注射 液相色谱-质谱联用
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抗肝病毒药物的药物代谢动力学研究进展 被引量：4
2
作者 徐聪 曾苏 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第18期1430-1433,共4页
目的综述抗肝病毒药物药物代谢动力学研究发展。方法参阅近十年国内外文献,将抗肝病毒药物按来源分类分为化学药物、生物制剂以及传统中药,分析、总结和归纳了各类抗肝病毒药物的药物代谢动力学研究成果。结果以抗乙肝病毒(HBV)治疗药... 目的综述抗肝病毒药物药物代谢动力学研究发展。方法参阅近十年国内外文献,将抗肝病毒药物按来源分类分为化学药物、生物制剂以及传统中药,分析、总结和归纳了各类抗肝病毒药物的药物代谢动力学研究成果。结果以抗乙肝病毒(HBV)治疗药物为例,揭示出各类药物在肝炎患者体内的吸收、分布、代谢和排泄(ADME)过程的特征。结论在概述抗肝病毒药物的药物代谢动力学特征基础上对未来抗肝病毒药物的发展趋势进行展望,为今后抗肝病毒药物的研究与应用提供必要的参考。 展开更多
关键词 抗肝病毒 药物代谢动力学 核苷(酸)类 干扰素 中药
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放射性同位素标记药物在吸收、分布、代谢、排泄研究中的应用 被引量：10
3
作者 边诣聪 胡海红 曾苏 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期906-911,共6页
近年来,放射性同位素示踪技术在药物研究中得到了广泛的应用,已成为药物代谢研究中不可缺少的研究手段。利用放射性同位素及其标记物作为示踪剂来研究药物在生物体中吸收、分布、代谢、排泄(absorption,distribution,metabolism,excreti... 近年来,放射性同位素示踪技术在药物研究中得到了广泛的应用,已成为药物代谢研究中不可缺少的研究手段。利用放射性同位素及其标记物作为示踪剂来研究药物在生物体中吸收、分布、代谢、排泄(absorption,distribution,metabolism,excretion,ADME)规律具有准确、可靠、灵敏度高、专属性强、适用范围广、操作简单等优点。本文将对近年来放射性同位素在生物体内外ADME研究中的实际应用进行概述。 展开更多
关键词 同位素示踪技术 放射性同位素 示踪剂 药物代谢 质量平衡 转运 吸收-分布-代谢-排泄
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人细胞色素P450 3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18重组酶的异源表达与活性 被引量：9
4
作者 王晓雯 曾苏 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期456-463,共8页
目的重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源。方法应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰... 目的重组表达人细胞色素P450(CYP)3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,为CYP3A4代谢活性的体外研究提供单一酶源。方法应用杆状病毒表达系统构建含有上述各CYP3A4突变体基因序列的重组病毒,将其连同含人源还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-P450氧化还原酶(POR)和细胞色素b5基因的重组病毒共同感染昆虫草地夜蛾细胞Sf9得到CYP3A4突变体与POR和细胞色素b5共表达的重组蛋白,分别以高效液相色谱法和荧光分析法测定各重组酶对睾酮和7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素的代谢活性。结果在mRNA分子水平上验证了CYP3A4突变体CYP3A4*3,CYP3A4*4,CYP3A4*5和CYP3A4*18基因在Sf9细胞中的转录。感染了各重组病毒的Sf9细胞裂解液对睾酮和7-苄氧基-4-三氟甲基香豆素有明显代谢。结论应用杆状病毒-昆虫细胞表达系统在体外成功表达了具有催化活性的人CYP3A4突变体CYP3A4.3,CYP3A4.4,CYP3A4.5和CYP3A4.18蛋白,其中CYP3A4.5活性显著低于野生型蛋白,CYP3A4.18活性显著高于野生型蛋白,而CYP3A4.3和CYP3A4.4与野生型蛋白活性近似。 展开更多
关键词 细胞色素P450CYP3A4 突变 杆状病毒科 睾酮
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利用细菌／杆状病毒系统在昆虫细胞中表达人CYP2E1 被引量：4
5
作者 路珂 曾苏 姚彤炜 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2008年第2期118-125,共8页
目的:获得人CYP2E1重组酶,并用该重组酶的特征性探针底物对其进行代谢活性研究。方法:以人肝组织RNA为模板,通过RT-PCR得到CYP2E1 cDNA片断,然后与pFastBac质粒连接,得到pFastBac-CYP2E1重组质粒,将其转化E.coli DH 10Bac大肠杆菌,通过... 目的:获得人CYP2E1重组酶,并用该重组酶的特征性探针底物对其进行代谢活性研究。方法:以人肝组织RNA为模板,通过RT-PCR得到CYP2E1 cDNA片断,然后与pFastBac质粒连接,得到pFastBac-CYP2E1重组质粒,将其转化E.coli DH 10Bac大肠杆菌,通过转座作用,获得重组Bacmid-CYP2E1,将其转染草地夜蛾细胞(Sf9)后,产生重组杆状病毒。将该病毒以及分别含有人CYPOR和人CYPb5的病毒共同感染Sf9细胞,收集共表达蛋白,以氯唑沙宗为底物鉴定重组酶的活性。结果:利用细菌/杆状病毒系统得到重组人CYP2E1的表达,其对氯唑沙宗的Km值为(72.4±8.7)μmol.L-1,Vmax值为(2.41±0.10)μmol.min-1.g-1蛋白。结论:利用杆状病毒系统成功表达了有催化活性的人CYP2E1重组酶,其活性与文献报道值相似。 展开更多
关键词 杆状病毒科 细胞色素P450酶系统 蛾/细胞学 大肠杆菌/遗传学 重组 遗传 细胞色素P450 杆状病毒 草地夜蛾细胞 氯唑沙宗
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人细胞色素P450 CYP2C19与CYPOR、CYPb5共表达模型的构建及其抑制剂筛选 被引量：2
6
作者 孔丽敏 胡海红 曾苏 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期2099-2107,共9页
目的:获得人细胞色素P450 2C19(CYP2C19)蛋白重组酶,用特征性底物表征重组酶活性,并将该重组酶用于天然产物CYP2C19抑制剂的筛选。方法:构建含人CYP2C19基因的重组杆状病毒穿梭质粒,使用昆虫细胞-杆状病毒表达系统共表达人CYP2C19、细... 目的:获得人细胞色素P450 2C19(CYP2C19)蛋白重组酶,用特征性底物表征重组酶活性,并将该重组酶用于天然产物CYP2C19抑制剂的筛选。方法:构建含人CYP2C19基因的重组杆状病毒穿梭质粒,使用昆虫细胞-杆状病毒表达系统共表达人CYP2C19、细胞色素氧化还原酶(CYPOR)和细胞色素b5(CYPb5);用蛋白印迹分析(Western Blot)鉴定重组酶的表达;以奥美拉唑为底物进行代谢孵育,HPLC分析鉴定酶的活性;并使用该重组蛋白对70种天然产物进行抑制能力的筛选。结果:Western Blot结果显示重组人CYP2C19蛋白在Sf 9细胞中成功表达,该重组酶代谢经典底物奥美拉唑的酶动力学参数分别为:米氏常数Km为(4.99±0.22)μmol.L-1,最大反应速率Vmax为(0.2539±0.0024)μmol.min-1.mg-1蛋白,表观清除率CLint值为0.0509 L.min-1.mg-1蛋白。对70种天然产物的抑制筛选实验显示白藜芦醇、大黄素、异土木香内酯、莪术醇、薄荷脑、鬼臼毒素、补骨脂素、五味子甲素、五味子乙素、新狼毒素B等对人CYP2C19有比较明显的抑制能力。结论:利用昆虫细胞-杆状病毒表达系统,可获得代谢活性良好的重组人CYP2C19蛋白,该重组酶可进一步用于其他底物的Ⅰ相代谢研究以及各种抑制剂的筛选。 展开更多
关键词 人细胞色素 蛋白重组酶 昆虫细胞-杆状病毒表达系统 蛋白印迹分析 HPLC法酶活性鉴定 奥美拉唑底物 天然产物抑制剂筛选 酶动力学参数
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重组大鼠长链2-羟酸氧化酶的克隆与表达 被引量：1
7
作者 苏晨 余露山 +1 位作者 姚彤炜 曾苏 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期331-336,共6页
目的克隆表达大鼠长链2-羟酸氧化酶。方法以鼠肾cDNA为模板,扩增大鼠长链2-羟酸氧化酶基因,连接到pET-28a(+)载体上构建重组质粒pET28a-rHao2,转化表达宿主Rosetta(DE3)。利用IPTG诱导重组蛋白的表达,并通过Ni柱纯化。通过监测DCIP在605... 目的克隆表达大鼠长链2-羟酸氧化酶。方法以鼠肾cDNA为模板,扩增大鼠长链2-羟酸氧化酶基因,连接到pET-28a(+)载体上构建重组质粒pET28a-rHao2,转化表达宿主Rosetta(DE3)。利用IPTG诱导重组蛋白的表达,并通过Ni柱纯化。通过监测DCIP在605 nm处吸光度值的变化来测定其对经典底物的酶动力学参数,验证活性。结果成功构建了表达质粒pET28a-rHao2(β1)和pET28a-rHao2(β2),并诱导表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2,其对2-羟基辛酸的Km分别为(25.1±1.9)和(24.6±1.2)μmol.L-1;对2-羟基异己酸的Km分别为(24.6±2.3)和(22.4±1.6)μmol.L-1。结论成功克隆表达了大鼠长链2-羟酸氧化酶两种同工酶β1和β2,获得了纯度高,活性好的重组酶,可为其体外底物及抑制剂的筛选提供模型。 展开更多
关键词 长链2-羟酸氧化酶 克隆 表达
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