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人TACI-linker-BR3双受体融合基因真核表达载体构建及其在COS-7细胞中的表达 被引量：1
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作者 王燕 窦恒利 +7 位作者 曹伟娟 钱琤 梁艳 杨再兴 陆慧琦 朱烨 周晔 仲人前 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期1190-1195,共6页
目的:构建人双受体融合基因真核表达载体———pcDNA3.1(+)-TACI-linker-BR3-IgGFc,观察其在COS-7细胞中的表达。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染COS-7细胞,通过Western印迹、ELISA以及免疫组化方法,检测目的蛋白的表达... 目的:构建人双受体融合基因真核表达载体———pcDNA3.1(+)-TACI-linker-BR3-IgGFc,观察其在COS-7细胞中的表达。方法:应用基因工程技术构建重组载体,脂质体转染COS-7细胞,通过Western印迹、ELISA以及免疫组化方法,检测目的蛋白的表达及其与BAFF、APRIL蛋白相互作用情况。结果:融合基因在瞬时转染的真核细胞中获得表达,并分泌至上清,转染效率能达到48%,融合蛋白能与BAFF、APRIL蛋白有效结合而且融合蛋白中分子标签IgGFc未影响双受体融合蛋白的结构及其生物学活性。结论:人TACI-linker-BR3双受体基因与IgGFc融合基因载体构建成功,表达的融合蛋白具有生物学活性,为进一步探讨SLE等自身免疫疾病的发病机制和生物学治疗方法奠定了基础。 展开更多
关键词 BAFF APRIL TACI BR3 融合蛋白 真核表达
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实时定量PCR检测自身免疫中APR IL mRNA表达
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作者 王燕 窦恒利 +1 位作者 耿红莲 仲人前 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期336-340,共5页
建立检测增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法,了解自身免疫性疾病[系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)]患者外周血单个核细胞(PBMC)中APRIL的表达水平,研究APRIL mRNA的表达... 建立检测增殖诱导配体(a proliferation-inducing ligand,APRIL)mRNA的SYBR GreenⅠ实时定量PCR方法,了解自身免疫性疾病[系统性红斑狼疮(SLE)、类风湿性关节炎(RA)]患者外周血单个核细胞(PBMC)中APRIL的表达水平,研究APRIL mRNA的表达与自身免疫性疾病发病机制、预后之间的关系。方法构建克隆载体pGEM-T Easy-APRIL作为定量模板,Line Gene FQD-33A荧光定量PCR仪定量检测58例自身免疫性疾病(SLE、RA)确诊病人和20例正常健康献血者的外周血APRIL mRNA表达含量,以APRIL mRNA和内参GAPDH mRNA含量比值作为APRIL表达水平的指标。结果58例自身免疫病患者的APRIL mRNA表达范围3.95～192,均值为29.68±4.5。20例正常对照标本PBMC APRIL mRNA的表达范围3.1～18.7,均值为10.56±2.0。自身免疫病患者外周血中APRIL mRNA的表达水平高于正常对照组,其中久治不愈或疗效差者APRIL mRNA表达水平明显高于初发患者及治疗后缓解患者,但后两组差异无显著性意义。结论成功建立了人APRIL基因表达含量的SYBR GreenⅠ实时定量检测方法。自身免疫性疾病(SLE、RA)患者的APRIL mRNA的表达含量升高,其中疗效差久治不愈患者有更高表达水平。研究APRIL表达和自身免疫病发展、早期诊断、预后等相关性,为寻找自身免疫病治疗新靶点打下基础。 展开更多
关键词 增殖诱导配体 自身免疫病 SYBR Green I荧光染料
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