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环状RNA_0000231对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响
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作者 苗仁英 王金亮 +5 位作者 于朝洋 张一飞 付一群 吕程威 杨博 宋燕 《中华实验外科杂志》 CAS 2024年第11期2499-2504,共6页
目的:探讨环状RNA(circRNA)_0000231对血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖和迁移的影响及其调控机制。方法:选择24只北京协和医学院基础研究所的ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))4周龄雄性C57BL/6J小鼠,将小鼠按数字表格法随机分为4组,每组6只,正常... 目的:探讨环状RNA(circRNA)_0000231对血管平滑肌细胞(VSMCs)的增殖和迁移的影响及其调控机制。方法:选择24只北京协和医学院基础研究所的ApoE基因敲除(ApoE^(-/-))4周龄雄性C57BL/6J小鼠,将小鼠按数字表格法随机分为4组,每组6只,正常饮食组(normal组)给予普通饲料,作为空白对照、高脂饮食组(high fat组)给予高脂饲料,建立动脉粥样硬化(AS)小鼠模型、高脂饮食+空载体腺病毒组(Ad-sh-nc组)在高脂饮食基础上尾静脉注射搭载空载体腺病毒、高脂饮食+circRNA_0000231腺病毒敲低组(Ad-sh-circ)在高脂饮食基础上注射circRNA_0000231腺病毒敲低。12周后分别取各组小鼠的主动脉,检测circRNA_0000231的表达,采用血管油红O染色法检测AS程度。于37℃、5%CO_(2)条件下,在添加10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素的高糖杜尔伯科改良伊格尔(DMEM)培养基中培养小鼠主动脉平滑肌细胞(MASMCs)以评估circRNA_0000231对MASMCs表型的影响。采用RNA下拉实验和双荧光素酶报告基因实验验证circRNA_0000231的下游调控靶基因。通过噻唑蓝(MTT)和细胞迁移实验(Transwell)检测circRNA_0000231对MASMCs增殖和迁移的影响。组间比较采用非配对t检验或非参数检验,对于3组或多组的多重比较采用单因素方差分析。结果:circRNA_0000231在AS模型的斑块组织中的表达高于normal组(1.03±0.06比4.98±1.37,t=7.042,P<0.01);血管油红O染色可见Ad-sh-circ组小鼠AS病变面积低于Ad-sh-nc组[(0.59±0.11)cm^(2)比(0.34±0.07)cm^(2),t=4.694,P<0.01],Ad-sh-circ组小鼠的斑块占比低于Ad-sh-nc组[(46.02±10.14)%比(21.05±8.81)%,t=4.552,P<0.01]。敲低circRNA_0000231可增加微小RNA(miR)-630的表达(0.99±0.03比3.77±0.19,t=24.824,P<0.01),而过表达circRNA_0000231可抑制miR-630的表达(0.99±0.12比0.41±0.05,t=7.695,P<0.01)。MTT结果表明circRNA_0000231的敲低抑制MASMCs的增殖(1.55±0.09比0.89±0.11,t=7.787,P<0.01)。Transwell和划痕实验表明,敲低circRNA_0000231减弱MASMCs的迁移能力[(149.33±8.02)个比(72.67±4.04)个,t=14.785,P<0.01;(100.33±8.50)比(60.67±6.03),t=6.591,P<0.01]。Western blot结果表明,敲低circRNA_0000231抑制了MASMCs的PCNA、MMP-2和MMP-9的表达(0.780±0.025比0.410±0.015,t=21.377,P<0.01;0.790±0.021比0.381±0.009,t=31.506,P<0.01;0.820±0.013比0.410±0.008,t=47.385,P<0.01)。过表达miR-630可抑制Zeste增强子同源物2(EZH2)表达(1.020±0.056比0.260±0.035,t=20.085,P<0.01),敲低miR-630促进EZH2表达(1.010±0.035比3.690±0.251,t=18.356,P<0.01)。结论:沉默circRNA_0000231可抑制血管平滑肌细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 环状RNA_0000231 血管平滑肌细胞 动脉粥样硬化 微小RNA-630
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