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新疆小麦籽粒过氧化物酶(POD)活性检测及其基因等位变异检测 被引量:7
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作者 王丽丽 战帅帅 +5 位作者 谢磊 王继庆 哈尼开·马坎 任毅 时佳 耿洪伟 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第10期1765-1774,共10页
【目的】研究新疆小麦品种(系)过氧化物酶活性高低并分析相关基因变异类型和分布,为新疆小麦育种和品质的遗传改良奠定基础。【方法】分别利用TaPod-A1和TaPod-D1基因位点的显性互补功能标记TaPod-3A1/TaPod-3A2和TaPod-7D1/TaPod-7D6对... 【目的】研究新疆小麦品种(系)过氧化物酶活性高低并分析相关基因变异类型和分布,为新疆小麦育种和品质的遗传改良奠定基础。【方法】分别利用TaPod-A1和TaPod-D1基因位点的显性互补功能标记TaPod-3A1/TaPod-3A2和TaPod-7D1/TaPod-7D6对113份新疆小麦品种(系)进行分子标记检测,结合新疆小麦材料POD活性的测定结果,分析POD活性相关基因不同等位变异对小麦籽粒POD活性的影响,验证TaPod-A1和TaPod-D1基因位点功能标记有效性的同时,对新疆小麦材料POD相关基因的等位变异分布频率进行分析。【结果】新疆小麦品种(系)中,在TaPod-A1位点,具有TaPod-A1b基因型的小麦品种(系)POD活性(2595.3 U/(g·min))极显著(P<0.01)高于具有TaPod-A1a基因型的材料(2346.0 U/(g·min)),2种基因型的分布频率分别为36.3%和63.7%;在TaPod-D1位点,具有TaPod-D1b基因型的小麦品种(系)POD活性(2503.9 U/(g·min))显著(P<0.05)高于具有TaPod-D1a基因型的材料(2376.9 U/(g·min)),2种基因型的分布频率分别为46.9%和53.1%。在113份新疆小麦材料中,共检测到TaPod-A1a/TaPod-D1a、TaPod-A1a/TaPod-D1b、TaPod-A1b/TaPod-D1a和TaPod-A1b/TaPod-D1b 4种变异组合类型,在新疆小麦中的分布频率分别为31.9%、31.9%、21.2%和15.0%。TaPod-A1b/TaPod-D1b(2706.2 U/(g·min))类型的POD活性显著(P<0.05)高于TaPod-A1a/TaPod-D1a(2283.6 U/(g·min))。【结论】新疆小麦品种(系)以TaPod-A1a(低POD活性)和TaPod-D1a(低POD活性)等位变异类型为主;TaPod-A1和TaPod-D1的功能标记均能较好的区分小麦籽粒POD活性的高低,将2个位点特异性标记结合起来使用,有效地筛选出高POD活性的材料,提高新疆小麦品种(系)优异等位变异的频率,促进新疆小麦品质的遗传改良。 展开更多
关键词 小麦 过氧化物酶 功能标记 标记组合 等位变异
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脱叶剂瑞脱龙对新疆石河子主栽机采棉品种脱叶敏感性和吐絮率的影响分析 被引量:8
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作者 宋敏 高文伟 +3 位作者 李贤超 陈全家 吴鹏昊 曲延英 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2016年第1期40-44,共5页
为探究新疆石河子机采棉适宜品种,研究选取生育期不同的10个主栽品种棉花进行检测。使用瑞脱龙(80%噻苯隆450g/hm^2)喷施棉花正常植株,分析施药后第5天、第10天、第15天、第20天棉花生育期与脱叶率和吐絮率的关系。结果表明,喷施脱叶剂... 为探究新疆石河子机采棉适宜品种,研究选取生育期不同的10个主栽品种棉花进行检测。使用瑞脱龙(80%噻苯隆450g/hm^2)喷施棉花正常植株,分析施药后第5天、第10天、第15天、第20天棉花生育期与脱叶率和吐絮率的关系。结果表明,喷施脱叶剂瑞脱龙后脱叶率与棉花生育期呈负相关,而脱叶率与吐絮率成正相关,t检验结果显示,脱叶剂瑞脱龙对棉花品质无显著影响;喷施脱叶剂瑞脱龙后第10天至第15天的脱叶率可作为选择机采棉花品种脱叶敏感性参照指标。不同棉花品种喷施脱叶剂后,生育期短的品种对脱叶剂敏感性强,吐絮率高,适于喷药后机械采收。 展开更多
关键词 棉花 机采棉 脱叶率 吐絮率
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新疆海岛棉育成品种表型性状的遗传多样性分析 被引量:8
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作者 谢元元 曲延英 +3 位作者 陈全家 郑炜佳 柴颜军 孔杰 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2165-2171,2188,共8页
[目的]揭示新疆海岛棉自育品种选择的技术路线、方法和特点,提高育种效率.[方法]选用32份新疆自育海岛棉品种,采用统计分析和举例分析相结合.[结果]随着育种年代的不断推移,产量性状有很大程度的改良,16个表型性状中单株结铃数的遗传多... [目的]揭示新疆海岛棉自育品种选择的技术路线、方法和特点,提高育种效率.[方法]选用32份新疆自育海岛棉品种,采用统计分析和举例分析相结合.[结果]随着育种年代的不断推移,产量性状有很大程度的改良,16个表型性状中单株结铃数的遗传多样性指数最高,达到了2.6,其次为株高,遗传多样性指数最低的是花柱高度仅为0.43,随着育种年代的推移纤维品质在不断地改良,欧式遗传距离变幅在1.03~9.52,平均距离为4.325,遗传距离最大的两个品种是新海6号和新海36号为9.52,最小的为和新海14号新海20号为1.03,聚类分析表明32份海岛棉可以聚为四大类.[结论]新疆海岛棉品种遗传基础比较狭窄,亲缘关系较为接近,核心亲本的使用较为普遍. 展开更多
关键词 海岛棉 自育品种 表型性状 遗传多样性
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新疆冬小麦穗发芽抗性鉴定及VP1B基因的等位变异检测 被引量:5
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作者 谢磊 王娟霞 +4 位作者 任毅 严勇亮 张芳 战帅帅 耿洪伟 《新疆农业大学学报》 CAS 2019年第1期1-8,共8页
为了解新疆冬小麦穗发芽抗性水平并筛选出抗性较强品种,通过籽粒法对86份新疆冬小麦品种(系)进行了穗发芽抗性鉴定,并利用小麦3BL位点穗发芽共显性STS标记VP1B3对其进行等位变异检测。结果表明,不同新疆冬小麦品种(系)间穗发芽抗性差异... 为了解新疆冬小麦穗发芽抗性水平并筛选出抗性较强品种,通过籽粒法对86份新疆冬小麦品种(系)进行了穗发芽抗性鉴定,并利用小麦3BL位点穗发芽共显性STS标记VP1B3对其进行等位变异检测。结果表明,不同新疆冬小麦品种(系)间穗发芽抗性差异明显,发芽指数变异范围18.19%~98.76%;86份材料中,中抗品种(系)3个,中感品种(系)10个,高感品种(系)73个,其平均发芽指数依次为22.76%、48.68%和85.80%,不含高抗穗发芽品种(系)。应用STS标记VP1B3共检测出VP1Ba、VP1Bb以及VP1Bc3种基因型,其分布频率分别为73.30%、3.40%和23.30%。综合表型鉴定和分子标记检测结果,‘新冬28号’、‘奎花2号’、‘石冬9号’3个品种为穗发芽抗性品种。 展开更多
关键词 新疆冬小麦 穗发芽 STS标记 等位变异检测
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新疆冬小麦过氧化物酶基因TaPod-D1和TaPod-A1的等位变异及分布 被引量:3
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作者 谢磊 战帅帅 +3 位作者 王丽丽 任毅 时佳 耿洪伟 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期262-267,共6页
为了给新疆小麦品种面粉色泽的改良提供参考依据,利用位于7D染色体上的功能标记POD-7D1和POD-7D6及3A染色体上的功能标记POD-3A1和POD-3A2对98份新疆冬小麦品种(系)进行等位变异检测。结果表明,在TaPod-D1位点,有42份(占42.9%)材料含有... 为了给新疆小麦品种面粉色泽的改良提供参考依据,利用位于7D染色体上的功能标记POD-7D1和POD-7D6及3A染色体上的功能标记POD-3A1和POD-3A2对98份新疆冬小麦品种(系)进行等位变异检测。结果表明,在TaPod-D1位点,有42份(占42.9%)材料含有与高POD活性相关的TaPod-D1a等位基因,56份(占57.1%)材料含有与低POD活性相关的TaPod-D1b等位基因;在TaPod-A1位点,有28份(占28.6%)材料含有与高POD活性相关的TaPod-A1b等位基因,70份(占71.4%)材料含有与低POD活性相关的TaPod-A1a等位基因。在不同类型的新疆冬小麦品种(系)中,两个不同位点上高POD活性等位变异TaPod-D1a和TaPod-A1b的分布频率均表现为引进品种(系)≈自育品种(系)>地方品种。所检测的新疆冬小麦品种(系)共有四种等位基因组合,分别为Tapod-D1b/Tapod-A1a、Tapod-D1a/Tapod-A1a、 Tapod-D1b/Tapod-A1b和Tapod-D1a/Tapod-A1b,它们在新疆冬小麦品种(系)中的分布频率依次为39.8%、31.6%、17.4%和11.2%。 展开更多
关键词 新疆冬小麦 过氧化物酶基因 等位变异检测 分子标记
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新疆早熟植棉区机采棉和手摘棉纤维品质比较 被引量:12
6
作者 宋敏 王海标 +2 位作者 高文伟 耿洪伟 曲延英 《中国棉花》 2015年第12期4-6,共3页
通过比较分析机采棉和手采棉的纤维品质,发现新疆早熟植棉区机采棉纤维长度较手摘棉差1mm,断裂比强度较手摘棉差1.08cN·tex-1,短纤维率高于手摘棉,棉花主体品级为3级,较手摘棉低1级。由此提出在新疆早熟植棉区应加强断裂比强度高... 通过比较分析机采棉和手采棉的纤维品质,发现新疆早熟植棉区机采棉纤维长度较手摘棉差1mm,断裂比强度较手摘棉差1.08cN·tex-1,短纤维率高于手摘棉,棉花主体品级为3级,较手摘棉低1级。由此提出在新疆早熟植棉区应加强断裂比强度高、纤维长、马克隆值适中的机采棉品种选育,以提升新疆早熟植棉区机采棉纤维品质。 展开更多
关键词 早熟 棉区 机采棉 手摘棉 纤维品质
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大豆gma-miR1514b生物信息学分析及人工microRNA植物表达载体构建 被引量:2
7
作者 倪志勇 于月华 +1 位作者 陈全家 曲延英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期46-51,共6页
MicroRNAs在植物发育与逆境响应等多个方面具有重要的调节作用。本研究采用生物信息学方法分析gmamiR1514b的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子在线预测工具分析表明gma-miR1514b启动子序列具有TATA-box、CAAT-... MicroRNAs在植物发育与逆境响应等多个方面具有重要的调节作用。本研究采用生物信息学方法分析gmamiR1514b的靶基因和启动子中的顺式作用元件。PLACE和Plant CARE启动子在线预测工具分析表明gma-miR1514b启动子序列具有TATA-box、CAAT-box基本的顺式作用元件和一些参与光、逆境和植物激素应答相关的顺式作用元件。PMRD软件预测获得5个gma-miR1514b靶基因,分别与拟南芥CA2、NTL9和ANAC014基因同源。通过重叠PCR方法替换拟南芥At-MIR319的成熟链和互补链序列,构建含有amiR1514b前体的植物表达载体amiR1514b-p CAMBIA3301。 展开更多
关键词 大豆 gma-miR1514b amiRNA 启动子
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基于开放实验平台培养植物生产类专业创新人才 被引量:2
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作者 陈琴 苏秀娟 +2 位作者 耿宏伟 曲延英 陈全家 《科技视界》 2021年第25期188-190,共3页
实验平台是进行实验教学和科学研究的主要基地,高校实验室担负着将“会读书的人”变为“会创造的人”的重任。实验平台开放是高校“以学生为中心”教育理念的重要举措,有利于激发学生学习热情,提高学生实验操作技能,培养学生团队意识和... 实验平台是进行实验教学和科学研究的主要基地,高校实验室担负着将“会读书的人”变为“会创造的人”的重任。实验平台开放是高校“以学生为中心”教育理念的重要举措,有利于激发学生学习热情,提高学生实验操作技能,培养学生团队意识和主动探索精神。通过开放实验平台,使学生有更多独立实验的机会,不仅可以促进学生的自主创新能力,还可以提高实验室仪器设备利用率及实验室的科研水平。本研究以新疆农业大学农业生物技术重点实验室为例,通过完善开放实验室管理制度、丰富开放实验室内涵建设、科研驱动开放等措施,进一步完善了实验室管理模式,培养了植物生产类专业学生的实践创新能力。 展开更多
关键词 实验室 开放管理 创新人才培养
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番茄U6启动子的克隆及CRISPR/Cas9基因编辑体系的建立 被引量:18
9
作者 蒲艳 刘超 +3 位作者 李继洋 阿尔祖古丽.塔什 胡燕 刘晓东 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期315-326,共12页
【目的】从番茄中克隆高效转录的SlU6启动子,构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,并在番茄中建立CRISPR/Cas9系统,为番茄功能基因组学和分子育种研究提供技术基础。【方法】采用PCR方法从‘中蔬四号’番茄品种中克隆4种SlU6启动子,利用Transfe... 【目的】从番茄中克隆高效转录的SlU6启动子,构建CRISPR/Cas9基因编辑载体,并在番茄中建立CRISPR/Cas9系统,为番茄功能基因组学和分子育种研究提供技术基础。【方法】采用PCR方法从‘中蔬四号’番茄品种中克隆4种SlU6启动子,利用Transfer PCR方法分别对4个启动子进行两种不同长度的截短,分别构建8个截短的SlU6启动子驱动GUS的植物融合表达载体。利用农杆菌瞬时转化法分别转染番茄叶片,通过GUS染色筛选出在番茄叶片中转录活性较高的SlU6-2启动子。采用DNA重组技术构建以SlU6-2为启动子驱动sg RNA,以番茄白粉病相关基因MLO1和EDR1为靶序列的CRISPR/Cas9基因组编辑载体。载体构建成功后,采用PEG法转化番茄原生质体,提取基因组DNA,采用酶切/PCR法分析内源基因突变情况;采用测序法分析内源基因突变的类型。利用突变位点频率分布图来验证番茄内源启动子在番茄CRISPR/Cas9系统中的有效性。【结果】经过两轮PCR,共获得4种8个不同长度的番茄U6启动子,其长度分别是452、202、448、206、433、190、448和218 bp,启动子序列比对分析发现番茄U6启动子与拟南芥U6启动子一样,也含有比较保守的两个元件,USE和TATA框。成功构建了8个SlU6启动子分别驱动GUS的植物融合表达载体。番茄叶片染色结果显示转化后的番茄叶片均被染成蓝色,表明克隆的番茄8个SlU6启动子均具有转录活性。选择SlU6-2P4为启动子驱动sg RNA,成功构建番茄白粉病相关基因MLO1和EDR1为靶序列的CRISPR/Cas9基因组编辑载体,验证结果表明番茄内源启动子SlU6-2P4能有效地驱动sg RNA的转录,并成功实现对番茄内源基因的编辑。内源基因突变的类型都为碱基替换,突变热点仅存在于内源基因靶序列区。【结论】成功克隆了4种在番茄叶片中高效转录的SlU6启动子;基于SlU6-2启动子的CRISPR/Cas9基因组编辑载体,在番茄中成功实现对内源基因的编辑。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 SlU6启动子 克隆 番茄 基因编辑
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基于棉花U6启动子的海岛棉CRISPR/Cas9基因组编辑体系的建立 被引量:12
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作者 李继洋 雷建峰 +5 位作者 代培红 姚瑞 曲延英 陈全家 李月 刘晓东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期227-235,共9页
CRISPR/Cas9基因组编辑技术是基因功能研究的一种强有力的工具,目前已在许多生物体中成功实现内源靶向基因的突变。利用已克隆的海岛棉新海16的2个U6启动子,分别构建带有新海16内源基因(GbGGB和GbERA1)靶位点DNA片段的CRISPR/Cas9基因... CRISPR/Cas9基因组编辑技术是基因功能研究的一种强有力的工具,目前已在许多生物体中成功实现内源靶向基因的突变。利用已克隆的海岛棉新海16的2个U6启动子,分别构建带有新海16内源基因(GbGGB和GbERA1)靶位点DNA片段的CRISPR/Cas9基因编辑载体。以新海16的胚性愈伤组织为供试材料,制备海岛棉的原生质体。通过PCR方法大量富集构建好的CRISPR/Cas9基因编辑载体的核心片段(包括GbU6::sg RNA和CAMV35S::Cas9两部分),并利用PEG法转化海岛棉的原生质体。对原生质体基因组DNA进行酶切后PCR,成功检测到内源靶基因的突变现象。对PCR产物进行克隆测序,结果显示序列突变的类型主要以碱基替换为主,少数为碱基缺失。结果表明基于海岛棉U6启动子的CRISPR/Cas9基因编辑系统能在海岛棉中实现靶向基因编辑的功能,为棉花功能基因组学研究提供了重要的技术基础。 展开更多
关键词 棉花 原生质体 CRISPR/Cas9 基因组编辑
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棉花DNA提取及优化SSR反应体系的建立和应用 被引量:12
11
作者 高文伟 陈全家 +3 位作者 曲延英 麻浩 马林 张鹏飞 《新疆农业大学学报》 CAS 北大核心 2009年第6期34-37,共4页
对棉花DNA提取程序和SSR反应体系进行了研究。利用正交设计对模板DNA、引物、Taq酶和Mg2+浓度4种成分以3个梯度进行优化和选择,结果表明,最优反应体系为15μL,其中含有:10×Taqbuffer 1.5μL、Mg2+(25 mmol/μL)1.5μLd、NTPs(25 mm... 对棉花DNA提取程序和SSR反应体系进行了研究。利用正交设计对模板DNA、引物、Taq酶和Mg2+浓度4种成分以3个梯度进行优化和选择,结果表明,最优反应体系为15μL,其中含有:10×Taqbuffer 1.5μL、Mg2+(25 mmol/μL)1.5μLd、NTPs(25 mmol/μL)2.0μL、引物(20 pmol/μL)各2.0μL、Taq酶(2.0U/μL)0.15μL、DNA模板(25 ng)3.0μL、ddH2O补至15μL。采用建立的反应体系,利用8对引物对3个品种进行扩增,6%的变性聚丙烯酰氨凝胶电泳检测结果显示该体系扩增结果清晰稳定。 展开更多
关键词 棉花 正交试验 PCR 反应体系
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普通小麦籽粒过氧化物酶活性全基因组关联分析 被引量:7
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作者 时佳 翟胜男 +7 位作者 刘金栋 魏景欣 白璐 高文伟 闻伟锷 何中虎 夏先春 耿洪伟 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第21期4212-4227,共16页
【目的】小麦籽粒过氧化物酶(peroxidase,POD)活性对面制品加工品质有重要影响,发掘控制籽粒POD活性重要位点,并筛选其候选基因,为小麦品质的改良奠定基础。【方法】以151份黄淮冬麦区和82份北部冬麦区品种(系)为材料,分别利用来自于小... 【目的】小麦籽粒过氧化物酶(peroxidase,POD)活性对面制品加工品质有重要影响,发掘控制籽粒POD活性重要位点,并筛选其候选基因,为小麦品质的改良奠定基础。【方法】以151份黄淮冬麦区和82份北部冬麦区品种(系)为材料,分别利用来自于小麦90 K SNP芯片的18 189和18 417个高质量SNP标记,对POD活性进行全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS)。【结果】供试材料中POD活性表现出广泛的表型变异和多样性,黄淮麦区材料的POD活性变异系数为15.4%—21.8%,遗传力为0.79,北部麦区材料的POD活性变异系数为15.0%—19.9%,遗传力为0.82。相关性分析表明,不同环境之间材料的POD活性表现出显著的相关性,黄淮麦区相关系数为0.46—0.89(P<0.0001),北部麦区相关系数为0.50—0.87(P<0.0001)。多态性信息含量PIC值为0.09—0.38,最小等位基因频率MAF值为0.05—0.5。群体结构分析表明,黄淮麦区与北部麦区2个自然群体结构简单,均可分为3个亚群。GWAS分析结果表明,在黄淮冬麦区材料中共检测到20个与POD活性显著关联的位点(P<0.001),分布在1A、2A、2B、2D、3A、3B、3D、4A、4B、5A、5B、6A、6D和7A染色体上,单个位点可解释7.8%—13.3%的表型变异。在北部冬麦区材料中共检测到20个与POD活性显著关联(P<0.001)的位点,分布在1A、1B、1D、2A、2B、2D、3A、3B、4B、6A、6B、7A、7B和7D染色体上,单个位点可解释14.4%—23.2%的表型变异。加性回归分析表明,随着优异等位基因数量的增多,小麦籽粒POD活性越高。在发现的所有POD活性相关位点中,2个位点在黄淮麦区和北部麦区材料中均能检测到且稳定遗传,可将其转换为STARP(semi-thermal asymmetric reverse PCR)或CAPS标记,以应用于分子标记辅助育种。获得3个与POD活性有关的候选基因,分别编码磷酸甘露糖变位酶(PMM-D1)、辣根过氧化物酶(PER40)和烷基氢过氧化物还原酶(F775_31640)。【结论】黄淮麦区与北部冬麦区2个自然群体遗传多样性丰富,群体结构简单,适用于全基因组关联分析。在2个自然群体中分别发现20个POD活性位点,并在显著相关的位点区域内筛选到3个候选基因。含有越多优异等位变异的材料其POD活性越高。 展开更多
关键词 普通小麦 POD活性 90 K SNP芯片 群体结构 候选基因
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棉花不同GbU6启动子截短克隆及功能鉴定 被引量:12
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作者 雷建峰 李月 +4 位作者 徐新霞 阿尔祖古丽.塔什 蒲艳 张巨松 刘晓东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期675-683,共9页
U6启动子是CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统中驱动sgRNA转录的重要元件,而使用较短序列的启动子也是构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的基本要求之一。将已经克隆的海岛棉GbU6-5P启动子(长度为1166 bp),采用Transfer PCR方法成功地截出6个... U6启动子是CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统中驱动sgRNA转录的重要元件,而使用较短序列的启动子也是构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的基本要求之一。将已经克隆的海岛棉GbU6-5P启动子(长度为1166 bp),采用Transfer PCR方法成功地截出6个长度不同的U6启动子,其长度分别为672、468、358、280、202和105 bp,并分别构建了6个启动子驱动的GUS融合植物表达载体。将构建好的6个GbU6-5Ps::GUS-pCAMBIA1300与初始克隆的GbU6-5P::GUS-pCAMBIA1300植物表达载体一起利用农杆菌真空渗透转化法分别转染棉花花粉。GUS组织化学染色显示,克隆到的7个不同截短大小的GbU6-5P启动子均能驱动GUS基因在棉花花粉中转录,棉花花粉被染成蓝色但颜色深浅存在显著差异。结果显示启动子长度越短,其转录活性越高。而且另外两种棉花U6启动子GbU6-1P和GbU6-7P也表现出类似的结果。本研究克隆了3个短小的、在棉花花粉细胞中具有转录功能的GbU6启动子。结果显示更短的U6启动子具有更高的转录活性,而且这一特点在不同U6启动子上具有共性。这预示着使用更短U6启动子不仅符合构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的要求,而且会提高sgRNA的转录水平,进而可能提高基因组编辑效率。 展开更多
关键词 棉花 GbU6启动子 截短克隆 真空渗透 棉花花粉
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棉花GhMYB146基因克隆及亚细胞定位分析 被引量:5
14
作者 倪志勇 邱迎风 +3 位作者 加得拉.吐留汗 于月华 陈全家 曲延英 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2119-2126,共8页
MYB转录因子是发育、代谢、生物和非生物胁迫应答调控网络中的关键因子。为了分析棉花Gh MYB146转录因子的亚细胞定位,通过RT-PCR和RACE方法从棉花纤维中克隆了1个棉花MYB转录因子Gh MYB146的c DNA序列,采用生物信息学方法分析了Gh MYB... MYB转录因子是发育、代谢、生物和非生物胁迫应答调控网络中的关键因子。为了分析棉花Gh MYB146转录因子的亚细胞定位,通过RT-PCR和RACE方法从棉花纤维中克隆了1个棉花MYB转录因子Gh MYB146的c DNA序列,采用生物信息学方法分析了Gh MYB146的氨基酸序列,构建了Gh MYB146基因的亚细胞定位载体并进行了亚细胞定位分析。结果表明,克隆的R2R3-MYB基因Gh MYB146的c DNA全长1 027 bp,开放阅读框长879 bp,编码292个氨基酸,蛋白质预测分子量约为33.151 k D,等电点为7.9;推测的氨基酸序列中含有2个高度保守的SANT结构域;Gh MYB146基因组包含3个外显子和2个内含子。进化树分析表明,Gh MYB146和Gh MYB5分为一个分支;亚细胞定位结果表明,Gh MYB146:GFP融合蛋白定位于细胞核中。本试验结果为进一步研究Gh MYB146基因的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 棉花 GhMYB146 克隆 亚细胞定位
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不同截短U3启动子在棉花中的功能分析 被引量:3
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作者 雷建峰 徐新霞 +3 位作者 代培红 李继洋 张巨松 刘晓东 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2016年第3期307-314,共8页
从海岛棉中克隆了2种GbU3-2P、GbU3-3P启动子,对它们进行2种长度截短,长度分别为436、245 bp和384、233 bp,同时构建了4个相应启动子驱动GUS的融合植物表达载体。利用农杆菌真空渗透转化法将4个GbU3Ps∷GUS-sg RNA-P1300植物表达载体分... 从海岛棉中克隆了2种GbU3-2P、GbU3-3P启动子,对它们进行2种长度截短,长度分别为436、245 bp和384、233 bp,同时构建了4个相应启动子驱动GUS的融合植物表达载体。利用农杆菌真空渗透转化法将4个GbU3Ps∷GUS-sg RNA-P1300植物表达载体分别转染棉花胚性愈伤组织。经GUS组织化学染色显示:克隆得到的2种截短大小的GbU3-2P和GbU3-3P启动子均能驱动GUS基因在棉花愈伤组织中表达,棉花愈伤组织被染成蓝色,但颜色深浅没有显著差异。本研究表明,同一GbU3启动子截短后,较短的启动子和较长的启动子具有相同的转录活性。这为构建棉花CRISPR/Cas9基因组编辑载体系统提供了更多理想的启动子。 展开更多
关键词 棉花 GbU3启动子 截短克隆 真空渗透 愈伤组织
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基于优化sgRNA系统提高海岛棉CRISPR/Cas9基因组编辑功效的研究 被引量:4
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作者 李继洋 胡燕 +2 位作者 姚瑞 代培红 刘晓东 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期1522-1534,共13页
CRISPR/Cas9基因组编辑体系已经在多种作物中被建立,其最大的优势在于能简单高效定向创制突变体。然而,CRISPR/Cas9基因组编辑体系在实际操作过程中经常会出现没有编辑的情况,或者靶向编辑目的基因的同时也会引发不同程度的脱靶效应,这... CRISPR/Cas9基因组编辑体系已经在多种作物中被建立,其最大的优势在于能简单高效定向创制突变体。然而,CRISPR/Cas9基因组编辑体系在实际操作过程中经常会出现没有编辑的情况,或者靶向编辑目的基因的同时也会引发不同程度的脱靶效应,这对CRISPR/Cas9基因组编辑技术的运用带来不利影响。本研究基于前期在海岛棉体细胞中建立的CRISPR/Cas9基因组编辑体系,通过对构建Cas9不同密码子优化方式、不同PAM位点个数和不同靶位点数量的编辑载体,来分析比较编辑效率和脱靶效应的差异。结果表明,2种Cas9密码子不同优化方式的编辑载体产生的编辑效率和脱靶效应无显著差异;优化后的双PAM位点的编辑效率显著高于单PAM位点,且脱靶效率显著较低;大部分双靶序列编辑效率均高于单靶序列且脱靶效率较低。上述研究结果为今后优化CRISPR/Cas9介导的海岛棉基因组编辑体系奠定了重要的理论依据。 展开更多
关键词 棉花 CRISPR/Cas9 编辑效率 脱靶效率 sgRNA类型
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盐胁迫对海岛棉种子活力的影响 被引量:6
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作者 苏秀娟 徐海江 +1 位作者 邓晓娟 龚林涛 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1604-1614,共11页
【目的】研究不同基因型海岛棉萌发期的耐盐特性,分析盐胁迫下海岛棉种子活力指标的变化规律,为培育耐盐海岛棉品种提供支持。【方法】以35份海岛棉种子作为材料,以NaCl溶液(150 mmol/L)模拟盐胁迫条件,统计分析发芽势、发芽率、根长、... 【目的】研究不同基因型海岛棉萌发期的耐盐特性,分析盐胁迫下海岛棉种子活力指标的变化规律,为培育耐盐海岛棉品种提供支持。【方法】以35份海岛棉种子作为材料,以NaCl溶液(150 mmol/L)模拟盐胁迫条件,统计分析发芽势、发芽率、根长、下胚轴长、苗鲜重、苗干重6项指标。【结果】(1)盐胁迫条件下,海岛棉种子各指标受影响程度不同,其中下胚轴受影响程度最大,苗干重受影响最小;(2)与对照样本比较,其中发芽势、发芽率、根长、下胚轴长、苗鲜重5项指标最大值、最小值、平均数均低于对照,苗干重的最大值、最小值、平均值则高于对照。【结论】35份海岛棉种子分为3类:第Ⅰ类属于高耐盐品种,第Ⅱ类属于中等耐盐品种,第Ⅲ类属于低耐盐品种。 展开更多
关键词 海岛棉 NACL 盐胁迫 种子活力 耐盐性
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海岛棉GbWRKY40基因的克隆及特征分析 被引量:3
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作者 倪志勇 加得拉.吐留汗 +2 位作者 邱迎风 曲延英 陈全家 《棉花学报》 CSCD 北大核心 2017年第4期393-400,共8页
【目的】WRKY转录因子调控多种生物学进程,包括植物生长发育和应答多种环境胁迫。本研究旨在分析WRKY转录因子在海岛棉纤维发育中的功能。【方法】从海岛棉中克隆了1个WRKY转录因子基因GbWRKY40,进行同源性分析、多序列比对,利用荧光定... 【目的】WRKY转录因子调控多种生物学进程,包括植物生长发育和应答多种环境胁迫。本研究旨在分析WRKY转录因子在海岛棉纤维发育中的功能。【方法】从海岛棉中克隆了1个WRKY转录因子基因GbWRKY40,进行同源性分析、多序列比对,利用荧光定量聚合酶链式反应分析其表达模式,通过构建酵母表达载体并转化酵母菌株AH109研究其转录激活活性。【结果】该基因c DNA全长1713 bp,5'非编码区长261 bp,3'非编码区长510 bp;开放阅读框长942 bp,编码313个氨基酸,预测相对分子质量约为34.138×103,等电点为8.46,包含5个外显子和4个内含子;其编码蛋白含有1个WRKY保守区(WRKYGQK)和1个锌指基序(C-X5-C-X23-H-X1-H),属于WRKY家族第Ⅱ类a组,包含3个核定位信号区,与陆地棉GhWRKY40同源性最高。GbWRKY40在根和开花后25 d纤维中表达量高,而且不具有转录激活活性。【结论】GbWRKY40可能参与调控棉纤维次生壁发育。 展开更多
关键词 海岛棉 GbWRKY40 表达模式 基因克隆 转录激活
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大豆gma-miR1508a靶基因鉴定及植物表达载体构建 被引量:1
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作者 倪志勇 于月华 +2 位作者 任燕萍 陈全家 曲延英 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期1090-1092,共3页
MicroRNAs是内源的非编码小RNA分子,在植物生长、发育和逆境响应过程中具有重要的调控功能。本研究采用5'RLM-RACE方法鉴定了大豆gma-miR1508a的1个靶基因Glyma16g27800。为了构建gma-miR1508a的过表达载体,使用烟草花叶病毒组成型... MicroRNAs是内源的非编码小RNA分子,在植物生长、发育和逆境响应过程中具有重要的调控功能。本研究采用5'RLM-RACE方法鉴定了大豆gma-miR1508a的1个靶基因Glyma16g27800。为了构建gma-miR1508a的过表达载体,使用烟草花叶病毒组成型启动子35S控制gma-miR1508a的过表达,采用PCR方法从大豆基因组DNA中扩增了101 bp含有折回结构的前体序列,扩增片段被亚克隆至p CAMBIA3301载体中,PCR和测序结果表明gma-miR1508a植物表达载体构建成功。 展开更多
关键词 大豆 gma-miR1508a 靶基因 植物表达载体
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分子标记在甜菜离子注入诱变育种中的初步应用 被引量:1
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作者 高文伟 马林 +5 位作者 沙红 曲延英 于月华 刘珊 李玉娇 王燕飞 《中国糖料》 2011年第2期13-15,共3页
利用经过离子注入诱变产生的早熟、高糖突变体为材料,结合RAPD标记分析进一步验证了离子注入诱变应用在甜菜上的有效性;通过分析材料间DNA水平上的差异,得到了甜菜品系7208、W11、S10之间有差异的引物;建立了7208、W11和S10的指纹图谱库... 利用经过离子注入诱变产生的早熟、高糖突变体为材料,结合RAPD标记分析进一步验证了离子注入诱变应用在甜菜上的有效性;通过分析材料间DNA水平上的差异,得到了甜菜品系7208、W11、S10之间有差异的引物;建立了7208、W11和S10的指纹图谱库,为新标记的创制奠定基础;为分子标记辅助选择育种提供物质保障和技术支撑;同时也为拓宽甜菜种质提供有效的方法。 展开更多
关键词 甜菜 分子标记 RAPD 诱变育种
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