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转化生长因子β_1基因沉默脂肪干细胞移植对盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化和心肌细胞的影响研究 被引量：4
1
作者 方汉军 李锋华 +1 位作者 许成 廉秋芳 《实用心脑肺血管病杂志》 2017年第2期58-65,共8页
目的探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)基因沉默脂肪干细胞(ADSCs)移植对盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响。方法本实验于2015年6月—2016年7月在陕西省医学实验动物中心实验室完成。体外培养ADSCs,构建TGF-β_1为靶向... 目的探讨转化生长因子β_1(TGF-β_1)基因沉默脂肪干细胞(ADSCs)移植对盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化和心肌细胞凋亡的影响。方法本实验于2015年6月—2016年7月在陕西省医学实验动物中心实验室完成。体外培养ADSCs,构建TGF-β_1为靶向基因的mRNA和siRNA表达质粒,病毒转染至ADSCs,取第三代ADSCs进行慢病毒转染,转染时分为空白组、对照组、TGF-β_1-siRNA转染组。采用Western blot法检测基因转染后第3天和第14天不同基因转染组ADSCs TGF-β_1蛋白表达情况。选取80只SPF级雄性Dahl盐敏感大鼠构建盐敏感性高血压大鼠模型,采用随机数字表法分为正盐组、高盐组、ADSCs组及TGF-β_1基因沉默组,每组20只。正盐组给予0.3%氯化钠饮食;高盐组给予8%氯化钠饮食;ADSCs组予8%氯化钠饮食6周后尾静脉移植ADSCs,持续3 d;TGF-β_1基因沉默组大鼠给予8%氯化钠饮食6周后尾静脉移植TGF-β_1基因沉默ADSCs,持续3 d。细胞移植2周后,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测4组大鼠心肌组织TGF-β_1mRNA表达情况,采用Western blot法检测4组大鼠心肌组织TGF-β_1蛋白表达情况,采用超声心动图检测4组大鼠左心室射血分数(LVEF)和缩短分数(FS),并计算左心室质量指数(LVMI),VG染色测算胶原容积积分,HE染色观察心肌细胞形态,荧光显微镜下观察心肌组织中CM-Dil标记的ADSCs分布情况,采用TUNEL法检测4组大鼠心肌细胞凋亡情况。结果 (1)荧光显微镜下显示,CM-Dil标记的ADSCs呈橘红色,标记率为97%。(2)基因转染后第3天和第14天空白组和对照组ADSCs TGF-β_1蛋白相对表达量比较,差异无统计学意义(P>0.05),而TGF-β_1-siRNA转染组ADSCs TGF-β_1蛋白相对表达量低于空白组和对照组(P<0.05)。(3)细胞移植2周后,TGF-β_1基因沉默组大鼠心肌组织TGF-β_1mRNA、蛋白相对表达量低于正盐组、高盐组及ADSCs组,ADSCs组大鼠心肌组织TGF-β_1mRNA、蛋白相对表达量低于正盐组、高盐组,高盐组大鼠心肌组织TGF-β_1mRNA、蛋白相对表达量高于正盐组(P<0.05)。(4)细胞移植2周后,高盐组和ADSCs组大鼠LVEF和FS低于正盐组和TGF-β_1基因沉默组,LVMI高于正盐组和TGF-β_1基因沉默组(P<0.05);ADSCs组和TGF-β_1基因沉默组大鼠LVEF和FS高于高盐组,LVMI低于高盐组(P<0.05);正盐组与TGF-β_1基因沉默组大鼠LVEF、FS及LVMI比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(5)细胞移植2周后,高盐组、ADSCs组和TGF-β_1基因沉默组大鼠胶原容积积分高于正盐组,ADSCs组和TGF-β_1基因沉默组大鼠胶原容积积分低于高盐组,TGF-β_1基因沉默组大鼠胶原容积积分低于ADSCs组(P<0.05)。(6)HE染色结果显示,细胞移植2周后高盐组大鼠心肌出现明显纤维化且巨噬细胞浸润明显增多,ADSCs组大鼠心肌纤维化较轻,TGF-β_1沉默组大鼠心脏纤维化最轻、巨噬细胞浸润最少。(7)荧光显微镜下显示,细胞移植2周后正盐组和高盐组大鼠心肌组织中未发现CM-Dil标记的ADSCs,TGF-β_1基因沉默组大鼠心肌组织中CM-Dil标记的ADSCs多于ADSCs组(P<0.05)。(8)细胞移植2周后,正盐组大鼠心肌细胞凋亡率为0,ADSCs组和TGF-β_1基因沉默组大鼠心肌细胞凋亡率低于高盐组,TGF-β_1基因沉默组大鼠心肌细胞凋亡率低于ADSCs组(P<0.05)。结论TGF-β_1基因沉默ADSCs移植能有效减轻盐敏感性高血压大鼠心肌纤维化,减少心肌细胞凋亡。 展开更多
关键词 高血压 大鼠 近交Dahl 脂肪干细胞 转化生长因子β1 基因沉默 心肌 纤维化 细胞凋亡
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内皮祖细胞移植对盐敏感性高血压大鼠心肌重构的影响研究 被引量：1
2
作者 漆秦 方汉军 +4 位作者 李锋华 许成 刘富强 牟建军 廉秋芳 《实用心脑肺血管病杂志》 2016年第8期9-15,共7页
目的分析内皮祖细胞(EPCs)移植对盐敏感性高血压大鼠心肌重构的影响。方法 2015年1月—2016年2月于陕西省医学实验动物中心实验室进行实验,选取Dahl盐敏感大鼠66只,按随机数字表法分为正盐组、高盐组及EPCs移植组,各22只。正盐组大鼠每... 目的分析内皮祖细胞(EPCs)移植对盐敏感性高血压大鼠心肌重构的影响。方法 2015年1月—2016年2月于陕西省医学实验动物中心实验室进行实验,选取Dahl盐敏感大鼠66只,按随机数字表法分为正盐组、高盐组及EPCs移植组,各22只。正盐组大鼠每日予以0.3%氯化钠饮食,高盐组及EPCs移植组大鼠每日予以8%氯化钠饮食,其中EPCs移植组大鼠尾静脉注入CM-Dil标记的EPCs;3组大鼠均连续喂养6周。观察第3代EPCs形态,比较3组大鼠心肌重构指标〔前壁厚度、后壁厚度、左心室舒张末期内径(LVDd)、左心室收缩末期内径(LVDs)、短轴缩短率(FS)、左心室射血分数(LVEF)〕、新生毛细血管数、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和CXC趋化因子配体16(CXCL16)基因及蛋白表达情况,同时观察3组大鼠CM-Dil标记阳性细胞及心肌纤维化情况。结果第3代EPCs生长迅速、纯度高、形态单一。正盐组、EPCs移植组大鼠前壁厚度、FS、LVEF高于高盐组,LVDs、LVDd低于高盐组(P<0.05);EPCs移植组大鼠前壁厚度、FS、LVEF高于正盐组,LVDs低于正盐组(P<0.05)。正盐组、EPCs移植组大鼠新生毛细血管数多于高盐组(P<0.05);EPCs移植组大鼠新生毛细血管数多于正盐组(P<0.05)。正盐组、EPCs移植组大鼠VEGF mRNA相对表达量高于高盐组,CXCL16 mRNA相对表达量低于高盐组(P<0.05);EPCs移植组大鼠VEGF mRNA相对表达量高于正盐组,CXCL16 mRNA相对表达量低于正盐组(P<0.05)。正盐组、EPCs移植组大鼠VEGF蛋白相对表达量高于高盐组,CXCL16蛋白相对表达量低于高盐组(P<0.05);EPCs移植组大鼠VEGF蛋白相对表达量高于正盐组,CXCL16蛋白相对表达量低于正盐组(P<0.05)。EPCs组大鼠可见CM-Dil标记阳性细胞,正盐组和高盐组大鼠未见CM-Dil标记阳性细胞。正盐组大鼠未发生心肌纤维化,高盐组及EPCs移植组大鼠均出现不同程度的心肌纤维化;与高盐组比较,EPCs移植组心肌纤维化程度较轻,巨噬细胞浸润较少。结论 EPCs移植可延缓盐敏感性高血压大鼠心肌重构,增加大鼠心肌毛细血管数并上调VEGF基因及蛋白的表达,下调CXCL16基因及蛋白的表达,有利于减少心肌纤维化。 展开更多
关键词 高血压 大鼠 近交Dahl 干细胞 心室重构
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法舒地尔对盐敏感性高血压大鼠心室重构及心肌细胞凋亡的影响研究 被引量：1
3
作者 漆秦 王显利 +3 位作者 吴朝 李阳 褚超 廉秋芳 《实用心脑肺血管病杂志》 2017年第12期49-54,共6页
目的探讨法舒地尔对盐敏感性高血压大鼠心室重构及心肌细胞凋亡的影响。方法本实验于2016年2月—2017年6月在陕西省医学实验动物中心实验室完成。选取6周龄健康雄性Dahl盐敏感大鼠69只,采用随机数字表法分为生理盐组、高盐组及法舒地尔... 目的探讨法舒地尔对盐敏感性高血压大鼠心室重构及心肌细胞凋亡的影响。方法本实验于2016年2月—2017年6月在陕西省医学实验动物中心实验室完成。选取6周龄健康雄性Dahl盐敏感大鼠69只,采用随机数字表法分为生理盐组、高盐组及法舒地尔组,每组23只。生理盐组大鼠给予含盐量为0.3%的正常饲料饲养;高盐组大鼠给予含盐量为8%的特制饲料喂养,自由饮水;法舒地尔组大鼠给予含盐量为8%的特制饲料喂养,自由饮水,建模成功后6 h腹腔注射法舒地尔,连续治疗1周。药物治疗结束后1周采用高分辨小动物超声成像系统检测大鼠左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室收缩末期内径(LVESd)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室射血分数(LVEF),并测量前壁厚度、后壁厚度;HE染色观察心肌细胞形态;VG染色法测算胶原容积积分;TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测RhoA激酶mRNA相对表达量,Western blot法检测RhoA激酶相对表达量。结果 (1)药物治疗结束后1周,生理盐组和法舒地尔组大鼠LVEDd、LVESd小于高盐组,LVFS和LVEF高于高盐组,前壁厚度和后壁厚度大于高盐组(P<0.05);法舒地尔组大鼠LVEDd、LVESd、前壁厚度及后壁厚度小于生理盐组,LVFS和LVEF高于生理盐组(P<0.05)。(2)生理盐组大鼠心肌细胞排列有序,心肌间质无炎性细胞浸润及纤维化瘢痕形成;高盐组大鼠心肌细胞排列紊乱,巨噬细胞浸润明显增多同时伴有明显纤维化重构;与高盐组相比,法舒地尔组大鼠尽管有炎性细胞浸润,但心肌细胞排列有序且无纤维化瘢痕组织形成,心肌纤维化重构较轻。(3)药物治疗结束后1周,生理盐组和法舒地尔组大鼠胶原容积积分低于高盐组,法舒地尔组大鼠胶原容积积分高于生理盐组(P<0.05)。(4)药物治疗结束后1周,生理盐组和法舒地尔组大鼠心肌细胞凋亡率低于高盐组,法舒地尔组大鼠心肌细胞凋亡率高于生理盐组(P<0.05)。(5)药物治疗结束后1周,生理盐组和法舒地尔组大鼠RhoA激酶mRNA和RhoA激酶相对表达量低于高盐组,法舒地尔组大鼠激酶mRNA和RhoA激酶相对表达量高于生理盐组(P<0.05)。结论法舒地尔能有效抑制盐敏感性高血压大鼠心室重构及心肌细胞凋亡,其机制可能与降低RhoA激酶表达有关。 展开更多
关键词 盐敏感性高血压 法舒地尔 心室重构 细胞凋亡 大鼠 近交Dahl
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