广东省实验小鼠自然感染鼠诺如病毒的调查 被引量：23

1

作者 袁文 张钰 +4 位作者 刘忠华 潘金春 王静 罗琴芳 黄韧 《中国比较医学杂志》 CAS 2010年第2期78-82,共5页

目的了解广东省实验小鼠自然感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况。方法随机抽取广东省7个繁育设施的小鼠206只,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其感染MNV的情况。结果共检测小鼠盲肠内容物206份,阳性样本为77份,阳... 目的了解广东省实验小鼠自然感染小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的情况。方法随机抽取广东省7个繁育设施的小鼠206只,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其感染MNV的情况。结果共检测小鼠盲肠内容物206份,阳性样本为77份,阳性率为37.38%。3个设施的小鼠感染MNV,各品系小鼠易感性差异无显著。结论证实广东省小鼠存在MNV感染,部分设施小鼠MNV感染率很高,需加强动物的饲养管理。RT-PCR方法可以应用于MNV感染检测。 展开更多

关键词 鼠诺如病毒 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 自然感染

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生物标志物在海洋环境污染监测中的应用及特点 被引量：12

2

作者 蔡文超 黄韧 +2 位作者 李建军 王国栋 陈琳 《水生态学杂志》 北大核心 2012年第2期137-146,共10页

生物标志物是一种用来进行环境污染物毒性效应早期预警的重要工具,综述了乙酰胆碱酯酶、腺苷三磷酸酶、谷胱甘肽硫转移酶、抗氧化酶、细胞色素P450酶系、金属硫蛋白、热激蛋白HSP70、卵黄蛋白原和DNA损伤等多种生物标志物在海洋环境污... 生物标志物是一种用来进行环境污染物毒性效应早期预警的重要工具,综述了乙酰胆碱酯酶、腺苷三磷酸酶、谷胱甘肽硫转移酶、抗氧化酶、细胞色素P450酶系、金属硫蛋白、热激蛋白HSP70、卵黄蛋白原和DNA损伤等多种生物标志物在海洋环境污染监测中的应用特点,同时指出了各生物标志物在应用中的影响因素等需要注意的问题。提出有关利用生物标志物监测海洋环境污染的后续研究建议:避免使用单一生物标志物,多种类型生物标志物联合使用,全面、客观评价环境污染的生物毒性;对比实验室染毒和野外染毒的差异,排除影响生物标志物的非毒物因素;开发更为敏感的、与污染物的浓度相关性更好的生物标志物,并深入研究其致毒机理。 展开更多

关键词 海洋环境监测 污染 生物标志物

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结合内标的小鼠诺如病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用 被引量：13

3

作者 袁文 王静 +3 位作者 赵维波 张钰 郭鹏举 黄韧 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期49-56,共8页

目的建立一种快速、特异、敏感的荧光定量RT-PCR检测方法,用于小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的检测。方法根据MNV ORF1-ORF2结合区域中保守序列设计一对特异性引物和Taqman探针,同时设计和制备了内标用于监控假阴性,建立含有内标... 目的建立一种快速、特异、敏感的荧光定量RT-PCR检测方法,用于小鼠诺如病毒(murine norovirus,MNV)的检测。方法根据MNV ORF1-ORF2结合区域中保守序列设计一对特异性引物和Taqman探针,同时设计和制备了内标用于监控假阴性,建立含有内标的荧光定量RT-PCR检测体系,通过优化,得到最佳反应体系和反应条件;构建质粒标准品并以之为模板绘制标准曲线;进行特异性、敏感性和重复性试验,最后用建立的方法检测344份小鼠临床样本,验证在临床应用中的效果。结果该方法特异性强,与小鼠肝炎病毒、小鼠脑脊髓炎病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒Ⅲ型、出血热病毒和淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒不发生交叉反应。构建的荧光定量标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系相关系数r2=0.9986,可以检测到10 copies/μL的质粒标准品,对MNV活病毒检测可检测到1.78×10-2TCID50/m L的病毒,检测灵敏度比常规RT-PCR高10倍,比病毒分离高100倍。对5份样品进行5次批内和批间重复检测,检测结果变异系数均小于2%。通过对344份临床样品检测,检测到阳性样品103份,阳性率29.94%。有5份样本结果为假阴性。结论建立的MNV荧光定量RTPCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合用于MNV日常监测、临床诊断和流行病学调查。 展开更多

关键词 小鼠诺如病毒 荧光定量RT-PCR 内标

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利用功能基因PCR芯片探讨过表达Slit2基因与老年小鼠淀粉样蛋白产生沉积的关系 被引量：4

4

作者 李舸 李航 +5 位作者 刘书华 李韵峰 关雅伦 李雪娇 黄韧 张钰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期272-279,共8页

目的通过对比老年Tg-Slit2小鼠与AD小鼠Tg-2567淀粉样蛋白产生和清除相关基因表达差异,初步探讨过表达Slit2基因与老年小鼠淀粉样蛋白产生沉积的关系。方法选取14月龄雄性C5BL/6小鼠、TgSlit2小鼠和Tg-2576小鼠作为实验研究对象,利用Aβ... 目的通过对比老年Tg-Slit2小鼠与AD小鼠Tg-2567淀粉样蛋白产生和清除相关基因表达差异,初步探讨过表达Slit2基因与老年小鼠淀粉样蛋白产生沉积的关系。方法选取14月龄雄性C5BL/6小鼠、TgSlit2小鼠和Tg-2576小鼠作为实验研究对象,利用Aβ1-40和Aβ1-42抗体对小鼠脑组织进行免疫组化染色,同时通过脑总RNA提取、RNA质量鉴定、c DNA合成以及PCR芯片检测,获得功能基因表达情况,并对两种转基因小鼠与野生型小鼠AD基因表达进行差异化比较分析。结果 Tg-Slit2小鼠相比与同年龄的Tg-2576小鼠,脑组织中并未发现典型的Aβ沉积表型,脑组织功能基因芯片分析发现,与同年龄的C57BL/6小鼠相比,Tg-Slit2有16个基因显著上调,8个基因显著下调,而Tg-2576小鼠14个基因显著上调,17个基因显著下调。进一步对差异基因分析发现,三种小鼠鼠源的淀粉样蛋白前体基因APP表达无差异,而与Aβ产生相关的Psen2基因在Tg-2576小鼠中显著上调,与Aβ清除相关的LRP6和LRP8则发生显著下调,但这些基因在Tg-Slit2老年小鼠中并未发现显著改变。结论14月龄过表达Slit2小鼠未产生Aβ的沉积,Aβ相关基因也未显示出与Tg2576小鼠相似的改变。 展开更多

关键词 Tg-Slit2小鼠 Tg-2576小鼠 功能基因PCR芯片 Β淀粉样蛋白

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小鼠肝炎病毒逆转录环介导等温扩增检测技术的建立 被引量：7

5

作者 袁文 刘忠华 +2 位作者 张钰 刘香梅 黄韧 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2009年第5期354-359,I0007,I0008,共8页

目的建立小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术并进行初步应用。方法针对MHV核衣壳蛋白基因序列设计6条特异性引物,以MHV基因... 目的建立小鼠肝炎病毒(mouse hepatitis virus,MHV)逆转录环介导等温扩增(reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP)检测技术并进行初步应用。方法针对MHV核衣壳蛋白基因序列设计6条特异性引物,以MHV基因组RNA为模板,进行RT-LAMP反应。扩增产物通过浊度、SYBR green I荧光染料显色及电泳三种方法观察结果。同时,用限制性内切酶AluI对扩增产物进行酶切鉴定。进行RT-LAMP特异性和敏感性试验。最后用建立的RT-LAMP方法检测55份小鼠临床样本。结果RT-LAMP技术简单快速,等温条件下(65℃)一个小时内即可完成反应。酶切结果证明RT-LAMP产物正确。该技术具有很高的特异性和敏感性,可检测到的MHV RNA最低浓度为0.1 pg/μL,比逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)灵敏10倍。临床样本检测结果显示,与RT-PCR比较RT-LAMP方法的敏感性和特异性分别为100%和83.3%。结论RT-LAMP技术是一种快速、简便诊断方法,该方法检测特异性强、敏感性高,可以成为快速准确检测MHV的有效手段。 展开更多

关键词 小鼠肝炎病毒 逆转录环介导等温扩增 逆转录聚合酶链式反应

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高盐饮食对雄性大鼠腰椎松质骨的影响及其机理研究 被引量：6

6

作者 贾欢欢 卢丽 +5 位作者 陈珺 杨国柱 陆幸妍 吴玉娥 张钰 李青南 《广东药学院学报》 CAS 2014年第4期463-466,共4页

目的研究高盐饮食对雄性大鼠腰椎松质骨的影响及其机理。方法选择5周龄SD雄性大鼠24只随机分为2组,分别饲喂不同钠盐比例的鼠粮,正常组含NaCl 2.6 g/kg,高盐饮食组含NaCl 20 g/kg,连续喂养60 d。实验结束,取第5腰椎骨(LV5)松质骨进行骨... 目的研究高盐饮食对雄性大鼠腰椎松质骨的影响及其机理。方法选择5周龄SD雄性大鼠24只随机分为2组,分别饲喂不同钠盐比例的鼠粮,正常组含NaCl 2.6 g/kg,高盐饮食组含NaCl 20 g/kg,连续喂养60 d。实验结束,取第5腰椎骨(LV5)松质骨进行骨形态计量学分析。结果静态参数:高盐组腰椎骨骨小梁面积百分数、骨小梁厚度均低于正常组(P<0.05);而骨小梁分离度大于正常组(P<0.05);骨小梁数量两组差异无统计学意义。动态参数:高盐组腰椎骨荧光周长百分数显著低于正常组(P<0.01);而骨形成率(BFR/TV、BFR/BS)及成骨细胞数目也低于正常组(P<0.05);骨矿化沉积率、骨形成率BFR/BV及破骨细胞数目差异无统计学意义。结论高盐饮食可导致腰椎骨量减少,骨结构变差,其机理主要是高盐导致骨形成减少,而不影响骨吸收,最终使骨吸收大于骨形成。 展开更多

关键词 高盐饮食 第五腰椎骨 成骨细胞 破骨细胞 骨形态计量学

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小鼠诺如病毒分离鉴定及病毒衣壳蛋白基因序列分析 被引量：4

7

作者 袁文 张谱华 +4 位作者 王静 刘香梅 赵维波 张钰 黄韧 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2013年第6期18-25,I0003,共9页

目的了解广东地区小鼠诺如病毒（murine norovirus,MNV）的分子遗传特征和进化来源。方法采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞对RT-PCR检测为阳性的小鼠样本进行病毒分离,通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验、测序方法对病毒分离株进... 目的了解广东地区小鼠诺如病毒（murine norovirus,MNV）的分子遗传特征和进化来源。方法采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞对RT-PCR检测为阳性的小鼠样本进行病毒分离,通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验、测序方法对病毒分离株进行鉴定。应用RT-PCR技术针对15株MNV分离株的VP1基因的1626个核苷酸片段进行基因扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌中进行克隆。通过氨苄青霉素平皿筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定及序列分析。将这15株MNV分离株与从GenBank获得的19株MNV参考株进行序列比较分析,基于VP1基因的1626核苷酸片段构建系统发生进化树,一起进行分子流行病学研究。结果从80个小鼠样本中分离到了15株MNV病毒,通过细胞病变试验、RT-PCR试验、间接免疫荧光试验和测序分析鉴定确认分离到的病毒为MNV。序列分析结果显示MNV分离株的VP1蛋白基因全长均为1626个核苷酸,广东地区15株MNV分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别在89.7%~100%和94.8%~100%之间,15株MNV分离株与其他19株MNV参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别在87.5%~92.9%和92.4%~98.2%之间。进化树分析表明来自设施A和设施D的13株病毒之间的亲缘关系较近,同属一个进化分支。来自设施B的ZD-1毒株和设施C的ZYY-163毒株与来自广东（K162）、日本（S7-P2、S7-PP3）、韩国（K4）和德国（Berlin/04/06/DE、Berlin/05/06/DE）同属另一个进化分支。结论成功分离到15株MNV病毒。遗传进化分析表明广东地区的MNV分离株来源并不相同,来自设施B和设施C的MNV分离株与国外分离株的亲缘关系较近,而来自设施A和设施D的13株MNV分离株可能是本地固有的毒株。 展开更多

关键词 小鼠诺如病毒 病毒分离鉴定 遗传进化分析

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外环境湿度和换气次数对独立通风笼盒微环境湿度和氨浓度的影响 被引量：7

8

作者 赵维波 闵凡贵 +4 位作者 刘香梅 邝慧文 张钰 刘年双 萨晓婴 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第8期36-40,共5页

目的评估在独立通风笼盒(IVC)所处环境不同湿度条件下,IVC不同换气次数时,大、小鼠IVC微环境湿度和氨浓度的变化。方法屏障环境内,以7 d为换笼周期,分别设定室内环境低湿(40%)、中湿(50%)、高湿(60%),IVC换气次数为40次/h、60次/h时,对... 目的评估在独立通风笼盒(IVC)所处环境不同湿度条件下,IVC不同换气次数时,大、小鼠IVC微环境湿度和氨浓度的变化。方法屏障环境内,以7 d为换笼周期,分别设定室内环境低湿(40%)、中湿(50%)、高湿(60%),IVC换气次数为40次/h、60次/h时,对3个品牌大、小鼠IVC微环境进行测定,观察笼盒内湿度和氨浓度的变化。结果当室内环境为低湿条件,小鼠和大鼠IVC换气次数设置为40次/h时;当室内环境为中湿条件,小鼠换气次数设置为40次/h、大鼠换气次数设置为60次/h时;当室内环境为高湿条件,小鼠换气次数设置为60次/h时,笼盒内微环境均基本能够满足GB14925-2010对湿度和氨浓度的要求。而在高湿情况下,即使大鼠IVC换气次数置为60次/h也不能满足要求。结论室内环境湿度和IVC换气次数是影响IVC微环境的关键指标,只有依据室内环境条件合理设置IVC换气次数才能较好地维护IVC微环境和达到有效管理的目的。 展开更多

关键词 IVC 外环境 微环境 换气次数 湿度 氨浓度

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杜洛克母猪初情期日龄全基因组关联分析 被引量：7

9

作者 袁晓龙 徐丹同 +5 位作者 曹浩男 熊浩铭 曾检华 陈子韬 张哲 李加琪 《广东农业科学》 CAS 2020年第5期87-92,共6页

【目的】母猪初情期日龄是重要的经济性状,直接影响母猪的繁殖利用年限,但调控母猪初情期启动的机制尚不清楚。【方法】基于全基因组芯片数据,对571头杜洛克母猪初情期日龄进行全基因组关联分析,筛选影响母猪初情期日龄的重要基因。【... 【目的】母猪初情期日龄是重要的经济性状,直接影响母猪的繁殖利用年限,但调控母猪初情期启动的机制尚不清楚。【方法】基于全基因组芯片数据,对571头杜洛克母猪初情期日龄进行全基因组关联分析,筛选影响母猪初情期日龄的重要基因。【结果】571头杜洛克母猪的初情期日龄符合正态分布,初情期日龄最早为173 d,最晚为291 d,平均为224 d;初情期越早的母猪表现出更高的窝产仔数和平均窝重;通过质控,共有30281 SNP位点被用于全基因组关联分析,在前10个潜在SNP位点附近,找到ABCC8、BCAR3、NELL2和NSF等基因,这些基因的主要功能富集在ATP binding、第二性征发育、激素分泌的调控方面。【结论】初步筛选了影响母猪初情期日龄的基因,但具体功能需要进一步研究确认。此研究不仅能为解析母猪初情期启动的遗传机制提供参考,还能为母猪初情期日龄的遗传改良提供一定的理论基础。 展开更多

关键词 杜洛克猪 初情期 全基因组关联分析(GWAS) 候选基因

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水基钻井液对诸氏鲻虾虎鱼抗氧化酶的影响 被引量：3

10

作者 蔡文超 陈小曲 +1 位作者 李建军 黄韧 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第2期16-19,共4页

目的 研究我国南海区某海洋钻井水基钻井液对诸氏鲻虾虎鱼抗氧化酶的影响.方法在19.75～158 mg/L浓度下,对3月龄诸氏鲻虾虎鱼染毒,并用试剂盒法测定超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性.结果 SOD对水基钻井液的毒性暴露不... 目的 研究我国南海区某海洋钻井水基钻井液对诸氏鲻虾虎鱼抗氧化酶的影响.方法在19.75～158 mg/L浓度下,对3月龄诸氏鲻虾虎鱼染毒,并用试剂盒法测定超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）的活性.结果 SOD对水基钻井液的毒性暴露不太敏感,在染毒第1天只有最低浓度组受到一定程度的抑制,染毒第2 天各浓度组酶活性均受到一定程度的诱导（12.4%～25.5%）,这种诱导作用在第4天即有所减弱,之后酶活性的变化变缓.CAT则对水基钻井液表现出较强的敏感性.染毒第1 天,各组酶活性均受到明显的诱导,并且各组酶活性表现出明显的浓度效应关系.最高浓度组酶活性最大诱导率达到97%（P＆gt;0.05）.随后虾虎鱼CAT酶活性逐渐下降,第7 天,各染毒组酶活性的抑制率达到58.4%～89.1%.结论 CAT在中毒反应中表现出了敏感性,具备了作为生物标志物的重要条件,有望在今后的实际应用中发挥作用. 展开更多

关键词 水基钻井液 诸氏鲻虾虎鱼 生物毒性 SOD CAT

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实时荧光定量TaqMan-PCR检测小鼠多瘤病毒方法的建立 被引量：2

11

作者 尹雪琴 袁文 +8 位作者 王静 黄碧洪 饶丹 伍妙梨 朱余军 冯胜鹏 郭鹏举 张钰 黄韧 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期53-58,共6页

目的建立一种快速、特异、敏感的小鼠多瘤病毒(murine polyomavirus,MPyV)荧光定量TaqMan PCR检测方法,用于MPyV核酸的检测。方法根据GenBank中小鼠多瘤病毒基因组序列设计了一对特异性引物及TaqMan探针,扩增长度为69 bp的片段,通过优... 目的建立一种快速、特异、敏感的小鼠多瘤病毒(murine polyomavirus,MPyV)荧光定量TaqMan PCR检测方法,用于MPyV核酸的检测。方法根据GenBank中小鼠多瘤病毒基因组序列设计了一对特异性引物及TaqMan探针,扩增长度为69 bp的片段,通过优化反应体系和反应条件,对构建的重组质粒标准品进行检测,并绘制标准曲线,进行特异性、敏感性和重复性试验。最后用建立的方法对人工感染MPy V的肺脏、脾脏和粪便,及86份小鼠临床样本进行检测,验证在临床应用中的效果。结果所建立的检测方法特异性强,只能在小鼠多瘤病毒DNA中检出荧光信号,检测灵敏度达到100拷贝,批内和批间重复性好,检测结果变异系数(CV)均小于1.13%,人工感染MPyV小鼠的肺脏、脾脏和粪便均为阳性,对86份临床样本进行检测,有3份样本呈阳性(阳性率为3.5%)。结论建立的MPyV荧光定量TaqMan-PCR检测方法特异性强、敏感性高、重复性好,适合用于MPyV临床诊断、日常监测和流行病学调查。 展开更多

关键词 小鼠多瘤病毒 实时荧光定量PCR TAQMAN探针

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高钠摄入与骨质疏松的关系 被引量：11

12

作者 杨俊贤 李青南 《中华骨质疏松和骨矿盐疾病杂志》 CSCD 2017年第3期306-310,共5页

钠是机体必需的营养元素,它参与维持水、电解质平衡、调节神经系统功能,承担着重要的生物学功能。然而高钠摄入也会引起机体的相关疾病,是高血压的诱因之一。随着研究的深入,发现高钠也是诱发骨质疏松的危险因素,但目前未受到足够重视... 钠是机体必需的营养元素,它参与维持水、电解质平衡、调节神经系统功能,承担着重要的生物学功能。然而高钠摄入也会引起机体的相关疾病,是高血压的诱因之一。随着研究的深入,发现高钠也是诱发骨质疏松的危险因素,但目前未受到足够重视。近期研究表明,在实验研究中,高钠会抑制成骨细胞的分化及其功能;高钠会导致大鼠骨密度和骨强度降低,使骨折发生率增加;在临床上,高钠饮食会增加骨质疏松患病风险,而且无论更年期妇女的骨密度如何,高盐饮食都会增加骨折的危险;但高钠对骨骼的作用研究文献不多,其分子机制尚不明确。本文从实验和临床两个方面,对高钠摄入与骨质疏松的关系作一综述。 展开更多

关键词 高钠 骨质疏松

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利用微卫星标记对五指山小型猪近交群的遗传分析 被引量：3

13

作者 袁文 王静 +3 位作者 刘香梅 闵凡贵 潘金春 王希龙 《实验动物与比较医学》 CAS 2012年第4期329-333,共5页

目的分析五指山小型猪近交群的遗传变异及近交程度。方法利用26个微卫星基因座对五指山小型猪近交群进行了遗传多样性检测，统计了各位点等位基因组成，并计算它们的平均基因纯合率、平均多态信息含量和平均杂合度。结果近交群26个基因... 目的分析五指山小型猪近交群的遗传变异及近交程度。方法利用26个微卫星基因座对五指山小型猪近交群进行了遗传多样性检测，统计了各位点等位基因组成，并计算它们的平均基因纯合率、平均多态信息含量和平均杂合度。结果近交群26个基因座的共检测到180个等位基因，平均等位基因数为6．92，平均基因纯合率为56．57％，平均多态信息含量为0．6042，平均杂合度为0．4478。结论五指山小型猪近交群具有较高的纯合度，保持了一定的遗传稳定性。 展开更多

关键词 五指山小型猪 微卫星 遗传变异

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小鼠脑脊髓炎病毒非编码蛋白片段实时荧光定量PCR标准品的构建 被引量：2

14

作者 袁文 张钰 +2 位作者 王静 刘香梅 黄韧 《实验动物与比较医学》 CAS 2012年第1期8-13,共6页

目的构建小鼠脑脊髓炎病毒（TMEV）非编码蛋白（UTR）片段标准品，用于实时荧光定量PCR检测小鼠脑脊髓炎病毒。方法RT-PCR扩增TMEVuTR片段上80-1094nt之间长度为1014bp的片段，将目的片段连接至pMD18-T载体，转化至DH5α感受态细胞。分... 目的构建小鼠脑脊髓炎病毒（TMEV）非编码蛋白（UTR）片段标准品，用于实时荧光定量PCR检测小鼠脑脊髓炎病毒。方法RT-PCR扩增TMEVuTR片段上80-1094nt之间长度为1014bp的片段，将目的片段连接至pMD18-T载体，转化至DH5α感受态细胞。分别经PCR鉴定和序列测定验证重组质粒。分光光度计测量重组质粒的吸光值，换算成拷贝数浓度后作10倍梯度稀释制得质粒标准品。然后进行实时荧光定量PCR分析，绘制标准曲线。结果TMEVUTR片段成功克隆至pMD18-T载体中，测序结果表明重组质粒中插入的UTR序列正确，实时荧光定量PCR分析10倍梯度系列稀释的质粒标准品所得到的标准曲线良好，统计学分析显示α值与标准品浓度的对数存在良好线性关系，回归系数在0．99以上。结论成功构建了TMEVUTR片段实时荧光定量PCR标准品，为今后TMEV实时荧光定量PCR检测打下了基础。 展开更多

关键词 小鼠脑脊髓炎病毒 实时荧光定量PCR 标准品

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小鼠脑脊髓炎病毒自然感染调查以及人工感染小鼠试验 被引量：1

15

作者 袁文 张钰 +6 位作者 黄碧洪 罗银珠 王静 潘金春 吴瑞可 郭鹏举 黄韧 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第4期75-81,共7页

目的了解小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)自然感染情况,探究人工感染TMEV小鼠体内各脏器组织中病毒分布及血清抗体变化。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法对2010年~2015年广东地区采集的SPF级小鼠、开放环境... 目的了解小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV)自然感染情况,探究人工感染TMEV小鼠体内各脏器组织中病毒分布及血清抗体变化。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和荧光定量RT-PCR(qRT-PCR)检测方法对2010年~2015年广东地区采集的SPF级小鼠、开放环境饲养的小鼠以及野生褐家鼠临床样本进行TMEV检测。36只ICR小鼠经脑内接种TMEV BeAn病毒,每天观察动物的临床症状,在接种第0、3、7、10、17、21、31、39、46天每个时间点分别对3只动物安乐死,剖检并取血清和组织脏器样本进行TMEV检测。结果 SPF级小鼠TMEV抗体阳性率为5.29%(n=2834),核酸阳性率为27.27%(n=457);开放环境饲养的小鼠的抗体和核酸阳性率分别为71.95%(n=82)和53.66%(n=82);野生褐家鼠中核酸阳性率为25.93%(n=27)。TMEV阳性小鼠中仅有两只小鼠表现有明显的临床症状。盲肠内容物、粪便和脑是qRT-PCR检测的最佳选择样本。ICR小鼠脑内接种TMEV BeAn病毒后第3 d可在脑、心脏、肝脏、肺脏和胃中检测到病毒核酸,脾脏、肾脏和盲肠中未检测到病毒核酸。肝脏、心脏、肺脏和胃中的病毒在接种后第10天已完全清除,脑中的病毒一直持续存在到第46天试验结束。小鼠感染后第7天可以检测到抗体,随后抗体水平逐渐升高,接种后17 d抗体阳性率达100%,并一直到46 d都可以维持较高的抗体水平。人工感染小鼠呈隐性感染,临床上并未表现明显症状和眼观病理变化。结论广东地区实验小鼠和野生褐家鼠均存在TMEV感染,且感染率较高。小鼠接种TMEV BeAn毒株后呈隐性感染,感染小鼠第7天可以产生抗体且持续存在。病毒在感染小鼠肝脏、心脏、肺脏和胃中短时间存在,而在脑中长期存在。qRT-PCR与ELISA两种检测方法具有较好的一致性,qRT-PCR检测方法可作为实验动物国家标准的有力补充。 展开更多

关键词 小鼠脑脊髓炎病毒(TMEV) 感染 检测

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非人灵长类评价学习记忆功能的影响因素探讨

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作者 李舸 刘晓霖 +7 位作者 陈锐 刘书华 李韵峰 关雅伦 李雪娇 裴中 黄韧 张钰 《中国比较医学杂志》 北大核心 2017年第9期24-29,共6页

目的基于威斯康辛通用测试仪的延迟应答测试是评价非人灵长类学习记忆能力的常用方法,该实验在进行过程中受到很多因素影响,如何设定规范的训练和评价参数,对正确评价猴的学习记忆能力具有重要的参考意义和价值。方法本研究选取8~9岁雄... 目的基于威斯康辛通用测试仪的延迟应答测试是评价非人灵长类学习记忆能力的常用方法,该实验在进行过程中受到很多因素影响,如何设定规范的训练和评价参数,对正确评价猴的学习记忆能力具有重要的参考意义和价值。方法本研究选取8~9岁雄性食蟹猴作为实验研究对象,利用改良的威斯康辛通用测试仪检测,通过食蟹猴获取食物的正确率来评价训练次数,评价频率,间隔评价时间,延迟时间和陷阱食盒数量等实验因素对结果的影响。结果当减少训练阶段的训练次数(小于10次)时,食蟹猴获取食物的正确率不稳定且呈现出显著的下降趋势;在获得足够训练的前提下,评价频率对食蟹猴获取食物的正确率影响较小;常规训练后3个月进行评价,食蟹猴仍然能够获得65%的获取食物正确率;增加延迟时间后,会导致部分食蟹猴获取食物的正确率显著降低;此外,当增加到3个以上陷阱食盒时,导致食蟹猴获取食物正确率普遍低于65%以下。结论合理的设置训练和评价阶段的实验参数对非人灵长类学习记忆功能的评价具有重要的影响和意义。 展开更多

关键词 非人灵长类 学习记忆 训练 评价

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大鼠脓毒症模型的凝血功能研究 被引量：15

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作者 李锦灵 黄树武 +7 位作者 李舸 刘书华 李韵峰 关雅伦 李雪娇 黄韧 王晖 张钰 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期224-229,共6页

目的探讨盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)所致脓毒症大鼠模型凝血功能的变化。方法采用CLP诱导SD大鼠脓毒症,术后8、16和48 h时检测相关的凝血功能指标,采用HE染色观察肺、肾、肝、脾的组织病理学变化。结果 CLP诱导... 目的探讨盲肠结扎穿孔法(cecal ligation and puncture,CLP)所致脓毒症大鼠模型凝血功能的变化。方法采用CLP诱导SD大鼠脓毒症,术后8、16和48 h时检测相关的凝血功能指标,采用HE染色观察肺、肾、肝、脾的组织病理学变化。结果 CLP诱导的脓毒症大鼠12 d生存率为30%,发病急且死亡率较高。在疾病发展的急性期内,CLP大鼠8 h时出现APTT时间延长(P<0.05),16 h时出现PT时间延长(P<0.05),内源凝血途径的XII活性及外源性凝血途径的VII活性出现一过性抑制。TT在48 h出现延长(P<0.01)。FIB的含量从16 h开始逐渐增多(P<0.001)。与凝血和抗凝功能有关的其他重要指标中PLT数量从8 h逐渐下降(P<0.01);v WF:Ag量从8 h逐渐增多(P<0.001);D-D量从16 h逐渐升高(P<0.05);PS:Ag量直到48 h出现明显下降(P<0.001);而AT-III含量无明显变化。病理检查发现肺、肾、肝、脾组织存在不同程度的损伤,但未显示明显的静脉血栓和出血特征。结论大鼠脓毒症模型在急性期内存在凝血功能紊乱,但未观察到凝血功能引起的组织病理变化。 展开更多

关键词 脓毒症 大鼠 凝血功能 病理

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MPTP诱导帕金森病小鼠亚急性与慢性模型的比较及评价 被引量：11

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作者 陈世坚 李舸 +8 位作者 张钰 关雅伦 李雪娇 刘书华 李永超 李韵峰 高金风 魏小月 赵宇红 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2022年第8期1247-1252,共6页

背景:1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病小鼠模型是较为广泛使用的帕金森病动物模型之一,可以部分反映帕金森病的发病过程和病理特征。目的:利用MPTP诱导建立小鼠亚急... 背景:1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-Methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病小鼠模型是较为广泛使用的帕金森病动物模型之一,可以部分反映帕金森病的发病过程和病理特征。目的:利用MPTP诱导建立小鼠亚急性和慢性帕金森病模型,观察两种动物模型在行为学、组织病理学及相关蛋白水平变化上的异同及其与疾病临床症状的差异性。方法:C57BL/6J雄性小鼠40只随机分为4组:亚急性模型组小鼠腹腔注射MPTP,25 mg/kg,1次/d,连续注射7 d诱导亚急性模型;对照1组腹腔注射生理盐水;慢性模型组小鼠皮下注射MPTP(25 mg/kg)并腹腔注射丙磺舒(Probenecid,250 mg/kg),每间隔3.5 d注射1次,共10次诱导慢性模型;对照2组腹腔注射Probenecid溶剂。通过疲劳转棒实验与爬杆实验测试小鼠行为变化;利用免疫荧光染色检测脑黑质区酪氨酸羟化酶阳性细胞分布;采用免疫印迹法检测脑组织中酪氨酸羟化酶蛋白表达水平。研究所涉及的动物实验获得广东省实验动物监测所AAALAC认证机构动物实验动物使用与管理委员会(IACUC)批准[IACUC2020137]。结果与结论:①在亚急性小鼠模型中,疲劳转棒实验结果显示小鼠在加速转动的转棒上停留时间较对照1组显著降低(P<0.05);在爬杆实验中,小鼠从杆顶部运动到底部的时间较对照1组显著增加(P<0.05),但黑质区的酪氨酸羟化酶的阳性细胞数及酪氨酸羟化酶蛋白表达与对照1组相比无显著差异;②在慢性模型小鼠中,疲劳转棒的停留及爬杆实验总时间与对照2组相比均无显著差异,但黑质区酪氨酸羟化酶阳性细胞数量及酪氨酸羟化酶蛋白表达水平显著低于对照2组(P<0.05);③结果说明,MPTP诱导的亚急性和慢性帕金森小鼠模型由于造模方式的差异,分别在运动损伤和病理改变中表现出与人帕金森病部分相似的表型,提示在利用上述两种模型开展相关研究中,需根据实验目的选择适当的动物模型开展。 展开更多

关键词 帕金森病 MPTP 亚急性模型 慢性模型 酪氨酸羟化酶

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miR-144、miR-21-3p、miR-142-5p及miR-27b-3p对心肌梗塞后血管再生的作用 被引量：6

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作者 袁晓龙 潘金春 +8 位作者 蒋瑶 龚宝勇 高洪彬 白国锋 谭伟江 梁十 李加琪 张豪 王希龙 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期297-306,共10页

目的以五指山小型猪心肌梗塞模型为研究对象,筛选对心肌梗塞易感且可能调控血管生成素-2(ANGPT-2,促血管生长和形成的重要基因)表达的miRNAs。以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为细胞模型,探索候选miRNAs对人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移及细... 目的以五指山小型猪心肌梗塞模型为研究对象,筛选对心肌梗塞易感且可能调控血管生成素-2(ANGPT-2,促血管生长和形成的重要基因)表达的miRNAs。以人脐静脉内皮细胞(HUVECs)为细胞模型,探索候选miRNAs对人脐静脉内皮细胞的增殖、迁移及细胞血管形成中的作用。方法通过小RNA测序和生物信息学软件预测靶标于ANGPT-2,并且在心肌梗塞组和对照组中差异表达的miRNAs,利用Edu法、Transwell法、体外实验法检测候选miRNAs对HUVECs的增殖、迁移和血管成腔的影响。结果miR-144、miR-21-3p、miR-142-5p及miR-27b-3p是潜在的靶标于ANGPT-2,并且在心肌梗塞和对照两组表达水平差异显著的miRNAs。miR-144不能直接影响HUVECs的增殖,但能抑制细胞的迁移及血管形成;miR-21-3p能抑制HUVECs增殖和迁移,但促进HUVECs血管形成;miR-142-5p和miR-27b-3p能抑制HUVECs增殖、迁移及成管;miR-142-5p和miR-27b-3p能显著抑制ANGPT-2的转录表达。结论心肌梗塞后,miR-142-5p和miR-27b-3p可能通过靶标于ANGPT-2的3’UTR并且抑制ANGPT-2的转录表达,抑制血管内皮细胞的增殖、迁移及血管形成,进而抑制血管再生。 展开更多

关键词 心机梗塞 血管再生 MIRNAS ANGPT-2

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护骨胶囊对去卵巢大鼠腰椎松质骨的影响 被引量：6

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作者 钟佳贤 林泽苗 +3 位作者 贾欢欢 吴玉娥 陈珺 李青南 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2016年第9期1007-1011,共5页

目的:观察护骨胶囊对去卵巢大鼠腰椎松质骨骨组织形态计量学的影响。方法:3月龄雌性SD大鼠60只,随机分为假手术(Sham)、去卵巢(OVX)、仙灵骨葆胶囊阳性对照(Pos)和护骨胶囊低(HG-L)、中(HG-M)、高(HG-H)剂量组,每组10只。Sham组仅去除... 目的:观察护骨胶囊对去卵巢大鼠腰椎松质骨骨组织形态计量学的影响。方法:3月龄雌性SD大鼠60只,随机分为假手术(Sham)、去卵巢(OVX)、仙灵骨葆胶囊阳性对照(Pos)和护骨胶囊低(HG-L)、中(HG-M)、高(HG-H)剂量组,每组10只。Sham组仅去除卵巢周围部分脂肪,其他组均去除卵巢。术后2 d开始给药,持续3个月后,采用骨组织形态计量学检测腰椎骨的动静态参数。结果:与Sham组比较,OVX组骨小梁面积百分数(%Tb.Ar)、骨小梁数量(Tb.N)降低、骨小梁分离度(Tb.Sp)增加(P<0.01),单位骨小梁周长成骨细胞(Ob.N)、成骨细胞周长百分数(%Ob.Pm)和单位骨小梁周长破骨细胞数(Oc.N)、破骨细胞周长百分数(%Oc.Pm)增加(P<0.01或P<0.05)。与OVX组比较,HG-L、HG-M、Pos组%Tb.Ar均升高(P<0.01或P<0.05),HG-L组Tb.N升高(P<0.01),而HG-L、HG-M和Pos组Tb.Sp均降低(P<0.01或P<0.05),HG-L组荧光周长百分数(%L.Pm)、骨形成率BFR/BV和BFR/BS均降低(P<0.01或P<0.05),HG各剂量组和Pos组%Ob.Pm均增加(P<0.01或P<0.05),Pos组Oc.N降低(P<0.05)。结论:护骨胶囊可以有效地增加去卵巢大鼠腰椎松质骨的骨量、改善骨微结构,低剂量抑制骨高转换,且促进骨形成,与仙灵骨葆比较,改善骨结构效果明显。 展开更多

关键词 护骨胶囊 骨质疏松 骨组织形态计量学 腰椎

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