α-酮戊二酸介导异柠檬酸脱氢酶3A发挥抑制心肌细胞肥大的作用

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作者 伍华燕 温艺红 +5 位作者 赵亨利 高原 周川孟 王娅 朱杰宁 单志新 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2025年第2期275-283,共9页

【目的】探究异柠檬酸脱氢酶3A(IDH3A)对心肌细胞肥大的调控作用和潜在机制。【方法】通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot实验检测健康志愿者(n=10)与心力衰竭患者(n=10)心肌组织标本、假手术组与主动脉弓缩窄术(TAC)小鼠心肌... 【目的】探究异柠檬酸脱氢酶3A(IDH3A)对心肌细胞肥大的调控作用和潜在机制。【方法】通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot实验检测健康志愿者(n=10)与心力衰竭患者(n=10)心肌组织标本、假手术组与主动脉弓缩窄术(TAC)小鼠心肌标本以及去氧肾上腺素(PE)诱导的乳大鼠心肌细胞(NRVCs)中IDH3A的表达水平。利用腺病毒介导在PE诱导的NRVCs中过表达IDH3A,检测其对NRVCs肥厚相关基因表达的影响,并通过鬼笔环肽染色检测IDH3A对NRVCs面积的影响。利用序列突变方式构建消除IDH3A酶活性的突变体(IDH3A_D208A),通过检测其对NRVCs肥大表型、ATP和ROS水平影响来验证IDH3A是否依赖酶活性发挥调节心肌细胞肥大作用。Western blot和鬼笔环肽染色检测外源给予α-酮戊二酸(AKG)对心肌细胞肥大的影响。【结果】IDH3A在心衰患者心肌、TAC手术小鼠心肌、PE诱导的NRVCs中表达均显著下调(分别为P=0.0052、P=0.0266、P=0.0413和P=0.0066)。过表达IDH3A可显著抑制PE诱导的NRVCs中肥厚相关基因表达和细胞表面积增大(分别为P<0.0001、P=0.0001和P=0.0002)。ATP和ROS水平检测结果表明过表达IDH3A能够抑制PE诱导的NRVCs中ATP和ROS水平的增加(分别为P=0.0012和P<0.0001),而无酶活性的IDH3A突变体则不具备该作用。外源给予AKG可以,而无酶活性的IDH3A突变体无法抑制PE诱导的NRVCs肥大。【结论】IDH3A通过生成AKG发挥抑制心肌细胞肥大的作用,为以IDH3A为靶点的心肌肥厚治疗研究提供科学资料。 展开更多

关键词 心肌肥厚 异柠檬酸脱氢酶3A Α-酮戊二酸 心肌细胞 线粒体

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CircSLC8A1_005通过编码蛋白抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用

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作者 胡雅婷 高原 +5 位作者 伍华燕 梁俣 李晖 徐金东 刘宇鹏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期35-44,共10页

【目的】探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。【方法】利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circSLC8A1_005,并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1... 【目的】探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。【方法】利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circSLC8A1_005,并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和平滑肌肌动蛋白α2(Acta2)基因表达,通过EdU和划痕实验检测不同干预对mCFs的增殖和迁移能力的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circSLC8A1_005包含的潜在核糖体进入序列(IRES)的活性。通过Western blot实验检测circSLC8A1_005翻译蛋白SLC8A1-605aa及其在细胞内分布情况。双萤光素酶报告基因实验检测SLC8A1-605aa对超氧化物歧化酶2(Sod2)的转录激活作用。通过RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验检测SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA的结合作用。放线菌素D实验检测SLC8A1-605aa对Sod2 mRNA稳定性的影响。【结果】利用腺病毒可在mCFs中有效介导过表达circSLC8A1_005,过表达circSLC8A1_005可显著抑制mCFs中纤维化相关基因表达,抑制mCFs的增殖和迁移能力。双萤光素酶报告基因实验结果提示circ⁃SLC8A1_005包含的2个IRES具有活性。Western blot检测结果显示circSLC8A1_005可翻译预期大小为70 ku的SLC8A1-605aa蛋白,并主要分布于细胞核内。过表达SLC8A1-605aa和circSLC8A1_005可一致地抑制mCFs的纤维化表型。SLC8A1-605aa可特异上调超氧化物歧化酶2(Sod2)表达,但并不能转录激活Sod2表达;RIP实验结果显示SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA有特异结合作用,而放线菌素D实验结果显示SLC8A1-605aa能够增强Sod2 mRNA的稳定性。【结论】CircSLC8A1_005通过翻译蛋白SLC8A1-605aa发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用,SLC8A1-605aa可能是潜在的用于心肌纤维化治疗的靶点。 展开更多

关键词 心肌纤维化 环形RNA circSLC8A1_005 翻译 心肌成纤维细胞

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丙酮酸激酶同工酶M2介导长非编码RNA RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大作用

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作者 李艺 温艺红 +5 位作者 伍华燕 姜佳雪 欧涛 陈凯茵 刘宇鹏 单志新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期544-553,共10页

越来越多的证据表明,长非编码RNA(lncRNA)在生物学功能调节中发挥着重要的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)检测显示,与健康器官捐献者(n=23)相比,长非编码RNARP11-879F14.2在心力衰竭(heart failure,HF)患者(n=21)心肌中表达水平显著升高,... 越来越多的证据表明,长非编码RNA(lncRNA)在生物学功能调节中发挥着重要的作用。实时定量PCR(RT-qPCR)检测显示,与健康器官捐献者(n=23)相比,长非编码RNARP11-879F14.2在心力衰竭(heart failure,HF)患者(n=21)心肌中表达水平显著升高,但其在心肌肥厚调节中可能的作用和机制尚不清楚。利用腺病毒介导在乳小鼠心肌细胞(neonatal mouse ventricular cardiomyocytes,NMVCs)和乳大鼠心肌细胞(neonatal rat ventricular cardiomyocytes,NRVCs)中过表达RP11-879F14.2,检测对NMVCs中心肌肥厚相关基因,包括肌球蛋白重链(MYH7)、骨骼肌肌动蛋白(Acta1)以及心钠素(NPPA)表达的影响,结果显示,过表达RP11-879F14.2可显著抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达。RT-qPCR和Western印迹结果证实,当过表达RP11-879F14.2时可显著促进NMVCs中丙酮酸激酶同工酶M2(PKM 2)表达。并且,过表达PKM 2和RP11-879F14.2可一致地抑制NMVCs和NRVCs中心肌肥厚相关基因表达和去氧肾上腺素(phenylephrine,PE)诱导NRVCs的表面积增加,而敲降PKM 2可逆转RP11-879F14.2对NMVCs中心肌肥厚相关基因表达的抑制作用。利用Seahorse 96XF细胞能量分析仪检测显示,过表达RP11-879F14.2和PKM 2可一致增加NMVCs中葡萄糖代谢水平,而沉默PKM 2对RP11-879F14.2上调NMVCs中糖酵解、三羧酸(TCA)循环和线粒体电子传递链(ETC)相关基因的表达有显著的抑制作用。因此,PKM 2介导RP11-879F14.2发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多

关键词 心肌肥厚 心肌细胞 长非编码RNA 丙酮酸激酶同工酶M2

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环状RNA circ_0120051通过miR-144-3p/IDH2轴抑制心肌成纤维细胞的纤维化表型研究

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作者 梁俣 胡志琴 +5 位作者 温艺红 伍华燕 王娅 刘宇鹏 单志新 方咸宏 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期196-205,共10页

【目的】研究环形RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。【方法】通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(S... 【目的】研究环形RNA circ_0120051对心肌成纤维细胞的纤维化表型的调控作用和机制。【方法】通过实时萤光定量PCR(RT-qPCR)检测健康器官捐献者(n=24)与心力衰竭(HF)病人(n=21)心肌标本中circ_0120051及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验鉴定circ_0120051的RNA稳定性。RT-qPCR检测circ_0120051在人心肌细胞AC16中的核质分布情况。利用腺病毒在C57BL/6乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中过表达circ_0120051,通过RT-qPCR和Western blot检测过表达circ_0120051对mCFs中纤维化相关基因表达的影响,利用细胞划痕实验检测对mCFs迁移能力的影响。通过RNA免疫共沉淀技术(RIP)验证circ_0120051与miR-144-3p间的结合作用,利用双萤光素酶报告基因实验鉴定miR-144-3p与靶基因异柠檬酸脱氢酶2(Idh2)3’-UTR的结合位点。【结果】Circ_0120051在心衰病人心肌中表达显著增加,而其宿主基因SLC8A1表达无显著差异。Circ_0120051主要定位于人心肌细胞的胞质中。RNase R消化实验证实circ_0120051相对于线性SLC8A1 mRNA具有典型的环状RNA稳定性。过表达circ_0120051可抑制mCFs中纤维化相关基因表达和mCFs的迁移能力。RIP实验证实circ_0120051与miR-144-3p之间具有明显结合作用。在mCFs中转染miR-144-3p可促进纤维化相关基因的表达,并有效逆转circ_0120051对mCFs纤维化表型的抑制作用。双萤光素酶报告基因实验证实miR-144-3p与Idh2的3’-UTR存在结合作用。miR-144-3p可在转录水平抑制mCFs中Idh2表达,而过表达circ_0120051可增加mCFs中IDH2表达。在mCFs中转染miR-144-3p和Idh2的小干扰RNA(siRNA),可一致性地逆转circ_0120051对纤维化相关基因表达和mCFs迁移的抑制作用。【结论】Circ_0120051通过特异结合miR-144-3p并增加其靶基因IDH2表达来发挥抑制mCFs纤维化表型的作用。 展开更多

关键词 心肌纤维化 环状RNA 微RNA Circ_0120051 心肌成纤维细胞

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环状RNA _005647通过结合miR-99b-5p抑制心肌细胞中肥厚相关基因的表达 被引量：6

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作者 严钰敏 袁淑菁 +4 位作者 张铭 朱杰宁 符永恒 方咸宏 单志新 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2021年第1期10-16,共7页

目的研究环状RNA circRNA_005647抑制心肌肥厚相关基因表达的作用机制。方法建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注诱导的心肌肥厚小鼠模型。原代分离获得C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVC),AngⅡ处理NMVC建立心肌细胞肥大模型。利用NMVC,分别感染circ... 目的研究环状RNA circRNA_005647抑制心肌肥厚相关基因表达的作用机制。方法建立血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注诱导的心肌肥厚小鼠模型。原代分离获得C57BL/6乳小鼠心肌细胞(NMVC),AngⅡ处理NMVC建立心肌细胞肥大模型。利用NMVC,分别感染circRNA_005647重组腺病毒(rAd-circRNA_005647)和转染miR-99b-5p模拟物来研究对NMVC肥大的影响。通过双荧光素酶报告基因实验和RNA Pull-down实验验证circRNA_005647与miR-99b-5p的结合作用。实时荧光定量PCR和Western blot检测NMVC中心肌肥厚相关基因的mRNA和蛋白表达水平。结果在AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚模型和心肌细胞肥大模型中,circRNA_005647及其宿主基因肌球蛋白IXA(Myo9a)表达升高。过表达circRNA_005647可抑制AngⅡ诱导的NMVC中肥厚相关基因心房钠尿肽(Anp)和肌球蛋白重链7(Myh7)基因表达升高。circRNA_005647与miR-99b-5p间存在结合作用。过表达circRNA_005647可抑制miR-99b-5p促心肌细胞肥大的作用。结论circRNA_005647通过结合miR-99b-5p发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多

关键词 心肌肥厚 环状RNA circRNA_005647 微小RNA miR-99b-5p

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Circ_0018478通过编码HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用 被引量：4

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作者 丰嘉欣 郭继深 +5 位作者 梁俣 姜佳雪 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期995-1004,共10页

【目的】探究环状RNA circ_0018478调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用和可能机制。【方法】RTqPCR检测健康器官捐献者(n=18)和心衰(n=28)患者心肌中circ_0018478及其宿主基因含E3泛素蛋白连接酶4的HECT和RLD结构域(HERC4)的表达水平... 【目的】探究环状RNA circ_0018478调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用和可能机制。【方法】RTqPCR检测健康器官捐献者(n=18)和心衰(n=28)患者心肌中circ_0018478及其宿主基因含E3泛素蛋白连接酶4的HECT和RLD结构域(HERC4)的表达水平。荧光原位杂交(FISH)实验和核质RNA定量检测circ_0018478的细胞分布情况,放线菌素D干预实验和核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验检测circ_0018478的RNA稳定性。过表达腺病毒介导的circ_0018478时,分别在RNA和蛋白水平检测乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中如Ⅰ型和Ⅲ型胶原等纤维化相关基因表达的影响。利用EdU染色和Trans-well细胞迁移实验鉴定circ_0018478对mCFs增殖和迁移能力的影响。质谱shot-gun分析circ_0018478可能翻译蛋白的肽段序列。利用小干扰RNA(siRNA)抑制HERC4-193表达,检测对circ_0018478调控mCFs纤维化表型的影响。【结果】在心衰病人心肌中,相较于无显著表达差异的宿主基因HERC4,环形RNA circ_0018478表达显著增加。FISH和核质分离实验结果证实circ_0018478主要定位于心肌细胞胞质中。放线菌素D和RNase R消化实验证实circ_0018478具有典型的RNA稳定性。过表达circ_0018478可抑制mCFs的增殖、迁移和纤维化相关基因的表达。质谱shot-gun和Western blot检测结果提示circ_0018478可翻译预期的HERC4-193蛋白。过表达circ_0018478和HERC4-193可一致地抑制mCFs的纤维化表型,而抑制HERC4-193表达可有效减弱circ_0018478抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用(P<0.05)。【结论】Circ_0018478通过翻译蛋白HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用。 展开更多

关键词 心肌纤维化 circ_0018478 翻译 心肌成纤维细胞

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基因型相同而表现型不同的Fabry病一家系报道 被引量：1

7

作者 陈欣 刘洋 +3 位作者 廖洪涛 李慧 方咸宏 吴书林 《岭南心血管病杂志》 2019年第3期290-293,共4页

目的报道一个具有相同α-半乳糖苷酶A突变基因型而临床表现型不同的家系。方法使用二代测序对一个具有多种心律失常的患者进行筛查寻找基因突变,并对家属进一步验证确认。结果该家系中,先证者经历一次心源性休克,且出现多种心律失常,包... 目的报道一个具有相同α-半乳糖苷酶A突变基因型而临床表现型不同的家系。方法使用二代测序对一个具有多种心律失常的患者进行筛查寻找基因突变,并对家属进一步验证确认。结果该家系中,先证者经历一次心源性休克,且出现多种心律失常,包括室性心动过速、短PR综合征、心房扑动、心房颤动、窦性心动过缓。家族中有1例患者表现为类似的短PR综合征,余患者均有不同的临床表现。DNA测序显示,该家系所有患者皆有α-半乳糖苷酶A错义突变(G43D)。该基因突变既往描述将导致法布里病。结论GLA基因突变可导致多种临床表型,即使在同一家系相同基因型的条件下,其临床表现的个体差异仍较大。 展开更多

关键词 法布里病 短PR综合征 基因 突变

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circRNA_100395通过结合miR-31-5p抑制心肌细胞肥大相关基因的表达 被引量：4

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作者 郭晶 陈丽文 +7 位作者 温艺红 黄智琪 陈泽润 刘彦俊 朱杰宁 方咸宏 徐金东 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期56-64,共9页

目的:探讨环状RNA(circRNA)_100395对心肌细胞肥大表型的影响及其作用机制。方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=8)与心衰患者(n=14)心肌组织中circRNA_100395及其宿主基因Kelch蛋白样家族成员20(KLHL20)的表达水平。原代分离、培养... 目的:探讨环状RNA(circRNA)_100395对心肌细胞肥大表型的影响及其作用机制。方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=8)与心衰患者(n=14)心肌组织中circRNA_100395及其宿主基因Kelch蛋白样家族成员20(KLHL20)的表达水平。原代分离、培养乳小鼠心室肌细胞(NMVCs),分别感染对照病毒(rAd-GFP)和circRNA_100395重组腺病毒(rAd-circRNA_100395)24 h,探究circRNA_100395对心肌肥大相关的β-肌球蛋白重链(β-MHC)、骨骼肌α-肌动蛋白(ACTA1)及心房钠尿肽(ANP)表达的影响。采用鬼笔环肽染色检测circRNA_100395对血管紧张素II(AngII)处理的NMVCs肥大反应的影响。通过双萤光素酶报告基因实验及RNApull-down实验验证微小RNA-31-5p(miR-31-5p)与circRNA_100395的结合作用。通过转染miR-31-5p mimic至NMVCs中,检测miR-31-5p对circRNA_100395抑制心肌肥大相关基因表达的影响。结果:在心衰患者心肌组织中,circRNA_100395表达水平及其宿主基因KLHL20的mRNA表达水平显著增加(P<0.05)。过表达circRNA_100395可以降低NMVCs中心肌肥大相关基因Myh7(编码β-MHC蛋白)、Acta1及Anp的表达,抑制AngII的促NMVCs肥大反应(P<0.01)。双萤光素酶报告基因实验和RNApull-down实验结果表明miR-31-5p与circRNA_100395存在相互结合作用。过表达miR-31-5p可减弱circRNA_100395对心肌细胞肥大的抑制作用。结论:circRNA_100395通过结合miR-31-5p发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多

关键词 心肌细胞肥大 环状RNA_100395 微小RNA-31-5p

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circRNA_0000994通过翻译蛋白抑制心肌细胞肥大相关基因表达 被引量：2

9

作者 郭继深 丰嘉欣 +7 位作者 温艺红 陈泽润 李艺 朱杰宁 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1756-1764,共9页

目的:研究环状RNA(circRNA)_0000994对心肌细胞肥大表型的调控作用及机制。方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=18)与心力衰竭(HF)病人(n=28)心肌组织中circRNA_0000994及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。通过分... 目的:研究环状RNA(circRNA)_0000994对心肌细胞肥大表型的调控作用及机制。方法:通过RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=18)与心力衰竭(HF)病人(n=28)心肌组织中circRNA_0000994及其宿主基因溶质载体家族8成员A1(SLC8A1)的表达水平。通过分离和培养新生小鼠心室肌细胞(NMVCs),利用重组腺病毒载体介导circRNA_0000994过表达并检测其对NMVCs肥大表型的影响。采用鬼笔环肽染色检测circRNA_0000994对血管紧张素II(Ang II)诱导的NMVCs肥大反应的影响。人AC16心肌细胞过表达circRNA_0000994后,利用质谱shotgun技术鉴定circRNA_0000994预期翻译蛋白(简称SLC8A1-605aa)的特征性肽段序列。利用NMVCs先后过表达circRNA_0000994及转染siRNA-SLC8A1-605aa,检测SLC8A1-605aa表达对circRNA_0000994抑制NMVCs肥大表型的影响。结果:在HF病人心肌组织中,circRNA_0000994及SLC8A1 mRNA的表达显著增加。过表达circRNA_0000994可降低NMVCs中心脏肥大相关基因肌球蛋白重链7(MYH7)、骨骼肌肌动蛋白α1(ACTA1)和心房钠尿肽(ANP)的表达,抑制Ang II诱导的NMVCs肥大反应(P<0.01)。Western blot及质谱shot-gun分析结果显示,circRNA_0000994可翻译SLC8A1-605aa蛋白。过表达circRNA_0000994和SLC8A1-605aa可一致地抑制NMVCs中心脏肥大相关基因表达,而抑制SLC8A1-605aa表达则可逆转circRNA_0000994对NMVCs肥大表型的抑制作用。结论:circRNA_0000994通过翻译SLC8A1-605aa蛋白发挥抑制心肌细胞肥大的作用。 展开更多

关键词 心脏肥大 环状RNA_0000994 溶质载体家族8成员A1

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CircRNA_100395通过结合miR-144-3p抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达 被引量：10

10

作者 温艺红 杨真祯 +5 位作者 张铭 朱杰宁 杨莹 符永恒 方咸宏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期875-883,共9页

【目的】研究环形RNA circRNA_100395调节心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用机制。【方法】CircRNAs表达谱芯片分析结合实时荧光定量PCR验证circRNA_100395在长期持续性房颤(AF)病人左心耳组织中的表达。检测血管紧张素Ⅱ(Ang-... 【目的】研究环形RNA circRNA_100395调节心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达的作用机制。【方法】CircRNAs表达谱芯片分析结合实时荧光定量PCR验证circRNA_100395在长期持续性房颤(AF)病人左心耳组织中的表达。检测血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导人心房肌成纤维细胞(HAFs)中circRNA_100395的表达及在细胞核质中分布情况。利用放线菌素D实验检测circRNA_100395的RNA稳定性。制备重组circRNA_100395腺病毒(rAd-circRNA_100395)并感染HAFs,检测HAFs中纤维化相关基因Col1a1、Col3a1和Acta2的mRNA和蛋白表达。通过双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验分别鉴定circRNA_100395与微小RNA miR-144-3p的结合作用。【结果】Masson染色结果显示AF病人心耳组织的纤维化明显加重(P<0.01)。CircRNA_100395在AF患者心耳组织中表达降低(P<0.05),但在Ang-Ⅱ诱导的HAFs中表达明显升高(P<0.05),且主要分布于HAFs细胞质内。放线菌素D实验证明circRNA_100395的RNA稳定性明显高于其宿主基因KLHL20 mRNA。过表达circRNA_100395抑制HAFs中纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验和RNA Pull-down实验均证实circRNA_100395与miR-144-3p存在特异性的结合作用。CircRNA_100395可抑制miR-144-3p促HAFs中纤维化相关基因表达的作用。【结论】CircRNA_100395通过特异结合miR-144-3p来发挥抑制纤维化相关基因表达的作用。 展开更多

关键词 心肌纤维化 人心房肌成纤维细胞 环状RNA 微小RNA

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核内miR-199b-5p通过上调CDK9表达促进心肌细胞肥大 被引量：4

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作者 易芷瑶 赵安职 +6 位作者 张铭 曾妮 朱杰宁 杨莹 严钰敏 郭惠明 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期193-201,共9页

目的:研究核内微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制。方法:利用RT-qPCR检测健康人与心衰患者心肌组织中miR-199b-5p的表达水平。通过核质分离及RT-qPCR技术确定miR-199b-5p在人心肌AC16细胞中的核质分布。原... 目的:研究核内微小RNA-199b-5p(miR-199b-5p)对心肌细胞肥大的调控作用及其机制。方法:利用RT-qPCR检测健康人与心衰患者心肌组织中miR-199b-5p的表达水平。通过核质分离及RT-qPCR技术确定miR-199b-5p在人心肌AC16细胞中的核质分布。原代分离培养C57BL/6乳小鼠心室肌细胞(NMVCs),转染miR-199b-5p mimic,利用RT-qPCR和Western blot检测心房钠尿肽(ANP)、MYH7/β-肌球蛋白重链(β-MHC)和细胞周期蛋白依赖性激酶9(CDK9)表达。敲减NMVCs中CDK9基因表达,检测其对miR-199b-5p诱导的心肌细胞肥大相关基因表达的影响。双萤光素酶报告基因实验确定miR-199b-5p对CDK9基因的转录激活作用及与其启动子区的结合作用。通过ChIP-PCR实验验证miR-199b-5p通过募集RNA聚合酶Ⅱ(PolⅡ)和p300参与CDK9基因的转录激活。结果:RT-qPCR结果显示心衰患者心肌中miR-199b-5p表达增加。核质分离和RT-qPCR结果显示人心肌AC16细胞中miR-199b-5p在胞核中富集存在。转染miR-199b-5p mimic能显著提高NMVCs中ANP、MYH7/β-MHC和CDK9表达。抑制CDK9表达可逆转miR-199b-5p的促心肌细胞肥大作用。双萤光素酶报告基因实验显示miR-199b-5p可增加CDK9基因的转录激活,miR-199b-5p与CDK9基因启动子区存在特异的结合位点。ChIP-PCR实验显示miR-199b-5p能募集PolⅡ和p300到CDK9基因启动子区,参与CDK9基因的转录激活。结论:核内miR-199b-5p通过转录激活CDK9基因发挥促进心肌细胞肥大作用。 展开更多

关键词 微小RNA-199b-5p 细胞周期蛋白依赖性激酶9 心肌细胞肥大

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PTBP1介导长链非编码RNA RP11-879F14.2发挥抑制心肌纤维化的作用 被引量：2

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作者 杨莹 郭晶 +5 位作者 温艺红 黄宇晴 易芷瑶 朱杰宁 方咸宏 单志新 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期33-41,共9页

【目的】研究长链非编码RNA(lncRNA)RP11-879F14.2调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及机制。【方法】对心衰患者及健康对照者心肌组织进行Masson染色检测心肌胶原水平。lncRNA表达谱芯片检测心衰患者及健康对照者心肌中lncRNAs的表... 【目的】研究长链非编码RNA(lncRNA)RP11-879F14.2调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及机制。【方法】对心衰患者及健康对照者心肌组织进行Masson染色检测心肌胶原水平。lncRNA表达谱芯片检测心衰患者及健康对照者心肌中lncRNAs的表达变化,实时定量荧光PCR(RT-qPCR)验证RP11-879F14.2在心衰患者心肌中的表达。利用重组RP11-879F14.2腺病毒(rAd-RP11-879F14.2)感染人心房肌成纤维细胞(HAFs),检测纤维化相关基因Col1a1,Col3a1和Acta2表达。RT-qPCR检测HAFs的核/质组分中RP11-879F14.2的水平。基于生物信息学预测和双荧光素酶报告基因实验鉴定RP11-879F14.2与多聚嘧啶区结合蛋白(PTBP1)的结合作用。检测敲低HAFs中PTBP1表达对RP11-879F14.2调控心肌纤维化相关基因表达的影响。【结果】Masson染色结果显示,心衰病人心肌组织发生明显纤维化。RT-qPCR结果证实RP11-879F14.2在心衰患者心肌组织中表达增加(P<0.01)。过表达RP11-879F14.2可在RNA及蛋白水平显著抑制心肌纤维化相关基因表达。核质分离及RT-qPCR检测结果证实RP11-879F14.2主要分布于细胞核中。RP11-879F14.2可与PTBP1结合,并促进HAFs中PTBP1表达,而敲低PTBP1可逆转RP11-879F14.2抑制HAFs中纤维化相关基因表达的作用。【结论】PTBP1可介导RP11-879F14.2发挥抑制心肌纤维化的作用。 展开更多

关键词 长链非编码RNA lncRNA RP11-879F14.2 PTBP1 心肌纤维化 心肌成纤维细胞

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FGF7通过上调SOD2抑制心肌成纤维细胞中纤维化相关基因的表达 被引量：2

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作者 黄宇晴 温艺红 +6 位作者 张铭 朱杰宁 杨莹 严钰敏 易芷瑶 曾妮 单志新 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期611-618,共8页

目的:研究成纤维细胞生长因子7(FGF7)调控心肌纤维化相关基因表达的作用机制。方法:利用mRNA表达谱芯片检测心衰患者心肌组织与健康对照心肌组织以及重组FGF7腺病毒感染小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)和正常对照mCFs中差异表达的基因。血管... 目的:研究成纤维细胞生长因子7(FGF7)调控心肌纤维化相关基因表达的作用机制。方法:利用mRNA表达谱芯片检测心衰患者心肌组织与健康对照心肌组织以及重组FGF7腺病毒感染小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)和正常对照mCFs中差异表达的基因。血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导mCFs建立心肌纤维化的细胞模型。流式细胞术检测过表达FGF7对mCFs细胞周期的影响。利用重组FGF7腺病毒感染mCFs,RT-qPCR及Western blot检测FGF7、Ⅰ型胶原α1链(Col1a1)、Ⅲ型胶原α1链(Col3a1)和肌动蛋白α2(Acta2)等纤维化相关基因的表达,并检测蛋白激酶B(PKB/Akt)和腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的活化情况。用siRNA沉默mCFs中超氧化物歧化酶2(SOD2)的表达或用AMPK抑制剂compound C抑制mCFs中AMPK的活性后,检测过表达FGF7的mCFs中心肌纤维化相关基因表达的变化。结果:心衰患者心肌组织及AngⅡ诱导的mCFs中FGF7的表达显著降低(P<0.05)。过表达FGF7不影响mCFs的细胞周期,但可降低mCFs中Col1a1、Col3a1和Acta2的表达(P<0.05)。过表达FGF7的mCFs中SOD2表达和磷酸化AMPK水平增加(P<0.05),但磷酸化Akt水平无显著变化(P>0.05)。沉默SOD2可逆转FGF7抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用,而compound C可减弱FGF7上调SOD2表达和抑制纤维化相关基因表达的作用。结论:FGF7通过激活AMPK来增加SOD2表达,从而发挥抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用。 展开更多

关键词 成纤维细胞生长因子7 超氧化物歧化酶2 心肌成纤维细胞 心肌纤维化

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miR-25-3p通过BTG2/SOD2轴促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达 被引量：4

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作者 赵安职 郭晶 +7 位作者 陈丽文 黄智琪 陈泽润 朱杰宁 张梦珍 张铭 徐金东 单志新 《中国动脉硬化杂志》 CAS 2022年第4期328-334,351,共8页

目的研究微小RNA(microRNA,miRNA)miR-25-3p对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控及机制。方法血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注小鼠构建心肌纤维化模型。用miRNA表达谱芯片检测纤维化的小鼠心肌中表达水平有差异的miRNA。原代分离法获得C57BL/6小... 目的研究微小RNA(microRNA,miRNA)miR-25-3p对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控及机制。方法血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)灌注小鼠构建心肌纤维化模型。用miRNA表达谱芯片检测纤维化的小鼠心肌中表达水平有差异的miRNA。原代分离法获得C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞(mCF),建立AngⅡ处理mCF的心肌纤维化细胞模型。mCF转染miR-25-3p mimic后检测纤维化相关基因的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-25-3p与B细胞易位基因2(BTG2)的3′端非翻译区(3′UTR)的结合作用。放线菌素D实验验证BTG2对超氧化物歧化酶2(SOD2)稳定性的作用。结果miR-25-3p在AngⅡ灌注诱导的小鼠心肌和AngⅡ处理的mCF中表达升高。转染miR-25-3p mimic可使mCF中的Ⅰ型胶原α1(COL1A1)、Ⅲ型胶原α1(COL3A1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)基因表达显著增加。双荧光素酶报告基因实验和功能实验证实BTG2是miR-25-3p的下游靶基因,并参与介导miR-25-3p促进mCF中纤维化相关基因表达的作用。机制研究证实BTG2可通过增加SOD2 m RNA的稳定性而上调其表达。结论miR-25-3p通过抑制BTG2的表达来下调SOD2的水平进而增强纤维化相关基因的表达,发挥促进心肌纤维化的作用。 展开更多

关键词 心肌纤维化 心脏成纤维细胞 miR-25-3p BTG2 SOD2

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