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PCV2、P1和TTV混合感染的流行病学调查 被引量：3
1
作者 王小敏 何孔旺 +6 位作者 王东田 周忠涛 茅爱华 俞正玉 汪伟 倪艳秀 温立斌 《福建农业学报》 CAS 2013年第9期864-868,共5页
【目的】研究2012年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)、类猪圆环病毒P1和猪输血传播病毒(TTV)混合感染的情况。【方法】采用PCR方法对采集自我国江苏、安徽和浙江3省的108份组织和血清样品进行PCV2、P1和TTV检测。【结果】PCV2感染率为6... 【目的】研究2012年我国部分地区猪圆环病毒2型(PCV2)、类猪圆环病毒P1和猪输血传播病毒(TTV)混合感染的情况。【方法】采用PCR方法对采集自我国江苏、安徽和浙江3省的108份组织和血清样品进行PCV2、P1和TTV检测。【结果】PCV2感染率为64.81%,P1感染率为12.96%,TTV1感染率为33.33%,TTV2感染率为51.85%,其中8份样品表现为PCV2和P1的混合感染,42份样品表现为PCV2和TTV的混合感染,4份样品表现为PCV2、P1和TTV的混合感染,分别占样品总数的7.41%、38.89%和3.7%。【结论】猪群中PCV2和TTV的感染比较普遍,P1的感染率较低,PCV2和TTV的混合感染率较高,混合感染种类复杂,加重了疫病防控的难度。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 类猪圆环病毒因子P1 猪输血传播病毒
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猪圆环病毒2型2010 AHCY 株的分离鉴定及遗传变异分析 被引量：1
2
作者 王小敏 何孔旺 +9 位作者 王东田 周忠涛 茅爱华 俞正玉 汪伟 倪艳秀 温立斌 张雪寒 郭容利 李彬 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期77-81,共5页
旨为分离得到1株猪圆环病毒2型毒株,对其生物学特性进行鉴定,测定其TCID50,并进行全基因组比对分析。利用细胞传代的方法对PCR检测为PCV1阴性、PCV2阳性的病料进行病毒分离,分离毒株接种PK15细胞,通过PCR检测和间接免疫荧光进行鉴定。... 旨为分离得到1株猪圆环病毒2型毒株,对其生物学特性进行鉴定,测定其TCID50,并进行全基因组比对分析。利用细胞传代的方法对PCR检测为PCV1阴性、PCV2阳性的病料进行病毒分离,分离毒株接种PK15细胞,通过PCR检测和间接免疫荧光进行鉴定。并对分离株的TCID50和全基因组序列进行了测定与分析。成功分离得到猪圆环病毒2型,命名为2010AHCY株,其基因组全长为1 767 bp,在PK15细胞上的TCID50为104.23。全基因组序列分析表明,该分离株与其他参考毒株核苷酸同源性为93.2%～99.9%,与HM038030 PCV2d的同源性最高,为99.9%。系统进化树分析表明,分离株2010AHCY属于PCV2d基因型,与PCV2b基因型亲缘关系较近。为分析华东地区PCV2分子流行病学、遗传变异和PMWS的防治奠定了基础。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 分离 鉴定 遗传变异
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猪输血传播病毒2型ORF1基因的原核表达及条件优化 被引量：1
3
作者 王小敏 何孔旺 +7 位作者 张文文 王东田 周忠涛 张雪寒 周俊明 汪伟 倪艳秀 温立斌 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期38-43,共6页
为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到... 为了克隆猪输血传播病毒2型(TTV2)ORF1基因,构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达猪TTV2 ORF1蛋白,并对其表达条件进行优化。利用普通PCR从猪TTV2阳性样本中扩增出TTV2 ORF1基因,利用分子克隆的方法将猪TTV2 ORF1基因克隆到原核表达载体pcoldI上,构建表达载体pcold-ORF1,在大肠杆菌中诱导表达带有6个组氨酸标签的ORF1融合蛋白。并对影响重组蛋白表达的3个因素,即诱导时间、诱导温度和IPTG浓度进行优化,确定了pcold-ORF1重组蛋白表达的最佳表达条件。SDS-PAGE分析结果表明,重组蛋白在BL21中高效表达,以包涵体形式表达为主,分子质量约为39 kDa。蛋白表达量随诱导时间增加而有所增加,在15℃时表达量最高,而IPTG浓度对蛋白的表达量没有显著影响。Western Blotting结果表明,重组蛋白与猪TTV2阳性血清特异性反应,具有很好的免疫原性。成功获得TTV2-ORF1基因,构建了原核表达载体并获得高效表达,为TTV的ELISA检测方法的建立提供抗原。且重组蛋白在15℃条件下,加入0.2 mmol/L浓度的IPTG,诱导24 h,表达条件最佳。 展开更多
关键词 猪输血传播病毒2型 基因克隆 原核表达
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