目的探讨铁皮石斛多糖对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导星形胶质细胞腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/UNC-51类似自噬激活激酶1(UNC-51 like autophagy activating kinase1,ULK1...目的探讨铁皮石斛多糖对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导星形胶质细胞腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/UNC-51类似自噬激活激酶1(UNC-51 like autophagy activating kinase1,ULK1)通路相关自噬的影响。方法体外培养人星形胶质细胞,分为对照组、H/R组(H/R建模)、低浓度铁皮石斛多糖组(H/R建模+100μg·mL-1铁皮石斛多糖)、中浓度铁皮石斛多糖组(H/R建模+200μg·mL^(-1)铁皮石斛多糖)和高浓度铁皮石斛多糖组(H/R建模+400μg·mL^(-1)铁皮石斛多糖)。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;试剂盒测定细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)水平;Westernblotting检测细胞中p-AMPK、AMPK、p-ULK1、ULK1、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(light chain 3,LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达情况。结果与对照组相比,H/R组星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著升高(P<0.05);随着铁皮石斛多糖的处理及处理浓度的升高,星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论铁皮石斛多糖对H/R诱导的星形胶质细胞AMPK/ULK1通路激活及自噬具有抑制作用,可促进细胞存活并减少细胞凋亡。展开更多
目的建立一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)同时测定益肾养元颗粒中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、虎杖苷、大黄素、大黄素甲醚、薯蓣皂苷元、齐墩果酸、乌索酸、蔷薇酸和...目的建立一测多评法(quantitative analysis of multi-components by single-marker,QAMS)同时测定益肾养元颗粒中2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、虎杖苷、大黄素、大黄素甲醚、薯蓣皂苷元、齐墩果酸、乌索酸、蔷薇酸和坡模酸的含量。方法采用SpursilC18色谱柱(4.6mm×250 mm,5μm)进行HPLC测定,柱温为30℃;甲醇-0.1%甲酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1;检测波长分别为280 nm(检测2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、虎杖苷、大黄素和大黄素甲醚)和210 nm(检测薯蓣皂苷元、齐墩果酸、乌索酸、蔷薇酸和坡模酸)。以薯蓣皂苷元为内参物,建立其与其他组分的相对校正因子,计算各成分含量,同时将外标法实测值与QAMS计算值进行比较,验证QAMS的准确性和可靠性。结果 2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、虎杖苷、大黄素、大黄素甲醚、薯蓣皂苷元、齐墩果酸、乌索酸、蔷薇酸和坡模酸的线性范围分别为23.89~477.80,8.67~173.40,4.26~85.20,2.99~59.80,9.86~197.20,0.69~13.80,2.17~43.40,1.28~25.60,1.66~33.20μg·mL-1,r为0.9994~0.9999;平均回收率分别为99.45%,98.49%,97.94%,98.91%,100.03%,96.90%,99.02%,97.86%和98.35%,RSD分别为1.01%,0.87%,1.37%,1.19%,0.70%,0.98%,1.03%,0.82%和1.53%(n=9);经独立样本T-检验,2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷、虎杖苷、大黄素、大黄素甲醚、薯蓣皂苷元、齐墩果酸、乌索酸、蔷薇酸和坡模酸含量的计算值和实测值之间无明显差异。结论所建立的QAMS操作便捷、结果准确,可同时测定益肾养元颗粒中9种成分含量。展开更多
文摘目的探讨铁皮石斛多糖对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)诱导星形胶质细胞腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/UNC-51类似自噬激活激酶1(UNC-51 like autophagy activating kinase1,ULK1)通路相关自噬的影响。方法体外培养人星形胶质细胞,分为对照组、H/R组(H/R建模)、低浓度铁皮石斛多糖组(H/R建模+100μg·mL-1铁皮石斛多糖)、中浓度铁皮石斛多糖组(H/R建模+200μg·mL^(-1)铁皮石斛多糖)和高浓度铁皮石斛多糖组(H/R建模+400μg·mL^(-1)铁皮石斛多糖)。MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;试剂盒测定细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)水平;Westernblotting检测细胞中p-AMPK、AMPK、p-ULK1、ULK1、Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(light chain 3,LC3)Ⅰ、LC3Ⅱ蛋白表达情况。结果与对照组相比,H/R组星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白表达水平显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著升高(P<0.05);随着铁皮石斛多糖的处理及处理浓度的升高,星形胶质细胞存活率、细胞中SOD水平及LC3Ⅰ/LC3Ⅱ蛋白表达水平显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、细胞中MDA水平及p-AMPK/AMPK、p-ULK1/ULK1、Beclin1蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论铁皮石斛多糖对H/R诱导的星形胶质细胞AMPK/ULK1通路激活及自噬具有抑制作用,可促进细胞存活并减少细胞凋亡。
