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应用PCR-RFLP技术检测阿德福韦耐药相关性HBV变异 被引量：1
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作者 毛日成 张继明 +4 位作者 尹有宽 秦艳丽 章婉琴 邬祥惠 翁心华 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2007年第5期362-367,共6页
目的建立一种简便、快速、实用的检测阿德福韦(ADV)耐药相关性HBV变异(rtA181V/T/S和rtN236T变异)的方法。方法根据GenBank收录的HBV基因全序设计套式-PCR引物,使野毒株的PCR产物上游末端引入BglI的酶切位点,使rt236变异株的PCR产物下... 目的建立一种简便、快速、实用的检测阿德福韦(ADV)耐药相关性HBV变异(rtA181V/T/S和rtN236T变异)的方法。方法根据GenBank收录的HBV基因全序设计套式-PCR引物,使野毒株的PCR产物上游末端引入BglI的酶切位点,使rt236变异株的PCR产物下游末端引入BseDI(SecI)的酶切位点,建立PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法。用此方法分别检测含rt181变异株、rt236变异株及野毒株质粒和3例ADV耐药慢性乙型肝炎患者血清标本。将变异株和野毒株配成不同比例,再用此方法检测,以了解该方法的敏感性。结果本研究建立的PCR—RFLP方法可同时检测rt181变异和rt236变异;用此方法检测血清标本,结果与测序及克隆分析一致;此方法可检测出标本中10%的变异株。结论应用PCR- RFLP方法可同时检测rtA181V/T/S和rtN236T变异,具有较高的敏感性,可用于ADV耐药变异的早期诊断。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 阿德福韦耐药 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性
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应用液相芯片技术检测拉米夫定耐药相关性HBV变异 被引量：1
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作者 刘红艳 毛日成 +8 位作者 李义良 夏佳慧 范丽丽 尹永喜 李新艳 赵旭 郭红英 朱浩翔 张继明 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期978-983,共6页
目的建立一种检测拉米夫定（LAM）耐药相关性HBV变异的检测系统。方法从血清样本中提取病毒DNA，经纯化后，与生物素标记的引物经过PCR扩增后，来自HBV开放阅读框架的、被生物素标记的DNA扩增产物与偶联在微球上的特异性寡核苷酸探针杂... 目的建立一种检测拉米夫定（LAM）耐药相关性HBV变异的检测系统。方法从血清样本中提取病毒DNA，经纯化后，与生物素标记的引物经过PCR扩增后，来自HBV开放阅读框架的、被生物素标记的DNA扩增产物与偶联在微球上的特异性寡核苷酸探针杂交，未能结合微球的DNA被洗脱，加入标记有链亲素修饰的藻红蛋白（SAPE），在Luminex分析仪上，用双色激光分别激发微球的红色荧光（定性）和SAPE的绿色荧光（定量），从而判断靶基因的突变类型和相对含量。采用液相芯片（muhi-analyte suspension array，MASA）技术构建有LAM相关耐药的HBV全基因质粒和25例LAM耐药的慢性乙型肝炎患者（CHB）的HBV逆转录区（RT）第180和204位氨基酸的变异情况；并与普通测序法相比较，以了解该方法的特异性；同时将变异株和野毒株按不同比例混合后检测，以了解该方法的敏感性。结果MASA可同时检测a180和n204氨基酸变异，并能准确判断变异的类型及混合变异；MASA对25例LAM耐药的CHB患者相关耐药，检测发现有15份患者标本中20411探针杂交信号明显升高（测序变异阴性和阳性荧光值中位数分别为5和106），有11份样本与204V探针杂交信号较高（测序变异阴性和阳性荧光值中位数分别为9和114）差异有统计学意义（z=-4．588，P〈0．05；z=-4．520，P〈0．05）；有2份发现2种探针杂交信号均很高，即有YIDD和YVDD混合变异株存在；仅有1份标本与20412探针杂交信号明显较高。同样用该方法检测20份未治疗患者的血清标本，均未发现LAM相关性变异。当病毒群中含有大于5％的LAM耐药相关HBV变异株时，即可被本方法检测到。结论MASA可用于LAM相关耐药变异株的早期检测。该方法较普通测序法灵敏，且操作简便、高通量、需要时间短，便于临床大样本检测的应用。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 拉米夫定 抗药性 病毒 芯片分析技术
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