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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E原核表达载体的表达及产物纯化 被引量:2
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作者 李福民 冉玉平 +4 位作者 吴琦 李明 段德鉴 赵秀红 周光平 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期151-153,共3页
目的:构建水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE)原核表达系统的纯化方法,并鉴定目的蛋白。方法:将VZVgE基因片段克隆到原核表达载体pGEX-1λT,构建重组原核融合蛋白表达载体pGEX-VZVgE;用IPTG(异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷)诱导融合蛋白在... 目的:构建水痘-带状疱疹病毒(VZV)糖蛋白E(gE)原核表达系统的纯化方法,并鉴定目的蛋白。方法:将VZVgE基因片段克隆到原核表达载体pGEX-1λT,构建重组原核融合蛋白表达载体pGEX-VZVgE;用IPTG(异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷)诱导融合蛋白在大肠杆菌中表达;利用蛋白回收试剂盒对表达产物进行纯化。并用免疫印迹法检测纯化产物的抗原性。结果:经双酶切及测序鉴定所得到的重组质粒即为含有目的片段的重组载体pGEX-VZVgE;在IPTG诱导下pGEX-VZVgE表达分子质量为98ku的融合蛋白;纯化后的融合蛋白经凝血酶酶切后,得到分子质量约为72ku的VZVgE,并用免疫印迹证明其具有良好的抗原性。结论:构建的VZVgE重组原核表达载体能表达重组蛋白,并建立了一套纯化VZVgE的方法;从而为VZVgE的应用研究打下基础。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白E 原核表达载体 融合蛋白 免疫印迹
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小鼠小肠抗生素肽的初步分离 被引量:1
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作者 闫兆平 陈晓理 +2 位作者 张正 黄宁 王伯瑶 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第19期2890-2894,共5页
目的初步分离小鼠小肠抗生素肽。方法将12只健康ICR小鼠剖腹切取从屈氏韧带到回盲部的小肠,以10%乙酸溶液冲洗肠腔收集灌洗液,并以30%乙酸溶液制备小肠组织匀浆,反复离心,聚乙二醇浓缩后透析,冰冻干燥,进行AU-PAGE、Tricine-SDS-PAGE、... 目的初步分离小鼠小肠抗生素肽。方法将12只健康ICR小鼠剖腹切取从屈氏韧带到回盲部的小肠,以10%乙酸溶液冲洗肠腔收集灌洗液,并以30%乙酸溶液制备小肠组织匀浆,反复离心,聚乙二醇浓缩后透析,冰冻干燥,进行AU-PAGE、Tricine-SDS-PAGE、考马斯亮蓝R-250染色或银染显示多肽条带,然后进行凝胶成像分析和杀菌试验。结果小鼠小肠组织匀浆和灌洗液中均含有可杀灭细菌、真菌的抗生素多肽,其中组织匀浆中所含的此类多肽较多;小鼠小肠抗生素肽的杀菌作用具有剂量依赖关系,且对不同细菌、真菌的杀灭作用也不同;小鼠小肠抗生素肽的分子量主要集中于3.0kD~14.3kD和29.0kD。结论小鼠小肠含有多种抗生素肽,具有广谱的杀灭微生物的作用。 展开更多
关键词 抗生素肽 肠道屏障 分离 小鼠
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人子宫内膜粘液抗菌多肽的分离纯化 被引量:3
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作者 王莉莉 潘小玲 +3 位作者 黄宁 冯云 吴琦 王伯瑶 《四川生理科学杂志》 2004年第1期5-6,共2页
目的 :分离纯化人子宫内膜粘液抗菌多肽。方法 :采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖弥散法检测子宫内膜粘液酸溶性提取物抗菌活性 ;琼脂糖电泳洗脱相应抗菌条带 ,HPLC进一步分离纯化 ,琼脂糖弥散法检测纯化分子抗菌活性 ,Tricine SDS... 目的 :分离纯化人子宫内膜粘液抗菌多肽。方法 :采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳琼脂糖弥散法检测子宫内膜粘液酸溶性提取物抗菌活性 ;琼脂糖电泳洗脱相应抗菌条带 ,HPLC进一步分离纯化 ,琼脂糖弥散法检测纯化分子抗菌活性 ,Tricine SDS PAGE电泳检测其分子量。结果 :从人子宫内膜酸溶性提取物中纯化出一分子量约为 6KD左右的抗菌多肽 ,对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株 (E .coli.ML 3 5P)有抗菌活性。结论 :HUP可能是一种新的子宫内膜分泌的抗菌多肽 ,参与了子宫的天然防御机制。 展开更多
关键词 人子宫内膜 抗菌多肽 分离纯化 粘液 聚丙烯酰胺凝胶电泳 琼脂糖弥散法 抗菌活性 E.coli 琼脂糖电泳 氨苄青霉素 HPLC 电泳检测 大肠杆菌 防御机制 提取物 酸溶性 分子量 耐药株
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水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E真核表达载体的构建及表达
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作者 李福民 冉玉平 +2 位作者 段德鉴 赵秀红 吴琦 《中国皮肤性病学杂志》 CAS 北大核心 2004年第6期328-330,共3页
目的 构建水痘 带状疱疹病毒 (VZV )糖蛋白E的真核表达载体并使其在COS7细胞中表达。方法 用PCR方法扩增VZV糖蛋白E基因 ,并将其克隆到真核表达载体 pcDNA 3 .1。用脂质体转染试剂将重组载体转入COS7细胞 ,通过免疫组化法检测转染细... 目的 构建水痘 带状疱疹病毒 (VZV )糖蛋白E的真核表达载体并使其在COS7细胞中表达。方法 用PCR方法扩增VZV糖蛋白E基因 ,并将其克隆到真核表达载体 pcDNA 3 .1。用脂质体转染试剂将重组载体转入COS7细胞 ,通过免疫组化法检测转染细胞瞬时表达的重组蛋白。结果 扩增的目的基因包括了全段糖蛋白E基因 ,长度约1.9kb。重组表达载体在COS7细胞中表达出了糖蛋白E。结论 VZV糖蛋白E真核表达载体的成功构建及在COS7细胞中重组蛋白的表达 ,为研究此蛋白的免疫原性和VZV核酸疫苗打下了基础。 展开更多
关键词 水痘-带状疱疹病毒 糖蛋白E 真核表达载体 基因表达
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卡介苗胞壁蛋白诱导人单核吞噬细胞IL-12和iNOS mRNA表达
5
作者 孔祥丽 唐琼 +2 位作者 冯云 吴琦 王伯瑶 《西部医学》 2004年第1期23-25,共3页
目的 研究卡介苗 (BCG)胞壁蛋白的活性组分能否诱导人单核吞噬细胞 IL - 12 P4 0和 i NOS基因表达。方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测 THP- 1细胞 IL - 12 P4 0和 i NOS m RNA在 BCG胞壁蛋白组分刺激下的表达变化... 目的 研究卡介苗 (BCG)胞壁蛋白的活性组分能否诱导人单核吞噬细胞 IL - 12 P4 0和 i NOS基因表达。方法 应用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT- PCR)法检测 THP- 1细胞 IL - 12 P4 0和 i NOS m RNA在 BCG胞壁蛋白组分刺激下的表达变化。结果 卡介苗胞壁蛋白 Sephadex G- 15 0层析分子量约 2 1~ 2 9k D的组份可诱导 THP- 1细胞 IL -12 P4 0和 i NOSm RNA的表达增强。结论  BCG胞壁蛋白可刺激人单核吞噬细胞 IL - 12 P4 0和 i NOS基因的增强表达。 展开更多
关键词 人单核吞噬细胞 IL-12 INOS 基因表达 卡介苗 胞壁蛋白
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