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BDNF对H_2O_2诱导人成纤维细胞凋亡的实验研究 被引量:1
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作者 陈建业 王晓明 +5 位作者 唐中 陈瑾歆 刘戟 王若菡 刘智敏 陈俊杰 《川北医学院学报》 CAS 2004年第2期2-5,共4页
目的研究脑源性神经营养因子 (BDNF)对H2 0 2 诱导人成纤维细胞 (hFB)凋亡的作用。方法 将含人Ⅰ型胶原a1链(COLIAl)基因启动子和增强子元件并在其 3′端接BDNFcDNA的微基因pSVCEPBFCAT ,经脂质体介导转染hFB并驱动BDNF异位表达 ,采用... 目的研究脑源性神经营养因子 (BDNF)对H2 0 2 诱导人成纤维细胞 (hFB)凋亡的作用。方法 将含人Ⅰ型胶原a1链(COLIAl)基因启动子和增强子元件并在其 3′端接BDNFcDNA的微基因pSVCEPBFCAT ,经脂质体介导转染hFB并驱动BDNF异位表达 ,采用四唑盐 (MTT)显色法检测细胞增殖 ,吖啶橙荧光染色显微镜观察细胞形态的改变 ,琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂。结果 经 2 0 0 μmol/LH2 O2 作用 2 4h后 ,pSVCEPBFCAT转染组和对照组包括未转染hFB、空载体pSVCEPCAT转染hFB的细胞生长抑制率分别为 35 %和≥ 84 % ,p <0 .0 0 1;对照组hFB普遍可见凋亡细胞特有的形态学及生物化学改变 ,如胞浆和核固缩、染色质断裂、DNA电泳呈阶梯状条带 ,而pSVCEPBFCAT转染hFB未发现上述凋亡特征。结论 BDNF促进hFB增殖和拮抗H2 O2 诱导凋亡 ,明显抑制H2 O2 对hFB的细胞毒性。 展开更多
关键词 BDNF H2O2 诱导 成纤维细胞 细胞凋亡 实验研究
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人脑髓鞘碱性蛋白对H_2O_2诱导人肺癌细胞YTLMC-90凋亡的抑制作用 被引量:9
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作者 陈建业 王晓明 +5 位作者 刘戟 陈璟歆 王若菡 彭文珍 程汉华 陈俊杰 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第2期170-174,共5页
背景与目的:人脑髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)广泛分布于神经系统及多种非神经组织之中,而且在肺癌、乳腺癌、神经胶质瘤等多种肿瘤细胞中均检查到MBP的表达。但MBP与癌细胞侵犯神经组织的活性是否相关、与肺癌细胞的生物学行... 背景与目的:人脑髓鞘碱性蛋白(myelinbasicprotein,MBP)广泛分布于神经系统及多种非神经组织之中,而且在肺癌、乳腺癌、神经胶质瘤等多种肿瘤细胞中均检查到MBP的表达。但MBP与癌细胞侵犯神经组织的活性是否相关、与肺癌细胞的生物学行为是否相关尚未见报道。本研究主要探讨MBP对过氧化氢(H2O2)诱导人肺癌细胞YTLMC-90凋亡的影响。方法:实验分为MBPcDNA微基因pSVCEPMBPCAT转染组(试验组)、空质粒pSVCEPCAT转染组和未转染组(对照组)。将含人Ⅰ型胶原a1链(COLⅠA1)基因启动子和增强子元件、并在其3′端接MBPcDNA的微基因,转染YTLMC-90细胞,并驱动MBP异位表达;采用MTT法检测细胞增殖,吖啶橙荧光染色显微镜和电镜观察细胞形态及其超微结构的改变;琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂。结果:200μmol/LH2O2作用24h后,转染组、未转染组和空载体pSVCEPCAT转染组YTLMC-90细胞的生长抑制率分别为36.67%、84.00%和78.67%(P<0.001);对照组YTLMC-90细胞普遍可见凋亡细胞特有的形态学及生物化学改变,如胞核固缩、染色质断裂,DNA电泳呈梯状条带;而MBPcDNA微基因转染的YTLMC-90细胞未发现上述凋亡特征。结论:MBP促进YTLMC-90细胞增殖和拮抗H2O2诱导的凋亡,明显减少H2O2对YTLMC-90的细胞毒作用。 展开更多
关键词 髓鞘碱性蛋白 微基因 过氧化氢 肺肿瘤 YTLMC-90细胞系 凋亡
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血清甘油三酯、总胆固醇含量与HDL亚类分布的关系 被引量:5
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作者 颜丙玉 傅明德 +3 位作者 杨雨叶 徐燕华 刘宇 杨鲁川 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期327-329,共3页
目的 探讨血甘油三酯 (TG) ,总胆固醇 (TC)水平对 HDL亚类组成及含量的影响。方法 采用双向电泳 -免疫印迹检测法按血 TG、TC水平分层分析了 2 89例受试者血清 HDL 亚类组成及含量。结果 受试者按血TG水平分层时 ,随着 TG逐渐升高 ,... 目的 探讨血甘油三酯 (TG) ,总胆固醇 (TC)水平对 HDL亚类组成及含量的影响。方法 采用双向电泳 -免疫印迹检测法按血 TG、TC水平分层分析了 2 89例受试者血清 HDL 亚类组成及含量。结果 受试者按血TG水平分层时 ,随着 TG逐渐升高 ,小颗粒的 preβ1 - HDL、 preβ2 - HDL、 HDL3b及 HDL3a含量均有升高趋势 ,而大颗粒的 HDL2 a、HDL2 b含量有降低趋势 ,与 TG正常组比较 ,TG高组及 TG极高组 preβ1 - HDL、HDL3b含量均显著升高(P<0 .0 1或 P<0 .0 5 )。而 HDL2 b含量显著降低 (P<0 .0 1)。此外 ,TG极高组 HDL3a含量亦显著升高 (P<0 .0 5 )。受试者按血 TC水平分层时 ,随着 TC逐渐升高 ,preβ1 - HDL ,preβ2 - HDL、 HDL3c及 HDL3b含量亦有升高趋势 ,HDL2 b含量有所降低。其中 ,与 TC合适水平组比较 ,TC高组 preβ1 - HDL、HDL3c及 HDL3b含量均显著升高 (P<0 .0 5 )。结论 随着血 TG或 TC水平升高 ,HDL颗粒呈变小趋势 ,且血 TG水平变化可能是较 TC变化更为重要的影响HDL 亚类组成的因素。 展开更多
关键词 甘油三酯 胆固醇 HDL亚类 动脉粥样硬化
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BDNF对H_2O_2诱导人肺癌细胞YTMLC-90凋亡的抑制效应 被引量:3
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作者 陈建业 刘戟1 +5 位作者 王若菡 彭文珍 刘智敏 王晓明 陈海燕 陈俊杰 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第9期938-942,共5页
背景与目的:已证实在神经系统内外多种细胞中均可合成神经营养因子,如神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)、脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)和神经营养素3/4(NT-3/4)。这些神经营养因子不仅能促进神经细胞... 背景与目的:已证实在神经系统内外多种细胞中均可合成神经营养因子,如神经生长因子(nervegrowthfactor,NGF)、脑源性神经营养因子(brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)和神经营养素3/4(NT-3/4)。这些神经营养因子不仅能促进神经细胞的存活、增殖和凋亡,也与癌细胞侵犯神经组织的活性有关;但BDNF与肺癌细胞的生物学行为是否相关尚未见报道。本文旨在研究BDNF对过氧化氢(H2O2)诱导人肺癌细胞YTMLC-90凋亡的作用。方法:用含人I型胶原a1链(COLIA1)基因启动子和增强子元件及在其3'端接BDNFcDNA的微基因pSVCEPBFCAT,转染人肺癌细胞YTMLC-90并驱动BDNF异位表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)显色法检测细胞增殖,吖啶橙荧光染色显微镜和电镜观察细胞形态及其超微结构的改变,琼脂糖凝胶电泳检测染色质DNA断裂。结果:经200μmol/LH2O2作用24h,转染pSVCEPBFCAT的YTMLC-90细胞生长抑制率为30.0%,而未转染YTMLC-90和转染空载体pSVCEPCAT的YTMLC-90细胞生长抑制率分别为84.60%和80.00%,实验组与两个对照组之间的差异均有显著性(P<0.01);对照组YTMLC-90细胞可见凋亡特有的形态学及生物化学改变,如胞浆和核固缩、染色质断裂、DNA电泳呈梯状条带,而转染pSVCEPBFCAT的YTMLC-90细胞未发现上述凋亡特征。结论:BDNF促进YTMLC-90? 展开更多
关键词 BDNF H2O2 诱导 人肺癌细胞 YTMLC-90 抑制效应 细胞凋亡
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毛细管电泳技术快速检测p53基因点突变 被引量:2
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作者 刘戟 敬慧娥 +3 位作者 茹钦华 邓应平 罗国安 黄倩 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期476-479,共4页
目的 探讨利用毛细管电泳技术快速检测 p5 3基因点突变的临床应用价值。方法 采用毛细管电泳作 SSCP分析 ,检测 2 0例结肠癌肿瘤标本 p5 3基因第 7外显子 PCR扩增产物 ,并与传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果进行比较 ,最后用 DNA序列测... 目的 探讨利用毛细管电泳技术快速检测 p5 3基因点突变的临床应用价值。方法 采用毛细管电泳作 SSCP分析 ,检测 2 0例结肠癌肿瘤标本 p5 3基因第 7外显子 PCR扩增产物 ,并与传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳结果进行比较 ,最后用 DNA序列测定判断其准确性。结果  2 0例结肠癌标本中 ,毛细管电泳技术检测出 5例标本( Ca4,Ca6,Ca7,Ca8,Ca14)有突变 ,而凝胶电泳结合银染技术仅检出 4例标本 ( Ca4,Ca6,Ca7,Ca14)有突变 ,测序证实经毛细管电泳所检出的 5例标本均存在点突变。结论 对于 PCR产物的单链构象多态性分析 ,毛细管电泳技术是一种更加快速、简便、敏感的方法 。 展开更多
关键词 毛细管电泳技术 快速检测 P53 基因点突变 单链构象多态性
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脑源性神经营养因子对H_2O_2诱导人动脉平滑肌细胞凋亡的作用 被引量:1
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作者 陈建业 刘戟 +3 位作者 王若菡 刘智敏 李忌 陈俊杰 《四川大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期251-253,259,共4页
目的 研究脑源性神经营养因子 (BDNF)对过氧化氢 (H2 O2 )诱导人动脉平滑肌细胞 (SMC)凋亡的作用。方法  BDNF基因经脂质体介导转染 SMC, 型胶原基因调节元件 (COL IA1)驱动该基因在 SMC中异位表达 ,用 MTT法检测细胞增殖 ,吖啶橙 (AO... 目的 研究脑源性神经营养因子 (BDNF)对过氧化氢 (H2 O2 )诱导人动脉平滑肌细胞 (SMC)凋亡的作用。方法  BDNF基因经脂质体介导转染 SMC, 型胶原基因调节元件 (COL IA1)驱动该基因在 SMC中异位表达 ,用 MTT法检测细胞增殖 ,吖啶橙 (AO)荧光染色观察细胞形态学变化 ,流式细胞仪检测细胞凋亡率 ,琼脂糖电泳检测 DNA图谱。结果  10 0~ 80 0 μm ol/ L 浓度的 H2 O2 明显抑制 SMC增殖 ,2 0 0 μm ol/ L H2 O2 作用 2 4 h后 ,可见典型的细胞凋亡形态学及生物化学改变即胞浆固缩、核染色质断裂、DNA电泳呈梯形条带 ;经 BDNF基因修饰的 SMC则未显示上述改变。结论  H2 O2 能有效诱导 SMC凋亡 ,转 BDNF基因的 SMC对 H2 O2 展开更多
关键词 脑源性神经营养因子 过氧化氢 动脉平滑肌细胞 细胞凋亡
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人神经生长因子基因在大肠杆菌中的表达
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作者 何晓嫱 陈俊杰 +4 位作者 王若菡 游乐然 刘戟 陈建业 林佳 《华西医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期94-97,共4页
目的 为进一步研究神经生长因子 (β- NGF)及其基因的结构及功能奠定基础。方法 自行设计合成一对特异引物 ,直接从人血细胞基因组 DNA中 PCR扩增出 NGF基因片段 ,克隆至 p GEM- T Easy载体 ,p GEM- T- NGF克隆片段再定向插入原核表... 目的 为进一步研究神经生长因子 (β- NGF)及其基因的结构及功能奠定基础。方法 自行设计合成一对特异引物 ,直接从人血细胞基因组 DNA中 PCR扩增出 NGF基因片段 ,克隆至 p GEM- T Easy载体 ,p GEM- T- NGF克隆片段再定向插入原核表达载体 p GEX- 5 T,构建的重组体 p5 TNF转化大肠杆菌 JM10 9并经IPTG诱导表达。结果 经限制性酶谱和 DNA测序确证 ,p GEM- T- NGF克隆片段为 β- NGF全长编码序列(380 bp) ;SDS- PAGE、分光光度计扫描和 Western印迹显示 ,p5 TNF转化菌有 40 .5× 10 3u特异区带 ,融合蛋白表达量为 5 0 3.2 mg/ L,占菌体可溶性蛋白总量 (7.4g/ L) 6 .8% ,该产物具 NGF抗原活性。结论 本研究成功克隆 β-NGF基因全长编码序列并在大肠杆菌中获稳定表达 ,同时证实国人 β- 展开更多
关键词 人基因组DNA 神经生长因子 大肠杆菌 基因表达 基因治疗
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