目的观察靶向抑制livin基因后结肠癌细胞HCT116对伊立替康敏感性的变化。方法采用脂质体包裹方法将载体介导的靶向livin基因的短发夹干扰RNA(a short hairpin RNA,shRNA)转入结肠癌细胞HCT116,48h后蛋白印迹方法检测RNA干扰的生物学效应...目的观察靶向抑制livin基因后结肠癌细胞HCT116对伊立替康敏感性的变化。方法采用脂质体包裹方法将载体介导的靶向livin基因的短发夹干扰RNA(a short hairpin RNA,shRNA)转入结肠癌细胞HCT116,48h后蛋白印迹方法检测RNA干扰的生物学效应,应用伊立替康0.01、0.1、1、10μg/mL梯度浓度作用于结肠癌细胞,24 h后MTT方法检测抑制livin基因表达后结肠癌细胞对伊立替康的敏感性变化,分光光度法检测结肠癌细胞内凋亡相关因子caspase-3活性的改变。结果靶向livin的shRNA有效地抑制了结肠癌细胞HCT116内livin基因的表达,抑制livin基因表达后结肠癌细胞对伊立替康的敏感性得到明显提高,细胞内的caspase-3活性显著增强。结论靶向抑制livin基因表达后能够激活细胞凋亡信号通路,增强伊立替康的抗结肠癌作用。展开更多
目的探讨8型腺相关病毒的制备方法,初步检测其在体内的表达。方法采用载体质粒、辅助质粒和包装质粒三质粒磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装病毒,经超声破碎-饱和硫酸铵沉淀-氯化铯梯度离心提取并纯化病毒。肌肉注射感染肌肉组织,...目的探讨8型腺相关病毒的制备方法,初步检测其在体内的表达。方法采用载体质粒、辅助质粒和包装质粒三质粒磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装病毒,经超声破碎-饱和硫酸铵沉淀-氯化铯梯度离心提取并纯化病毒。肌肉注射感染肌肉组织,检测报告基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent prote in,EGFP)在体内的表达活性。结果成功包装制备出8型腺相关病毒,重组病毒能够有效感染肌肉组织,绿色荧光蛋白在肌肉组织中稳定高效表达。结论此实验方法制备病毒的质量能够满足小动物体内实验的要求,为进一步应用其进行基因治疗打下基础。展开更多
文摘目的观察靶向抑制livin基因后结肠癌细胞HCT116对伊立替康敏感性的变化。方法采用脂质体包裹方法将载体介导的靶向livin基因的短发夹干扰RNA(a short hairpin RNA,shRNA)转入结肠癌细胞HCT116,48h后蛋白印迹方法检测RNA干扰的生物学效应,应用伊立替康0.01、0.1、1、10μg/mL梯度浓度作用于结肠癌细胞,24 h后MTT方法检测抑制livin基因表达后结肠癌细胞对伊立替康的敏感性变化,分光光度法检测结肠癌细胞内凋亡相关因子caspase-3活性的改变。结果靶向livin的shRNA有效地抑制了结肠癌细胞HCT116内livin基因的表达,抑制livin基因表达后结肠癌细胞对伊立替康的敏感性得到明显提高,细胞内的caspase-3活性显著增强。结论靶向抑制livin基因表达后能够激活细胞凋亡信号通路,增强伊立替康的抗结肠癌作用。
文摘目的探讨8型腺相关病毒的制备方法,初步检测其在体内的表达。方法采用载体质粒、辅助质粒和包装质粒三质粒磷酸钙共沉淀方法转染HEK293细胞,包装病毒,经超声破碎-饱和硫酸铵沉淀-氯化铯梯度离心提取并纯化病毒。肌肉注射感染肌肉组织,检测报告基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluoresent prote in,EGFP)在体内的表达活性。结果成功包装制备出8型腺相关病毒,重组病毒能够有效感染肌肉组织,绿色荧光蛋白在肌肉组织中稳定高效表达。结论此实验方法制备病毒的质量能够满足小动物体内实验的要求,为进一步应用其进行基因治疗打下基础。
