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千金藤素对牛卵母细胞体外成熟中抗氧化能力的影响 被引量：1
1
作者 徐冰洁 王玉琪 +4 位作者 郑湘民 孙朝阳 高青山 方南洙 金庆国 《中国畜牧杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期245-250,共6页
为探究千金藤素(Cepharanthine,Ceph)对牛卵母细胞抗氧化能力的影响及作用机制,本实验在牛卵母细胞体外成熟培养基中添加0、10、100、500、1000μmol/L Ceph进行培养,统计第一极体排出率,筛选出Ceph的最佳浓度,根据浓度将分为对照组和C... 为探究千金藤素(Cepharanthine,Ceph)对牛卵母细胞抗氧化能力的影响及作用机制,本实验在牛卵母细胞体外成熟培养基中添加0、10、100、500、1000μmol/L Ceph进行培养,统计第一极体排出率,筛选出Ceph的最佳浓度,根据浓度将分为对照组和Ceph处理组,通过免疫荧光染色法检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)表达水平以及线粒体膜电位水平(JC-1);使用实时荧光定量PCR检测囊胚内抗氧化相关基因(SIRT-1、SOD-1、SOD-2)mRNA转录水平。结果表明:与对照组相比,添加500、1000μmol/L Ceph可显著提高牛卵母细胞第一极体排出率,而10、100μmol/L Ceph组第一极体排出率显著降低,后续采用500μmol/L Ceph用于实验;与对照组相比,添加500μmol/L Ceph显著降低了ROS水平,GSH及JC-1水平显著升高,SIRT-1、SOD-1、SOD-2 mRNA表达水平也显著升高。由此可知,在体外成熟培养基中添加500μmol/L Ceph可以缓解氧化应激损伤,维持线粒体膜电位,从而提高卵母细胞体外发育质量。 展开更多
关键词 千金藤素 牛 卵母细胞 氧化应激 体外成熟
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千金藤素对牛体外卵母细胞和早期胚胎抗凋亡能力的影响
2
作者 郑湘民 王玉琪 +4 位作者 徐冰洁 孙朝阳 高青山 方南洙 金庆国 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期2943-2952,共10页
【目的】探究千金藤素(Ceph)对牛卵母细胞及早期胚胎抗凋亡能力的影响,为提高牛体外胚胎生产效率提供参考,同时为Ceph抗癌过程中的药理作用提供新的数据。【方法】将牛卵母细胞分别在含不同浓度(0、10、100、500、1000μmol/L)Ceph的体... 【目的】探究千金藤素(Ceph)对牛卵母细胞及早期胚胎抗凋亡能力的影响,为提高牛体外胚胎生产效率提供参考,同时为Ceph抗癌过程中的药理作用提供新的数据。【方法】将牛卵母细胞分别在含不同浓度(0、10、100、500、1000μmol/L)Ceph的体外成熟培养液中培养,观测卵母细胞成熟率及受精后的早期胚胎发育,确定Ceph的最适浓度,并对牛卵母细胞组织蛋白酶B(CB)活性、细胞自噬相关蛋白LC3水平、凋亡相关基因Survivin和Caspase-3 mRNA表达水平及囊胚细胞凋亡率进行检测。【结果】经500μmol/L Ceph处理的牛卵母细胞成熟率及早期胚胎分裂率、囊胚率均显著高于其他组(P<0.05)。添加Ceph显著降低了牛卵母细胞CB活性和LC3水平(P<0.05),显著提高了抗凋亡相关基因Survivin mRNA表达水平(P<0.05),显著降低了促凋亡相关基因Caspase-3 mRNA表达水平及囊胚细胞凋亡率(P<0.05)。【结论】在体外胚胎生产过程中添加Ceph能够通过调控凋亡相关基因Survivin和Caspase-3的表达影响CB和LC3水平,提升牛卵母细胞抗凋亡能力和体外胚胎生产效率。 展开更多
关键词 千金藤素 牛 卵母细胞 早期胚胎 抗凋亡
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Psammaplin A对牛老化卵母细胞体外发育的影响 被引量：3
3
作者 王华清 高青山 +4 位作者 姜文杰 赵予晗 金庆国 李英花 许永男 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期497-503,共7页
为探讨组蛋白去乙酰化抑制剂Psammaplin A(PsA)对牛老化卵母细胞体外发育的影响,本试验将卵母细胞随机分为对照组、老化组和50mmol/L PsA处理的老化组(PsA组)。应用免疫荧光染色和JC-1检测牛卵母细胞孤雌激活后的囊胚率、囊胚中的细胞... 为探讨组蛋白去乙酰化抑制剂Psammaplin A(PsA)对牛老化卵母细胞体外发育的影响,本试验将卵母细胞随机分为对照组、老化组和50mmol/L PsA处理的老化组(PsA组)。应用免疫荧光染色和JC-1检测牛卵母细胞孤雌激活后的囊胚率、囊胚中的细胞数、细胞凋亡、活性氧(reactive oxygen species,ROS)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)和胚胎线粒体膜电位强度。结果显示,老化组囊胚率显著低于PsA组及对照组(P<0.05),PsA组囊胚率与对照组间无显著差异(P>0.05)。对照组及PsA组囊胚内细胞数显著高于老化组(P<0.05),PsA组囊胚内细胞数与对照组间无显著差异(P>0.05);老化组细胞凋亡率显著高于对照组及PsA组(P<0.05),PsA组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05)。老化组MⅡ期卵母细胞的GSH水平显著低于对照组与PsA组(P<0.05),对照组与PsA组的GSH水平无显著差异(P>0.05)。老化组1细胞期胚胎ROS水平显著高于对照组和PsA组(P<0.05),PsA组ROS水平显著高于对照组(P<0.05)。老化组4-8细胞早期胚胎的线粒体膜电位强度显著低于对照组和PsA组(P<0.05),对照组线粒体膜电位强度显著高于PsA组(P<0.05)。综上所述,PsA可有效延缓牛卵母细胞的老化并提高卵母细胞和胚胎质量。 展开更多
关键词 牛卵母细胞 Psammaplin A(PsA) 活性氧 线粒体膜电位
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乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响 被引量：1
4
作者 王宇 赵予晗 +2 位作者 焦安惠 王玉琪 高青山 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期3909-3917,共9页
【目的】研究乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,为研究体内乙草胺对卵母细胞质量的影响提供参考。【方法】将收集的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)置于含有不同浓度(0(对照组)、10、50、100、130、200μmol/L)... 【目的】研究乙草胺对小鼠卵母细胞体外成熟的影响,为研究体内乙草胺对卵母细胞质量的影响提供参考。【方法】将收集的卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)置于含有不同浓度(0(对照组)、10、50、100、130、200μmol/L)乙草胺的体外成熟培养液中培养14 h,统计卵母细胞第一极体排出率,进行体外受精后,统计体外受精胚胎的囊胚率,筛选出适宜于卵母细胞体外培养的乙草胺浓度。将COCs在对照组和筛选出的适宜浓度的乙草胺组成熟培养液中培养14 h后,利用DCFH-DA检测卵母细胞活性氧(ROS)水平;利用CellTracker蓝色染料检测卵母细胞谷胱甘肽(GSH)水平;利用JC-1染色法检测卵母细胞线粒体膜电位水平(mitochondrial membrane potential,MMP);利用实时荧光定量PCR检测卵母细胞内凋亡相关基因的表达水平,利用Hoechst 33342染色检测体外受精胚胎的囊胚细胞总数,用Fluorescein-dUTP染色法检测囊胚细胞凋亡率。【结果】与对照组相比,100、130、200μmol/L乙草胺组卵母细胞的第一极体排出率显著降低(P<0.05),100和130μmol/L乙草胺组体外受精胚胎的囊胚率显著降低(P<0.05),200μmol/L乙草胺组体外受精胚胎未发育到囊胚期,因此选择100和130μmol/L乙草胺进行后续试验。与对照组相比,在100和130μmol/L乙草胺组中,卵母细胞ROS水平显著升高(P<0.05),GSH水平及MMP显著降低(P<0.05),卵母细胞中促凋亡基因Caspase-9的相对表达量显著升高(P<0.05),而抗凋亡基因Bax、Bcl-2的相对表达量显著降低(P<0.05);100和130μmol/L乙草胺组囊胚细胞总数显著降低(P<0.05),囊胚细胞凋亡率显著升高(P<0.05)。【结论】乙草胺通过提高卵母细胞内ROS及促进卵母细胞凋亡降低卵母细胞的质量,从而影响卵母细胞受精后胚胎的发育潜力。 展开更多
关键词 乙草胺 小鼠 卵母细胞 体外成熟 体外受精 早期胚胎
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柠檬苦素对小鼠卵母细胞体外成熟及其体外受精胚胎发育的影响 被引量：1
5
作者 焦安惠 张笑梦 +2 位作者 赵予晗 王宇 高青山 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第10期3891-3900,共10页
【目的】研究柠檬苦素(limonin,Lim)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)及后续体外受精(IVF)胚胎发育潜能的影响,旨在为体外成熟培养系统的优化提供参考。【方法】在小鼠体外成熟培养液中添加不同浓度的Lim(0、10、20、50μmol/L),成熟培养12 ... 【目的】研究柠檬苦素(limonin,Lim)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)及后续体外受精(IVF)胚胎发育潜能的影响,旨在为体外成熟培养系统的优化提供参考。【方法】在小鼠体外成熟培养液中添加不同浓度的Lim(0、10、20、50μmol/L),成熟培养12 h后统计小鼠卵母细胞第一极体(PBI)排出率,筛选体外成熟培养液中添加Lim的最适浓度;在体外成熟培养液中添加最适浓度的Lim,以0μmol/L Lim为对照组,成熟培养12 h,通过免疫荧光染色检测活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)以及线粒体膜电位(MMP)水平;通过实时荧光定量PCR检测卵母细胞抗氧化及凋亡相关基因的mRNA表达水平。将最适Lim组及对照组卵母细胞体外成熟24 h后进行体外受精,于体外受精24 h和3.5 d分别统计胚胎卵裂率和囊胚率,并用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342染色分别检测囊胚总细胞数及囊胚内凋亡细胞比率。【结果】与0μmol/L Lim组相比,20μmol/L Lim组小鼠卵母细胞PBI排出率显著升高(P<0.05),后续试验均用20μmol/L Lim进行处理。与对照组组相比,20μmol/L Lim组小鼠卵母细胞内ROS水平显著降低(P<0.05),GSH、MMP水平均显著增加(P<0.05),抗氧化相关基因(GPx3、CAT和Prdx3)、抗凋亡相关基因(Bcl-2、Bcl-xl)表达水平均显著上调(P<0.05),促凋亡相关基因(Caspase-3)表达水平显著下调(P<0.05);体外受精胚胎的卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数均显著增加(P<0.05),囊胚内细胞凋亡比率显著下降(P<0.05)。【结论】在体外成熟培养液中添加20μmol/L Lim可以通过抑制氧化应激和细胞凋亡、增加MMP水平提高小鼠卵母细胞质量,从而提高体外受精胚胎的发育潜力。 展开更多
关键词 小鼠 卵母细胞 柠檬苦素 体外成熟 氧化应激
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国产FSH对延边黄牛超数排卵效果的影响 被引量：1
6
作者 何道宏 王华清 +1 位作者 崔七星 高青山 《畜牧与兽医》 北大核心 2019年第8期12-15,共4页
试验以延边黄牛为研究对象,通过使用黄体酮阴道缓释剂(CIDR)+促卵泡素(FSH)+氯前列醇钠(PGF2ɑ)+人工合成促性腺激素释放激素(GnRH)的超数排卵方案,探讨不同剂量的国产FSH与进口的Folltropin-v对延边黄牛超数排卵的影响。结果表明,2 000... 试验以延边黄牛为研究对象,通过使用黄体酮阴道缓释剂(CIDR)+促卵泡素(FSH)+氯前列醇钠(PGF2ɑ)+人工合成促性腺激素释放激素(GnRH)的超数排卵方案,探讨不同剂量的国产FSH与进口的Folltropin-v对延边黄牛超数排卵的影响。结果表明,2 000 IU国产FSH剂量组的头均黄体数最多,超排效果最好,且比进口的Folltropin-v成本更低。使用2 000 IU国产FSH对不同季节延边黄牛进行超排处理的结果表明,秋季和冬季的头均黄体数无显著差异(P>0.05)。不同冲胚方法的结果表明,三通管式的胚胎回收率(57.94±22.42)%显著高于注射式(17.62±11.84)%(P<0.05)。综上,2 000 IU国产FSH能够有效提高优良供体牛利用率,为延边黄牛超数排卵技术提供理论依据。 展开更多
关键词 延边黄牛 超数排卵 促卵泡素 黄体数 胚胎
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石斛碱对卵母细胞体外发育潜能的影响 被引量：2
7
作者 鄂志强 赵予晗 +1 位作者 孙敬宇 高青山 《中国畜牧杂志》 CAS 北大核心 2022年第12期173-177,共5页
本研究旨在探究石斛碱(DNE)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响机制。通过在小鼠卵母细胞体外成熟培养基中添加不同浓度DNE(0、5、10、20、50μmol/L),验证DNE促进卵母细胞成熟的最适浓度;通过免疫荧光染色检测活性氧水平(ROS)、谷胱甘肽(GSH... 本研究旨在探究石斛碱(DNE)对小鼠卵母细胞体外成熟的影响机制。通过在小鼠卵母细胞体外成熟培养基中添加不同浓度DNE(0、5、10、20、50μmol/L),验证DNE促进卵母细胞成熟的最适浓度;通过免疫荧光染色检测活性氧水平(ROS)、谷胱甘肽(GSH)表达水平以及线粒体膜电位(MMP)水平;通过qRT-PCR技术检测小鼠卵母细胞在不同浓度DNE培养基中,体外培养12h后抗氧化相关基因的mRNA表达水平。结果表明:经10μmol/L和20μmol/L DNE处理后小鼠卵母细胞的第一极体(PBI)排出率相比于对照组显著提高,并且添加10μmol/L和20μmol/L DNE可显著降低小鼠卵母细胞的ROS水平,显著提高小鼠卵母细胞GSH水平。此外,经10μmol/L和20μmol/L DNE处理后的卵母细胞MMP水平显著高于对照组。10μmol/L和20μmol/LDNE处理后的小鼠卵母细胞抗氧化相关基因STRT1、STRT2、SOD2的mRNA表达水平显著高于对照组。综上所述,DNE能够通过抑制氧化应激、增强MMP水平来改善小鼠卵母细胞成熟比率,从而提高小鼠卵母细胞发育潜能。 展开更多
关键词 昆明鼠 石斛碱 卵母细胞 氧化应激 体外成熟
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芝麻素对小鼠早期胚胎体外发育的影响
8
作者 何道宏 韩国波 +4 位作者 孙敬宇 鄂志强 崔宇新 许永男 高青山 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第12期3666-3673,共8页
本试验旨研究在体外培养(in vitro culture,IVC)中添加芝麻素(sesamin,SES)对小鼠早期胚胎体外发育的影响。采集6周龄雌性昆明小鼠受精卵,随机分为对照组和不同浓度(10、50、100μmol/L)SES组。采用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342免... 本试验旨研究在体外培养(in vitro culture,IVC)中添加芝麻素(sesamin,SES)对小鼠早期胚胎体外发育的影响。采集6周龄雌性昆明小鼠受精卵,随机分为对照组和不同浓度(10、50、100μmol/L)SES组。采用Fluorescein-dUTP和Hoechst 33342免疫荧光染色分别检测囊胚内细胞凋亡率和总细胞数;采用DCFH-DA检测早期胚胎内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;采用CMF 2HC检测早期胚胎内谷胱甘肽(glutathione,GSH)水平;采用JC-1检测早期胚胎线粒体膜电位强度。结果显示,不同浓度SES组分裂率和囊胚率较对照组均有提高,但无显著差异(P>0.05);50μmol/L SES组细胞数较对照组显著提高(P<0.05),细胞凋亡率较对照组显著降低(P<0.05);与对照组相比,50μmol/L SES组ROS水平显著降低(P<0.05),GSH水平和线粒体膜电位水平显著提高(P<0.05)。结果表明,在IVC中添加SES可提高囊胚内细胞数、减少细胞凋亡率,降低细胞内ROS水平,提高细胞内GSH水平,改善早期胚胎线粒体功能,减少胚胎氧化应激的损伤,提高小鼠早期胚胎发育质量。 展开更多
关键词 小鼠 胚胎发育 芝麻素 活性氧 线粒体膜电位
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细胞周期检查点激酶1的表达对猪卵母细胞体外成熟的影响 被引量：1
9
作者 韩国波 李英花 +1 位作者 叶孟傲然 许永男 《畜牧与兽医》 北大核心 2020年第11期7-13,共7页
细胞周期检查点激酶1(Chk1)作为DNA复制检查点和DNA损伤反应的重要成员,在有丝分裂和减数分裂中都具有重要作用。为探究Chk1对猪卵母细胞减数分裂的影响,本研究首先采用免疫荧光染色和实时荧光定量PCR技术检测了Chk1在猪卵母细胞不同时... 细胞周期检查点激酶1(Chk1)作为DNA复制检查点和DNA损伤反应的重要成员,在有丝分裂和减数分裂中都具有重要作用。为探究Chk1对猪卵母细胞减数分裂的影响,本研究首先采用免疫荧光染色和实时荧光定量PCR技术检测了Chk1在猪卵母细胞不同时期的表达和定位,随后利用chir-124抑制Chk1的表达,研究其对猪卵母细胞减数分裂的影响,以及相关基因的表达和纺锤体的变化。结果表明,Chk1在4个时期(GV、GVBD、MI、MII)均有表达,GV期主要定位在生发泡内,GVBD期主要定位在核周围,MI期和MII期主要定位在纺锤体上;用不同浓度的chir-124处理卵母细胞来抑制Chk1,发现0.5μmol/L的chir-124对卵母细胞生发泡破裂(GVBD)的影响最大,可显著提高猪卵母细胞处于GV-IV期的比例(P<0.05),并且可显著提高卵母细胞达到GVBD期的比率(P<0.05),但对后续的成熟没有显著影响;随后对MII期卵母细胞的基因表达进行检测发现,Chk1的抑制可调节cdk1、cdc25C、cyclin b1基因的表达,并使gwl基因的表达显著下降(P<0.05),从而调节卵母细胞恢复减数分裂的进程;Chk1的表达会激活纺锤体组装检查点(SAC),阻止同源染色体分离,将猪卵母细胞定位在MI期,而减少Chk1的表达后,猪卵母细胞可渡过MI期,进入MII期。综上,在GV期使用chir-124抑制Chk1的表达可促进猪卵母细胞恢复减数分裂,并促进后续的成熟。 展开更多
关键词 猪 卵母细胞 体外成熟 CHK1 chir-124
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罗格列酮对小鼠卵母细胞体外成熟的影响
10
作者 张笑梦 金庆国 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期335-339,共5页
旨在研究体外培养中添加罗格列酮(Rosiglitazone,RSG)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)的影响。收集4~6周龄雌性小鼠卵母细胞,随机分为对照组和20μmol/L RSG组。在饱和湿度,38.5℃、5%CO_(2)培养12 h,统计卵母细胞第一极体排出率。使用DCFH... 旨在研究体外培养中添加罗格列酮(Rosiglitazone,RSG)对小鼠卵母细胞体外成熟(IVM)的影响。收集4~6周龄雌性小鼠卵母细胞,随机分为对照组和20μmol/L RSG组。在饱和湿度,38.5℃、5%CO_(2)培养12 h,统计卵母细胞第一极体排出率。使用DCFH-DA检测卵母细胞内活性氧(ROS);采用CMF2HC检测卵母细胞内谷胱甘肽(GSH)水平;采用JC-1检测卵母细胞内线粒体膜电位;采用实时荧光定量PCR测定抗氧化相关基因的表达水平。结果显示,RSG组卵母细胞第一极体排出率相较于对照组显著提高(P<0.05);与对照组相比,RSG组ROS水平明显降低,GSH和线粒体膜电位水平显著升高(P<0.05)。本研究还发现,RSG组卵母细胞中抗氧化相关基因GPX-3、CAT和SOD-2的mRNA转录水平均显著提高(P<0.05)。结果表明,在体外成熟过程中添加RSG可以提高小鼠卵母细胞成熟率,降低细胞内ROS堆积,提高细胞内GSH水平、卵母细胞线粒体功能和抗氧化基因表达水平,缓解氧化应激造成的损伤,提高卵母细胞体外成熟质量。 展开更多
关键词 罗格列酮 小鼠 卵母细胞 体外成熟
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