从生物多样性和基因多态性认识肿瘤生物学行为及基因改变的异质性 被引量：5

1

作者 吕有勇 《世界华人消化杂志》 CAS 2002年第6期690-693,共4页

0 引言 细胞发生癌变到肿瘤的快速生长、浸润和转移是一个多因素、多阶段、多基因变异累积的复杂病变过程[1].在肿瘤发生、发展的过程中,基因水平的改变远比我们在解剖学、细胞学水平看到的变化要复杂[2].

关键词 生物多样性 基因多态性 肿瘤生物学 基因变异 基因疗法

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应用SEREX技术筛选和鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原 被引量：2

2

作者 岳文涛 张丽娜 +3 位作者 郑华 王玥 孙颖 焦振峰 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第4期289-293,共5页

背景与目的目前用于非小细胞肺癌诊断的标志物为数不多,为寻找更多的早期诊断和靶向治疗相关的标志物,本研究应用SEREX技术筛选与鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原。方法使用非小细胞肺癌患者血清对人肺鳞癌和腺癌噬菌体展示文库进行生物... 背景与目的目前用于非小细胞肺癌诊断的标志物为数不多,为寻找更多的早期诊断和靶向治疗相关的标志物,本研究应用SEREX技术筛选与鉴定非小细胞肺癌肿瘤相关抗原。方法使用非小细胞肺癌患者血清对人肺鳞癌和腺癌噬菌体展示文库进行生物淘选和SEREX筛选。PCR扩增阳性克隆插入片段后测序,结果与GeneBank数据库中已知基因进行同源性比较,分析其生物学特性。结果用非小细胞肺癌血清对噬菌体展示文库进行筛选,共获得31个阳性克隆,测序后发现其代表15个基因,其中12个与已知cDNA序列同源,与肺癌或其它肿瘤的发生、发展关系密切;另外3个未发现有同源基因,可能是新基因。结论应用SEREX技术发现15个肺癌相关抗原和3个肺癌相关抗原的候选基因,为进一步的深入研究打下良好的基础。 展开更多

关键词 肺肿瘤 SEREX 噬菌体展示 基因文库

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抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体死亡受体5嵌合抗体的构建及其真核表达 被引量：1

3

作者 陈凤 郭雅彬 +2 位作者 刘士廉 郑德先 刘彦信 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期690-695,共6页

目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳... 目的构建以人肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)受体死亡受体5(DR5)为抗原的鼠/人重组嵌合抗体。方法采用基因工程技术,扩增和克隆抗DR5嵌合抗体的轻、重链表达载体,共转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr-),筛选稳定分泌表达抗DR5嵌合抗体的细胞株。采用ELISA和Western bloting法鉴定抗体的人源性和抗体-抗原结合活性,四唑盐/吩嗪硫酸甲酯比色法检测抗体的生物学活性。结果获得了稳定表达和分泌抗人DR5的嵌合抗体(anti-DR5mV-hH)的重组细胞;与人DR5蛋白具有高的特异性结合活性;能使体外培养的人髓性白血病Jurkat细胞和人结肠癌HCT116细胞的存活率分别下降到73.15%和77.30%。结论抗DR5嵌合抗体anti-DR5mV-hH具有抗肿瘤活性,为发展人源化抗体药物的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 抗死亡受体5嵌合抗体 中国仓鼠卵巢细胞 人IgG轻链 人IgG重链

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肺癌血清肿瘤标志物研究进展 被引量：1

4

作者 郑华 岳文涛 朱允中 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第8期935-938,共4页

肺癌是当前全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。大部分患者确诊时已为晚期，失去了最佳治疗时机。近年来，虽然不断有新型的化疗药物被发现，但是肺癌5年存活率没有明显的提高。不能早期发现和诊断肺癌是导致肺癌疗效差及高死亡率的... 肺癌是当前全世界发病率和死亡率最高的恶性肿瘤。大部分患者确诊时已为晚期，失去了最佳治疗时机。近年来，虽然不断有新型的化疗药物被发现，但是肺癌5年存活率没有明显的提高。不能早期发现和诊断肺癌是导致肺癌疗效差及高死亡率的主要原因，故提高肺癌预后的关键是早期诊断。 展开更多

关键词 肺癌预后 血清肿瘤标志物 早期诊断 高死亡率 5年存活率 恶性肿瘤 治疗时机 化疗药物

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肿瘤全基因组变异分析的意义评述 被引量：3

5

作者 吕有勇 陈凤 《诊断学理论与实践》 2009年第1期1-5,共5页

到目前为止，人们对肿瘤发生机制的认识可归纳为几个基本假说，即基因突变、染色体易位、表观遗传修饰和干细胞起源。其中，基因点突变、缺失、扩增的变化已得到较多的实验证据。但这些研究结论是建立在仅对很少一部分基因进行了分析的... 到目前为止，人们对肿瘤发生机制的认识可归纳为几个基本假说，即基因突变、染色体易位、表观遗传修饰和干细胞起源。其中，基因点突变、缺失、扩增的变化已得到较多的实验证据。但这些研究结论是建立在仅对很少一部分基因进行了分析的基础上。可见，我们靠现有的知识很难真正揭示基因变异与肿瘤间的关系。如需全面了解，必须进行肿瘤全基因组变异分析。 展开更多

关键词 肿瘤 基因组 变异 分析

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从p53肿瘤基因治疗临床试验展望我国肿瘤生物学研究的前景

6

作者 吕有勇 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第23期2017-2017,共1页

关键词 P53基因 恶性肿瘤 基因治疗 临床试验 肿瘤生物学

原文传递

PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌的关系 被引量：29

7

作者 岳文涛 王小敏 王玥 《中国肺癌杂志》 CAS 2009年第4期312-315,共4页

背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科... 背景与目的PI3K/Akt/mTOR通路失调对肺癌形成可能具有重要作用,本研究通过分析非小细胞肺癌组织中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平,探讨PI3K/Akt/mTOR信号转导途径与非小细胞肺癌之间的关系。方法外科手术中获取40例非小细胞肺癌组织及30例癌旁组织,应用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RT-PCR)技术检测癌及癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平。结果非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(40±59)%、(61±23)%、(77±32)%、(43±21)%,癌旁组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平分别为(16±40)%、(23±16)%、(10±12)%、(20±17)%,非小细胞肺癌组织中VEGF、PI3K、Akt、mTOR基因的表达水平均高于癌旁组织(P<0.01)。联合应用4个基因表达作为NSCLC诊断标志,诊断的敏感性达到87.5%,特异性为90%。结论非小细胞肺癌中PI3K/Akt/mTOR信号转导途径相关基因表达水平明显上调,说明该通路在非小细胞肺癌中被激活。联合检测VEGF、PI3K、Akt、mTOR的表达水平改变可能作为NSCLC的诊断标志。 展开更多

关键词 肺肿瘤 VEGF P13K AKT MTOR

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mTOR和PTEN在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义 被引量：9

8

作者 王亮 许绍发 +3 位作者 岳文涛 赵晓婷 张丽娜 王玥 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第7期717-721,共5页

背景与目的mTOR是调节细胞生长和增殖的重要信号转导分子,也是一种蛋白激酶。它通过活化下游的相关的效应蛋白发挥作用。在信号转导通路中PTEN基因可通过对该信号途径的负调控而抑制mTOR的活化。本研究通过分析mTOR信号转导途径中mTOR和... 背景与目的mTOR是调节细胞生长和增殖的重要信号转导分子,也是一种蛋白激酶。它通过活化下游的相关的效应蛋白发挥作用。在信号转导通路中PTEN基因可通过对该信号途径的负调控而抑制mTOR的活化。本研究通过分析mTOR信号转导途径中mTOR和PTEN基因在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达和临床意义。方法外科手术中获取65例NSCLC组织及30例癌旁组织,RT-PCR技术检测NSCLC组织及癌旁组织中mTOR和PTEN基因的表达水平。结果mTOR在NSCLC组织中表达量(0.23±0.16)显著高于癌旁组(0.12±0.09)(P<0.01),PTEN在NSCLC组织中表达量(0.19±0.28)显著低于癌旁组(0.53±0.28)(P<0.01)。mTOR和PTEN与病人的性别、年龄、病理类型、淋巴结转移情况无关,与病人的肿瘤大小有关。结论mTOR在NSCLC中被激活,PTEN在NSCLC组织表达缺失或减少,mTOR通路的激活和PTEN表达缺失在NSCLC发生发展中起到一定的作用。 展开更多

关键词 MTOR PTEN 逆转录聚合酶链反应 肺肿瘤

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非小细胞肺癌患者中Survivin抗体的临床意义及诊断价值 被引量：6

9

作者 马丽 岳文涛 +3 位作者 张丽娜 王玥 张春彦 杨学惠 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第7期706-712,共7页

背景与目的在世界范围内,恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因,且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入,肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议。... 背景与目的在世界范围内,恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因,且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入,肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议。本研究旨在探讨Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中可能的临床应用价值。方法采用RT-PCR方法获得Survivin cDNA,构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin,亲和层析方法纯化蛋白,SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定,建立基于Survivin融合蛋白的间接ELISA方法,对89例健康志愿者、215例非小细胞肺癌患者以及20例肺部良性疾病患者的血清样本进行检测。结果重组Survivin融合蛋白在BL21(DE3)中以包涵体形式高效表达,间接ELISA方法检测Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中的阳性率为19.5%,特异性为88.9%,Survivin自身抗体与非小细胞肺癌患者的肿瘤大小、远处转移间存在相关性(P<0.05),Survivin自身抗体与CEA在非小细胞肺癌患者中联合检测的阳性率明显高于CEA与NSE、SCC、CYFRA、ProGRP联合检测的阳性率,这大大提高了非小细胞肺癌检测的敏感性。结论本研究成功构建原核表达载体pET30a(+)/Survivin,并建立检测Sur-vivin自身抗体的间接ELISA方法,Survivin自身抗体与肺癌肿瘤大小、远处转移间的相关性及在非小细胞肺癌患者联合检测中的重要作用,为Survivin自身抗体在肺癌中的临床应用提供了线索和依据。 展开更多

关键词 原核表达 Survivin自身抗体 肺肿瘤 间接ELISA 联合检测

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抗原处理相关转运因子在小儿急性白血病患者中的表达及其临床意义 被引量：3

10

作者 谢建军 胡亚美 +4 位作者 吕有勇 李志刚 巩文玉 余素明 孙婧 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第10期1062-1065,共4页

背景与目的:抗原处理相关转运因子(transporterassociatedwithantigenprocessing,TAP)参与免疫监视,因而可能与肿瘤发生有关。本文旨在探讨急性白血病TAP分子表达及其临床意义,探讨急性白血病的治疗策略。方法:采用RT-PCR检测34例初治... 背景与目的:抗原处理相关转运因子(transporterassociatedwithantigenprocessing,TAP)参与免疫监视,因而可能与肿瘤发生有关。本文旨在探讨急性白血病TAP分子表达及其临床意义,探讨急性白血病的治疗策略。方法:采用RT-PCR检测34例初治急性淋巴细胞白血病(acutelymphoblasticleukemia,ALL)(初治组)、15例复发ALL(复发组)及20例急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)患者骨髓中TAP亚单位TAP1和TAP2的表达。20例无全身性疾病外科住院患儿作为对照组。使用数码成像分析仪测定并计算扩增条带的相对于阳性内对照GAPDH的吸光度(A)值。结果:ALL初治组和ALL复发组的TAP1A值(分别为0.448±0.167和0.169±0.021)及TAP2的A值(分别为0.196±0.180和0.112±0.020)均低于对照组,P均<0.01;AML组TAP2的A值低于对照组(P<0.01);ALL复发组TAP1的A值低于ALL初治组,P<0.05;ALL初治组复发者(6/34)TAP1的A值(0.215±0.159)较持续完全缓解(constantcompleteremission,CCR)者低(24/34,0.462±0.189,P<0.05)。结论:小儿ALL和AML均存在TAP分子低表达,这可能促使白血病细胞逃避免疫监视;TAP1亚单位低表达可能与ALL的复发有关。 展开更多

关键词 抗原 转运因子 小儿 急性白血病 免疫学 复发

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基于双基因分析的结肠癌标志基因选择 被引量：2

11

作者 李建更 高志坤 +1 位作者 严志 阮晓钢 《中国生物医学工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期691-695,共5页

针对结肠癌标志基因选择问题,引入一种最高得分对(TSP)方法,处理一组包含40个肿瘤和22个正常样本的结肠癌微阵列数据,得到标志基因对(VIP,DARS)并构建双基因分类器。结果显示,该分类器对62例样本的分类准确率可达93.55%。进一步,利用荧... 针对结肠癌标志基因选择问题,引入一种最高得分对(TSP)方法,处理一组包含40个肿瘤和22个正常样本的结肠癌微阵列数据,得到标志基因对(VIP,DARS)并构建双基因分类器。结果显示,该分类器对62例样本的分类准确率可达93.55%。进一步,利用荧光实时定量PCR在10个独立样本上检验所选基因对的分类效果,正确率为100%,表明该方法能有效地选择结肠癌标志基因,对临床诊断有积极的意义。 展开更多

关键词 标志基因 结肠癌 双基因分类器 荧光实时定量PCR(Q-RT-PCR)

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MMP-11在胃癌患者血清中的表达及临床意义 被引量：15

12

作者 严冬 沈琳 吕尤勇 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2007年第12期968-972,共5页

背景与目的:基质金属蛋白酶11(MMP-11)是基质金属蛋白酶家族中的一员,已有文献报道其与食管癌、肺癌等疾病的预后相关,尚缺乏MMP-11与胃癌的相关研究,本实验旨在观察基质金属蛋白酶11(MMP-11)在胃癌患者外周血清中的表达情况及临床意义... 背景与目的:基质金属蛋白酶11(MMP-11)是基质金属蛋白酶家族中的一员,已有文献报道其与食管癌、肺癌等疾病的预后相关,尚缺乏MMP-11与胃癌的相关研究,本实验旨在观察基质金属蛋白酶11(MMP-11)在胃癌患者外周血清中的表达情况及临床意义。方法:收集2005年3月—2007年2月北京肿瘤医院收治的130例胃癌患者血清,采用逆转录-聚合酶链反应及酶联免疫技术检测MMP-11mRNA及蛋白表达情况。取20例正常健康人血清为对照组。结果:MMP-11mRNA在正常人群中表达的阳性率为5%,而在胃癌患者外周血清中阳性表达率(68.4%)高于正常人群;MMP-11蛋白在胃癌患者外周血清中表达量为(44±27)ng/ml,高于正常人群的(3±3)ng/ml;130例胃癌患者中,根治术后辅助治疗未见复发30例;术后复发或(和)转移的胃癌患者30例,复发、转移组血清MMP-11蛋白表达量(51±27)ng/ml,术后未见复发、转移的胃癌患者血清MMP-11蛋白表达量(27±28)ng/ml;两组患者外周血清MMP-11mRNA表达差异与蛋白水平一致。结论:MMP-11在胃癌患者外周血清中高表达,显著高于正常人群,尤其在根治术后转移和(或)复发的晚期患者的外周血中,推测其可能作为胃癌诊断、复发/转移的分子标志物。 展开更多

关键词 基质金属蛋白酶11 胃癌 转移

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抗人肺腺癌单抗5F-11噬菌体抗体库的构建及表达

13

作者 岳文涛 赖百塘 +3 位作者 汪惠 湛秀萍 张春彦 扬学慧 《中国肺癌杂志》 CAS 2002年第2期119-122,共4页

目的　构建抗人肺癌单抗 5F 11的噬菌体显示文库。方法　利用RT PCR方法从 5F 11杂交瘤细胞扩增抗体轻重链可变区基因 ,用连接子连接成为ScFv基因后克隆至噬菌体载体pCANTAB5E。以肺腺癌细胞系A2 为抗原进行 4轮筛选 ,得到富集的次级噬... 目的　构建抗人肺癌单抗 5F 11的噬菌体显示文库。方法　利用RT PCR方法从 5F 11杂交瘤细胞扩增抗体轻重链可变区基因 ,用连接子连接成为ScFv基因后克隆至噬菌体载体pCANTAB5E。以肺腺癌细胞系A2 为抗原进行 4轮筛选 ,得到富集的次级噬菌体表达文库。结果　制备了库容为 8× 10 7pfu/ml的噬菌体展示文库。随机抽取未经筛选的克隆进行酶切 ,酶切图谱呈多样性 ,富集后的酶切图谱则显示特异构型的噬菌体得到富集。检测 30个噬菌体克隆上清 ,其中 2 3个与A2 细胞有较强反应。结论　本研究获得了抗人肺腺癌单抗 5F 11的单链抗体 ,为拓展抗体的应用创造了条件。 展开更多

关键词 噬菌体展示文库 抗体库 ScFv基因 肺腺癌 RT-PCR法 抗人肺腺癌单抗5F-11 单链抗体 构建 抗体表达

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吸烟肺癌患者尿中烟草特有亚硝胺4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶)-1-丁酮代谢产物的测定

14

作者 张同梅 赖百塘 +1 位作者 段连山 王小珏 《中国肺癌杂志》 CAS 2006年第3期231-235,共5页

背景与目的国外研究表明不论以何种方式用烟草特有亚硝胺4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶)-1-丁酮[4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone,NNK]处理小鼠均能特异地诱发小鼠肺癌,且多为肺腺癌,NNK是公认的吸烟者患肺癌的一个病因。... 背景与目的国外研究表明不论以何种方式用烟草特有亚硝胺4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶)-1-丁酮[4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanone,NNK]处理小鼠均能特异地诱发小鼠肺癌,且多为肺腺癌,NNK是公认的吸烟者患肺癌的一个病因。本研究的目的是通过测定吸烟者尿中NNK的代谢产物4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶)-1-丁醇[4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl)-1-butanol,NNAL]及其解毒产物4-(甲基亚硝胺)-1-(3-吡啶-N-氧化物)-1-丁醇[4-(methylnitrosamino)-1-(3-pyridyl-N-oxide)-1-butanol,NNAL-Gluc]的含量及NNAL-Gluc/NNAL比值来了解NNK特异的致肺癌性。方法用高压液相色谱仪(HPLC)和气相色谱-双极质谱联用仪(GC-MS/MS)对10例吸烟肺癌患者、8例健康吸烟者和4例健康不吸烟者的24h尿样进行分析。结果不吸烟者的尿中未测到NNAL和NNAL-Gluc,健康吸烟者尿中平均NNAL-Gluc/NNAL比值为4.95,吸烟肺癌患者为0.5。结论建立了在吸烟者尿中测定NNK代谢产物NNAL及NNAL-Gluc的方法。初步研究显示健康吸烟者对NNK的解毒能力明显大于吸烟肺癌患者,为在吸烟人群中筛选肺癌高危人群提供了检测手段。 展开更多

关键词 烟草特有亚硝胺 肺肿瘤 代谢产物

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非小细胞肺癌患者中Survivin抗体的临床意义及诊断价值

15

作者 马丽 岳文涛 +3 位作者 张丽娜 王玥 张春彦 杨学惠 《结核病与胸部肿瘤》 2012年第4期246-252,共7页

背景与目的在世界范围内，恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因，且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入，肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议... 背景与目的在世界范围内，恶性肿瘤已经成为威胁人类健康的主要原因，且其发病率和死亡率居高不下。随着人们对肿瘤标志物研究的不断深入，肿瘤相关的自身抗体成为了研究热点。肺癌患者血清中Survivin自身抗体的临床意义目前还存在争议。本研究旨在探讨Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中可能的临床应用价值。方法采用RT-PCR方法获得SurvivincDNA，构建原核表达载体pET30a（＋）／Survivin，亲和层析方法纯化蛋白，SDS—PAGE电冰及Westernblot鉴定，建立基于Survivin融合蛋白的间接ELISA方法，对89例健康志愿者、215例非小细胞肺癌患者以及20例肺部良性疾病患者的血清样本进行检测。结果重组Survivin融合蛋白在BL21（DE3）中以包涵体形式高效表达，间接ELISA方法检测Survivin自身抗体在非小细胞肺癌患者血清中的阳性率为19．5％，特异性为88．9％，Survivin自身抗体与非小细胞肺癌患者的肿瘤大小、远处转移间存在相关性（P〈0．05），Survivin自身抗体与CEA在非小细胞肺癌患者中联合检测的阳性率明显高于CEA与NSE、SCC、CYFRA、ProGRP联合检测的阳性率，这大大提高了非小细胞肺癌检测的敏感性。结论本研究成功构建原核表达载体pET30a（＋）／Survivin，并建立检测Survivin自身抗体的间接ELISA方法，Survivin自身抗体与肺癌肿瘤大小、远处转移间的相关性及在非小细胞肺癌患者联合检测中的重要作用，为Survivin自身抗体在肺癌中的临床应用提供了线索和依据。 展开更多

关键词 原核表达 Survivin自身抗体 肺肿瘤 间接ELISA 联合检测

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5F11-DOX结合物对人肺腺癌细胞体内外抑制作用的研究

16

作者 张同梅 赖百塘 湛秀萍 《结核病与胸部肿瘤》 2004年第4期269-278,共10页

目的 研究单克隆抗体-化疗药物结合物5F11-DOX对人肺腺癌A2细胞体内外的抑制作用及其可能的作用机制。方法 戊二醛法制备5F11-DOX结合物；集落形成试验观察结合物对肿瘤细胞的体外杀伤作用；荧光显微镜观察DOX在肿瘤细胞中的分布；免疫... 目的 研究单克隆抗体-化疗药物结合物5F11-DOX对人肺腺癌A2细胞体内外的抑制作用及其可能的作用机制。方法 戊二醛法制备5F11-DOX结合物；集落形成试验观察结合物对肿瘤细胞的体外杀伤作用；荧光显微镜观察DOX在肿瘤细胞中的分布；免疫组化检测抗体在细胞的结合部位及分布；裸鼠皮下或腹腔内人肺癌A2细胞异种移植瘤，尾静脉给药，比较不同剂量的5F11-DOX结合物与游离DOX对A2细胞异种移植瘤的疗效。结果 浓度为0．04ug/d的5F11-DOX即可在体外杀死全部人肺腺癌A2细胞，5F11-DOX结合物比游离DOX的作用提高了10倍(P<0．05)。荧光镜检发现在DOX浓度为3ug／ml作用3小时，去除药物，继续培养24小时后，5F11-DOX组的DOX荧光比游离DOX组的强。显示结合物组的DOX在细胞内的保留时间比游离DOX组的更长。免疫组化染色检测发现5F11-DOX孵育后5F11定位于细胞膜与胞浆中，而荧光镜检发现．DOX分布于细胞浆及核内。提示5F11-DOX复合物主要通过抗体的靶向性将药物带到靶细胞的膜表面并内化进入细胞，而后结合物在细胞内解离，DOX分布于胞浆及核内，杀伤癌细胞。结合物大分子进入细胞内，从而影响DOX药物从细胞内泵出。裸鼠皮下及腹腔内异种移植瘤治疗试验显示5F11-DOX组裸鼠的移植瘤明显小于对照组和同剂量游离DOX组(P<0．05)；5F11-DOX疗效相当于4-8倍之游离DOX的疗效。瘤体的病理切片HE染色显示，5F11-DOX结合物组癌巢中央和周围均有大片的瘤组织溶解。结论 5F11-DOX结合物对人肺癌A2细胞瘤的杀伤作用显著高于游离的DOX，体外杀伤作用约提高10倍左右，体内对A2细胞异种移植瘤的疗效比游离DOX组提高4-8倍。 展开更多

关键词 结合物 体内 细胞内 游离 异种移植 胞浆 皮下 体外杀伤作用 腹腔内 人肺癌

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胃癌细胞周期不同时相MTS1/p16、p21、p53的表达 被引量：2

17

作者 王俊 李文梅 +2 位作者 梁云燕 王代树 吕有勇 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1999年第2期116-120,共5页

目的：进一步明确不同周期时相肿瘤细胞p16基因的表达水平及在细胞周期调控中的作用。方法：改进并建立了一个高同步率、高收获率的细胞周期同步化的方法[7]，通过此方法把细胞同步在不同的时期，对RNA及蛋白的表达进行研究，确定在不... 目的：进一步明确不同周期时相肿瘤细胞p16基因的表达水平及在细胞周期调控中的作用。方法：改进并建立了一个高同步率、高收获率的细胞周期同步化的方法[7]，通过此方法把细胞同步在不同的时期，对RNA及蛋白的表达进行研究，确定在不同周期时相中p16的表达有何变化，同时分析其它几个重要的抑癌基因如p53、p21，研究它们在细胞周期中的表达以及与p16基因相互关系。结果：确定在不同周期时相的胃癌细胞系MGc80－3和BGC823细胞中，p16mRNA的表达随细胞种类的不同而有一定的差异，其蛋白在各周期时相中均有表达，在两种细胞中无明显差异。p53在各个周期时相的表达无明显差异，Wafl／p21的蛋白和mRNA的表达具有一致性，M期其mRMA不表达，而蛋白有微弱的表达。结论：以上结果表明在肿瘤细胞G1期CDK4活性的调节，可能主要不是发生在mRNA和蛋白表达水平上。 展开更多

关键词 胃肿瘤 P16基因 mRNA 细胞周期

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c-Met/ErbB3/PI3K信号通路在肺癌EGFR-TKI获得性耐药中的研究进展 被引量：1

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作者 贾文韫 李宝兰 岳文涛 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期721-723,共3页

0引言目前小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）包括吉非替尼（Gefitinib）和厄洛替尼（Erlotinb）,作为二线药物在非小细胞肺癌的临床治疗中取得了明显疗效。但在临床使用中,EG-FR-TKI敏感病人在用药6~8月后部分... 0引言目前小分子酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitor,TKI）包括吉非替尼（Gefitinib）和厄洛替尼（Erlotinb）,作为二线药物在非小细胞肺癌的临床治疗中取得了明显疗效。但在临床使用中,EG-FR-TKI敏感病人在用药6~8月后部分出现了疾病进展即获得性耐药,获得性耐药的发生使小分子酪氨酸激酶抑制剂的应用受到了极大的限制[1]。 展开更多

关键词 C-MET ERBB3 PI3K 肺癌 获得性耐药

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银染mRNA差异显示法分离黄芪与当归肾脏保护作用相关基因 被引量：6

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作者 余凌 王海燕 +1 位作者 吕有勇 李惊子 《中华内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第10期677-681,共5页

目的　分离与肾脏疾病慢性进展相关的基因 ,以及黄芪、当归药物防治肾硬化相关的基因。方法　以银染mRNA差异显示法对比正常肾脏、肾病综合征后硬化肾脏以及黄芪、当归治疗组的肾脏基因表达 ,并分离疾病状态下表达发生改变且能被黄芪、... 目的　分离与肾脏疾病慢性进展相关的基因 ,以及黄芪、当归药物防治肾硬化相关的基因。方法　以银染mRNA差异显示法对比正常肾脏、肾病综合征后硬化肾脏以及黄芪、当归治疗组的肾脏基因表达 ,并分离疾病状态下表达发生改变且能被黄芪、当归治疗纠正的基因。结果　分离、克隆了 2 6个黄芪、当归对肾脏具有保护作用的相关基因片段 ,随机选取 8个进行Northern杂交验证 ,其一被证实在肾硬化过程中表达下调 ;黄芪、当归治疗组其表达恢复。测序后同源性比较显示为一新基因。结论　银染mRNA差异显示法是简便快捷的分离差异基因的方法 ,本实验分离的新基因可能参与了肾脏疾病的慢性进展 ,并与黄芪、当归的治疗作用有关。 展开更多

关键词 黄芪 当归 肾疾病 银染mRNA差异显示法

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抗人肺癌噬菌体展示可溶性ScFv的筛选与鉴定及其序列测定

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作者 岳文涛 赖百塘 +1 位作者 张春燕 湛秀萍 《中华肿瘤防治杂志》 CAS 2009年第19期1458-1462,共5页

目的:制备抗人肺癌单链抗体(single chain Fvferment antibody,ScFv),并对抗体生物学特性进行初步研究。方法:以人肺腺癌细胞系A2为抗原,对5F-11杂交瘤细胞噬菌体抗体库进行富集和筛选。以人肺腺癌细胞系A2和正常人淋巴细胞为抗原,进行... 目的:制备抗人肺癌单链抗体(single chain Fvferment antibody,ScFv),并对抗体生物学特性进行初步研究。方法:以人肺腺癌细胞系A2为抗原,对5F-11杂交瘤细胞噬菌体抗体库进行富集和筛选。以人肺腺癌细胞系A2和正常人淋巴细胞为抗原,进行酶联免疫吸附试验,从富集后的噬菌体抗体库中筛选出只与A2细胞结合的阳性克隆。筛选的噬菌体克隆转染大肠埃希菌HB2151,得到可溶性单链抗体分泌克隆。可溶性抗体分泌克隆测序。应用ELISA、竞争性ELISA、SDS-PAGE及蛋白质印迹法对其中的2A7-1克隆进行初步鉴定。结果:以肺腺癌细胞A2为抗原进行了4轮富集。进一步筛选得到18个仅识别A2细胞而与人淋巴细胞无反应的融合抗体分泌克隆。转染大肠埃希菌HB2151后筛选到能与A2细胞特异结合的可溶性抗体分泌克隆2A7-1。竞争性ELISA结果显示,5F-11能强烈抑制2A7-1与A2细胞的结合。SDS-PAGE蛋白质印迹法显示得到大小约为30×103的单链抗体。结论:通过噬菌体抗体技术成功分离到了鼠单抗5F-11的可溶性ScFv分泌克隆,为进一步的抗体应用研究奠定了基础。 展开更多

关键词 细菌噬菌体 抗体 单克隆 肺肿瘤 腺癌

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