利用体细胞核移植技术生产表达增强绿色荧光蛋白(EGFP)的转人溶菌酶基因(HLY)的猪克隆胚胎 被引量：4

1

作者 李秋艳 卫恒习 +7 位作者 郭英 李燕 赵蕊 于政权 汤波 张磊 戴蕴平 李宁 《自然科学进展》 北大核心 2008年第10期1157-1162,共6页

由于生理特性和器官大小的原因,猪在人类疾病模型和器官移植方面具有很大的应用潜力.正因如此,猪基因结构的修饰对农业生产和人类医学两方面都意义重大.研究用脂质体介导的方法转染了猪胎儿成纤维细胞,所用结构为双标的人溶菌酶质粒(pBC... 由于生理特性和器官大小的原因,猪在人类疾病模型和器官移植方面具有很大的应用潜力.正因如此,猪基因结构的修饰对农业生产和人类医学两方面都意义重大.研究用脂质体介导的方法转染了猪胎儿成纤维细胞,所用结构为双标的人溶菌酶质粒(pBC1-HLY-GFP-NEO).分别对包含两个品种(五指山猪、长白猪)的5个细胞系(sw7,sw8,slw3,slw6和slw9)进行了转染.经过14d,1000μg/mL浓度G418药物的筛选处理,sw7,sw8,slw3和slw6等4个细胞系的95以上细胞都表达绿色荧光蛋白,而细胞系slw9的转染效率只有49.3.用转染效率高的3个细胞系作为核供体构建猪克隆胚胎,通过电刺激方法进行融合和激活,然后在PZM3中体外培养.48h后,重构胚的平均卵裂率为76.7;经过7d培养后观察,有18.5的胚胎发育到囊胚阶段,其中93.3的囊胚在荧光显微镜下能够发出绿色荧光,但囊胚之间的荧光强度存在差异.研究结果表明,通过脂质体介导的方法可以获得高转染效率的转基因猪胎儿成纤维细胞系,但细胞系之间的转染效率不同;用转基因猪胎儿成纤维细胞构建的重构胚,能够成功发育到囊胚阶段,而且大多数为表达绿色荧光蛋白的阳性胚胎. 展开更多

关键词 EGFP 猪 核移植 胎儿成纤维细胞 人溶菌酶(HLY)

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利用体细胞克隆技术生产优质种公牛

2

作者 张磊 张晓霞 +3 位作者 戴蕴平 张胜利 雷臣 李宁 《中国奶牛》 2010年第6期3-6,共4页

2004年3月,在国家高技术研究发展计划（863）项目、国家重大基础研究发展规划（973）项目和中国科学院创新工程规划项目等的资助下,中国农业大学农业生物技术国家重点实验室李宁院士领导的动物分子遗传组与北京奶牛中心、北京济普霖生... 2004年3月,在国家高技术研究发展计划（863）项目、国家重大基础研究发展规划（973）项目和中国科学院创新工程规划项目等的资助下,中国农业大学农业生物技术国家重点实验室李宁院士领导的动物分子遗传组与北京奶牛中心、北京济普霖生物技术有限公司和山东科龙畜牧产业有限公司等多家单位合作,成功获得了优质种牛＂龙＂的克隆体。 展开更多

关键词 体细胞克隆技术 优质 种公牛 农业生物技术 国家重点实验室 生产 利用 中国农业大学

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猪体外受精胚胎、孤雌激活胚胎以及体细胞核移植胚胎的体外培养 被引量：10

3

作者 张运海 潘登科 +4 位作者 孙国杰 孙秀柱 李燕 戴蕴平 李宁 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期588-593,共6页

目的本研究系统比较了体外受精胚(IVFEs)、孤雌激活胚(PAEs)以及体细胞核移植胚(NTEs)的发育率和囊胚质量,同时还比较了PZM-3和NCSU-23两种培养基培养对PAEs以及NTEs发育的影响。方法利用体细胞核移植技术、体外受精技术和孤雌激活技术... 目的本研究系统比较了体外受精胚(IVFEs)、孤雌激活胚(PAEs)以及体细胞核移植胚(NTEs)的发育率和囊胚质量,同时还比较了PZM-3和NCSU-23两种培养基培养对PAEs以及NTEs发育的影响。方法利用体细胞核移植技术、体外受精技术和孤雌激活技术分别生产猪的NTEs、IVFEs和PAEs,开展体外培养。结果(1)IVFEs、PAEs和NTEs的卵裂率分别为72.0%,66.0%和63.5%,各组间没有显著差异(P>0.05);囊胚形成率分别为11.0%,22.6%和16.9%,也不存在明显不同(P>0.05);然而,在囊胚质量,即ICM细胞数/总细胞数的比例上,IVFEs和NTEs均优于PAEs(0.448%,0.356%vs 0.122%,P<0.05)。(2)对PAEs来讲,以PZM-3为基础培养基时囊胚率明显高于以NCSU-23为基础培养基时的处理组(35.4%vs.22.6%,P<0.05);而对NTEs而言,两种培养基在支持胚胎形成囊胚方面的效果相当(26.6%vs.21.1%,P>0.05),虽然PZM-3培养时胚胎卵裂率显著低于NCSU-23培养组(47.5%vs.63.5%,P<0.05)。结论(1)PAEs的囊胚质量在3种来源的胚胎中最差;(2)对PAEs理想的培养基,当用于NTEs培养时却不一定是最佳的选择。 展开更多

关键词 猪 体外受精 体细胞核移植 孤雌激活 体外培养

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无血清培养基IVD101和G1/G2在牛体细胞核移植中的应用研究 被引量：3

4

作者 李荣 刘颖 +7 位作者 赵兴波 王莉莉 王海萍 丁方荣 李京 李松 高凤磊 戴蕴平 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1487-1492,共6页

通过考察牛体细胞核移植重构胚在无血清培养基(IVD101、G1/G2)条件下培养的囊胚发育率及其质量,从而评估无血清培养基支持牛体细胞核移植重构胚体外发育的能力。采用IVD101和G1/G2对牛体细胞核移植胚胎进行体外培养,并以CR1aa+5%FBS作... 通过考察牛体细胞核移植重构胚在无血清培养基(IVD101、G1/G2)条件下培养的囊胚发育率及其质量,从而评估无血清培养基支持牛体细胞核移植重构胚体外发育的能力。采用IVD101和G1/G2对牛体细胞核移植胚胎进行体外培养,并以CR1aa+5%FBS作为对照组。无血清培养基IVD101和G1/G2的囊胚发育率与对照组无显著性差异(41.2%±9.1%、42.2%±10.8%,48.0%±9.2%,P>0.05)。通过囊胚差异染色和冷冻/解冻胚胎存活率分析胚胎质量,发现无血清培养基ICM/Total略低于对照组(31.8%±10.5%、29.5%±11.9%vs.33.0%±14.8%),但无显著性差异(P>0.05);3个组别的囊胚经程序化冷冻/解冻后无血清培养基的存活率(IVD101、G1/G2)略高于对照组,但差异不显著(84.8%、80.4%vs.77.3%,P>0.05)。结果证明无血清培养基(IVD101、G1/G2)可以支持体细胞核移植重构胚的体外发育,且其对程序化冷冻的耐受性与添加血清组(CR1aa+5%FBS)相似。 展开更多

关键词 无血清培养基 体细胞核移植 差异染色 胚胎冷冻

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季节对猪体外成熟卵母细胞的发育能力的影响 被引量：5

5

作者 张坤 张运海 +8 位作者 潘登科 马育芳 张建 李旭阳 卫恒习 王少华 李燕 戴蕴平 李宁 《自然科学进展》 北大核心 2007年第7期963-967,共5页

猪的卵母细胞对外界环境非常敏感,这造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一.文章的研究目的是描述季节的变化对体外成熟卵母细胞发育能力的影响.研究中比较了不同季节每对卵巢获得A/B级卵的数量以及卵母细胞核... 猪的卵母细胞对外界环境非常敏感,这造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一.文章的研究目的是描述季节的变化对体外成熟卵母细胞发育能力的影响.研究中比较了不同季节每对卵巢获得A/B级卵的数量以及卵母细胞核成熟的比例(实验1),另外统计分析了不同季节孤雌(实验2)和核移植(实验3)胚胎发育能力的差异,最后在冬春两季分别进行了克隆胚胎的移植以观测其体内发育情况(实验4).结果显示实验1,春季(3月到5月)COCs/卵巢的比例最高(7.6±3.5),夏,秋,冬季的比例依次是(6.4±3.3),(6.7±2.9),(6.7±3.4),p<0.05.然而,没有发现卵母细胞的MⅡ比例有显著性差异((75.3±3.3)%,(73.5±2.3)%,(73.0±4.2)%,(76.5±6.7)%,依次是春,夏,秋,冬季的MⅡ比例,p<0.05).实验2,观察到夏季孤雌胚胎的囊胚率显著性降低(10.1±2.6)%,春,秋,冬季的孤雌胚胎囊胚率依次是(27.2±3.4)%,(22.4±3.5)%,(22.4±3.4)%,p<0.05.实验3,猪体细胞克隆胚胎在春季囊胚率获得提高((12.2±1.3)%,秋,冬季的克隆胚胎囊胚率依次是(10.2±1.2)%,(8.1±1.4)%,p<0.05).实验4,发现冬季胚胎移植无论是妊娠率还是出生率都明显低于春季.以上结果表明季节变化影响体外成熟卵母细胞的发育能力. 展开更多

关键词 季节 体细胞核移植 猪 孤雌激活 卵母细胞

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瘦素对猪卵母细胞体外成熟及克隆猪妊娠率的影响 被引量：2

6

作者 卫恒习 李俊 +5 位作者 李秋艳 李燕 戴蕴平 马育芳 薛恺 李宁 《自然科学进展》 北大核心 2008年第11期1320-1324,共5页

体细胞克隆猪在人类医学、基础科学研究和畜牧业生产方面均具有很大的应用潜力.为了提高体细胞克隆猪的效率,首先比较了两种基础成熟液NCSU-23和TCM199的体外成熟效果,然后在TCM199培养液的基础上,较系统地研究了添加不同浓度的瘦素对... 体细胞克隆猪在人类医学、基础科学研究和畜牧业生产方面均具有很大的应用潜力.为了提高体细胞克隆猪的效率,首先比较了两种基础成熟液NCSU-23和TCM199的体外成熟效果,然后在TCM199培养液的基础上,较系统地研究了添加不同浓度的瘦素对猪卵母细胞成熟、孤雌激活胚胎和克隆胚胎的体外发育以及克隆胚胎体内发育的影响.结果表明:成熟液中添加100ng/mL或200ng/mL瘦素对猪卵母细胞的核成熟没有显著影响(P>0.05);对孤雌激活卵裂率和克隆胚胎卵裂率也没有显著影响(P>0.05);但却显著提高了孤雌激活胚胎的囊胚率和囊胚细胞数,并且显著提高了克隆胚胎的囊胚率;当添加量为100ng/mL时,克隆囊胚的细胞数显著升高.另外,研究表明,瘦素很可能具有提高克隆胚胎移植妊娠率和妊娠到期率的作用. 展开更多

关键词 瘦素 卵母细胞 体外成熟 体细胞核移植 猪

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季节对体外成熟卵母细胞的发育能力的影响 被引量：2

7

作者 张坤 张运海 +6 位作者 马育芳 潘登科 卫恒习 王少华 李燕 戴蕴平 李宁 《广西农业生物科学》 CAS CSCD 2006年第B09期178-179,共2页

猪的卵母细胞对外界环境非常敏感，造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一。猪卵脆弱的主要原因是其胞质中含有大量的脂肪滴，但目前其具体生物学功能还不清楚。众所周知，猪的繁殖表现和环境密切相关，例如，... 猪的卵母细胞对外界环境非常敏感，造成猪的胚胎学相关研究是家畜繁殖学研究领域中最困难的方面之一。猪卵脆弱的主要原因是其胞质中含有大量的脂肪滴，但目前其具体生物学功能还不清楚。众所周知，猪的繁殖表现和环境密切相关，例如，温度、湿度、光照等。本研究目的是描述季节的变化对体外成熟卵母细胞发育能力的影响。连续两年从当地屠宰场获取初情期前猪卵巢，抽取猪卯丘卵母细胞复合体，并在不含BSA的NCSU-23（添加10ng／mL： EGF，10ng／mL leptin，0．57mmol／Lcysteine，10IU／mLPMSG和101U／mLhCG）中培养44h，然后用透明质酸酶脱去卵丘。部分卵母细胞经过电击进行孤雌激活，部分卵母细胞用来进行体细胞核移植。对于猪体细胞核移植，使用长白猪胎儿成纤维细胞做为核供体，上述脱去卵丘的卵母细胞作为胞质供体。克隆胚和孤雌胚在添加4mg／mL的BSA液滴中培养，第2天和第6天分别计算卵裂和囊胚率（D0：融合或激活的当天）。其中每个实验至少重复3次，所有实验都经过SPSS（13．0）统计分析。比较了不同季节每对卵巢获得A级卵（外包3层以上致密的卵丘细胞并且卵胞质均匀的卵母细胞为A级卵）和B级卵（外包2～3层卵丘细胞并且胞质均匀的卵母细胞为B级卵）的数量以及卵母细胞核成熟的比例（实验1），统计分析了不同季节孤雌（实验2）和核移植（实验3）胚胎发育能力的差异。实验1中发现春季（3～5月）COCs／ovarypairs的比例最高[7．6±3．5（春）vs6．4±3．3（夏），6．7±2．9（秋），6．7±3．4（冬），P〈0．05]。然而，没有发现卵母细胞的MⅡ百分比有显著性差异[75．3％±3．3％（春），73．59／5±2．3％（夏），73．0％±4．2％（秋），76．5％±6．79／5（冬），P〈0．05]。实验2中观察到夏季孤雌胚胎的囊胚率显著性降低[10．2％±2．7％（春）vs27．29／5±3．5％（夏），24．2％±3．29／5（秋），22．3％±3．4％（冬），P〈0．05]。实验3，猪体细胞克隆胚胎在春季囊胚率获得提高[1e．2％±1．3％（春）VS10．3±1．1％（秋），8．1±1．4％（冬），P〈0．05]。以上结果表明，季节变化影响体外成熟卵母细胞的发育能力。 展开更多

关键词 猪 体外成熟 卵母细胞

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低氧对牛体细胞体外增殖的影响 被引量：1

8

作者 李松 丁方荣 +7 位作者 王海萍 王莉莉 李京 郑敏 王美利 王超 戴蕴平 朱士恩 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期991-996,共6页

本研究通过比较常氧(20%)和低氧(5%)环境下培养牛体细胞的生长效果,进而探讨低氧对牛体细胞体外增殖的影响。选用牛的3种常用核移植供体细胞(胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、卵丘颗粒细胞)分别在常氧和低氧2种培养环境下进行连续... 本研究通过比较常氧(20%)和低氧(5%)环境下培养牛体细胞的生长效果,进而探讨低氧对牛体细胞体外增殖的影响。选用牛的3种常用核移植供体细胞(胎儿成纤维细胞、胎儿输卵管上皮细胞、卵丘颗粒细胞)分别在常氧和低氧2种培养环境下进行连续传代培养和细胞克隆培养,并对其倍增水平和细胞克隆形成效率作比较分析。结果显示,5%的低氧环境对这3种细胞的体外增殖均有促进效果,而且各细胞的增殖水平(50.61±2.47、16.35±0.43、43.38±0.84)均显著高于常氧组(27.42±0.23、12.14±0.83、32.76±1.53,P<0.01)。以500个·皿-1(直径100mm)的细胞浓度接种培养的情况下,低氧培养的胎儿输卵管上皮细胞的克隆形成效率((53.05±4.62)%)显著高于常氧组((36.68±5.68)%)(P<0.01),而低氧组胎儿成纤维细胞和卵丘颗粒细胞获得的细胞克隆数只是略多于常氧组,差异并不显著(P>0.05)。当以1个.孔-1的细胞浓度接种于96孔板培养时,低氧组各类细胞的单细胞克隆形成效率((21.60±2.37)%、(22.29±5.42)%、(27.92±3.69)%)显著高于常氧组((12.01±1.42)%、(7.92±2.86)%、(10.49±3.07)%)(P<0.01或P<0.05)。将体外培养条件的常氧含量(20%)调减至更接近体内生理状况的低氧含量(5%)可以延长牛体细胞增殖寿命和提高单细胞克隆形成效率,对细胞生长有很好的促进作用。 展开更多

关键词 低氧 牛体细胞 体外增殖

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转基因和再克隆对克隆胚胎细胞凋亡的影响 被引量：1

9

作者 孙国杰 李荣 +6 位作者 戴蕴平 王海平 王莉莉 刘颖 丁方荣 卫恒习 李宁 《自然科学进展》 北大核心 2009年第3期266-271,共6页

细胞凋亡在着床前胚胎发育过程中发挥着重要作用,胚胎凋亡检测能为获得高质量的体细胞克隆胚胎提供有益信息,进而有助于提高克隆效率.用原位末端标记法对牛的转基因克隆和转基因再克隆囊胚进行了细胞凋亡检测,再克隆囊胚是利用转基因克... 细胞凋亡在着床前胚胎发育过程中发挥着重要作用,胚胎凋亡检测能为获得高质量的体细胞克隆胚胎提供有益信息,进而有助于提高克隆效率.用原位末端标记法对牛的转基因克隆和转基因再克隆囊胚进行了细胞凋亡检测,再克隆囊胚是利用转基因克隆牛的体细胞作为供体细胞进行体细胞核移植后获得的第二代克隆胚胎.结果表明转基因克隆胚胎的囊胚发育率显著低于非转基因克隆胚胎的囊胚发育率,而转基因克隆囊胚的细胞凋亡指数显著高于非转基因克隆胚胎的细胞凋亡指数.此外,转基因再克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数与非转基因克隆胚胎的囊胚发育率和胚胎细胞凋亡指数相比差异性不显著.结果表明早期的转基因克隆胚胎发育能力的减弱可能是由于供体细胞的基因转染和药物筛选过程导致的,而再克隆对其早期胚胎的发育能力没有负面影响. 展开更多

关键词 凋亡 转基因克隆囊胚 转基因再克隆囊胚 牛

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“自我剪切”2A肽介导的Δ-12和ω-3脂肪酸脱氢酶以及过氧化氢酶在转基因小鼠肌肉表达研究

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作者 方锐 彭云乾 +1 位作者 郑敏 孟庆勇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2012年第2期175-180,共6页

哺乳动物因为缺乏Δ-12和ω-3脂肪酸脱氢酶,不能自身合成必需的多不饱和脂肪酸.目前,通过转基因技术在哺乳动物体内表达ω-3脂肪酸脱氢酶,能将长链的n-6多不饱和脂肪酸转化成n-3多不饱和脂肪酸,造成体内长链的n-6多不饱和脂肪酸含量显... 哺乳动物因为缺乏Δ-12和ω-3脂肪酸脱氢酶,不能自身合成必需的多不饱和脂肪酸.目前,通过转基因技术在哺乳动物体内表达ω-3脂肪酸脱氢酶,能将长链的n-6多不饱和脂肪酸转化成n-3多不饱和脂肪酸,造成体内长链的n-6多不饱和脂肪酸含量显著减低.本研究通过自我剪切2A肽介导Δ-12和ω-3脂肪酸脱氢酶(FAT-2和FAT-1)以及人过氧化氢酶(human catalase,hCAT)在小鼠的肌肉同时表达.结果表明,转基因小鼠肌肉中长链n-3多不饱和脂肪酸含量提高2.6倍,长链n-6多不饱和脂肪酸含量没有显著变化,而n-6/n-3比例显著降低(P<0.01).同时蛋白质印迹检测到人过氧化氢酶hCAT在小鼠的肌肉组织中表达,且过氧化氢酶活性比野生型小鼠显著提高(P<0.01). 展开更多

关键词 多不饱和脂肪酸 Δ-12脂肪酸脱氢酶 ω-3脂肪酸脱氢酶 过氧化氢酶

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具有乳腺导管再生能力的小鼠乳腺原基细胞群黏附因子的表达特点

11

作者 宋嘉哲 薛恺 +1 位作者 李松 李宁 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2010年第5期490-495,共6页

乳腺干细胞是研究器官形成、细胞增殖、分化、生存和凋亡等信号通路的理想模型,而近来的研究发现许多成体干细胞的特异性表面标记都与细胞黏附分子(celladhesion molecule,CAM)家族相关.因此,研究胚胎期乳腺干/祖细胞群的黏附分子基因... 乳腺干细胞是研究器官形成、细胞增殖、分化、生存和凋亡等信号通路的理想模型,而近来的研究发现许多成体干细胞的特异性表面标记都与细胞黏附分子(celladhesion molecule,CAM)家族相关.因此,研究胚胎期乳腺干/祖细胞群的黏附分子基因表达特点,对于纯化和鉴定胚胎期乳腺干/祖细胞具有重要指导意义.用成年小鼠乳腺上皮干细胞的标记CD24和CD49f来分选小鼠胚胎期14天乳腺原基细胞群,发现CD24+和CD49f+双阳性的乳腺原基细胞包含两个细胞群:CD24hiCD49f+细胞群和CD24medCD49f+细胞群.它们占乳腺原基总细胞的比例分别为16%和47%.在随后的细胞培养实验和体内移植再生实验中发现,CD24medCD49f+细胞群可以贴壁,而且具有再生乳腺导管的能力,相反,CD24hiCD49f+细胞群既不能贴壁也不具有移植再生能力.这些结果表明,这两个细胞群分别代表不同的细胞类型,而CD24medCD49f+细胞群有可能包含具有自我更新能力的乳腺原基干/祖细胞.挑选了可能与乳腺相关的19个黏附分子,并对这两群细胞进行了定量PCR检测.结果表明,具有乳腺导管重建能力的CD24medCD49f+细胞群的黏附分子基因表达明显区别于CD24hiCD49f+细胞群,而且其中几个与成体干细胞相关的标记基因在CD24medCD49f+细胞群中的表达显著高于CD24hiCD49f+细胞群. 展开更多

关键词 乳腺原基 乳腺干细胞 细胞黏附分子 再生

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评价与改良牛乳品质的研究最终报告

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作者 王建武 隋顺超 王慧敏 《科技创新导报》 2016年第2期162-163,共2页

该研究利用蛋白质组学的方法对中国荷斯坦奶牛、美国荷斯坦奶牛、娟姗牛和中国水牛的牛奶蛋白质进行了定性及定量的研究,其中包括初乳和常乳的牛奶乳清蛋白质及乳脂肪球膜蛋白质进行了细致的研究,建立牛乳清蛋白差异表达谱、乳脂肪球膜... 该研究利用蛋白质组学的方法对中国荷斯坦奶牛、美国荷斯坦奶牛、娟姗牛和中国水牛的牛奶蛋白质进行了定性及定量的研究,其中包括初乳和常乳的牛奶乳清蛋白质及乳脂肪球膜蛋白质进行了细致的研究,建立牛乳清蛋白差异表达谱、乳脂肪球膜差异蛋白质表达谱,挖掘与乳品质改良相关的功能性蛋白,揭示不同奶牛品种乳蛋白质合成、分泌信号传导通路的差异,为牛乳品质的改良提供素材,同时通过牛乳蛋白质组技术平台和牛乳蛋白质数据库的建立,进行转基因牛奶蛋白质表达差异的食品安全研究。在4种牛乳初乳和常乳的乳清及乳脂肪球膜蛋白质中,利用高效液相色谱和质谱联用的方法,鉴定出1148种蛋白质;将娟珊牛与水牛中表达的全部蛋白质分别与荷斯坦牛进行比较,在水牛中特异表达的蛋白质有132种,在娟珊牛中特异表达的蛋白质有131种。对这些特异表达的蛋白质结合4种牛泌乳特性和牛奶的特性进行分析,发现了大量与乳脂肪合成分泌相关的蛋白质。采用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)定量蛋白质组学质谱技术对这些蛋白质进行表达量的检测。对中国荷斯坦牛、美国荷斯坦牛、娟珊牛和水牛中初乳乳清和常乳乳清中168种具有定量结果的蛋白进行聚类及主成分分析,并根据聚类及主成分分析比较美国荷斯坦牛、娟珊牛及水牛与中国荷斯坦牛蛋白表达差异之间的相关性。在乳脂肪球膜蛋白质i TRAQ实验中,在8种乳脂肪球膜蛋白质样品中共有710种蛋白质具有定量的结果。我们以中国荷斯坦牛牛乳蛋白质相对表达量为本底,其他3种牛奶蛋白质相对含量与其比较。通过对差异表达蛋白的鉴定与功能分析我们找到了多个与脂代谢与炎症反应及其他疾病相关的蛋白,这些蛋白可以作为候选基因转入牛乳中,提高牛奶品质或增强奶牛抗病性,从而能够形成高品质牛奶生产种群。经建立了从样品收集、前期处理、高效液相色谱与质谱联用(LC-MS/MS)分析到后期样品质谱数据的分析处理等一整套全面系统的对乳制品进行蛋白质组学分析的流程。通过已经建立的乳蛋白质组学技术平台,我们还完成了对一种克隆牛奶、3种转基因克隆牛奶的乳清蛋白质表达谱的分析,为转基因牛乳食品安全评价提供了科学数据,也为转基因生物安全评价提供了技术分析手段。 展开更多

关键词 乳清蛋白差异表达谱 乳脂肪球膜差异蛋白质表达谱 功能性蛋白

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化学激活和季节对克隆猪出生率的影响 被引量：4

13

作者 马育芳 卫恒习 +9 位作者 李燕 李秋艳 方锐 赵蕊 张坤 薛恺 娄颜坤 戴蕴平 连林生 李宁 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2009年第4期384-391,共8页

为了解化学激活对克隆猪出生效率的影响,研究了体外成熟的猪卵母细胞被激活恢复减数分裂到克隆猪出生的整个过程.首先研究了电激活(Ele),Ele+CHX+CB和Ele+6-DMAP3种激活方法对猪卵母细胞孤雌激活(parthenogenetic,PA)和核移植(nucleartr... 为了解化学激活对克隆猪出生效率的影响,研究了体外成熟的猪卵母细胞被激活恢复减数分裂到克隆猪出生的整个过程.首先研究了电激活(Ele),Ele+CHX+CB和Ele+6-DMAP3种激活方法对猪卵母细胞孤雌激活(parthenogenetic,PA)和核移植(nucleartransfer,NT)重构胚体外发育的影响.比较了Ele或Ele+CHX+CB激活方法对克隆猪出生效率的影响.实验中单独列出了PA胚的扩张囊胚率或NT优质囊胚率来代表囊胚的质量.结果表明:化学联合激活提高了PA的囊胚率和扩张囊胚率,但对PA胚的卵裂率和囊胚细胞数没有显著影响(P>0.05).Ele+6-DMAP对PA胚的囊胚率和扩张囊胚率有显著提高(P<0.05),但对NT胚的囊胚率和优质囊胚率没有提高甚至降低了NT胚的发育.Ele+CHX+CB虽然提高了NT胚的囊胚率(P<0.05),但对优质囊胚率没有影响.Ele+CHX+CB激活方法使克隆猪出生率有所提高但不显著.本文还研究了季节对猪孤雌发育和克隆猪出生率的影响.结果表明,春季收集的猪卵母细胞使用3种激活方法卵母细胞的孤雌囊胚率均高于冬季收集的猪卵母细胞的囊胚率.春季和冬季进行移植,克隆猪出生率没有区别.综上,在PA中获得的结果与NT胚中获得的结果不一定完全匹配,说明孤雌激活和重构胚的激活机制还是有区别的.化学联合激活虽然能提高囊胚率,但它的作用相当于降低囊胚形成的门槛,却不是从本质上改变囊胚发育能力,因此不能显著提高克隆猪出生效率.春季收集的卵母细胞在体外培养中的发育能力好于冬季收集的卵母细胞,但季节对克隆猪出生率没有显著影响. 展开更多

关键词 孤雌激活 化学激活 体细胞核移植 克隆猪 季节

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