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作物基因工程湖南省重点实验室建设与管理的实践与思考
1
作者 彭艳 熊兴华 《教育教学论坛》 2014年第18期24-25,共2页
以当前作物基因工程湖南省重点实验室建设的现状为基础,根据学校实际情况,确定了实验室建设与发展的目标,总结了自实行首席科学家制以来取得的成效。并就如何能使实验室的建设和管理更科学、更规范,提出了一些看法。
关键词 实验室 建设与管理 思考
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Bt毒蛋白基因与植物抗虫基因工程 被引量：45
2
作者 林良斌 官春云 《生物工程进展》 CSCD 1997年第2期51-55,共5页
Ｂｔ毒蛋白基因与植物抗虫基因工程林良斌官春云（作物基因工程湖南省重点实验室，湖南农业大学长沙４１０１２８）在世界范围内，害虫造成的损失约占农作物总收获量的１３％，每年大约损失数千亿美元。目前，防治害虫仍然是主要地使用... Ｂｔ毒蛋白基因与植物抗虫基因工程林良斌官春云（作物基因工程湖南省重点实验室，湖南农业大学长沙４１０１２８）在世界范围内，害虫造成的损失约占农作物总收获量的１３％，每年大约损失数千亿美元。目前，防治害虫仍然是主要地使用化学农药，但随着时间推移，由此而引... 展开更多
关键词 植物基因工程 抗虫基因工程 BT毒蛋白基因
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基因工程技术在花卉中的应用 被引量：3
3
作者 向建华 陈信波 周小云 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第1期84-88,共5页
近年来花卉产业得到了蓬勃发展,不断成熟的基因工程技术为花卉的品质改良提供了新的思路,也为花卉产业化发展带来了新的机遇。本文综述了影响植物花色、花型、花期等相关基因及转基因的研究,展望了基因工程技术在花卉育种和产业化应用... 近年来花卉产业得到了蓬勃发展,不断成熟的基因工程技术为花卉的品质改良提供了新的思路,也为花卉产业化发展带来了新的机遇。本文综述了影响植物花色、花型、花期等相关基因及转基因的研究,展望了基因工程技术在花卉育种和产业化应用的发展前景。 展开更多
关键词 基因工程 基因克隆 花卉 产业化
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基因工程技术在棉花品种改良中的应用 被引量：1
4
作者 吴小月 熊兴华 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 1998年第6期494-498,共5页
综述了基因工程技术在棉花品种改良中的应用，特别是转Ｂｔ基因抗虫棉的研究和发展概况，并探讨了目前存在的问题及展望．
关键词 棉花 基因工程 转BT基因抗虫棉 品种改良
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马铃薯转基因工程研究现状 被引量：12
5
作者 张琨 袁利兵 +1 位作者 彭志红 任春梅 《湖南农业科学》 2011年第3期6-8,11,共4页
随着生物技术的高速发展和基因工程的日益完善,在马铃薯育种中利用转基因技术来改良品种特性,提高作物抗病虫害的能力,增加生物产量,将会更为直接便捷地解决常规育种无法解决的问题。综述了近十年来转基因工程在马铃薯育种上的应用,为... 随着生物技术的高速发展和基因工程的日益完善,在马铃薯育种中利用转基因技术来改良品种特性,提高作物抗病虫害的能力,增加生物产量,将会更为直接便捷地解决常规育种无法解决的问题。综述了近十年来转基因工程在马铃薯育种上的应用,为马铃薯产业的大力发展提供理论依据。 展开更多
关键词 马铃薯 转基因工程 生物安全性
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分子标记辅助选择Pigm基因改良水稻不育系桃农1A的苗瘟抗性 被引量：3
6
作者 周庚 黄俊 +10 位作者 邹玉莹 邓吉奇 李家鑫 谌强 郭成龙 李博文 车凡昊 姚威 黄希来 刘金灵 刘雄伦 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期39-46,共8页
为了改良桃农1B和桃农1A的苗瘟抗性,以携带广谱持久抗稻瘟病基因Pigm的中国地方水稻品种谷梅4号为供体亲本,先后以三系保持系桃农1B及其不育系桃农1A为受体亲本,利用与Pigm紧密连锁共显性DNA标记T9E3开展辅助选择育种。T9E3在桃农1B或桃... 为了改良桃农1B和桃农1A的苗瘟抗性,以携带广谱持久抗稻瘟病基因Pigm的中国地方水稻品种谷梅4号为供体亲本,先后以三系保持系桃农1B及其不育系桃农1A为受体亲本,利用与Pigm紧密连锁共显性DNA标记T9E3开展辅助选择育种。T9E3在桃农1B或桃农1A基因组中的PCR扩增条带约为2 000 bp,而对谷梅4号基因组的扩增产物大小为926 bp,多态性稳定;采用来自国内外不同稻区的32份稻瘟菌菌株室内接种苗瘟,桃农1B和桃农1A抗性频率均为9.38%,谷梅4号与改良系抗性频率均为90.63%;田间天然病圃鉴定桃农1B和桃农1A苗瘟8级,而改良系和供体亲本谷梅4号苗瘟均为0级。通过T9E3辅助选择、田间病圃筛选和室内接种鉴定,初步获得了3份高抗稻瘟病的改良不育系(桃农1A-Pigm-1—桃农1A-Pigm-3)及其保持系(桃农1B-Pigm-1—桃农1B-Pigm-3),进一步通过不育特性、农艺性状与产量结构调查分析,从中遴选出1个高抗稻瘟病、不育性稳定、包颈率低、农艺产量性状优良的优异不育系桃农1A-Pigm-2及其配套保持系桃农1B-Pigm-2。桃农1A-Pigm-2不育度和不育株率均为100%,典败花粉约占60%、圆败花粉约占40%,柱头外露率高达71.1%,包颈粒率仅为33.6%;桃农1B-Pigm-2播始历期为69 d,株高76.2 cm,主穗穗长28.1 cm,单株有效穗数15.8穗,单穗总颖花数115.3个,千粒质量27.7 g。实现了桃农1A和桃农1B苗瘟抗性及其他性状的综合改良,为三系杂交水稻育种应用创制了新的亲本材料。 展开更多
关键词 水稻 稻瘟病抗性改良 分子标记辅助选择 Pigm 桃农1A 桃农1B
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根癌农杆菌介导TA29-Barnase基因转化甘蓝型油菜的研究 被引量：41
7
作者 何业华 熊兴华 +8 位作者 官春云 李栒 林良斌 陈社员 刘忠松 李文彬 钟军 刘春林 周小云 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期615-620,共6页
经比较影响农杆菌介导Barnase嵌合基因转化甘蓝型油菜的各种因素后 ,建立了高效稳定的转基因实验体系。按该体系 ,甘蓝型油菜“湘油 15”子叶柄预培养 2 0h ,OD60 0 为 0 5农杆菌菌液感染后共培养 3d ,在MS +2mg·L-1AgNO3 +4 5mg&... 经比较影响农杆菌介导Barnase嵌合基因转化甘蓝型油菜的各种因素后 ,建立了高效稳定的转基因实验体系。按该体系 ,甘蓝型油菜“湘油 15”子叶柄预培养 2 0h ,OD60 0 为 0 5农杆菌菌液感染后共培养 3d ,在MS +2mg·L-1AgNO3 +4 5mg·L-1BA +10mg·L-1Km +30 0mg·L-1Carb培养基上进行选择 ,转化率为 8 8% ,PCR检测和Southern杂交检测证明外源基因已整合了甘蓝型油菜基因组中。 展开更多
关键词 根癌农杆菌介导 TA29-Barnase基因 基因转化 甘蓝型油菜 雄性不育
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甘蓝型油菜FAD2基因cDNA片段的克隆和序列分析 被引量：18
8
作者 熊兴华 官春云 +3 位作者 李栒 王学军 周小云 李家洋 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期97-99,共3页
为了提高油菜的油酸含量 ,继而培育高油酸油菜品种 ,从甘蓝型油菜成熟叶片中分离总 RNA,经反转录合成 c DNA第一条链 ,以此为模板进行多聚酶链式反应 ,产物为一长 6 5 4 bp的 DNA片段 .经克隆和序列测定表明 ,其核苷酸序列与 Gen Bank... 为了提高油菜的油酸含量 ,继而培育高油酸油菜品种 ,从甘蓝型油菜成熟叶片中分离总 RNA,经反转录合成 c DNA第一条链 ,以此为模板进行多聚酶链式反应 ,产物为一长 6 5 4 bp的 DNA片段 .经克隆和序列测定表明 ,其核苷酸序列与 Gen Bank中甘蓝型油菜 FAD2基因在比较区的同源性达 10 0 % . 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 FAD2基因 cDAN片段 基因克隆 序列分析 PCR 品质改良 油菜脱氢酶
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转基因抗虫油菜中Bt杀虫蛋白基因稳定遗传和高效表达及抗虫性研究 被引量：20
9
作者 林良斌 官春云 +2 位作者 周小云 何业华 杨志新 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期175-178,共4页
通过对转 Bt杀虫蛋白基因油菜植株的后代进行卡那霉素抗性分析和 PCR技术检测 ,结果表明 :Bt杀虫蛋白基因是以单拷贝、杂合地整合到转基因植株 (T0 1、T0 2、T0 3、T0 5、T0 6、T0 7、T0 8)的基因组中 ,并稳定地遗传。EL ISA检测表明 :... 通过对转 Bt杀虫蛋白基因油菜植株的后代进行卡那霉素抗性分析和 PCR技术检测 ,结果表明 :Bt杀虫蛋白基因是以单拷贝、杂合地整合到转基因植株 (T0 1、T0 2、T0 3、T0 5、T0 6、T0 7、T0 8)的基因组中 ,并稳定地遗传。EL ISA检测表明 :在第 3～第 9叶期 Bt杀虫蛋白基因在转基因油菜植株中高效地表达 ,Bt杀虫蛋白的表达量为 170～ 2 6 0 ng/ 2 5mg鲜叶 ,占植物可溶性蛋白的 0 .0 6 7%～ 0 .10 5 % ,其抗虫效果高达 72 .0 %～ 94 .4 %。但从第 11叶期后 Bt杀虫蛋白表达量显著地降低 ,只有 7～ 5 0 ng/ 2 5 mg鲜叶 ,占植物可溶性蛋白的 0 .0 0 3%～ 0 .0 2 %。 展开更多
关键词 转基因油菜 Bt杀虫蛋白基因 抗虫性 遗传转化 卡那霉素 PCR技术
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基因枪法向甘蓝型油菜转移反义FAD2基因的研究 被引量：17
10
作者 熊兴华 官春云 +4 位作者 李栒 江巨鳌 邬克彬 王学军 周小云 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期188-191,共4页
为了获得高油酸油菜品种,以湘油15号子叶柄为受体材料,用基因枪法,将反义油酸脱饱和酶FAD2基因连在种子特异表达载体上后导入油菜,使用可裂膜压力7700kPa,样品室真空度9.5×104Pa,质粒质量浓度为1.0μg/μL,靶距9cm,通过对子叶柄的... 为了获得高油酸油菜品种,以湘油15号子叶柄为受体材料,用基因枪法,将反义油酸脱饱和酶FAD2基因连在种子特异表达载体上后导入油菜,使用可裂膜压力7700kPa,样品室真空度9.5×104Pa,质粒质量浓度为1.0μg/μL,靶距9cm,通过对子叶柄的预处理48h,高渗处理1h,获得8株再生植株.经PCR与PCR-Southern杂交检测,其中有2株为转化株,证明反义FAD2基因已整合到湘油15号基因组中. 展开更多
关键词 油酸脱饱和酶基因 转化 油菜 基因枪
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利用Pi9基因序列标记辅助选择改良籼稻稻瘟病抗性 被引量：22
11
作者 文婷 梁毅 +6 位作者 江南 李智强 刘金灵 杨婷婷 戴良英 王国梁 刘雄伦 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期262-266,共5页
利用广谱抗稻瘟病基因Pi9基因序列设计的特异分子标记Pi9–a,通过回交育种和分子标记辅助选择技术,改良8份受体水稻材料(丰源B、Ⅱ32B、天龙香103、香丰187、明恢63、轮回422、R747、25H003)的稻瘟病抗性。结果表明:分子标记Pi9–a对8... 利用广谱抗稻瘟病基因Pi9基因序列设计的特异分子标记Pi9–a,通过回交育种和分子标记辅助选择技术,改良8份受体水稻材料(丰源B、Ⅱ32B、天龙香103、香丰187、明恢63、轮回422、R747、25H003)的稻瘟病抗性。结果表明:分子标记Pi9–a对8份受体亲本与Pi9供体亲本75–1–127间进行的多态性检测中,除香丰187外,其余7个组合间均存在稳定明显的多态;对4个BC1F1群体进行随机取样的基因型和表型鉴定中,Pi9–a对抗稻瘟病表型选择的效率均为100%。 展开更多
关键词 水稻 稻瘟病 Pi9基因 标记辅助选择 分子育种
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植物GPATs基因研究进展 被引量：16
12
作者 刘聪 肖旦望 +4 位作者 施春霖 胡学芳 邬克彬 官春云 熊兴华 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1352-1359,共8页
甘油-3-磷酸酰基转移酶(Glycerol-3-phosphate acyltransferase,GPAT)是三酰甘油(Triacylglycerol,TAG)生物合成的限速酶,催化TAG生物合成的起始步骤。GPATs主要负责将脂肪酰基从酰基-酰基载体蛋白(acyl-ACP)或酰基辅酶A(acyl-CoA)上转... 甘油-3-磷酸酰基转移酶(Glycerol-3-phosphate acyltransferase,GPAT)是三酰甘油(Triacylglycerol,TAG)生物合成的限速酶,催化TAG生物合成的起始步骤。GPATs主要负责将脂肪酰基从酰基-酰基载体蛋白(acyl-ACP)或酰基辅酶A(acyl-CoA)上转移到甘油-3-磷酸的(Glycerol-3-phosphate,G3P)sn-1位置上。有些成员还具有sn-2酰基转移活性。目前已经在多种植物中克隆得到了GPAT基因。这些GPAT基因编码的酶主要分为三类,它们在细胞中分别定位于质体、线粒体和内质网上。这些酶参与三酰甘油、几丁质和软木脂等多种脂质的生物合成,在植物的生长发育中发挥着非常重要的作用。文章介绍了植物GPAT基因的染色体定位和基因结构以及GPAT酶的亚细胞定位、sn-2酰基转移特异性、GPAT酶的底物选择性及其生理功能的最新研究进展。 展开更多
关键词 GPAT基因 底物选择性 sn-2特异性 GPAT功能
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甘蓝型油菜fad2基因片段的克隆和反义表达载体的构建 被引量：14
13
作者 熊兴华 官春云 +3 位作者 李栒 王学军 周小云 李家洋 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期1-4,共4页
从甘蓝型油菜湘油 15号基因组中分离总DNA ,以此为模板进行多聚酶链式反应 (PCR)。PCR产物与克隆载体 pGEM -TEasy连接 ,经NotI酶切后插入 pBluescriptIISK +。序列测定表明 ,PCR产物为 6 5 4bp的DNA片段 ,fad2基因片段只朝 pBluescript... 从甘蓝型油菜湘油 15号基因组中分离总DNA ,以此为模板进行多聚酶链式反应 (PCR)。PCR产物与克隆载体 pGEM -TEasy连接 ,经NotI酶切后插入 pBluescriptIISK +。序列测定表明 ,PCR产物为 6 5 4bp的DNA片段 ,fad2基因片段只朝 pBluescriptIISK +的T3-T7方向插入 ,经BamHI和SacI酶切后插入表达载体质粒pBI12 1相同的酶切位点 ,构建反义 fad2表达载体。 展开更多
关键词 FAD2基因 反义表达载体 甘蓝型油菜 PCR 基因克隆
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根癌农杆菌介导反义ACC合成酶基因对枣树的转化 被引量：18
14
作者 何业华 熊兴华 +4 位作者 林顺权 吴会桃 林良斌 何钢 陈建华 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期33-36,共4页
以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产... 以枣树鲜食品种鸡蛋枣为材料,通过根癌农杆菌介导ACC合成酶反义基因转化,得到了转基因植株.预培养1d的枣树幼嫩茎段经根癌农杆菌感染后共培养3d,转移至分化选择培养基MS(1/2NO3)+0.15mg/LNAA+1.75mg/LZT+10mg/LKm+500mg/LCarb上诱导产生不定芽,将抗Km不定芽先后在15mg/LKm的生长、增殖和生根培养基上继续选择,诱导成完整植株.经PCR检测从抗Km植株中选择到7株阳性植株,进一步经Southern杂交证实有6株外源基因已整合到了枣树基因组中.Real timePCR定量检测表明,ACC合成酶反义基因在5株转基因植株中得到表达. 展开更多
关键词 枣树 ACC合成酶反义基因 转化
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亚麻4CL基因克隆及RNAi遗传转化 被引量：8
15
作者 龙松华 李翔 +6 位作者 陈信波 乔瑞清 邓欣 邱财生 郭媛 郝冬梅 王玉富 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期2405-2411,共7页
该实验以前期克隆的亚麻4CL基因片段为靶序列,利用RACE方法克隆其全长cDNA序列(1 957bp),GenBank登录号为KC832864,该序列含有1 650bp完整的开放阅读框。系统进化树分析表明,亚麻4CL基因与盐芥4CL基因亲缘关系较近,而与禾本科的水稻(Ory... 该实验以前期克隆的亚麻4CL基因片段为靶序列,利用RACE方法克隆其全长cDNA序列(1 957bp),GenBank登录号为KC832864,该序列含有1 650bp完整的开放阅读框。系统进化树分析表明,亚麻4CL基因与盐芥4CL基因亲缘关系较近,而与禾本科的水稻(Oryza sativa)等亲缘关系最远。其编码蛋白预测分析结果显示,亚麻4CL基因由549个氨基酸组成,相对分子量为60kD,等电点为5.3,蛋白质二级结构以无规则卷曲比例最多,其次是α-螺旋。以亚麻4CL基因编码区413bp靶标序列作为干扰区段,扩增其正反向基因片段,构建植物干扰表达载体p1301M-4CL。通过农杆菌介导转入亚麻,DNA及RNA水平上分子检测发现,RNAi结构已经转入亚麻中,并显著降低了其4CL基因的表达量。 展开更多
关键词 亚麻 木质素 4CL基因 序列分析 RNAI载体 遗传转化
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水稻抗稻瘟病基因的定位与克隆研究进展 被引量：23
16
作者 江南 刘雄伦 +1 位作者 戴良英 王国梁 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第10期270-275,共6页
由稻瘟病菌引起的稻瘟病是一种真菌性病害,又名稻热病,是水稻最主要的病害之一,它是水稻生产的主要限制因子之一,对世界水稻生产和粮食安全带来了极大的影响。克隆和利用稻瘟病基因被认为是最为经济、有效和环保的策略。该文主要就近年... 由稻瘟病菌引起的稻瘟病是一种真菌性病害,又名稻热病,是水稻最主要的病害之一,它是水稻生产的主要限制因子之一,对世界水稻生产和粮食安全带来了极大的影响。克隆和利用稻瘟病基因被认为是最为经济、有效和环保的策略。该文主要就近年来水稻抗稻瘟病基因定位与克隆以及抗瘟基因的分子结构特点等方面取得的研究进展进行了综述,同时对抗瘟基因在水稻抗病育种中的应用提出了展望。 展开更多
关键词 水稻 稻瘟病 抗性基因 定位与克隆 分子结构
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用磁珠富集法分离亚麻基因组微卫星分子标记 被引量：16
17
作者 邓欣 陈信波 +5 位作者 龙松华 王孝纯 高原 何东锋 王进 王玉富 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期2099-2105,共7页
应用Dynal磁珠-生物素标记的微卫星探针(CT)15与亚麻基因组DNA酶切片段杂交,捕获300～1500bp含有微卫星序列的DNA片段,连接到pMD18-T载体中,构建富集微卫星序列的小片段插入文库。利用接头引物和根据微卫星核心序列设计的引物VRV(CT)15... 应用Dynal磁珠-生物素标记的微卫星探针(CT)15与亚麻基因组DNA酶切片段杂交,捕获300～1500bp含有微卫星序列的DNA片段,连接到pMD18-T载体中,构建富集微卫星序列的小片段插入文库。利用接头引物和根据微卫星核心序列设计的引物VRV(CT)15使用PCR方法直接对文库筛选,从422个转化子中获得了104个阳性克隆,对其进行测序分析,获得了97个微卫星序列,微卫星序列的富集效率达到22.99%,PCR扩增筛选效率93.27%。对97个微卫星序列进行比对分析,其中51个重复序列的两端序列高度相似,据其设计的特异引物对阳性克隆进行2次筛选,能淘汰相似度高的同类序列,提高筛选亚麻微卫星标记的效率。 展开更多
关键词 亚麻 微卫星 磁珠富集
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甘蓝型油菜2个GPAT6同源基因的克隆与表达分析 被引量：7
18
作者 刘聪 肖旦望 +3 位作者 胡学芳 邬克彬 官春云 熊兴华 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1304-1310,共7页
甘油-3-磷酸酰基转移酶(sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase,GPAT)是三酰甘油生物合成的关键酶,催化三酰甘油合成的起始步骤,在植物中参与调节生长发育、脂质的合成和逆境应答等过程。本试验通过RT-PCR从甘蓝型油菜品种湘油15中... 甘油-3-磷酸酰基转移酶(sn-glycerol-3-phosphate acyltransferase,GPAT)是三酰甘油生物合成的关键酶,催化三酰甘油合成的起始步骤,在植物中参与调节生长发育、脂质的合成和逆境应答等过程。本试验通过RT-PCR从甘蓝型油菜品种湘油15中克隆得到GPAT6基因的2个拷贝,分别命名为BnGPAT6-1(GenBank登录号为KJ000117)和BnGPAT6-2(KC106728)。它们的编码区序列(coding DNA sequence,CDS)均为1506 bp,编码501个氨基酸。预测其蛋白结构N端含有一个类卤酸脱卤酶(haloacid dehalogenase-like hydrolase,HAD-like)活性结构域,C端含有一个溶血磷脂酰基转移酶(lysophospholipid acyltransferase,LPLAT)功能域。蛋白序列比对和进化树分析表明,甘蓝型油菜与白菜(B.rapa)、甘蓝(B.oleracea)、拟南芥(Arabidopsis thaliana)和琴叶拟南芥(A.lyrata)中的GPAT6序列相似性最高。组织表达结果表明BnGPAT6基因在花中的表达量最高,在未成熟的胚中表达量呈先升高后降低的趋势。BnGPAT6的表达受ABA的抑制;在干旱和6-BA胁迫下几乎同时升高;在盐胁迫下,短时间内升高,达到峰值后降低;在水渍条件下没有明显变化。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 甘油-3-磷酸酰基转移酶 基因克隆 表达分析 逆境胁迫
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甘蓝型油菜油酸脱氢酶基因(fad2)多个拷贝的发现及分析 被引量：22
19
作者 肖钢 张宏军 +1 位作者 彭琪 官春云 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1563-1568,共6页
以甘蓝型油菜湘油15为材料,随机挑选56个来自基因组的fad2基因克隆、47个来自幼苗整株的fad2基因cDNA克隆和9个授粉27d后种子中fad2 cDNA克隆进行双向测序。基因组中56个fad2序列的碱基同源性为91.0%～99.9%,从中得到11个差异序列,即11... 以甘蓝型油菜湘油15为材料,随机挑选56个来自基因组的fad2基因克隆、47个来自幼苗整株的fad2基因cDNA克隆和9个授粉27d后种子中fad2 cDNA克隆进行双向测序。基因组中56个fad2序列的碱基同源性为91.0%～99.9%,从中得到11个差异序列,即11个不同的fad2基因拷贝。将其翻译成氨基酸序列发现,6个拷贝在编码区中出现多个终止密码子,另外5个的同源性为90.60%～99.74%,与47个来自幼苗整株的fad2基因cDNA序列进行比较,发现fad2基因没有内含子。从种子中的9个fad2 cDNA克隆序列中找到2个有差异的cDNA,它们的编码区中没有终止密码子,说明在种子中有多个fad2基因表达。基因组中的11个拷贝根据同源性可分成两组,命名为fad2I和fad2II。RT-PCR分析发现在授粉27d的种子中fad2I有较强表达,fad2II没有表达;但在叶片中两者都有表达。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 油酸脱氢酶基因 基因拷贝数 序列差异引物
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甘蓝型油菜WRI1基因cDNA的克隆与序列分析 被引量：7
20
作者 施春霖 刘聪 +3 位作者 肖旦望 陈社员 官春云 熊兴华 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期247-252,共6页
通过RT-PCR方法克隆了甘蓝型油菜湘油15号5个WRI1基因cDNA。测序结果显示,BnWRI1-1大小为1 248 bp,BnWRI1-2和BnWRI1-3大小为1 254 bp,BnWRI1-4、BnWRI1-5大小为1 242 bp;聚类分析结果显示,所克隆WRI1基因cDNA在进化关系上属于AP2/ERF... 通过RT-PCR方法克隆了甘蓝型油菜湘油15号5个WRI1基因cDNA。测序结果显示,BnWRI1-1大小为1 248 bp,BnWRI1-2和BnWRI1-3大小为1 254 bp,BnWRI1-4、BnWRI1-5大小为1 242 bp;聚类分析结果显示,所克隆WRI1基因cDNA在进化关系上属于AP2/ERF转录因子家族,同拟南芥AtWRI1(At3G54320)同处1个分支,并且所克隆基因cDNA来自甘蓝型油菜不同的基因组;通过核苷酸序列比对分析,得到所克隆WRI1基因cDNA单核苷酸变异位点40个;特异性酶切位点分析显示,来源于A基因组的BnWRI1-1、BnWRI1-2、BnWRI1-3第892位与来源于C基因组的BnWRI1-4和BnWRI1-5第880位的核苷酸发生变异,导致Bcl I识别位点的变化;酶切试验结果表明,采用BclI酶可区分甘蓝型油菜的AtWRI1-like WRI1基因的A或C基因组来源。 展开更多
关键词 甘蓝型油菜 WRI1基因 CDNA 序列分析
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