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大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因克隆与表达研究 被引量:6
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作者 杨青 雷旭宇 +4 位作者 许建强 李民 苏志国 安利佳 杨克瑞斯特.杨森 《大连理工大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第2期156-159,共4页
根据同源性设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,并由此推测出其相应的氨基酸序列.将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达.该表达产物经两步柱层析后,进行聚... 根据同源性设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,并由此推测出其相应的氨基酸序列.将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕氏酵母细胞中获得表达.该表达产物经两步柱层析后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,获得单一条带,并表现较强的生色底物活性. 展开更多
关键词 大连蛇岛 蝮蛇 类凝血酶 基因克隆 基因表达 酵母表达系统 氨基酸序列 蛇毒
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基于核孔膜的流程密集化纤维素制酒精实验装置 被引量:1
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作者 肖炘 李佐虎 《膜科学与技术》 CAS CSCD 2000年第1期46-49,共4页
首先依据纤维素制酒精分散、耦合、并行系统对组成其关键结构的中介物质的要求 ,对核孔膜进行了研究 ,在确证其可作为中介物质的基础上 ,根据该系统的设计原则建立了流程密集化纤维素酒精生物转化实验装置 .
关键词 流程密集化 纤维素 核孔膜 同步糖化发酵 乙醇
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大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化(英文) 被引量:15
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作者 杨青 胡学军 +4 位作者 许小明 高晓蓉 安利佳 苏志国 J.C.JANSON 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期390-393,共4页
根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇... 根据同源性分析设计引物 ,通过RT PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因 ,之后将该基因克隆到表达载体 pPIC9K中 ,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中 .经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+ Mut+ 在 5 0 0ml摇瓶中培养 ,甲醇诱导分泌表达 .上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到 :QSepharoseFF和Benzamidine Sepharose 4BCL .与天然蛇毒类凝血酶一致 ,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性 ,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱 .此重组类凝血酶在 37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽 ,但在 0℃下很稳定 .该酶的最适pH为 8 0 . 展开更多
关键词 大连蛇岛 蝮蛇 类凝血酶基因 毕赤酵母 克隆 表达 分离纯化
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纤维素制酒精的分散、耦合、并行系统 被引量:13
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作者 萧炘 李佐虎 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第4期27-29,共3页
生物转化是纤维素制酒精的有效途径。以强化纤维素酒精生物转化过程,降低转化成本为目的,在对该过程深入分析的基础上,提出了纤维素制酒精的分散、耦合、并行系统并阐述了其设计原则与解决方案,有普遍意义。
关键词 纤维素 酒精 生物转化 分散系统 耦合 并行系统
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