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题名人源S100A1蛋白的表达纯化与鉴定
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作者
刘子泉
陈昀
王天辉
徐传香
张娜
刘洪涛
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机构
军事医学科学院卫生学环境医学研究所军事劳动卫生研究室
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出处
《解放军预防医学杂志》
CAS
2011年第4期240-244,共5页
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基金
国家自然科学基金(No.30971421)
天津市自然科学基金(No.10JCYBJC10200)
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文摘
目的构建pBV220-S100A1表达载体,表达并纯化人源S100A1蛋白,为进一步研究人源S100A1蛋白相关的生物学功能及应用于临床诊断奠定基础。方法采用全基因合成法合成人源S100A1基因;通过GeneBank查询人源S100A1蛋白的氨基酸序列,进行序列优化设计,同时引入EcorI和BamHI酶切位点,构建原核表达载体pBV220-S100A1,热应激诱导其在大肠杆菌(E.coli DH5α)中表达,采用离子交换层析法纯化人源S100A1蛋白,最后采用Transwell迁移实验检测所纯化蛋白的生物活性。结果酶切鉴定和测序分析显示,人源S100A1的基因被成功插入pBV220多克隆位点;S100A1的基因片段在pBV220中的插入位点、碱基序列及读码框和终止子的次序完全正确;S100A1的基因序列位于表达载体pBV220的序列下游。经诱导表达和纯化,最终获得了人源S100A1蛋白,且经迁移实验证明,该纯化蛋白具有较高的生物活性。结论成功建立了人源S100A1蛋白表达载体,表达菌株经诱导表达和纯化,获得了高纯度的蛋白。
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关键词
人源S100a1
pbv220-s100a1表达载体
纯化
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Keywords
human S100a1 protein
pbv220-s100a1 expression vector
purification
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分类号
Q51
[生物学—生物化学]
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题名温控表达载体的构建及HIV-1p24的表达与纯化
被引量：2
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作者
王宏伟
金宁一
龚伟
苏忠兰
殷震
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机构
长春农牧大学基因工程实验室
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出处
《武汉大学学报（自然科学版）》
CSCD
1999年第4期505-508,共4页
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基金
国家自然科学基金
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文摘
通过改造原核表达载体ｐ Ｂ Ｖ２２０ 和ｐ Ｅ Ｔ２８，构建出了一种新的通用型温控原核表达载体ｐ Ｖ Ｖ５，该载体携带 Ｐｒ Ｐｌ串联温控启动子以及 Ｈｉｓ Ｔａｇ 的纯化标签，利于目的蛋白的表达与纯化将 Ｈ Ｉ Ｖ１ ｇａｇ 基因的１１４８１８５７ 编码序列分别插入到ｐ Ｖ Ｖ５ｂ、ｐ Ｅ Ｔ２８ｂ 的相应位点，构建了重组表达质粒 ｐ Ｅ Ｇ１ｂ、ｐ Ｂ Ｇ７ｂ，二者在不同受体菌中，表达重组蛋白的量分别占全菌体蛋白总量的 ４２％ 和２８％ 表达产物为融合蛋白并主要以包涵体的形式存在 该蛋白 Ｎ 端与含６ 个组氨酸在内的３０ 个氨基酸残基的多肽相连，利用 Ｉ Ｍ Ａ Ｃ金属螯和层析柱，对包涵体中的重组ｐ２４ 蛋白进行纯化， 其纯度超过 ８０％ ；对上清中的可溶性ｐ２４ 蛋白进行纯化，产物最终纯度超过６７％ 纯化后的重组蛋白可与 Ｈ Ｉ Ｖ１
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关键词
HIV-1
衣壳蛋白
原核表达载体
纯化
pbv220
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Keywords
expression vector
HIV 1
capsid protein
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
R394.8
[医药卫生—医学遗传学]
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题名重组人胰岛素样生长因子1的制备
被引量：9
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作者
梁东春
左爱军
吴亚锋
郭刚
张镜宇
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机构
天津市内分泌研究所
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出处
《天津医药》
CAS
北大核心
2005年第7期434-436,共3页
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基金
天津市自然科学基金重点项目(项目编号:033801611)
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文摘
目的:建立人胰岛素样生长因子1(IGF-1)基因大肠杆菌高效表达系统及rhIGF-1的初步纯化方法。方法:将人IGF-1基因克隆入原核表达质粒载体pBV220,重组质粒转化大肠杆菌DH5α,温度诱导表达,WesternBlot对表达产物进行鉴定。超滤离心纯化rhIGF-1,纯化产物行高效液相色谱分析。H3-TdR掺入法测定所制备rhIGF-1的促细胞增殖活性。结果:成功构建了重组质粒pBV-IGF-1,聚丙烯酰胺凝胶电泳可见与预期7.5ku大小相符的蛋白条带,WesternBlot证实该条带即为rhIGF-1。超滤离心一步纯化后rhIGF-1纯度即可达95%以上。H3-TdR结果显示,所制备的rhIGF-1可促进体外培养成肌细胞增殖。结论:成功建立了rhIGF-1的制备及纯化方法,表达产物经体外试验证实具有促细胞增殖的生物活性。
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关键词
人胰岛素样生长因子1
制备
Western
rhIGF-1
聚丙烯酰胺凝胶电泳
高效液相色谱分析
pbv220
温度诱导表达
细胞增殖活性
成肌细胞增殖
纯化方法
大肠杆菌
表达产物
BLOT
表达系统
质粒载体
原核表达
DH5Α
质粒转化
纯化产物
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Keywords
DNA recombinant insulin-like growth factor 1 escherichia coli
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分类号
R394.8
[医药卫生—医学遗传学]
R735.7
[医药卫生—肿瘤]
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