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肺腺癌同源正常组织中差异表达基因的克隆 被引量：2
1
作者 王辉 杨秋霞 +4 位作者 李殿俊 李呼伦 马建群 张欣 吕雪莹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第6期578-581,共4页
目的　从与肺腺癌同源的正常组织中筛选差异表达基因 ,以期从分子水平阐明机体抑制肿瘤发生的机制。方法　利用抑制性消减杂交分别获得肺腺癌组织及肺腺癌同源正常组织cDNA片段 ,并建立相应的cDNA文库。用肺腺癌组织及与其同源的正常组... 目的　从与肺腺癌同源的正常组织中筛选差异表达基因 ,以期从分子水平阐明机体抑制肿瘤发生的机制。方法　利用抑制性消减杂交分别获得肺腺癌组织及肺腺癌同源正常组织cDNA片段 ,并建立相应的cDNA文库。用肺腺癌组织及与其同源的正常组织cDNA片段作为探针 ,分别进行逆向和正向斑点杂交 ,筛选与同源正常组织探针杂交而不与肺腺癌组织探针杂交的阳性克隆并测序 ,测序结果与GenBank中的序列进行同源性分析。结果　在肺腺癌同源正常组织中 ,获得 12个差异表达基因片段 ,其中 4个与细胞凋亡相关基因有较高的同源性 ;8个与人类不同染色体的不同区域有较高的同源性 ,功能不详。结论　推测肺腺癌同源正常组织中存在凋亡相关基因等 ,它们可能通过多种途径促进细胞凋亡而抑制细胞异常增殖 。 展开更多
关键词 克隆 肺腺癌同源正常组织 差异表达基因 抑制性消减杂交 细胞凋亡
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抑制性消减杂交构建肺腺癌及同源正常组织cDNA文库
2
作者 李殿俊 杨秋霞 +4 位作者 李大林 曲昌发 郗雪艳 王辉 刘莉 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期859-862,共4页
目的:分离肺腺癌及同源正常组织中的未知特异性基因片段,并建立相应的cDNA文库,为研究肿瘤基因疫苗打下良好的基础。方法:从肺腺癌及同源正常组织中分别提取总RNA,磁珠分离mRNA并逆转录为dsDNA,经RasI消化酶切将Adaptor-1和Adaptor-2R... 目的:分离肺腺癌及同源正常组织中的未知特异性基因片段,并建立相应的cDNA文库,为研究肿瘤基因疫苗打下良好的基础。方法:从肺腺癌及同源正常组织中分别提取总RNA,磁珠分离mRNA并逆转录为dsDNA,经RasI消化酶切将Adaptor-1和Adaptor-2R适配子分别与肺腺癌消化后的cDNA连接(作为tester),再与正常同源组织(作为driver)进行正向杂交和逆向杂交。具有上述2种不同适配子的杂交后cDNA分子,通过初次PCR和巢式PCR富集未知的cDNA片段,此PCR产物与TA克隆载体pGEM连接,转化Top10大肠杆菌,获得白色菌落并经菌液PCR扩增出未知基因片段。结果:经正向抑制性消减杂交和逆向抑制性消减杂交分别获取了肺腺癌组织及同源正常组织的特异性cDNA文库。结论:抑制性消减杂交是一种快速、方便、有效的建立cDNA文库的方法。 展开更多
关键词 抑制性消减杂交 肺腺癌 CDNA文库
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