目的研究miR-195调控中心体相关激酶2(NEK2)对前列腺癌细胞增殖的影响。方法 Western blot检测在稳定表达和抑制表达miR-195的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平;构建克隆编码miR-195的序列片段慢病毒载体和表达NEK2的质粒载体,对转染空...目的研究miR-195调控中心体相关激酶2(NEK2)对前列腺癌细胞增殖的影响。方法 Western blot检测在稳定表达和抑制表达miR-195的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平;构建克隆编码miR-195的序列片段慢病毒载体和表达NEK2的质粒载体,对转染空载体和NEK2,以及同时转染了miR-195模拟物和NEK2、miR-195模拟物和空载体的LNCaP细胞株进行CCK8细胞增殖实验;采用shRNA方法构建干扰NEK2基因表达质粒,NEK2抑制成功和miR-195过表达的LNCaP细胞进行细胞增殖实验,测定si-NC、si-NEK2、si-195的LNCaP细胞的生长速度。结果在过表达miR-195的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平比阴性对照miR-NC的LNCaP细胞株中蛋白表达水平明显降低(P<0.01);相反,在miR-195被抑制表达的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平明显增加(P<0.01)。细胞增殖实验显示转染NEK2基因的LNCaP细胞在72、96h生长速度显著快于转染空载体的细胞(P<0.01);转染miR-195模拟物和NEK2的LNCaP细胞在72、96h生长速度显著慢于单纯转染NEK2的LNCaP细胞(P<0.01);si-NEK2的LNCaP细胞在72、96h生长速度明显慢于siNC,且与miR-195过表达的LNCaP细胞相似。结论 miR-195负性调控相关下游基因NEK2的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖,初步验证了miRNA-195-NEK2信号轴在前列腺癌中的作用。展开更多
文摘目的研究miR-195调控中心体相关激酶2(NEK2)对前列腺癌细胞增殖的影响。方法 Western blot检测在稳定表达和抑制表达miR-195的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平;构建克隆编码miR-195的序列片段慢病毒载体和表达NEK2的质粒载体,对转染空载体和NEK2,以及同时转染了miR-195模拟物和NEK2、miR-195模拟物和空载体的LNCaP细胞株进行CCK8细胞增殖实验;采用shRNA方法构建干扰NEK2基因表达质粒,NEK2抑制成功和miR-195过表达的LNCaP细胞进行细胞增殖实验,测定si-NC、si-NEK2、si-195的LNCaP细胞的生长速度。结果在过表达miR-195的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平比阴性对照miR-NC的LNCaP细胞株中蛋白表达水平明显降低(P<0.01);相反,在miR-195被抑制表达的LNCaP细胞株中NEK2蛋白的表达水平明显增加(P<0.01)。细胞增殖实验显示转染NEK2基因的LNCaP细胞在72、96h生长速度显著快于转染空载体的细胞(P<0.01);转染miR-195模拟物和NEK2的LNCaP细胞在72、96h生长速度显著慢于单纯转染NEK2的LNCaP细胞(P<0.01);si-NEK2的LNCaP细胞在72、96h生长速度明显慢于siNC,且与miR-195过表达的LNCaP细胞相似。结论 miR-195负性调控相关下游基因NEK2的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖,初步验证了miRNA-195-NEK2信号轴在前列腺癌中的作用。
