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lincRNA Cox2通过miR-129-5p/AMPK调控BCG感染的巨噬细胞糖酵解进程
1
作者 徐蕾 于嘉霖 +2 位作者 刘莉 邓光存 吴晓玲 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1606-1619,共14页
[目的]探究lincRNA Cox2对BCG(Bacillus Calmette-Guérin)感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程的调控作用,阐明Mtb与巨噬细胞之间的相互作用,为结核病的诊断和治疗提供新的靶点。[方法]利用小干扰RNA敲减lincRNA Cox2的表达,以及使用... [目的]探究lincRNA Cox2对BCG(Bacillus Calmette-Guérin)感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程的调控作用,阐明Mtb与巨噬细胞之间的相互作用,为结核病的诊断和治疗提供新的靶点。[方法]利用小干扰RNA敲减lincRNA Cox2的表达,以及使用miR-129-5p mimics过表达载体,结合BCG感染,通过实时荧光定量PCR检测lincRNA Cox2、miR-129-5p和促炎因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表达量;乳酸含量检测试剂盒检测乳酸(LD)的分泌情况;平板涂布法检测巨噬细胞菌载量情况;双荧光素酶报告基因系统验证lincRNA Cox2与miR-129-5p以及miR-129-5p与AMPK的互作关系;蛋白免疫印迹检测AMPK(AMP依赖蛋白激酶)及糖酵解途径中关键基因HK1(己糖激酶1)、PKM2(丙酮酸激酶2)和LDHA(乳酸脱氢酶)的表达变化。[结果]BCG感染12 h能够极显著上调RAW264.7巨噬细胞中lincRNA Cox2的表达(P=0.000013),与BCG组相比,siRNA+BCG组中AMPK(P=0.000771)、HK1(P=0.00323)、PKM2(P=0.000135)和LDHA(P=0.002532)的表达量以及乳酸的分泌量(P=0.020802)发生显著上调,而促炎因子IL-1β(P=0.000451)、TNF-α(P=0.000147)、IL-6(P=0.0001)的表达发生显著下调,菌载量试验表明siRNA+BCG组中的巨噬细胞菌载量显著下调(P=0.000127)。双荧光素酶报告基因系统表明lincRNA Cox2和miR-129-5p存在相互作用关系并以AMPK为靶基因。BCG感染RAW264.7巨噬细胞12 h后极显著下调miR-129-5p的表达(P=0.000156),与BCG组相比,miR-129-5p mimics+BCG组中AMPK(P=0.000262)、HK1(P=0.019524)、PKM2(P=0.001658)和LDHA(P=0.000887)表达量以及乳酸分泌量(P=0.044952)发生显著下调。[结论]lincRNA Cox2通过海绵吸附miR-129-5p并靶向AMPK,促进BCG感染的RAW264.7巨噬细胞糖酵解进程。 展开更多
关键词 lincrna cox2 miR-129-5p AMPK BCG 巨噬细胞 糖酵解进程
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结核分枝杆菌感染小鼠巨噬细胞中LincRNA Cox2的作用研究 被引量：7
2
作者 孙慧杰 蒋莹 +3 位作者 李德尚 王迪 朱晓雁 董梅 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2015年第3期201-205,共5页
目的探讨结核分歧杆菌感染巨噬细胞中lincRNA-cox2的表达及作用机制。方法应用实时定量PCR检测感染牛分枝杆菌(BCG,MOI≈10︰1)的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)中lincRNA-cox2的差异表达。对感染BCG的RAW 264.7细胞给予p38MAPK通路特异性抑制... 目的探讨结核分歧杆菌感染巨噬细胞中lincRNA-cox2的表达及作用机制。方法应用实时定量PCR检测感染牛分枝杆菌(BCG,MOI≈10︰1)的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)中lincRNA-cox2的差异表达。对感染BCG的RAW 264.7细胞给予p38MAPK通路特异性抑制剂SB203580(10μmol/L)、JNK通路特异性抑制剂SP600125(10μmol/L)、ERK通路特异性抑制剂U0126(10μmol/L),以确定lincRNA-cox2起作用的信号通路。用小分子RNA干扰真核载体转染技术诱导lincRNA-cox2沉默,检测结核菌感染后相关炎症因子TNF-α的差异表达。结果 RAW264.7细胞感染BCG后lincRNA-cox2显著上调(t值分别为:0.9771,1.650,P=0.0391,P<0.05,差异有统计学意义);阻断p38MAPK通路和JNK通路后lincRNA-cox2显著下调(p38MAPK通路抑制剂组t值分别为:3.777,0.5659,P=0.0483,P<0.05;JNK阻断组t值分别为:3.777,0.4998,P=0.0458,P<0.05,差异有统计学意义);沉默lincRNA-cox2的RAW264.7细胞感染BCG后TNF-α水平显著降低(t值分别为:318.8,64.42,74.68,P值分别为0.0186,0.0226,P<0.05,差异有统计学意义)。结论结核菌感染后可能通过激活p38MAPK、JNK通路上调RAW264.7细胞中lincRNA-cox2的表达,进而促进炎症因子TNF-ɑ的释放,起到控制结核感染的作用,可以为结核病在基因水平上的诊断和治疗提供参考。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 BCG lincrna-cox2 TNF-ɑ p38MAPK JNK
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敲低lincRNA-COX2抑制单核细胞增生李斯特菌感染相关的巨噬细胞的凋亡和M1型极化
3
作者 朱昱蓉 黄霜 +3 位作者 林琳 张峰源 姜旭淦 陈盛霞 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第4期289-294,共6页
目的探讨长链基因间非编码RNA环加氧酶2(lincRNA-COX2)在单核细胞增生李斯特菌(Lm)感染所致RAW264.7细胞凋亡和细胞极化中的作用.方法体外培养RAW264.7细胞,分为未感染对照组、Lm感染组、小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、si-NC联合Lm组、li... 目的探讨长链基因间非编码RNA环加氧酶2(lincRNA-COX2)在单核细胞增生李斯特菌(Lm)感染所致RAW264.7细胞凋亡和细胞极化中的作用.方法体外培养RAW264.7细胞,分为未感染对照组、Lm感染组、小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、si-NC联合Lm组、lincRNA-COX2小干扰RNA(si-lincRNA-COX2)组、si-lincRNA-COX2联合Lm组.Lm感染复数(MOI)=10感染RAW264.7细胞,细菌感染6 h后收集细胞,倒置荧光显微镜和实时定量PCR检测siRNA转染抑制效率,Western blot法检测细胞中裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)、caspase-3、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl2)、Bcl2相关X蛋白(BAX)、精氨酸酶1(Arg1)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)蛋白水平.结果Lm感染RAW264.7细胞后,c-caspase-3/caspase-3、BAX/Bcl2比值、iNOS蛋白水平较对照组显著上调,而Arg1水平较对照组下调.敲低lincRNA-COX2可抑制Lm感染引起的RAW264.7细胞中BAX/Bcl2、c-caspase-3/caspase-3及iNOS蛋白的升高,上调Lm感染后RAW264.7细胞中的Arg1蛋白.结论敲低lincRNA-COX2抑制Lm感染引起的RAW264.7细胞凋亡并抑制其向M1型极化. 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 RAW264.7细胞 长链基因间非编码RNA环加氧酶2(lincrna-cox2) 细胞凋亡 细胞极化
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lincRNA—cox2对小鼠RAW264．7巨噬细胞极化的影响 被引量：3
4
作者 黄自坤 姚芳苡 +5 位作者 罗清 叶建青 邓桢 呙阳 江红 李俊明 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期881-886,共6页
目的观察小鼠RAW264.7巨噬细胞不同极化状态下lincRNA-cox2表达变化，初步探讨lincRNA-cox2对巨噬细胞极化的影响。方法以IFN-γ/LPS刺激小鼠RAW264.7细胞诱导M1型极化，IL-4刺激RAW264.7细胞诱导M2型极化，采用实时荧光定量PCR（RT-PC... 目的观察小鼠RAW264.7巨噬细胞不同极化状态下lincRNA-cox2表达变化，初步探讨lincRNA-cox2对巨噬细胞极化的影响。方法以IFN-γ/LPS刺激小鼠RAW264.7细胞诱导M1型极化，IL-4刺激RAW264.7细胞诱导M2型极化，采用实时荧光定量PCR（RT-PCR）检测各组细胞lincRNA-cox2的表达。设计并合成针对lincRNA-cox2基因的siRNA及无关序列，脂质体转染RAW264.7细胞，48 h后分别加入IFN-γ/LPS或IL-4继续诱导M1/M2型巨噬细胞，采用酶联免疫试验（ELISA）检测细胞因子IL-12及IL-10的分泌量；RT-PCR检测与巨噬细胞极化相关的iNOS、TNF-α、Arg-1、Fizz1的表达。将lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞，检测其对M1极化表型的影响。结果RT-PCR结果显示，M1型巨噬细胞的lincRNA-cox2表达水平显著高于未极化细胞和M2型巨噬细胞。与对照组相比，lincRNA-cox2-siRNA转染RAW264.7细胞后，经IFN-γ/LPS诱导的M1型巨噬细胞中IL-12分泌降低，iNOS和TNF-α表达下降；而经IL-4诱导的巨噬细胞中IL-10产生增加，Arg-1和Fizz1表达升高。lincRNA-cox2-siRNA转染M1型巨噬细胞后，IL-12分泌降低，IL-10产生增加，其特点向M2样巨噬细胞转换。结论lincRNA-cox2参与调控小鼠巨噬细胞的极化，促进M1型巨噬细胞极化，抑制M2型巨噬细胞极化。 展开更多
关键词 巨噬细胞极化:长链非编码RNA lincrna—cox2
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