山茱萸多糖对衰老HDF细胞cyclinD1、CDK4表达的影响 被引量：8

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作者 王雅丽 欧芹 +1 位作者 魏晓东 张玉成 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期739-741,共3页

目的探讨山茱萸多糖对抗人胚肺成纤维二倍体(HDF)细胞衰老的作用及其可能的细胞周期调控机制。方法体外培养HDF细胞,实验组从40代开始加山茱萸多糖含药血清。观察细胞形态;MTT法检测细胞活力;RT-PCR法检测细胞周期蛋白(cyclin)D1、细胞... 目的探讨山茱萸多糖对抗人胚肺成纤维二倍体(HDF)细胞衰老的作用及其可能的细胞周期调控机制。方法体外培养HDF细胞,实验组从40代开始加山茱萸多糖含药血清。观察细胞形态;MTT法检测细胞活力;RT-PCR法检测细胞周期蛋白(cyclin)D1、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)4的mRNA表达。结果衰老组细胞活力下降,cyclinD1mRNA表达升高,CDK4 mRNA表达下降;山茱萸多糖可提高细胞活力,降低cy-clinD1表达,提高CDK4表达量。结论山茱萸多糖可能通过改变细胞周期调控因子的表达而发挥其抗HDF细胞衰老作用。 展开更多

关键词 山茱萸多糖 cyclind1 CDK4 人二倍体成纤维细胞

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回生口服液调控Wnt通路CyclinD1影响人肺腺癌细胞增殖的机制 被引量：6

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作者 肖桦 李罗翔 +1 位作者 秦旭华 赖莉 《成都中医药大学学报》 2014年第2期44-46,106,共4页

目的:研究回生口服液调控Wnt信号传导通路细胞周期蛋白D1(CyclinD1)影响人肺腺癌细胞(LAC)增殖的机制。方法:制备高、中、低剂量(11.6 g/kg,5.8 g/kg,2.9 g/kg)回生口服液含药血清,与人肺腺癌细胞系共同培养,MTT法检测含药血清对肺腺癌... 目的:研究回生口服液调控Wnt信号传导通路细胞周期蛋白D1(CyclinD1)影响人肺腺癌细胞(LAC)增殖的机制。方法:制备高、中、低剂量(11.6 g/kg,5.8 g/kg,2.9 g/kg)回生口服液含药血清,与人肺腺癌细胞系共同培养,MTT法检测含药血清对肺腺癌细胞的抑制率,流式细胞仪检测肺腺癌细胞周期相对分布;建立C57BL/6人肺腺癌荷瘤小鼠模型,予回生口服液高、中、低剂量治疗,免疫组化法检测小鼠移植瘤肺腺癌细胞Cyclin-D1阳性表达水平。结果:与阴性对照组比较,回生口服液高、中剂量组及顺铂组含药血清对肺腺癌细胞的生长抑制率明显增高,且干预的肺腺癌细胞G1期细胞比例明显增高,S期、G2期细胞比例明显减少(P<0.01,P<0.05);回生口服液中、高剂量及顺铂(DDP)治疗组小鼠肺腺癌细胞内CyclinD1阳性表达率明显低于模型组(P<0.01)。结论:回生口服液可明显抑制人肺腺癌细胞生长,使癌细胞停滞于细胞周期的G1期,并可明显降低肺腺癌细胞内CyclinD1的阳性表达。 展开更多

关键词 回生口服液 WNT通路 人肺腺癌细胞(LAC) 细胞周期蛋白D1(cyclind1)

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脑星形细胞瘤CyclinD1、P21^(WAF1/CIP1)和Survivin关系的探讨

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作者 王淳良 梅金红 +4 位作者 徐姗 万红萍 陈任生 王珊珊 徐林林 《江西医学院学报》 CAS 2008年第6期47-51,共5页

目的探讨CyclinD1、P21WAF1/CIP1和Survivin与脑星形细胞瘤的相关性。方法采用ElivisionTMplus免疫组化方法,检测10例正常脑组织、60例脑星形细胞瘤中CyclinD1、P21WAF1/CIP1和Survivin的表达情况。结果在正常脑组织和脑星形细胞瘤Ⅰ级... 目的探讨CyclinD1、P21WAF1/CIP1和Survivin与脑星形细胞瘤的相关性。方法采用ElivisionTMplus免疫组化方法,检测10例正常脑组织、60例脑星形细胞瘤中CyclinD1、P21WAF1/CIP1和Survivin的表达情况。结果在正常脑组织和脑星形细胞瘤Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级中的阳性表达情况:(1)CyclinD1阳性表达率分别为:20.00%(2/10)、25.00%(4/16)、43.75%(7/16)、50.00%(7/14)、71.43%(10/14),其表达与病理分级呈显著正相关(r=0.357,P<0.01);(2)P21WAF1/CIP1的阳性表达率分别为:0(0/10)、81.25%(13/16)、62.50%(10/16)、42.86%(6/14)、27.27%(3/14),其表达与病理分级呈显著负相关(r=-0.548,P<0.001);(3)Survivin的阳性表达率分别为:0(0/10)、56.25%(9/16)、68.75%(11/16)、92.86%(13/14)、100.00%(14/14),其表达与病理分级呈显著正相关(r=0.539,P<0.005);(4)CyclinD1表达阳性的28例中,P21WAF1/CIP1阳性表达11例,阳性率39.29%(11/28),Cy-clinD1表达阴性的32例中,P21WAF1/CIP1阳性表达21例,阳性率65.63%(21/32),两者呈负相关(r=-0.362,P<0.02);(5)Survivin表达阳性的47例中CyclinD1阳性表达27例,阳性率57.45%(27/47),Survivin表达阴性的13例中CyclinD1阳性表达1例,阳性率7.69%(1/13),两者呈显著正相关(r=0.411,P<0.005);(6)P21WAF1/CIP1表达阳性的32例中survivin阳性表达20例,阳性率62.50%(20/32),P21WAF1/CIP1表达阴性的28例中Survivin阳性表达27例,阳性率96.43%(27/28),两者呈显著负相关(r=-0.411,P<0.005)。结论(1)CyclinD1过表达、P21WAF1/CIP1表达减弱或消失以及Survivin的高表达与脑星形细胞瘤的发生、发展有关;(2)联合检测三者在一定程度上反映脑星形细胞瘤的生物学行为。 展开更多

关键词 脑星形细胞瘤cyclind1、P21^WAF1/CIP1 SURVIVIN 免疫组化

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p16和cyclinD1基因蛋白在卵巢囊腺瘤组织中的表达和意义

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作者 孙智才 魏国红 +1 位作者 刘嵘 张彤 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2001年第2期199-203,共5页

应用 s- p免疫组织化学方法观察人卵巢囊腺癌、交界性囊腺瘤和良性囊腺瘤中细胞增殖周期调控因子 p16和 cy-clin D1的表达和意义。结果表明 ,在卵巢囊腺癌 p16蛋白表达阳性率为 45 % ,明显低于良性囊腺瘤 (95 % ) ,染色强度大部分为弱... 应用 s- p免疫组织化学方法观察人卵巢囊腺癌、交界性囊腺瘤和良性囊腺瘤中细胞增殖周期调控因子 p16和 cy-clin D1的表达和意义。结果表明 ,在卵巢囊腺癌 p16蛋白表达阳性率为 45 % ,明显低于良性囊腺瘤 (95 % ) ,染色强度大部分为弱阳性或阳性 (+ )。 cyclin D1蛋白表达阳性率为 80 % ,明显高于良性囊腺瘤 (2 5 % ) ,染色强度大部分为阳性 (+ ) ,强阳性 ( )。p16蛋白表达阳性率随着卵巢囊腺瘤恶性程度的降低而升高。cyclin D1蛋白表达阳性率与卵巢囊腺瘤恶性程度有关。本研究结果表明 p16蛋白抑制肿瘤细胞增殖 ,而 cyclin D1蛋白促进肿瘤细胞增殖这一细胞增殖调控机制 。 展开更多

关键词 免疫组织化学 表达 P16 cyclind1基因 蛋白 卵巢囊腺瘤组织

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CyclinD1和Ki-67在茉莉酸甲酯抑制人肝癌细胞HepG2增殖作用中的表达变化

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作者 卢永刚 张洁 +1 位作者 谭晶 郭永章 《中国现代普通外科进展》 CAS 2013年第7期515-518,共4页

目的:探讨CyclinD1、Ki-67蛋白在茉莉酸甲酯(MeJA)抑制人肝癌细胞HepG2细胞增殖过程中的表达变化。方法:免疫细胞化学检测HepG2细胞CyclinD1、Ki-67蛋白的表达。结果:MeJA作用HepG2细胞48 h后,CyclinD1、Ki-67蛋白表达水平明显下降(P<... 目的:探讨CyclinD1、Ki-67蛋白在茉莉酸甲酯(MeJA)抑制人肝癌细胞HepG2细胞增殖过程中的表达变化。方法:免疫细胞化学检测HepG2细胞CyclinD1、Ki-67蛋白的表达。结果:MeJA作用HepG2细胞48 h后,CyclinD1、Ki-67蛋白表达水平明显下降(P<0.01)。结论:MeJA通过下调Cy-clinD1、Ki-67蛋白表达,使细胞周期相关蛋白的表达发生改变,减少处于增殖期的细胞数目,从而发挥抗肝癌作用。 展开更多

关键词 肝肿瘤 HEPG2人肝癌细胞 cyclind1蛋白 KI-67蛋白 茉莉酸甲酯

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Pin1，CyclinD1在宫颈癌中的表达及与HPV16/18感染的关系 被引量：4

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作者 石玲玲 唐娜 +2 位作者 崔艳艳 贡雪 李建华 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第3期21-25,共5页

研究肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1,CyclinD1在宫颈液基细胞上皮内病变和宫颈癌中的表达与HPV16/18感染的关系,探讨其对宫颈上皮内病变和宫颈癌诊断的意义。经液基细胞学筛查,采用原位杂交方法对80例宫颈上皮内病变和宫颈癌,13例正常组织进... 研究肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1,CyclinD1在宫颈液基细胞上皮内病变和宫颈癌中的表达与HPV16/18感染的关系,探讨其对宫颈上皮内病变和宫颈癌诊断的意义。经液基细胞学筛查,采用原位杂交方法对80例宫颈上皮内病变和宫颈癌,13例正常组织进行HPV检测分型,同时对HPV16/18阳性的标本进行Pin1,CyclinD1免疫组化。在正常宫颈组织、CINⅠ,CINⅡ-Ⅲ,浸润癌组织中Pin1表达率分别为7.7%(1/13)、57.1%(12/21)、68.4%(13/19)、85%(34/40)(P<0.05);CyclinD1表达率分别为0%、9.52%(2/21)、20.5% (4/19)、55%(22/40)。HPV16/18的表达率也随着宫颈病变的升级而升高,分别为15.4%(2/13)、42.9%(9/ 21)、57.9%(11/19)、82.5%(33/40)。Pin1和HPV16/18在宫颈病变中的表达高度相关(r_0=1.0,P<0.05);而CyclinD1的表达与HPV16/18相关性较小(r_0=0.4,P<0.05)。认识Pin1,cyclinD1和HPV16/18三者之间的关系及对宫颈上皮内病变和宫颈癌的筛查诊断具有重要意义。 展开更多

关键词 人乳头状瘤病毒16 18型 宫颈癌 原位杂交 肽基脯氨酰顺反异构酶Pin1 细胞周期素D1

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高危型HPV感染与宫颈上皮组织中P53、CyclinD1基因表达的关系 被引量：1

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作者 欧阳良良 袁育珺 汪红 《中国医学创新》 CAS 2021年第22期22-26,共5页

目的:观察P53、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)基因在高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染宫颈上皮组织中表达情况,并分析P53、CyclinD1与HR-HPV感染的关系。方法:收集2019年1月-2020年12月于本院完成宫颈活检的100例宫颈上皮组织标本的实验室资... 目的:观察P53、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)基因在高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染宫颈上皮组织中表达情况,并分析P53、CyclinD1与HR-HPV感染的关系。方法:收集2019年1月-2020年12月于本院完成宫颈活检的100例宫颈上皮组织标本的实验室资料进行回顾性分析。将其根据病变程度分为子宫颈癌组(n=47)、宫颈上皮内瘤变组(n=27)及正常组(n=26)。比较三组P53、CyclinD1蛋白阳性表达率与HR-HPV阳性检出率,分析P53、CyclinD1与HR-HPV的关系。结果:子宫颈癌组与宫颈上皮内瘤变组P53、CyclinD1蛋白阳性表达率、HR-HPV阳性检出率均高于正常组,且子宫颈癌组中P53、CyclinD1蛋白阳性表达率、HR-HPV阳性检出率均高于宫颈上皮内瘤变组(P<0.05)。HR-HPV阳性宫颈上皮组织中P53、CyclinD1蛋白阳性表达率均高于HR-HPV阴性的宫颈上皮组织(P<0.05)。HR-HPV感染与宫颈上皮组织中P53、CyclinD1蛋白阳性表达均呈正相关(τ=0.459、0.565,P<0.05)。结论:HR-HPV感染与宫颈上皮组织中P53、CyclinD1基因阳性表达存在一定联系。 展开更多

关键词 高危型人乳头瘤病毒 P53 细胞周期蛋白D1 宫颈上皮组织

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参慈胶囊联合顺铂对裸鼠A549肺癌组织DEC1及cyclinD1表达的影响 被引量：1

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作者 韦伊尔 田艳 +2 位作者 李仕成 邹莹 冼乐武 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2019年第14期3470-3474,共5页

目的观察参慈胶囊联合顺铂对裸鼠A549肺癌组织分化型胚胎软骨发育基因(DEC1)及细胞周期蛋白(cyclin)D1表达的影响及其作用机制。方法培养人肺腺癌细胞A549并对裸鼠进行造模,筛选瘤体积(0.125±0.012)cm3的荷瘤裸鼠32只,随机分为对... 目的观察参慈胶囊联合顺铂对裸鼠A549肺癌组织分化型胚胎软骨发育基因(DEC1)及细胞周期蛋白(cyclin)D1表达的影响及其作用机制。方法培养人肺腺癌细胞A549并对裸鼠进行造模,筛选瘤体积(0.125±0.012)cm3的荷瘤裸鼠32只,随机分为对照组、参慈胶囊组、顺铂组、参慈胶囊+顺铂组,分别予以生理盐水、参慈胶囊免煎颗粒灌胃及顺铂腹腔注射等连续干预3w,测量体积后取材,采用免疫组织化学法、实时荧光定量(RT-PCR)技术检测cyclinD1和DEC1mRNA表达。结果参慈胶囊组瘤体积、cyclinD1和DEC1mRNA表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),顺铂组及参慈胶囊+顺铂组与对照组、参慈胶囊组差异有统计学意义(P<0.05),参慈胶囊+顺铂组与顺铂组差异有统计学意义(P<0.05)。结论参慈胶囊联合顺铂化疗能够提高疗效,并能降低cyclinD1的表达及提高DEC1mRNA表达。 展开更多

关键词 参慈胶囊 顺铂 人肺腺癌细胞A549 DEC1 cyclind1

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特异性抗人cyclin D1人源单链抗体的筛选 被引量：4

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作者 李桂英 朱迅 +4 位作者 周立宏 邹德生 郝东云 田宇 杜柏榕 《中国实验诊断学》 2006年第11期1248-1251,共4页

目的从噬菌体抗体库中筛选人源性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体并进行鉴定。方法以原核表达并用Ni-NTA Agarose纯化的重组人cyclinD1蛋白为抗原,通过“吸附-洗脱-扩增”淘选过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体,通... 目的从噬菌体抗体库中筛选人源性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体并进行鉴定。方法以原核表达并用Ni-NTA Agarose纯化的重组人cyclinD1蛋白为抗原,通过“吸附-洗脱-扩增”淘选过程从噬菌体抗体库中筛选特异性抗人cyclinD1蛋白的单链抗体,通过ELISA方法对获得抗体的特异性和结合活性进行分析鉴定。结果经过4轮筛选,获得7株能与人cyclinD1蛋白结合的阳性克隆,其中3株噬菌体的可溶性表达单链抗体能与人cyclinD1蛋白有特异性结合活性。结论利用噬菌体抗体库技术可以不经免疫过程制备出特异性的人源性抗人cyclinD1抗体。 展开更多

关键词 人cyclind1蛋白 噬菌体抗体库 单链抗体 淘选

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人细胞周期蛋白D1在大肠杆菌BL21中的表达及纯化 被引量：1

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作者 李桂英 邹德生 +1 位作者 周立宏 曹玉华 《吉林大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期839-843,共5页

将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的23%.... 将人细胞周期蛋白D1全长cDNA克隆入原核表达载体pET-28c(+)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化E.coli BL21(DE3)后获得表达菌株.该菌株经IPTG诱导高效表达出带有组氨酸标签的以包涵体形式存在的融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的23%.包涵体经洗涤和溶解,在变性条件下利用N i2+螯合柱纯化、尿素梯度复性后,得到纯度达98%以上的纯化蛋白.SDS-PAGE显示纯化蛋白的分子量约为43 000,W estern-blot分析表明,在相应分子量处有一特异性条带,说明成功表达和纯化重组人细胞周期蛋白D1. 展开更多

关键词 人细胞周期蛋白D1 表达 包涵体 融合蛋白 蛋白质纯化 大肠杆菌

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褐藻糖胶抑制人肝癌细胞HepG2增殖的机制 被引量：4

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作者 李小婷 殷辰俞 +3 位作者 孟徐莲 段颉 孔秋月 冯晴 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1261-1265,共5页

目的:探讨褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制。方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0、10、100、500μg/ml的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改... 目的:探讨褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2体外增殖的相关机制。方法:采用MTT法测定不同浓度褐藻糖胶对人肝癌细胞株HepG2增殖的抑制作用,计算细胞生长抑制率;将0、10、100、500μg/ml的褐藻糖胶作用于HepG2细胞,48 h后光镜观察细胞形态改变,用Hoechst染色法和琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;Western blot检测cyclinD1和拓扑异构酶IIα(topoi-somerase IIα,TopoIIα)表达的改变。结果:褐藻糖胶具有抑制人肝癌细胞HepG2增殖的作用,呈剂量依赖性。不同浓度褐藻糖胶作用HepG2细胞后,500μg/ml组较其他浓度组光镜下和Hoechst 33258染色均呈现较明显细胞形态改变,100μg/ml和500μg/ml组均检测出DNA梯形条带。褐藻糖胶也能降低细胞增殖生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα的蛋白表达。结论:褐藻糖胶抑制人肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与褐藻糖胶抑制细胞增殖的生物标志蛋白cyclinD1和TopoIIα表达有关。 展开更多

关键词 褐藻糖胶 人肝癌细胞HEPG2 凋亡 cyclind1 TOPOIIΑ

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黄芩苷对肝癌细胞株SMMC-7721裸鼠移植瘤生长抑制作用及其机制 被引量：8

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作者 董明 侯俊明 +1 位作者 高美花 魏辉 《现代肿瘤医学》 CAS 2014年第2期256-258,共3页

目的:以裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤动物模型为研究对象,观察黄芩苷对移植瘤生长能力的影响,初步探讨黄芩苷对Cyclin D1和Caspase-3表达的影响。方法:BALB/c裸鼠右前腋部皮下接种人肝癌SMMC-7721细胞5×106个,建立人肝癌实体... 目的:以裸鼠人肝癌细胞株SMMC-7721移植瘤动物模型为研究对象,观察黄芩苷对移植瘤生长能力的影响,初步探讨黄芩苷对Cyclin D1和Caspase-3表达的影响。方法:BALB/c裸鼠右前腋部皮下接种人肝癌SMMC-7721细胞5×106个,建立人肝癌实体瘤模型。将20只成瘤裸小鼠随机分为空白对照组与黄芩苷组,每组10只。对照组腹腔注射生理盐水10ml/kg,黄芩苷组腹腔注射黄芩苷注射液100mg/kg,每2d给药1次,间断给药8次后称体重、处死,瘤块离体称重,计算抑瘤率;用免疫组织化学方法检测实验组和对照组移植瘤中CyclinD1和Caspase-3的表达水平。结果:黄芩苷组100mg/kg对裸鼠肝癌SMMC-7721实体瘤的抑制率为30.8%,两组间肝脏与肾脏指数比较,P均大于0.05。黄芩苷处理组凋亡指数为(13.6±1.1)%,高于对照组的(2.2±1.9)%,(P<0.01)。黄芩苷能够抑制CyclinD1表达及上调Caspase-3表达,(均P<0.05)。结论:黄芩苷对人肝癌SMMC-7721的裸鼠皮下移植瘤具有生长抑制作用,其抑瘤作用可能通过下调CyclinD1表达和上调Caspase-3表达来达到抑制瘤体增殖并有促进其凋亡的作用。在保护免疫器官功能方面,黄芩苷无明显优势。黄芩苷可能成为治疗原发性肝癌的有效手段之一,但是其在保护免疫器官方面还需要进一步研究。 展开更多

关键词 黄芩苷 人肝癌细胞株SMMC-7721 cyclind1 CASPASE-3

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膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞增殖的影响 被引量：10

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作者 王小杰 李欣 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期656-660,共5页

目的探讨膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞的增殖产生的影响。方法采用Western blotting法鉴定siRNA可有效抑制膜联蛋白A7表达,然后用脂质体转染法将siRNA转染入HepG2细胞,将细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,在转染后24h... 目的探讨膜联蛋白A7低表达对人肝癌HepG2细胞的增殖产生的影响。方法采用Western blotting法鉴定siRNA可有效抑制膜联蛋白A7表达,然后用脂质体转染法将siRNA转染入HepG2细胞,将细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,在转染后24h、48h、72h进行细胞计数以绘制细胞增殖曲线,转染后48h进行MTT实验以检测细胞增殖活力;免疫组织化学法检测cyclinD1和Ki67的表达,Western blotting法检测cyclinD1的表达情况。结果转染了靶向膜联蛋白A7的siRNA后48h的HepG2细胞,细胞计数和MTT实验可见siRNA干扰组细胞增殖活力较阴性对照组和空白对照组显著降低(P<0.05);cyclinD1和Ki67蛋白表达均为siRNA干扰组细胞表达显著低于两对照组(P<0.05)。结论膜联蛋白A7低表达可能对HepG2细胞的增殖具有一定的抑制作用。 展开更多

关键词 膜联蛋白A7 HEPG2细胞 cyclind1 KI67 免疫组织化学 免疫印迹法 人

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氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的抑制作用及机制研究 被引量：4

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作者 黄文静 李卫平 孙文娟 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第12期1635-1640,共6页

目的观察氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7周期、周期蛋白相关基因及产物表达的影响,探讨氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞周期的影响及其机制。方法MTT检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR技术检测细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA... 目的观察氨氯地平对人乳腺癌细胞MCF-7周期、周期蛋白相关基因及产物表达的影响,探讨氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞周期的影响及其机制。方法MTT检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR技术检测细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA的表达;Western blot检测细胞周期蛋白cyclinD1、p21的蛋白表达。结果氨氯地平剂量和时间依赖性的抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖,IC50为14.439μmol.L-1。经7.22μmol.L-1(1/2IC50)、14.439μmol.L-1(IC50)、28.88μmol.L-1(2IC50)的氨氯地平作用人乳腺癌MCF-7细胞48h,G0/G1期细胞较对照组明显增高(P<0.05);并使人乳腺癌MCF-7细胞中cyclinD1mRNA及蛋白表达降低;p21mRNA及蛋白表达升高。结论氨氯地平对人乳腺癌MCF-7细胞具有抗增殖作用,并使细胞阻滞于G1期。其G1阻滞机制可能与调控细胞周期相关基因cyclinD1、p21mRNA及蛋白的表达相关。 展开更多

关键词 氨氯地平 人乳腺癌MCF-7细胞 细胞周期 细胞周期蛋白 cyclind1 p21

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胰岛素对人肺腺癌细胞株A549影响的体外研究

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作者 李建雄 王雅娟 +1 位作者 杨俊兰 焦顺昌 《军医进修学院学报》 CAS 2009年第3期372-374,共3页

目的:探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平及其机制。方法:采用MTT比色法,分析胰岛素对肺腺癌A549细胞代谢的影响,用流式细胞仪作细胞周期分析,用Western Blot印迹方法检测细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果:胰... 目的:探讨用胰岛素提高人肺腺癌细胞A549生长代谢水平及其机制。方法:采用MTT比色法,分析胰岛素对肺腺癌A549细胞代谢的影响,用流式细胞仪作细胞周期分析,用Western Blot印迹方法检测细胞周期蛋白CyclinA和CyclinD1的表达情况。结果:胰岛素(2.0～32.0mU/mL)可促进人肺腺癌细胞A549的增殖(P<0.05),细胞周期结果显示胰岛素(8mU/mL)可使S期细胞增多。Western Blot印迹方法检测结果显示胰岛素(8mU/mL)后CyclinD1的表达明显增强,CyclinA的表达变化不明显。结论:胰岛素能促进人肺腺癌细胞株A549增殖,并且其增殖作用是可逆的。胰岛素主要作用于人肺腺癌细胞株A549细胞的S期。CyclinD1的表达增强在胰岛素促增殖机制中起着重要作用。 展开更多

关键词 人肺腺癌细胞株A549 胰岛素 细胞周期蛋白D1 细胞周期蛋白A

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敲低膜联蛋白A5对人胃癌MGC-803和MKN-45细胞周期的影响 被引量：3

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作者 王小杰 赵依纳 李欣 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期342-346,共5页

目的探讨敲低膜联蛋白A5(ANXA5)对人胃癌细胞系MGC-803、MKN-45细胞周期相关蛋白表达的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组及空白对照组,采用脂质体转染法将靶向膜联蛋白A5的siRNA以及阴性siRNA分别转染干扰组和阴性对照组MGC-803... 目的探讨敲低膜联蛋白A5(ANXA5)对人胃癌细胞系MGC-803、MKN-45细胞周期相关蛋白表达的影响。方法将细胞分为干扰组、阴性对照组及空白对照组,采用脂质体转染法将靶向膜联蛋白A5的siRNA以及阴性siRNA分别转染干扰组和阴性对照组MGC-803、MKN-45细胞,空白对照组不加任何试剂。转染后48 h采用Real-time PCR和Western bloting分别从mRNA和蛋白水平检测ANXA5的表达,确定ANXA5被敲低之后,Realtime PCR和Western bloting检测各组p21^(cip1)mRNA和P21^(cip1)的表达,Western bloting检测各组细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白的表达,流式细胞术检测各组细胞周期的变化情况。结果敲低ANXA5后,与阴性对照组和空白对照组相比,两种细胞的p21^(cip1)mRNA和P21^(cip1)蛋白均显著降低(P<0.05),cyclin D1(P<0.05)也显著降低。结论敲低ANXA5可下调MGC-803、MKN-45细胞中p21^(cip1)mRNA和P21^(cip1)蛋白以及cyclin D1的表达,推测ANXA5可能通过作用于细胞周期相关蛋白而引发细胞周期阻滞从而影响着胃癌的发展。 展开更多

关键词 膜联蛋白A5 MGC-803细胞 MKN-45细胞 细胞周期蛋白D1 实时定量聚合酶链反应 免疫印迹法 流式细胞术 人

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5F对绒癌JAR细胞增殖、细胞周期及PTEN、cyclinD1表达的影响 被引量：3

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作者 陈杰 庞江琳 +1 位作者 覃燕梅 梁念慈 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2012年第11期1693-1695,共3页

目的:探讨Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人绒癌JAR细胞增殖能力、细胞周期及PTEN,cyclinD1表达的影响。方法:采用MTT法和细胞集落形成法检测5F对JAR细胞增殖的作用,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot... 目的:探讨Ent-11α-hydroxy-15-oxo-kaur-16-en-19-oic-acid(5F)对人绒癌JAR细胞增殖能力、细胞周期及PTEN,cyclinD1表达的影响。方法:采用MTT法和细胞集落形成法检测5F对JAR细胞增殖的作用,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot方法检测5F对JAR细胞PTEN、cyclinD1表达水平的影响。结果:5F作用于JAR细胞12～48h,能明显抑制JAR细胞的增殖能力(P<0.05),50μmol/L,100μmol/L 5F作用48 h实验组的抑制率达到(54.85±1.91)%,(68.43±0.97)%,两组比较有统计学差异(P<0.05)。50μmol/L,100μmol/L 5F作用24 h可使JAR细胞周期阻滞于G0/G1期,明显上调PTEN蛋白表达水平,同时下调cyclinD1蛋白表达水平。结论:5F能通过阻滞细胞周期、上调PTEN表达水平,下调cyclinD1表达水平来抑制JAR细胞生长增殖。 展开更多

关键词 5F 细胞增殖 绒癌 PTEN 细胞周期蛋白D1

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氟化钠对人成骨细胞CyclinD1基因启动子区甲基化及其转录表达的影响 被引量：2

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作者 严威敏 廖玉丹 +1 位作者 罗鹏 潘雪莉 《环境与健康杂志》 CAS 北大核心 2016年第4期292-295,共4页

目的构建人原代成骨细胞氟中毒模型,检测不同剂量氟化钠对人成骨细胞中CyclinD1基因启动子区甲基化、mRNA转录及蛋白表达的影响,从细胞周期调控基因的表观遗传学角度探索氟中毒发生机制。方法在知情同意原则下,收集贵州航空工业集团贵... 目的构建人原代成骨细胞氟中毒模型,检测不同剂量氟化钠对人成骨细胞中CyclinD1基因启动子区甲基化、mRNA转录及蛋白表达的影响,从细胞周期调控基因的表观遗传学角度探索氟中毒发生机制。方法在知情同意原则下,收集贵州航空工业集团贵阳医院骨科外伤手术健康人(车祸)髂骨或股骨松质骨。采用酶消化法分离人原代成骨细胞,以碱性磷酸酶及钙化结节染色进行细胞鉴定;以0、125、250、500及1 000μmol/L氟化钠处理细胞72 h。以硫化测序PCR法(bisulfite sequencing PCR,BSP)检测CyclinD1基因启动子区甲基化状态;以实时荧光定量PCR(QT-PCR)检测CyclinD1基因转录mRNA相对表达量;以免疫印迹法(Western-blotting)检测CyclinD1蛋白表达。结果分别以0、125、250、500及1 000μmol/L氟化钠处理细胞72 h后,CyclinD1基因启动子区未检测到甲基化;CyclinD1基因mRNA转录相对表达量在0、125、250、500及1 000μmol/L Na F剂量组分别为0.414±0.093、0.742±0.089、0.796±0.122、1.114±0.260、1.140±0.171,NaF剂量组均高于对照组(F=18.89,P<0.05)。CyclinD1蛋白相对表达量分别为0.304±0.014、0.395±0.020、0.511±0.042、0.565±0.028、0.719±0.047,NaF剂量组均高于对照组(F=71.80,P<0.05)。CyclinD1基因转录mRNA及其蛋白表达随氟化钠剂量的升高均相应上升(P<0.05)。结论氟化钠上调人成骨细胞中CyclinD1基因转录与表达,是氟致人成骨细胞增殖能力及细胞周期时相分布发生改变的重要分子机制之一,但未观察到CyclinD1基因启动子区甲基化参与其表达上调过程。 展开更多

关键词 氟 人成骨细胞 cyclind1基因 DNA甲基化

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人肾脏系膜细胞内mRNA稳定因子HuR蛋白对细胞周期蛋白cyclinD1转录后表达的调节 被引量：1

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作者 张瑞雨 吕智美 +3 位作者 刘毅 张鹏举 完强 王荣 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2012年第2期47-52,共6页

目的观察人肾脏系膜细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下mRNA稳定因子人类抗原R(HuR)蛋白对细胞周期蛋白D1(cyclinD1)蛋白的作用。方法体外培养人肾脏系膜细胞,根据AngⅡ对其的刺激时间即0、3、6、9、24 h分别记为0A、3A、6A、9A、24A组。... 目的观察人肾脏系膜细胞在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下mRNA稳定因子人类抗原R(HuR)蛋白对细胞周期蛋白D1(cyclinD1)蛋白的作用。方法体外培养人肾脏系膜细胞,根据AngⅡ对其的刺激时间即0、3、6、9、24 h分别记为0A、3A、6A、9A、24A组。应用流式细胞仪检测0A组与24A组细胞周期;免疫细胞化学方法观察各组HuR蛋白的亚细胞定位变化;Western blot方法检测各组全细胞与胞质内HuR蛋白及全细胞cyclinD1表达水平;RT-PCR方法检测各组cyclinD1的RNA水平。干扰RNA方法观察抑制HuR蛋白表达后AngⅡ刺激下对全细胞cyclinD1表达的保护效应。结果与0A组比较,24A组细胞增殖趋势明显;HuR蛋白亚细胞定位从胞核转移到胞质,其中3A组变化最显著;全细胞HuR蛋白表达水平不变,胞质内HuR蛋白表达增强,其中3A组最显著(P<0.05);cyclinD1蛋白表达增强,其中24A组最显著(P<0.05),而RNA水平保持不变(P>0.05)。与转染前相比,干扰RNA转染后3A组胞质HuR蛋白表达明显减弱(P<0.05);24A组cyclinD1蛋白表达明显减弱(P<0.05),而RNA水平不变(P>0.05)。结论①AngⅡ可刺激人肾小球系膜细胞增殖;②AngⅡ刺激下人肾脏系膜细胞核内HuR蛋白向胞质内转移;③HuR蛋白参与AngⅡ刺激下cyclinD1蛋白表达过程。 展开更多

关键词 人肾脏系膜细胞 血管紧张素Ⅱ HuR蛋白 cyclind1蛋白 干扰RNA

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高危型人乳头状瘤病毒感染及p53、Cyclin D1与卵巢上皮性肿瘤的关系 被引量：6

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作者 柏青杨 张春庆 +2 位作者 荣玮 赵坤 孙玉荣 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2009年第28期4004-4007,共4页

目的:探讨高危型人乳头状瘤病毒感染及p53、Cyclin D1与卵巢癌发生的关系。方法采用原位杂交法检测卵巢上皮性良性肿瘤32例、交界性肿瘤25例、卵巢癌45例中HPV16/18病毒,免疫组化SP法检测p53、Cyclin D1的表达;用正常卵巢组织作对照。结... 目的:探讨高危型人乳头状瘤病毒感染及p53、Cyclin D1与卵巢癌发生的关系。方法采用原位杂交法检测卵巢上皮性良性肿瘤32例、交界性肿瘤25例、卵巢癌45例中HPV16/18病毒,免疫组化SP法检测p53、Cyclin D1的表达;用正常卵巢组织作对照。结果:①卵巢上皮性良性肿瘤HPV16/18的感染率及Cyclin D1阳性表达与交界性肿瘤、卵巢癌比较差异均有统计学意义(P<0.001),与正常卵巢组织比较差异无统计学意义;卵巢交界性肿瘤与卵巢癌比较差异无统计学意义。p53蛋白在卵巢交界性肿瘤与卵巢癌比较差异有统计学意义(P<0.001),与正常卵巢组织、卵巢上皮性良性肿瘤比较差异均无统计学意义。②低分化卵巢癌中HPV16/18的感染率高,p53呈高表达(P<0.05),与患者年龄、组织学类型及临床分期等无关。卵巢癌中Cyclin D1的表达与患者年龄、组织学类型、病理分级及临床分期等无关。③卵巢癌中Cyclin D1、p53与HPV16/18感染呈正相关。结论:高危型HPV感染及p53、Cyclin D1的异常表达可能与卵巢癌发生有关,其联合检测对卵巢交界性肿瘤及卵巢癌的早期诊断和治疗与估计预后具有重要意义。 展开更多

关键词 卵巢上皮性肿瘤 高危型人乳头状瘤病毒 P53 CYCLIN D1 原位杂交

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