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ZNF185基因的克隆及在小鼠睾丸中的定位 被引量：6
1
作者 潘智芳 冯卫国 +5 位作者 陈丽梅 刘晓影 赵春玲 连波 于文静 高志芹 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期973-975,共3页
目的:克隆ZNF185基因并检测ZNF185在小鼠睾丸中的定位。方法:从小鼠睾丸中提取RNA,经RT-PCR,再对目的片段进行克隆和鉴定;提取小鼠肝、睾丸与卵巢组织的蛋白质,进行Western blot分析;制备小鼠睾丸冰冻切片,应用免疫荧光技术分析。结果:(... 目的:克隆ZNF185基因并检测ZNF185在小鼠睾丸中的定位。方法:从小鼠睾丸中提取RNA,经RT-PCR,再对目的片段进行克隆和鉴定;提取小鼠肝、睾丸与卵巢组织的蛋白质,进行Western blot分析;制备小鼠睾丸冰冻切片,应用免疫荧光技术分析。结果:(1)ZNF185基因克隆完全正确。(2)Western blot显示,睾丸中的ZNF185含量最多。(3)免疫荧光显示,ZNF185定位于睾丸间质细胞和精子,在睾丸间质细胞表达较弱,而在圆形精子和成熟精子高表达。结论:成功克隆了ZNF185基因,并初步探明了ZNF185在小鼠睾丸中的定位。 展开更多
关键词 znf185 基因克隆 WESTERN BLOT 免疫荧光
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锌指蛋白185(ZNF185)在小鼠睾丸精子细胞、间质细胞和支持细胞中的表达和定位
2
作者 尤新国 李会平 +5 位作者 魏露 樊姝彤 刘晓影 陈丽梅 潘智芳 冯卫国 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1327-1330,1335,共5页
目的研究锌指蛋白185(ZNF185)在小鼠睾丸精子、间质和支持细胞中的表达变化。方法应用免疫荧光组织化学染色法检测ZNF185在精子、间质、支持细胞和睾丸组织中的定位;实时定量PCR和Western blot法分别检测三种细胞中ZNF185 mRNA和蛋白表... 目的研究锌指蛋白185(ZNF185)在小鼠睾丸精子、间质和支持细胞中的表达变化。方法应用免疫荧光组织化学染色法检测ZNF185在精子、间质、支持细胞和睾丸组织中的定位;实时定量PCR和Western blot法分别检测三种细胞中ZNF185 mRNA和蛋白表达水平的差异。结果免疫荧光细胞分析显示ZNF185在小鼠睾丸精子、间质和支持细胞中均表达,主要分布于间质和支持细胞胞质、精子细胞头部和尾部;实时定量PCR和Western blot结果显示,支持细胞ZNF185 mRNA和蛋白表达水平显著低于间质和精子细胞。结论 ZNF185分布于小鼠睾丸不同细胞,表达量存在差异。 展开更多
关键词 锌指蛋白185(znf185) 精子细胞 间质细胞 支持细胞 精子发生
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转录组测序分析ZNF185在食管鳞状细胞癌中的作用机制
3
作者 宋乃成 王磊 +3 位作者 张彬 李寿康 郑志坤 李劲松 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期287-293,共7页
目的通过转录组测序及生物信息学技术分析ZNF185在食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)中的作用机制及其下游信号通路。方法利用shRNA转染食管鳞癌细胞系Eca-109敲低ZNF185的表达,采用转录组测序技术检测mRNA的表达变化。根据测序数据筛选差异基因... 目的通过转录组测序及生物信息学技术分析ZNF185在食管鳞状细胞癌(食管鳞癌)中的作用机制及其下游信号通路。方法利用shRNA转染食管鳞癌细胞系Eca-109敲低ZNF185的表达,采用转录组测序技术检测mRNA的表达变化。根据测序数据筛选差异基因,通过GO功能分析和KEGG富集分析对差异基因相关的功能及信号通路进行分析。通过STRING工具分析差异蛋白的相互作用,构建出相关的蛋白互作网络,分析关键节点蛋白。结果ZNF185干扰组与干扰对照组Eca-109细胞的差异基因共有3859个,其中表达升高的基因有2112个,表达下降的基因有1747个。显著富集的GO项目包括RNA剪接、细胞-基质连接、局部粘附等。KEGG富集分析表明ZNF185可能与HIF-1信号通路、p53信号通路有关,蛋白互作网络分析发现了BMP2、OAS2等关键蛋白。结论通过转录组测序和生物信息分析筛选出ZNF185参与调控食管鳞癌可能的信号通路,为阐明食管鳞癌的发病机制提供了新的思路。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 znf185 转录组测序 信号通路
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ZNF185基因抗原表位分析及合成肽免疫避孕效果研究
4
作者 樊姝彤 满怡 +5 位作者 梁祖穆 李清华 陈丽梅 郭璐瑶 潘智芳 冯卫国 《现代生物医学进展》 CAS 2018年第11期2052-2056,2080,共6页
目的:预测ZNF185基因的抗原表位,并研究相应合成多肽诱导的免疫应答和免疫避孕效应。方法:应用DNA Star软件预测ZNF185蛋白二级结构、亲水性、可塑性、表面可及性与抗原指数。合成携带ZNF185抗原表位的多肽,进行小鼠免疫实验,检测小鼠... 目的:预测ZNF185基因的抗原表位,并研究相应合成多肽诱导的免疫应答和免疫避孕效应。方法:应用DNA Star软件预测ZNF185蛋白二级结构、亲水性、可塑性、表面可及性与抗原指数。合成携带ZNF185抗原表位的多肽,进行小鼠免疫实验,检测小鼠血清中IgG抗体水平、交配率、妊娠率及每窝产仔数,并观察生殖器官是否发生病变。结果:筛选ZNF185两段氨基酸序列合成多肽,该多肽能够诱导小鼠产生较高的抗体水平,实验组小鼠交配率和妊娠率显著低于对照组,生殖器官并无发生明显的组织病理学变化。结论:ZNF185具有一定的抗生育作用。 展开更多
关键词 znf185 抗原表位 合成肽 免疫避孕
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锌指蛋白185通过与肌动蛋白纤维结合抑制肿瘤细胞增殖 被引量：5
5
作者 郑全辉 陆斌 +1 位作者 葛淑芝 张爱红 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第21期4720-4722,共3页
目的检测锌指蛋白(ZNF)185不同蛋白剪切体与肌动蛋白纤维的结合及对肿瘤细胞增殖的影响。方法 Western印迹检测ZNF185的蛋白表达。克隆ZNF185不同蛋白剪切体基因,转染前列腺癌细胞。免疫荧光染色检测ZNF185与肌动蛋白纤维共定位,直接计... 目的检测锌指蛋白(ZNF)185不同蛋白剪切体与肌动蛋白纤维的结合及对肿瘤细胞增殖的影响。方法 Western印迹检测ZNF185的蛋白表达。克隆ZNF185不同蛋白剪切体基因,转染前列腺癌细胞。免疫荧光染色检测ZNF185与肌动蛋白纤维共定位,直接计数检测细胞增殖。结果 (1)ZNF185在正常前列腺组织中高表达,而在前列腺癌细胞中表达显著降低。(2)全长ZNF185与肌动蛋白纤维结合。(3)全长ZNF185显著抑制前列腺癌细胞的增殖。结论 ZNF185通过结合肌动蛋白纤维发挥抑制前列腺癌细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 znf185 基因克隆 免疫荧光 细胞增殖
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锌指蛋白185在小鼠睾丸间质细胞的表达研究 被引量：1
6
作者 魏露 尤新国 +5 位作者 李会平 樊姝彤 刘晓影 陈丽梅 潘智芳 冯卫国 《山西医科大学学报》 CAS 2016年第3期238-241,共4页
目的优化睾丸间质细胞分离纯化方法,研究锌指蛋白(zinc finger protein,ZNF)185在间质细胞中的表达。方法选用4-5周雄性小鼠,取睾丸,Ⅳ型胶原酶消化分离间质细胞,差速贴壁法纯化后,3β-羟基类固醇脱氢酶染色法鉴定细胞纯度,PCR、Western... 目的优化睾丸间质细胞分离纯化方法,研究锌指蛋白(zinc finger protein,ZNF)185在间质细胞中的表达。方法选用4-5周雄性小鼠,取睾丸,Ⅳ型胶原酶消化分离间质细胞,差速贴壁法纯化后,3β-羟基类固醇脱氢酶染色法鉴定细胞纯度,PCR、Western blot和免疫荧光法研究ZNF185在间质细胞中的表达。结果成功分离纯化小鼠睾丸间质细胞,有纯化组细胞的纯度(x珋=98%)显著高于无纯化组(x珋=22%)(P<0.001)。PCR和Western blot显示,ZNF185在间质细胞中高表达。免疫荧光显示,ZNF185定位于间质细胞的细胞质。结论通过该方法可获得高纯度间质细胞;ZNF185主要表达于间质细胞的细胞质,为进一步研究该蛋白的功能提供了实验基础。 展开更多
关键词 znf185 小鼠 睾丸间质细胞 分离 纯化 鉴定
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锌指蛋白185对胶质瘤细胞增殖影响的研究 被引量：1
7
作者 陆斌 郑全辉 《天津医药》 CAS 2015年第3期241-244,共4页
目的：探讨锌指蛋白ZNF185在人脑胶质瘤细胞增殖中的作用。方法标本取自2011年1月—2013年12月于唐山市工人医院就诊，经病理确诊为胶质瘤患者的肿瘤组织，以瘤旁组织作对照。提取不同组织总蛋白， Western-blot检测ZNF185的表达。提取... 目的：探讨锌指蛋白ZNF185在人脑胶质瘤细胞增殖中的作用。方法标本取自2011年1月—2013年12月于唐山市工人医院就诊，经病理确诊为胶质瘤患者的肿瘤组织，以瘤旁组织作对照。提取不同组织总蛋白， Western-blot检测ZNF185的表达。提取瘤旁组织总RNA，反转录扩增ZNF185编码序列并克隆至pEGFPC2质粒，构建ZNF185表达载体。采用Lipofactamine2000将ZNF185表达载体转染人胶质瘤细胞系SF767，以转染pEGFPC2空载体细胞作为对照。采用流式细胞仪检测细胞周期变化；MTT法检测细胞增殖活性。结果与瘤旁组织相比， ZNF185在人脑胶质瘤组织中表达显著降低（P＜0.01）；转染ZNF185表达载体的胶质瘤细胞与对照细胞相比ZNF185的表达显著增加（P＜0.01）；过表达ZNF185导致SF767细胞G0～G1期细胞比例显著增加（P＜0.05），而S期细胞比例减少（P＜0.05）。同时，过表达ZNF185也导致SF767细胞的增殖速度显著降低（P＜0.05）。结论ZNF185在人脑胶质瘤细胞中发挥抑制细胞增殖的作用。 展开更多
关键词 神经胶质瘤 细胞周期 细胞增殖 锌指 转染 znf185
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DNA甲基化通过锌指蛋白185调控慢性粒细胞白血病细胞的增殖 被引量：5
8
作者 郑全辉 张爱红 +6 位作者 郑爱华 么文博 张庆波 陆斌 胡雪莲 王娜 赵勇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第1期64-71,共8页
锌指蛋白185(ZNF185)属于LIM结构域蛋白,参与细胞的增殖和分化,在多种肿瘤细胞中具有抑癌基因的功能.ZNF185在正常人血液系统细胞中高表达,但目前对白血病细胞的作用未见研究.采用Western blot检测人外周血中性粒细胞、急性粒细胞白血... 锌指蛋白185(ZNF185)属于LIM结构域蛋白,参与细胞的增殖和分化,在多种肿瘤细胞中具有抑癌基因的功能.ZNF185在正常人血液系统细胞中高表达,但目前对白血病细胞的作用未见研究.采用Western blot检测人外周血中性粒细胞、急性粒细胞白血病细胞系HL-60和慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞中ZNF185的表达,发现ZNF185在HL-60和K562细胞中的表达水平显著低于外周血中性粒细胞.为了阐明ZNF185对慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响,从人外周血中性粒细胞克隆ZNF185编码序列,转染K562细胞,MTT检测细胞增殖,发现过表达ZNF185显著抑制K562细胞的增殖.甲基化特异PCR分析表明:ZNF185启动子在HL-60和K562细胞中高甲基化,用5-氮杂-2′-脱氧胞苷处理K562细胞,促进ZNF185的表达,显著抑制细胞增殖.研究结果表明,ZNF185启动子高甲基化导致其在K562细胞中的表达降低和细胞增殖抑制作用减弱.可能是慢性粒细胞白血病发生或发展的原因之一. 展开更多
关键词 锌指蛋白185 慢性粒细胞白血病 细胞增殖 DNA甲基化 5-氮杂-2′-脱氧胞苷
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锌指蛋白(ZNF)185在小鼠不同发育阶段睾丸中的表达 被引量：4
9
作者 冯卫国 潘智芳 +4 位作者 连波 陈丽梅 刘顺梅 刘晓影 高志芹 《生殖与避孕》 CAS CSCD 2012年第10期672-675,共4页
目的:研究锌指蛋白(ZNF)185在小鼠不同发育阶段睾丸中的表达。方法:从小鼠脑、肝、卵巢和不同发育阶段睾丸组织中提取总RNA,采用半定量RT-PCR法检测ZNF185的表达;制备小鼠不同发育阶段睾丸冰冻切片,应用免疫细胞化学分析法检测ZNF185蛋... 目的:研究锌指蛋白(ZNF)185在小鼠不同发育阶段睾丸中的表达。方法:从小鼠脑、肝、卵巢和不同发育阶段睾丸组织中提取总RNA,采用半定量RT-PCR法检测ZNF185的表达;制备小鼠不同发育阶段睾丸冰冻切片,应用免疫细胞化学分析法检测ZNF185蛋白的定位。结果:①ZNF185在睾丸中的表达显著高于脑、肝和卵巢组织。②ZNF185在小鼠性成熟前组睾丸中的表达显著低于性成熟期和老年期,而性成熟期和老年期之间差异不显著。③在性成熟前,ZNF185主要定位于睾丸间质细胞和类肌细胞;在性成熟期和老年期小鼠中,ZNF185主要定位于睾丸间质细胞、类肌细胞和精子。结论:ZNF185在小鼠性成熟后睾丸中的表达升高,定位更广泛。 展开更多
关键词 睾丸 精子发生 锌指蛋白(ZNF)185 RT-PCR 免疫细胞化学 小鼠
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锌指蛋白185在小鼠睾丸支持细胞中的表达与定位 被引量：1
10
作者 李会平 尤新国 +5 位作者 魏露 樊姝彤 刘晓影 陈丽梅 潘智芳 冯卫国 《现代生物医学进展》 CAS 2016年第18期3439-3442,3507,共5页
目的:检测锌指蛋白185在小鼠睾丸支持细胞中的表达,探讨其与精子发生的关系。方法:提取睾丸和支持细胞总RNA,经半定量RT-PCR法检测ZNF185的转录水平;提取睾丸和支持细胞的蛋白质,利用Western blot分析ZNF185的表达量;制备支持细胞爬片,... 目的:检测锌指蛋白185在小鼠睾丸支持细胞中的表达,探讨其与精子发生的关系。方法:提取睾丸和支持细胞总RNA,经半定量RT-PCR法检测ZNF185的转录水平;提取睾丸和支持细胞的蛋白质,利用Western blot分析ZNF185的表达量;制备支持细胞爬片,采用免疫荧光技术检测ZNF185的定位。结果:(1)半定量RT-PCR结果显示:在睾丸支持细胞中扩增出ZNF185基因条带。(2)Western blot结果显示:ZNF185在支持细胞中的表达量显著低于在睾丸组织中的表达量。(3)免疫荧光结果显示:ZNF185主要定位于支持细胞胞质中。结论:ZNF185可能参与支持细胞结构与功能的调控,进而影响精子发生过程。 展开更多
关键词 锌指蛋白(ZNF)185 支持细胞 表达 定位 精子发生
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