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RNA干扰沉默褐飞虱糖转运蛋白基因4的研究
1
作者 谢坤 丁汉凤 +6 位作者 李娜娜 贾素平 白静 丛韫喆 李广贤 姚方印 杨永义 《山东农业科学》 北大核心 2025年第1期22-29,共8页
褐飞虱是水稻上危害最严重的害虫之一,目前的防治措施存在各种弊端,开展控制褐飞虱的探索研究可开辟新的防治途径。本研究利用dsRNA(double-stranded RNA,双链RNA)介导的RNAi(RNA interference,RNA干扰)技术,以褐飞虱糖运输蛋白基因(Nls... 褐飞虱是水稻上危害最严重的害虫之一,目前的防治措施存在各种弊端,开展控制褐飞虱的探索研究可开辟新的防治途径。本研究利用dsRNA(double-stranded RNA,双链RNA)介导的RNAi(RNA interference,RNA干扰)技术,以褐飞虱糖运输蛋白基因(Nlst4)为靶标,在体外合成Nlst4的dsRNA,将其饲喂褐飞虱若虫后,其体内目标基因表达量显著下降,产生致死表型;构建Nlst4的RNAi干扰载体,通过农杆菌侵染转化培育转基因水稻,褐飞虱取食后,体内目标基因转录水平显著降低,1龄、2龄若虫发育历期显著延长,但未出现致死表型。试验结果证实,利用RNAi技术通过培育转基因水稻防治褐飞虱存在可行性,可为后续转基因抗褐飞虱水稻的培育提供科学依据。 展开更多
关键词 褐飞虱 rna干扰 糖转运蛋白基因4 人工饲喂 转基因水稻
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RNA干扰构建载体在防治植物病毒病中的研究
2
作者 孙媛 李梅蓉 +3 位作者 卢建霖 赵大媛 毛振坤 乔燕 《农业与技术》 2025年第1期35-39,共5页
植物病毒病素有植物癌症之称,具有种类多,易于突变,传播途径广,繁殖迅速,寄主高度依赖性等特点。在开展植物病毒病防治研究中,未有特效药剂可以抑制植物病毒病传播,因此植物感染病毒病便会导致严重损失。而RNA干扰作为植物抵抗的天然防... 植物病毒病素有植物癌症之称,具有种类多,易于突变,传播途径广,繁殖迅速,寄主高度依赖性等特点。在开展植物病毒病防治研究中,未有特效药剂可以抑制植物病毒病传播,因此植物感染病毒病便会导致严重损失。而RNA干扰作为植物抵抗的天然防御机制,其具有抗病毒、稳定转座子、监控异常表达mRNA特性,利用RNA干扰技术获得转基因植物是防治植物病毒病的有效方法之一。本文通过对植物病毒病和RNA干扰及在防治植物病毒病中的应用进行综述,有利于更好地利用基因工程为植物病毒病的防治研究提供理论依据。 展开更多
关键词 植物病毒病 抑制 rna干扰 防治
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低盐胁迫下LXRα激动剂添加和RNA干扰对大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼鱼脂质代谢的影响
3
作者 刘志峰 徐菲 +6 位作者 赵海池 施越雷 杨明超 黄智慧 孙志宾 徐荣静 马爱军 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1324-1334,共11页
大菱鲆是我国重要的养殖经济鱼类,随着养殖水域逐渐向滩涂和内陆拓展,亟待研究其低盐适应性机制,进而为培育耐低盐良种提供参考。通过腹腔注射干扰剂dsRNA以及激动剂T091317,以进一步检测下游脂质代谢相关基因的表达以及血清脂代谢产物... 大菱鲆是我国重要的养殖经济鱼类,随着养殖水域逐渐向滩涂和内陆拓展,亟待研究其低盐适应性机制,进而为培育耐低盐良种提供参考。通过腹腔注射干扰剂dsRNA以及激动剂T091317,以进一步检测下游脂质代谢相关基因的表达以及血清脂代谢产物的变化。研究设置两个盐度梯度(5和30),每个盐度设置4个处理组(干扰组、激动组、生理盐水组和空白对照组),实验周期72 h。结果显示:在dsRNA注射后,肝脏中LXRα基因的相对表达量呈现出显著的抑制作用,尤其是在盐度30下;盐度5的肝脏组以及不同盐度的肠道组中,干扰效果不明显。激动剂注射后LXRα基因的相对表达量在不同盐度组中均呈现了激动效应,但维持时间较短。低盐可以抑制SREBP-1、CYP7A1和ApoA-IV基因的表达,当LXRα基因受到抑制或激动后,三者尽管表达趋势不同,但整体上均呈现出相应的干扰和激动效应。血清生化结果显示,低盐显著抑制了TG和HDL的含量,对T-CHO以及LDL的含量无显著影响。30盐度下,当LXRα基因受到抑制或激动后,TG的含量呈现出相应的干扰和激动效应。以上表明在腹腔注射干扰剂dsRNA以及激动剂后,都能够相应的导致LXRα基因表达量降低或者升高。LXRα基因受到抑制后,可以引起下游转录因子SREBP-1基因表达的降低,进而抑制了TG的合成,因此血清中甘油三酯的含量可以进一步作为大菱鲆耐低盐选育的表型。 展开更多
关键词 大菱鲆(Scophthalmus maximus) 脂代谢 LXRα基因 rna干扰
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RNA干扰机制及其应用研究进展 被引量：6
4
作者 万春鹏 周寿然 左爱仁 《现代生物医学进展》 CAS 2008年第2期372-375,共4页
2006年诺贝尔生理学或医学奖,授予给了美国科学家Andrew Z.Fire和Craig C.Mello以表彰他们发现了RNA干扰(RNA interference RNAi)现象,使人们在基因治疗传染性、恶性肿瘤等危重疾病领域取得了突破性的发展。本文主要综述了RNA干扰系统... 2006年诺贝尔生理学或医学奖,授予给了美国科学家Andrew Z.Fire和Craig C.Mello以表彰他们发现了RNA干扰(RNA interference RNAi)现象,使人们在基因治疗传染性、恶性肿瘤等危重疾病领域取得了突破性的发展。本文主要综述了RNA干扰系统的组成、分子机制、作用特点及其在探索基因功能、传染性、恶性肿瘤的基因治疗和药物研发等四个方面的应用。 展开更多
关键词 rna干扰 rna干扰机制 rna干扰应用
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RNA干扰技术防控作物真菌病害研究进展
5
作者 李爽 闫更轩 +2 位作者 田缘 张淑梅 潘钰 《北方园艺》 CAS 北大核心 2024年第3期127-136,共10页
作物真菌病害发生普遍,危害严重,是制约现代农业高质量发展的主要限制因素之一。RNA干扰(RNA interference, RNAi)是真核生物中基于双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的同源mRNA降解、沉默相关基因表达的一种机制。近年来,利用RN... 作物真菌病害发生普遍,危害严重,是制约现代农业高质量发展的主要限制因素之一。RNA干扰(RNA interference, RNAi)是真核生物中基于双链RNA(double-stranded RNA,dsRNA)介导的同源mRNA降解、沉默相关基因表达的一种机制。近年来,利用RNA干扰技术防控作物真菌病害是研究热点,并已成功应用于农业生产,展现出良好的应用前景。该研究就作物真菌病害防治现状、RNA干扰技术原理、防控真菌病害机制及其在作物真菌病害防控中研究进展、基于RNA干扰生物技术存在的问题与应用前景进行了综述,旨在为RNA干扰技术在作物真菌病害防治中的广泛应用提供参考依据。 展开更多
关键词 rna干扰 作物 真菌病害 研究进展
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两个与中华拟同形溞生殖相关基因的筛选及其RNA干扰研究
6
作者 赵雅洁 李国庆 +2 位作者 王业平 金齐德 邓道贵 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期176-184,共9页
为了筛选与中华拟同形溞(Daphnia sinensis)生殖相关的基因,选择4个生长阶段的中华拟同形溞(雌性幼溞JF、成熟前1龄雌溞BM、第1成龄雌溞MA和第4成龄雌溞RF)进行转录组测序。在BM vs.JF、MA vs.JF、RF vs.JF、RF vs.MA、MA vs.BM、RF vs... 为了筛选与中华拟同形溞(Daphnia sinensis)生殖相关的基因,选择4个生长阶段的中华拟同形溞(雌性幼溞JF、成熟前1龄雌溞BM、第1成龄雌溞MA和第4成龄雌溞RF)进行转录组测序。在BM vs.JF、MA vs.JF、RF vs.JF、RF vs.MA、MA vs.BM、RF vs.BM等6个组合中,选择每个组合的前30个上调基因进行筛选,获得了163个差异表达基因。这些差异表达基因以鱼类信息素培养的第4成龄雌溞为样本进行RT-qPCR检测,共筛选出19个与生殖相关的候选基因,选择其中2个基因(Cluster-13168.32243,Dsussp和Cluster-13168.22885,Dsmapk)进行RNAi实验。在RNAi后,Dsussp和Dsmapk基因的表达量在含有其dsRNA的大肠杆菌(Escherichia coli)浓度组均显著小于对照组(Enhanced Green Fluorescent Protein,EGFP),且与EGFP组相比,Dsmapk和Dsussp基因的表达量在2%和5%大肠杆菌浓度组分别下降了28.1%和32.3%、41.1%和55.6%。在RNAi后,中华拟同形溞在Dsussp和Dsmapk组的怀卵数及产幼溞数与对照组相比均减少,且5%大肠杆菌浓度组均小于2%大肠杆菌浓度组。随着龄数的增加,RNAi对中华拟同形溞怀卵数和产幼溞数的抑制影响均加强。因此,Dsussp和Dsmapk基因被证实在中华拟同形溞的生殖发育中起重要作用。 展开更多
关键词 rna干扰 生殖 转录组测序 中华拟同形溞
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RNA干扰在植物中的作用机理及其应用研究进展 被引量：5
7
作者 马超 郝青南 马兵钢 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期1920-1927,共8页
RNA干扰(RNAi)是广泛存在于生物中的一种现象,它是小干扰RNA诱导的转录后基因沉默,是生物抵抗异常DNA的一种保护机制,同时在生物生长发育过程中调控基因的表达.本文综述了近年来有关RNA干扰的发现、作用过程及其机理,分析了它与反义寡... RNA干扰(RNAi)是广泛存在于生物中的一种现象,它是小干扰RNA诱导的转录后基因沉默,是生物抵抗异常DNA的一种保护机制,同时在生物生长发育过程中调控基因的表达.本文综述了近年来有关RNA干扰的发现、作用过程及其机理,分析了它与反义寡核苷酸、核酶、脱氧核酶的不同,并介绍了RNA干扰在植物基因功能、植物抗病毒、作物品种改良等方面的应用,为siRNA干扰的进一步利用提供参考资料. 展开更多
关键词 rna干扰 SIrna干扰 植物病毒
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应用RNA干扰技术体外抑制脂蛋白脂肪酶基因的表达 被引量：3
8
作者 刘明 赵铁强 +4 位作者 冼勋德 高松 范江霖 黄薇 刘国庆 《中国动脉硬化杂志》 CAS CSCD 2005年第1期45-47,共3页
目的　给探讨脂蛋白脂肪酶基因作为动脉粥样硬化基因治疗靶点提供实验基础。方法　利用RNA干扰技术在细胞水平抑制脂蛋白脂肪酶基因的表达 ,根据人脂蛋白脂肪酶基因设计靶序列短发夹RNA ,构建重组干扰质粒pSIREN DNR shRNA ,将干扰质粒... 目的　给探讨脂蛋白脂肪酶基因作为动脉粥样硬化基因治疗靶点提供实验基础。方法　利用RNA干扰技术在细胞水平抑制脂蛋白脂肪酶基因的表达 ,根据人脂蛋白脂肪酶基因设计靶序列短发夹RNA ,构建重组干扰质粒pSIREN DNR shRNA ,将干扰质粒与人脂蛋白脂肪酶真核表达质粒 pCDNA3 hLPL以脂质体方法共转染COS 7细胞 ,通过实时荧光定量聚合酶链反应、Westernblot和活性检测等方法判断脂蛋白脂肪酶基因抑制的效果。结果　转染干扰质粒的细胞中脂蛋白脂肪酶mRNA、蛋白表达以及酶活性均明显降低 ,抑制率可达 70 %以上。结论　所选靶序列可以有效抑制细胞中脂蛋白脂肪酶基因的表达 。 展开更多
关键词 病理学与病理生理学 脂蛋白脂肪酶基因的rna干扰 rna干扰 脂蛋白脂肪酶 短发夹rna 基因表达 动脉粥样硬化
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慢病毒介导RNA干扰抑制RRS1基因表达对胆管癌RBE细胞增殖的影响
9
作者 刘伟 郭骏军 +1 位作者 晏强 陈怀周 《中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生》 2024年第6期0164-0169,共6页
研究慢病毒介导RNAi干扰技术抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞表达后对胆管癌RBE细胞增殖产生的影响。方法 运用RT-PCR检测手术切除的胆管癌与癌旁胆管组织标本RRS1 mRNA基因水平的表达。通过慢病毒载体介导RNA干扰技术,从转录水平沉默RRS1... 研究慢病毒介导RNAi干扰技术抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞表达后对胆管癌RBE细胞增殖产生的影响。方法 运用RT-PCR检测手术切除的胆管癌与癌旁胆管组织标本RRS1 mRNA基因水平的表达。通过慢病毒载体介导RNA干扰技术,从转录水平沉默RRS1基因表达,RT-PCR检测抑制RRS1后在胆管癌mRNA基因水平的表达;体外实验观察抑制RRS1基因后对胆管癌RBE细胞增殖的影响,初步探讨抑制RRS1基因表达后对胆管癌细胞增殖的影响。结果 RT-PCR检测结果发现在胆管癌组织中的RRS1 mRNA基因表达水平较癌旁胆管组织明显升高,RNA干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中表达后,胆管癌RBE细胞的增殖能力受到了明显下降。结论 (1)胆管癌组织中RRS1基因表达上调。(2)慢病毒RNAi干扰抑制RRS1基因在胆管癌RBE细胞中的表达后,RRS1会促进胆管癌细胞的增殖能力。 展开更多
关键词 RRS1 胆管癌 rna干扰 细胞增殖
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人PTEN基因RNA干扰及其RESC救援慢病毒载体的构建与鉴定 被引量：1
10
作者 王玉梅 盛光耀 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第3期443-447,共5页
目的:构建人PTEN基因RNA干扰(RNAi)及其逃避RNAi策略结构(RESC)救援的慢病毒载体。方法:利用Invitrogen公司在线软件,针对已筛选确定的PTEN基因RNAi有效靶序列,设计并合成靶序列的oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XbaⅠ和XhoⅠ酶切后的pF... 目的:构建人PTEN基因RNA干扰(RNAi)及其逃避RNAi策略结构(RESC)救援的慢病毒载体。方法:利用Invitrogen公司在线软件,针对已筛选确定的PTEN基因RNAi有效靶序列,设计并合成靶序列的oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XbaⅠ和XhoⅠ酶切后的pFLRu-GFP载体连接构建成pFLRu-U6-shPTEN慢病毒载体。在此基础上,引入外源设计的PTENmRNA,与经EcoRⅠ和BamHⅠ酶切后的pFLRu-U6-shPTEN载体连接,从而产生在同一个载体内兼有人PTEN基因shRNA及其救援cDNA同时表达的RESC慢病毒载体pFLRu-U6-rrshPTEN。2者均转入到大肠杆菌XL10感受态细胞,制备质粒并用酶切及测序鉴定。分别用pFLRu-U6-shPTEN、pFLRu-U6-rrshPTEN与pCMV-dR8.2ΔR和pCMV-VSV-G质粒共转染293T包装细胞,包装产生2种慢病毒,收集病毒上清,系列稀释法检测病毒悬液的滴度。结果:氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆、酶切鉴定、U6前引物测序鉴定结果显示pFLRu-U6-shPTEN和pFLRu-U6-rrshPTEN均为阳性克隆,且2种慢病毒的滴度分别为6.6×105和5.6×105pfu/mL。结论:成功构建出人PTEN基因RNAi及其RESC慢病毒载体。有效地避免了由于脱靶效应所引起的假阳性结果对实验的干扰,为研究PTEN基因功能提供了稳定的转染细胞载体。 展开更多
关键词 PTEN基因 慢病毒载体 rna干扰 逃避rna干扰策略结构 脱靶效应
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基因沉默的维持——长效RNA干扰 被引量：1
11
作者 徐亮 何军林 《国际药学研究杂志》 CAS 2009年第5期389-392,共4页
自揭示了哺乳动物细胞中的RNA干扰(RNAi)现象以来,对其进行了大量的研究与资金投入,期望将其发展成一种切实可行的治疗手段。毫无疑问,RNAi是最具发展潜力的基因治疗策略。由于许多采用RNAi治疗的疾病需要长期用药,因此,有关RNAi类药物... 自揭示了哺乳动物细胞中的RNA干扰(RNAi)现象以来,对其进行了大量的研究与资金投入,期望将其发展成一种切实可行的治疗手段。毫无疑问,RNAi是最具发展潜力的基因治疗策略。由于许多采用RNAi治疗的疾病需要长期用药,因此,有关RNAi类药物长期应用的安全性问题成为关注重点。 展开更多
关键词 rna干扰 基因沉默 小干扰rna rna干扰组合治疗
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dsRNA和RNA干扰技术 被引量：3
12
作者 巢时斌 付文金 彭剑雄 《国外医学（生理病理科学与临床分册）》 2003年第1期97-100,共4页
dsRNA在细胞内诱导同源序列的基因表达受抑的现象称为RNA干扰。其机的阐明使它有可能在基因敲除 ,基因功能测定等方面成为一项成熟的技术 ,这将在生命科学领域中引起深刻变化。本文就dsRNA和RNA干扰的关系 ,RNA干扰的机制和特点 。
关键词 DSrna rna干扰 rna干扰技术 基因沉寂
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遗传学研究的新工具:RNA干扰 被引量：1
13
作者 于国龙 何蕴韶 《国外医学（遗传学分册）》 2005年第4期200-203,共4页
RNA干扰(RNAi)是近年来发现的一个新的遗传学现象,近年来在遗传学的研究中已用于基因功能的研究,遗传病的基因治疗等领域,成为遗传学研究的新工具。本文就其在遗传学方面的应用作一综述。
关键词 rna干扰(rnaI) 遗传学 基因 遗传学研究 rna干扰 工具 基因功能 基因治疗 遗传病
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RNA干扰技术抗乙型、丙型肝炎病毒的新进展 被引量：1
14
作者 彭国平 陈智 《国外医学（流行病学．传染病学分册）》 2005年第5期290-292,共3页
乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的慢性肝病严重影响人类健康,而防治此类严重肝病的关键在于抗病毒治疗,RNAi作为一种有效抵抗外来病毒入侵的机制,其在抗肝炎病毒上的应用有着巨大的前景,本文就近年来在RNAi抗HBV、HCV方... 乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)感染引起的慢性肝病严重影响人类健康,而防治此类严重肝病的关键在于抗病毒治疗,RNAi作为一种有效抵抗外来病毒入侵的机制,其在抗肝炎病毒上的应用有着巨大的前景,本文就近年来在RNAi抗HBV、HCV方面的研究进展进行综述。 展开更多
关键词 肝炎病毒 rna干扰 抗病毒 丙型肝炎病毒(HCV) 乙型肝炎病毒(HBV) rna干扰技术 慢性肝病 rnaI 抗病毒治疗 抗肝炎病毒 人类健康 抗HBV
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病毒反RNA干扰研究进展
15
作者 李筱筱 彭国平 蔡挺 《国际遗传学杂志》 CAS 2007年第1期10-13,共4页
RNA干扰（RNAi）是生物体长期进化发展过程中形成的一种对外源遗传因子的特异性降解机制。RNAi的机制是通过一段小片段双链RNA的作用序列特异性地使一段目的基因失活。随着病毒分子遗传学的发展，我们对于宿主RNAi防御系统的研究也愈加... RNA干扰（RNAi）是生物体长期进化发展过程中形成的一种对外源遗传因子的特异性降解机制。RNAi的机制是通过一段小片段双链RNA的作用序列特异性地使一段目的基因失活。随着病毒分子遗传学的发展，我们对于宿主RNAi防御系统的研究也愈加深入。令人感兴趣的是很多病毒已经发展了拮抗RNAi作用的机制通路从而得以逃脱RNAi介导的基因抑制。研究发现，无论植物还是动物病毒均可以利用自身原料合成抑制蛋白，干扰RNAi的进行。迄今为止，RNAi已被发现在自然界中所有真核生物内广泛分布，并且已经逐步演变为一种研究基因功能的重要手段。最重要的是RNAi更具有应用于基因治疗的美好前景。因此，对于病毒反RNAi机制的研究显得格外有意义。 展开更多
关键词 rna干扰 反rna干扰 抑制蛋白 抗病毒
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RNA干扰研究现状及其在胃癌诊治中的应用前景
16
作者 洪瑜 季峰 《浙江医学》 CAS 2007年第9期1006-1009,共4页
中国是世界上胃癌的高发病区，其死亡率居我国恶性肿瘤之首。目前对胃癌主要采取手术为主、内镜下治疗及化疗、放疗等为辅的综合疗法。尽管由于内镜技术的发展，极大提高了早期胃癌的检出率和治愈率，但对于进展期胃癌来说，其预后仍然... 中国是世界上胃癌的高发病区，其死亡率居我国恶性肿瘤之首。目前对胃癌主要采取手术为主、内镜下治疗及化疗、放疗等为辅的综合疗法。尽管由于内镜技术的发展，极大提高了早期胃癌的检出率和治愈率，但对于进展期胃癌来说，其预后仍然较差。因此，如何提高疗效、改善预后是胃癌研究的焦点。RNA干扰技术自问世以来，因其独特的原理和相比于其他基因治疗策略的优越性而被迅速应用于胃癌相关基因功能检测和基因治疗的研究中。 展开更多
关键词 早期胃癌 rna干扰研究 rna干扰技术 诊治 基因功能检测 基因治疗 内镜下治疗 进展期胃癌
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RNA干扰的机制及在兽医上的应用进展
17
作者 何叶峰 《山东农业科学》 2006年第4期109-112,共4页
RNA干扰(RNA interference,RNAi)是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制,是存在于真核细胞内的一种自我保护现象。本文概述了RNA干扰的机制、研究方法及在兽医上用于猪、鸡抗病毒感染的应用现状... RNA干扰(RNA interference,RNAi)是真核生物中普遍存在的抵抗病毒入侵、抑制转座子活动、调控基因表达的监控机制,是存在于真核细胞内的一种自我保护现象。本文概述了RNA干扰的机制、研究方法及在兽医上用于猪、鸡抗病毒感染的应用现状,提出了存在的问题和研究方向。 展开更多
关键词 rna干扰 rna干扰机制 研究方法 抗病毒感染
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小鼠NOMO1基因RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究 被引量：2
18
作者 沈震 陈欢欢 +3 位作者 张浩 盛燕辉 杨荣 孔祥清 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1661-1665,共5页
目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系。方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成... 目的:构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,比较其对P19细胞NOMO1基因的抑制效率,以研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系。方法:利用Designer3.0软件设计小鼠NOMO1基因干扰片段,合成shRNA序列,再行寡核苷酸双链的合成,退火后形成的寡核苷酸双链克隆到pGPU6/Hygro载体的黏性末端,连接产物转化到感受态细胞,增菌,质粒扩增,质粒DNA抽提,使用PstⅠ、BamHⅠ进行双酶切和DNA测序鉴定重组克隆。将小鼠NOMO1基因RNA干扰载体转染P19细胞,以RT-PCR技术验证NOMO1基因在P19细胞中的mRNA表达。以DMSO诱导分化方案诱导P19细胞向心肌细胞分化,采用定量RT-PCR技术检测P19细胞中α-MHC等基因mRNA的表达,评估NOMO1与P19干细胞向心肌细胞方向分化的关系。结果:双酶切证实shRNA正确插入质粒,测序结果表明插入的序列正确。载体转染的P19细胞筛选稳定表达株,经RT-PCR和Western blot验证4个位点设计的干扰质粒对NOMO1在P19细胞中的mRNA表达均具有较高的抑制效率。转染后P19细胞的α-MHC基因mRNA表达则显著下调(P<0.05)。结论:成功构建小鼠NOMO1基因RNA干扰载体,为研究NOMO1基因与P19细胞向心肌细胞方向分化的关系提供了稳定的转染细胞工具,NOMO1可能通过诱导α-MHC等基因表达,促进P19干细胞向中胚层的分化。 展开更多
关键词 先天性心脏病 NOMO1基因 rna干扰 rna干扰载体 P19细胞
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RNA干扰技术靶向hTERT基因治疗肝癌的实验研究 被引量：30
19
作者 张鹏辉 涂植光 +3 位作者 杨明清 黄文方 邹琳 周亚莉 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期619-625,共7页
背景与目的:RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的新基因阻断技术,在基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景。目前,利用RNAi已抑制了包括cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内... 背景与目的:RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是由双链RNA介导的、在转录后mRNA水平关闭相应基因表达的新基因阻断技术,在基因功能研究、基因治疗方面已显示出巨大的前景。目前,利用RNAi已抑制了包括cyclophilin、GAPDH、p53、c-myc在内的多个内源基因的表达。同时在艾滋病、病毒性肝炎等的治疗研究中也已取得一定进展。但对肝癌等恶性肿瘤中高表达的hTERT基因,国内外还未见相关研究报道。本研究利用RNAi技术,在体内外抑制hTERT基因表达,探讨RNAi对肝癌治疗的可行性。方法:设计干扰hTERT基因的小片段RNA,构建重组表达质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT并导入肝癌SMMC7721细胞株和裸鼠移植瘤,在体内外诱导RNAi,采用流式细胞检测技术、RT-PCR法、免疫组化等同时检测RNAi治疗组和对照组hTERT基因表达及细胞增殖变化。结果:体外细胞实验显示,重组质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT导入肝癌SMMC7721细胞株3～7天后,肝癌细胞生长抑制率达37.5%;细胞周期相分布发生显著变化,S期细胞明显减少,G1/G0期细胞显著增加;hTERT的mRNA表达由99.4%下调到53.1%,hTERT蛋白表达由86.3%下调到46.6%。裸鼠体内实验结果显示,质粒pTZU6+1-shRNA-hTERT注射裸鼠皮下移植瘤7天后,瘤体积明显缩小,hTERT的mRNA表达由99.1%下调到76.2%,hTERT蛋白表达由87.2% 展开更多
关键词 肝肿瘤 rna干扰 HTERT 基因治疗 可行性 特异性
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灰飞虱海藻糖酶基因的克隆及RNA干扰效应 被引量：31
20
作者 张倩 鲁鼎浩 +2 位作者 蒲建 吴敏 韩召军 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期911-920,共10页
RNA干扰(RNAi)不但可以用于研究基因的功能,还可以通过沉默靶标基因干扰特定的生命过程。因此,通过深入研究,发掘高效专一性靶基因和RNAi技术,有可能开辟针对性的害虫RNAi防控新途径。本研究通过灰飞虱Laodelphax striatellus转录组数... RNA干扰(RNAi)不但可以用于研究基因的功能,还可以通过沉默靶标基因干扰特定的生命过程。因此,通过深入研究,发掘高效专一性靶基因和RNAi技术,有可能开辟针对性的害虫RNAi防控新途径。本研究通过灰飞虱Laodelphax striatellus转录组数据分析并结合RACE技术,克隆了灰飞虱两种海藻糖酶的全长基因,分别命名为LSTre-1和LSTre-2,其GenBank登录号分别为JQ027050和JQ027051。它们均具有海藻糖酶基因的典型特征,与已报道的其他昆虫的海藻糖酶基因具有很高的相似性,并表现出一定的虫种亲缘关系。其中LSTre-1为水溶性海藻糖酶基因,全长2042 bp,开放阅读框编码602个氨基酸,前端有25个氨基酸的信号肽,但无跨膜结构域;LSTre-2为膜结合型海藻糖酶基因,全长2619 bp,开放阅读框编码618个氨基酸,前端有26个氨基酸的信号肽,有2个疏水性跨膜结构域。利用喂食法研究2种海藻糖酶基因dsRNA对灰飞虱的致死效应,发现靶向水溶性酶基因的干扰效应略高于靶向膜结合型的,但两种海藻糖酶基因的dsRNA都可以显著抑制灰飞虱海藻糖酶基因的表达,降低其活力,还能显著抑制试虫的生长,大幅增加试虫死亡率。结果提示,通过适宜途径干扰海藻糖酶基因可以开发防治灰飞虱的新途径。 展开更多
关键词 灰飞虱 海藻糖酶 DSrna rna干扰 致死效应
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