PB2基因在流感病毒跨物种传播和哺乳动物适应性中的作用及机制研究进展

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作者 郭雨欣 周栋梁 +1 位作者 蒲娟 张蕊 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期121-131,共11页

近年来,随着禽流感病毒感染人病例的不断增加,对其跨物种传播和哺乳动物适应性的研究备受关注。作为RNA聚合酶复合体的重要组成部分,PB2蛋白在流感病毒转录复制和宿主适应性中发挥关键作用。PB2的特定氨基酸位点突变以及不同亚型流感病... 近年来,随着禽流感病毒感染人病例的不断增加,对其跨物种传播和哺乳动物适应性的研究备受关注。作为RNA聚合酶复合体的重要组成部分,PB2蛋白在流感病毒转录复制和宿主适应性中发挥关键作用。PB2的特定氨基酸位点突变以及不同亚型流感病毒间的交换重组,能够改变病毒在宿主细胞中的聚合酶活性,进而影响病毒的宿主范围和致病性,促进病毒跨物种传播的能力。此外,PB2蛋白还通过与宿主关键因子的相互作用参与调控病毒对不同哺乳动物的宿主适应性。文章对PB2蛋白的结构和功能特征及其在哺乳动物适应性机制方面的最新研究进展进行归纳总结,为揭示流感病毒跨物种传播机制及相关防控手段的完善提供参考信息。 展开更多

关键词 流感病毒 pb2基因 跨物种传播 哺乳动物适应性 分子机制

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广东人H_5N_1毒株PB2基因进化和特性 被引量：3

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作者 黄平 李晖 +4 位作者 俞守义 邹丽容 方苓 陈秋霞 柯昌文 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第17期1547-1550,共4页

目的:通过对人禽流感H5N1毒株PB2基因序列的因H变异分析,揭示毒株PB2基因特征与进化.方法:检测广东地区人禽流感H5N1毒株PB2基因核苷酸序列,同时检索全球人禽流感H5N1毒株PB2基因序列,采用DNAStar5.0软件对检索的人禽流感H5N1毒株PB2基... 目的:通过对人禽流感H5N1毒株PB2基因序列的因H变异分析,揭示毒株PB2基因特征与进化.方法:检测广东地区人禽流感H5N1毒株PB2基因核苷酸序列,同时检索全球人禽流感H5N1毒株PB2基因序列,采用DNAStar5.0软件对检索的人禽流感H5N1毒株PB2基因核苷酸序列进行比对和分析;并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析.结果:1997/200648株毒株PB2基因核苷酸序列同源性分成两组,1997/1998毒株为第一组(G1),2003/2006毒株为第二组(G2).PB2基因错义置换导致101个氨基酸位点变异,占比例13.3%(101/759).PB2基因Ks值为39.4×10-6～63.4×10-6Nt/d,Ka值为3.36×10-6～5.11×10-6Nt/d;提示PB2基因进化主要受到自发突变影响.2003/2006毒株(包括毒株GD-01-06)仅保留一个糖基化位点(NPT301-303),丢失3个糖基化位点,可能影响蛋白致病性和抗原性.结论:目前PB2基因进化分成两组,主要受到除自发突变影响;PB2基因丢失3个糖基化位点可能影响蛋白致病性.人禽流感H5N1毒株PB2基因在自然界变异非常频繁,不断变异将影响H5N1毒株在人-人传播能力和引发大流行. 展开更多

关键词 人禽流感 H5N1毒株 pb2基因 进化 特性

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AIV PB2基因靶向性M1GS核酶的构建及其体外切割活性测定 被引量：1

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作者 李小英 伍婧茹 +1 位作者 刘琳 张文军 《广东药科大学学报》 CAS 2017年第1期103-107,共5页

目的针对禽流感病毒(AIV)复制酶PB2亚基的基因构建具有靶向切割作用的M1GS核酶,为新型抗AIV反义药物的开发奠定基础。方法基于大肠埃希菌的核糖核酸酶P(RNase P),根据AIV PB2基因的序列特征,设计一小段与之互补的引导序列GS,通过PCR技... 目的针对禽流感病毒(AIV)复制酶PB2亚基的基因构建具有靶向切割作用的M1GS核酶,为新型抗AIV反义药物的开发奠定基础。方法基于大肠埃希菌的核糖核酸酶P(RNase P),根据AIV PB2基因的序列特征,设计一小段与之互补的引导序列GS,通过PCR技术将其共价连接至大肠埃希菌RNase P催化性亚基(M1 RNA)的3'末端,以构建靶向性M1GS核酶。通过体外切割试验测定M1GS核酶的活性。结果构建了M1GS-T_(436)、M1GS-C_(341)两种M1GS核酶。体外切割实验证实,核酶M1GS-T_(436)可对靶RNA片段产生特异性切割;核酶M1GS-C_(341)虽可切割靶RNA片段,但可能属于非特异性切割。结论成功构建并筛选出一种具有显著体外切割活性的M1GS核酶(M1GS-T_(436)),为今后进一步研究其胞内及体内抗病毒活性奠定了基础。 展开更多

关键词 M1GS核酶 禽流感病毒 pb2基因 抗病毒

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A型流感病毒H7N9株PB1和PB2基因的克隆和真核表达 被引量：1

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作者 薛宇佳 杜江龙 +6 位作者 王晨 万雪梅 杨学财 王峰 贾骁晔 冉乾东 曹欣 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期1448-1451,共4页

【目的】本试验旨在构建A型H7N9流感病毒RNA聚合酶类蛋白PB1和PB2真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白。【方法】首先提取苏州分离株A型H7N9流感病毒的总RNA,通过RT-PCR技术获得了A型H7N9流感病毒PB1和PB2的全长基因,然后将其... 【目的】本试验旨在构建A型H7N9流感病毒RNA聚合酶类蛋白PB1和PB2真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白。【方法】首先提取苏州分离株A型H7N9流感病毒的总RNA,通过RT-PCR技术获得了A型H7N9流感病毒PB1和PB2的全长基因,然后将其克隆至真核表达载体pRK中构建pRK-Flag-PB1/PB2真核重组表达载体,经酶切及测序鉴定正确后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定PB1/PB2蛋白的表达。【结果】成功克隆了PB1和PB2全长基因,构建了A型H7N9流感病毒PB1和PB2蛋白真核表达载体pRK-Flag-PB1/PB2,并在293T细胞中转染表达,Western blot确定了PB1/PB2蛋白的成功表达。【结论】该表达载体的成功构建及在293T细胞中成功表达PB1和PB2蛋白,为后期开展流感病毒蛋白功能及与真核细胞中的蛋白相互作用的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 A型流感病毒 pb1基因 pb2基因 克隆 真核表达

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H9N2亚型禽流感病毒PB2蛋白哺乳动物适应性变异的筛选与功能鉴定

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作者 郭雨欣 蒲娟 《中国家禽》 北大核心 2024年第11期1-9,共9页

研究旨在鉴定H9N2亚型禽流感病毒PB2基因进化产生的哺乳动物适应性突变并明确其在哺乳动物宿主中的复制能力和致病性。试验通过建立中国源H9N2亚型禽流感病毒PB2氨基酸序列库、利用多态性分析以及聚合酶活性检测,筛选出PB2基因演化出的... 研究旨在鉴定H9N2亚型禽流感病毒PB2基因进化产生的哺乳动物适应性突变并明确其在哺乳动物宿主中的复制能力和致病性。试验通过建立中国源H9N2亚型禽流感病毒PB2氨基酸序列库、利用多态性分析以及聚合酶活性检测,筛选出PB2基因演化出的潜在适应性位点,并进一步利用哺乳动物细胞以及小鼠模型明确新突变的哺乳动物适应性。结果显示:PB2氨基酸序列中存在12个具有明显多态性的位点,其中PB2-340K、PB2-588V以及PB2-627V的变化趋势与自2015年起人感染病例增加呈正相关,并表现明显的人宿主偏好;这3个突变中,PB2-E627V显著增强了H9N2亚型禽流感病毒在人源293T细胞中聚合酶活性,并且显著提高了H9N2亚型禽流感病毒在哺乳动物细胞中的复制能力以及在小鼠中的病毒载量和致病性。以上研究表明,H9N2亚型禽流感病毒PB2蛋白表现出哺乳动物适应性进化特点,并且能够增强对小鼠的致病性,带来跨宿主感染风险。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9N2 哺乳动物适应性 pb2基因 E627V 聚合酶活性

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禽流感病毒新疆株A/Duck/XJ/4(H5N1)的PB1、PB2和PA基因测序及进化分析

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作者 汪萍 沙依兰古丽 +4 位作者 符子华 盛卓君 巴哥得力 陆桂丽 成进 《山东农业大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第3期331-334,344,共5页

通过RT-PCR技术对禽流感病毒新疆株A/Duck/X J/4（H5N1）的PB1、PB2和PA基因分别进行了扩增及克隆，测序结果表明该毒株的PB2、PB1和PA基因全长核苷酸序列分别为2341 bp、2282 bp和2187 bp。同源性分析表明A/Duck/X J/4（H5N1）株与禽... 通过RT-PCR技术对禽流感病毒新疆株A/Duck/X J/4（H5N1）的PB1、PB2和PA基因分别进行了扩增及克隆，测序结果表明该毒株的PB2、PB1和PA基因全长核苷酸序列分别为2341 bp、2282 bp和2187 bp。同源性分析表明A/Duck/X J/4（H5N1）株与禽源、野生鸟类和猪源的禽流感毒株均有很高的同源性（86.3%-99.6%）。与人源毒株相比，PB2和PA与A/HK/156/97（H5N1）株的同源性较低（86.3%-88.7%）;与A/V ietnam/CL01/2004（H5N1）株和A/hum an/Zhejiang/16/2006（H5N1）株的同源性较高（93.0%-98.8%）;PB1与人源毒株A/HK/156/97（H5N1）、A/V ietnam/CL01/2004（H5N1）、A/hum an/Zhejiang/16/2006（H5N1）同源性为91.1%-93.2%。 展开更多

关键词 禽流感病毒 pb1 pb2和PA基因 RT—PCR 序列分析

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美研究发现感冒病毒基因变化致命

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《中国科技产业》 2001年第10期43-43,共1页

关键词 美国 禽流感病毒 基因变化 毒性 pb2基因

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烟曲霉pbs2基因功能初步探讨 被引量：7

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作者 马彦 乔建军 +1 位作者 刘伟 李若瑜 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1126-1130,共5页

目的克隆烟曲霉pbs2基因，并构建烟曲霉pbs2基因突变株，了解该基因对烟曲霉形态学影响以及对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化。方法通过基因同源性比对，在烟曲霉基因组找出与酿酒酵母pbs2基因同源的序列，分析其结构并通过PCR扩增... 目的克隆烟曲霉pbs2基因，并构建烟曲霉pbs2基因突变株，了解该基因对烟曲霉形态学影响以及对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化。方法通过基因同源性比对，在烟曲霉基因组找出与酿酒酵母pbs2基因同源的序列，分析其结构并通过PCR扩增烟曲霉pbs2基因连同其上下游各约1．0kb的DNA片段，将该片段重组到质粒pDHt／SK中形成PA，再通过PCR扩增pyrG作为筛选标记插入到PA的pbs2基因开放阅读框架（ORF）中，构建好pbs2基因敲除载体PB。将敲除载体转化到根瘤农杆菌，再利用ATMT法转化嘧啶营养缺陷株烟曲霉AF293．1，筛选出烟曲霉pbs2基因缺陷株△pbs2。观察突变株和野生株AF293在基础培养基上的生长速度并测定二者对渗透压、氧化压力物质敏感性的变化。结果经过SMART软件分析发现烟曲霉pbs2基因编码一种磷酸转移酶。在基础培养基上△pbs2生长速度同野生株间差异无统计学意义（P〉0．05），但在氧化压力和渗透压的信号传导中，△pbs2对氧化压力和渗透压的敏感性较野生株AF293敏感。结论烟曲霉中pbs2基因不仅参与渗透压的传导，还参与氧化压力的传导，但只参与传导特定的氧化压力。 展开更多

关键词 烟曲霉 pbs2基因 信号传导

原文传递

野禽源AIV PB1-F2基因的遗传进化及部分氨基酸位点组成分析 被引量：1

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作者 张进 李雁冰 +2 位作者 柴洪亮 张兰兰 华育平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期674-680,共7页

在完成14株野禽源AIV PB1-F2基因克隆、测序的基础上,对其进行了同源性、遗传进化关系及氨基酸编码特征的比较分析。结果发现,H5N1亚型高致病性毒株A/lesser_kestrel/Harbin/194/2007(H5N1)PB1-F2的第37,48,50位氨基酸分别为精氨酸、脯... 在完成14株野禽源AIV PB1-F2基因克隆、测序的基础上,对其进行了同源性、遗传进化关系及氨基酸编码特征的比较分析。结果发现,H5N1亚型高致病性毒株A/lesser_kestrel/Harbin/194/2007(H5N1)PB1-F2的第37,48,50位氨基酸分别为精氨酸、脯氨酸、甘氨酸,与其他13个低致病性毒株均不相同(其分别为谷氨酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸)。为探讨这一现象,从NCBI Influenza Virus Resource中选取1 061个AIV毒株的PB1-F2基因序列进一步展开分析,结果表明:在第37,48,50位氨基酸位点上,97香港H5N1、其他H5N1及其他亚型AIV在此3个位点上氨基酸的构成存在着较为明显的差异,而且还呈现出了一定的规律和特点;并且研究还发现在此3个位点上,H9N2亚型毒株也表现出了较强的时间和空间分布特征。针对PB1-F2基因的遗传进化关系分析表明,H5N1及香港系毒株较其他AIV存在较远的遗传距离。随机的突变和重组似乎不足以解释这种差异及遗传距离形成的原因,其生物学意义有待于进一步探讨。 展开更多

关键词 野禽源禽流感病毒 pb1-F2基因 遗传进化 氨基酸组成

原文传递

深圳H7N9流感病毒PB1-F2基因分子特征 被引量：1

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作者 董方圆 王昕 +5 位作者 彭博 武伟华 刘慧 丁小满 郑青 房师松 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期493-497,共5页

目的了解深圳20株H7N9流感病毒PB1-F2基因的分子特征。方法使用DNAstar、MEGA等生物软件对深圳地区H7N9流感病毒PB1-F2进行核苷酸、氨基酸序列同源性和系统进化分析。结果2014年底到2015年H7N9流感病毒爆发主要集中在广东省，以深圳居... 目的了解深圳20株H7N9流感病毒PB1-F2基因的分子特征。方法使用DNAstar、MEGA等生物软件对深圳地区H7N9流感病毒PB1-F2进行核苷酸、氨基酸序列同源性和系统进化分析。结果2014年底到2015年H7N9流感病毒爆发主要集中在广东省，以深圳居首。深圳20株H7N9流感病毒PB1-F2基因主要分为三个亚系。3株的PB1-F2基因的N端缺失编码52个氨基酸；1株PB1-F2基因的c端缺失编码57个氨基酸；1株PB1-F2基因的c端缺编码76个氨基酸；其余株PB1-F2基因编码90个氮基酸。各深圳株与A／Anhui／1-DEWH730／2013株相比核苷酸和氨基酸的同源性分别为96．0％-100％和89．O％～100％。各深圳株之间的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为94．9％～100％和85．7％～100％。结论深圳H7N9流感病毒PB1-F2基因具有独特的分子特征。 展开更多

关键词 甲型流感病毒H7N9 pb1-F2基因 进化分析

原文传递

一种来源于链格孢菌的MAPK激酶AtPBS2基因的克隆及功能分析

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作者 冯飞 纪春艳 +2 位作者 杨秀芬 曾洪梅 邱德文 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期52-57,共6页

通过遗传学手段,构建了细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)cDNA酵母表达文库并筛选获得MAPK激酶AtPBS2基因,该基因全长2492bp,编码683个氨基酸。AtPbs2p与来源于烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的AtPbs2p(XP_752961)、粗糙脉孢菌(Neuro... 通过遗传学手段,构建了细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)cDNA酵母表达文库并筛选获得MAPK激酶AtPBS2基因,该基因全长2492bp,编码683个氨基酸。AtPbs2p与来源于烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的AtPbs2p(XP_752961)、粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)的NcPbs2p(XP_965727)、稻瘟菌(Magnaporthe grisea)MGCH7(XP_001522946)及酵母(Saccharomyces cerevisiae)ScPbs2p(EDN63254)序列分别具有52%、52%、49%和47%的相似性。在高渗环境下,AtPBS2基因与酵母的ScPBS2基因功能相同,具有耐高渗透压环境的能力。细极链格孢菌(A.tenuissima)中存在HOG通路信号途径,AtPBS2基因可能与链格孢菌(A.tenuissima)的逆境适应性调节密切相关。 展开更多

关键词 MAPK激酶 细极链格孢菌(Alternaria tenuissima) HOG途径 pbS2基因

原文传递

橡胶树炭疽菌CsPbs2基因的原核表达分析 被引量：4

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作者 廖小淼 何其光 +6 位作者 刘耀 徐良向 龙熙平 刘文波 张宇 林春花 缪卫国 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期2126-2132,共7页

HOG MAPK途径参与植物病原真菌生长发育、致病和对杀菌剂敏感性等过程,CsPbs2基因是HOG MAPK信号通路的关键成员。为研究CsPbs2蛋白的互作蛋白及其调控机制,本研究克隆了橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense) CsPbs2基因,构建融合蛋... HOG MAPK途径参与植物病原真菌生长发育、致病和对杀菌剂敏感性等过程,CsPbs2基因是HOG MAPK信号通路的关键成员。为研究CsPbs2蛋白的互作蛋白及其调控机制,本研究克隆了橡胶树炭疽菌(Colletotrichum siamense) CsPbs2基因,构建融合蛋白表达载体,利用SDS-PAGE和Western Blot检测蛋白表达。结果显示橡胶树炭疽菌(C. siamense)的CsPbs2基因全长2 051 bp,编码667个氨基酸,包含个1个内含子,具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶催化结构域。CsPbs2基因在进化关系上与球孢白僵菌(Beauveria bassiana)、禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)的Pbs2基因有最近的亲缘关系。构建的GST-CsPbs2蛋白融合表达载体在供试条件下(IPTG:0.6 mmol/L, 0.8 mmol/L,1.0 mmol/L温度16℃和25℃)均可较好诱导表达,GST-CsPbs2融合蛋白大小约为96 kD。用GST亲和层析柱纯化获得蛋白,经Western Blot检测显示该蛋白可与GST单克隆抗体特异性结合。本研究成功构建了GSTCsPbs2蛋白融合表达载体,纯化得到GST-CsPbs2融合蛋白,为后续利用Pull-down技术钓取Cs Pbs2的互作蛋白提供基础。 展开更多

关键词 橡胶树 橡胶树炭疽菌 pbs2基因 蛋白纯化 原核表达

原文传递

流感病毒可能致命的秘密被发现

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《当代畜禽养殖业》 2002年第2期17-17,共1页

美国科学发现,原本并不可怕的流感病毒只需经过一个小小的基因改变,便可以成为杀手病毒。普通流感病毒只会造成轻度呼吸道疾病,但是变身之后的杀手流感病毒可以感染包括心脏和大脑在内的多数人体器官,造成严重后果。 四年前,香港出现禽... 美国科学发现,原本并不可怕的流感病毒只需经过一个小小的基因改变,便可以成为杀手病毒。普通流感病毒只会造成轻度呼吸道疾病,但是变身之后的杀手流感病毒可以感染包括心脏和大脑在内的多数人体器官,造成严重后果。 四年前,香港出现禽流感疫情,虽然只有18个人感染病毒,但是其中有6个人不治而亡。 美国威斯康辛麦迪逊大学的研究人员发现。 展开更多

关键词 野生水禽 H5N1禽流感变体病毒 流感病毒 pb2基因

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