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人禽流感H_5N_1毒株PB1基因突变分析 被引量：3
1
作者 黄平 俞守义 +4 位作者 柯昌文 邹丽容 方苓 李晖 陈秋霞 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第22期2168-2170,共3页
目的通过对人禽流感H5N1毒株PB1基因序列的变异分析，揭示毒株PB1基因的特征与进化。方法检测广东地区人禽流感H5N1毒株PB1基因核苷酸序列，同时检索全球人禽流感H5N1毒株PB1基因序列，采用DNAStarLa-sergene软件对检索的人禽流感H5N1毒... 目的通过对人禽流感H5N1毒株PB1基因序列的变异分析，揭示毒株PB1基因的特征与进化。方法检测广东地区人禽流感H5N1毒株PB1基因核苷酸序列，同时检索全球人禽流感H5N1毒株PB1基因序列，采用DNAStarLa-sergene软件对检索的人禽流感H5N1毒株PB1基因核苷酸序列进行比对和分析，并结合流行病学资料对变异毒株进行进化速度分析。结果将50株毒株PB1基因核苷酸序列按同源性分成两组：1997-1998年毒株为第1组（G1），2003-2006年毒株为第2组（G2）。PB1基因74个氨基酸发生位点置换，占9．78％（74/757）。PB1基因Ks值为26．1×10^-6～39．8×10～Nt/d，Ka值为3．91×10^-6～5．59×10^-6～Nt/d，检验结果显示，基因进化受到负选择性压力。2003-2006年毒株（G2）丢失G757，引起氨基酸结构改变；同时糖基化位点也较1997-1998年毒株减少了1个糖基化位点NES382-384。结论目前PB1基因进化分成两组，自发突变作用影响PB1基因进化；PB1基因与PB2基因的进化途径在时间特征和区域特征方面类似。2003-2006年毒株PB1基因氨基酸结构和糖基化位点均有改变。 展开更多
关键词 人禽流感 H5N1毒株 pb1基因 突变 进化
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新疆油鸡H9N2亚型禽流感病毒PB1基因的克隆与序列分析 被引量：1
2
作者 武军元 黄忠武 +1 位作者 康强 姚礼文 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第1期222-225,共4页
为了阐明新疆油鸡H9亚型流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势,本研究采用RT-PCR技术对新疆油鸡分离株A/Chicken/Xinjiang Baicheng/1/2014(H9 N2)的PB1基因进行了克隆、测序及分子进化分析,将PB1基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列与G... 为了阐明新疆油鸡H9亚型流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势,本研究采用RT-PCR技术对新疆油鸡分离株A/Chicken/Xinjiang Baicheng/1/2014(H9 N2)的PB1基因进行了克隆、测序及分子进化分析,将PB1基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列与Genbank中已经公布的参考序列进行同源性比较。结果表明,新疆油鸡分离株的PB1基因由2274个碱基组成,编码757个氨基酸,与AIV A/chicken/Henan/89/2013(H7N9)的PB1基因处于同一分支,其核苷酸和氨基酸水平的同源性依次为99.2%和99.4%,新疆油鸡分离株的PB1基因不属于欧亚分支G1、A/CK/BJ/94和Y439的任何谱系。 展开更多
关键词 流感病毒 油鸡 聚合酶pb1基因 克隆 序列分析
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H3亚型鸭源流感病毒聚合酶PB1基因的序列分析
3
作者 樊玉磊 蒲娟 +1 位作者 张国中 刘金华 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2007年第1期11-14,共4页
目的阐明H3亚型鸭流感病毒与其他亚型流感病毒的关系。方法对活禽市场分离的3株H3N8亚型鸭源流感病毒聚合酶PB1基因进行了序列分析。结果3株鸭源H3N8流感病毒聚合酶PB1基因核苷酸同源性为99．9％，与H9N2亚型流感病毒（DK／ST／2143100... 目的阐明H3亚型鸭流感病毒与其他亚型流感病毒的关系。方法对活禽市场分离的3株H3N8亚型鸭源流感病毒聚合酶PB1基因进行了序列分析。结果3株鸭源H3N8流感病毒聚合酶PB1基因核苷酸同源性为99．9％，与H9N2亚型流感病毒（DK／ST／2143100）的同源性为96．31％-96．44％，而与H3N8亚型鸭流感病毒（Mal／Alberta／279／98）为88．65％-88．79％。系统进化树分析表明，本实验中的3株病毒属于相同的分支，且与刖duck／HongKong／Y439为代表的H9N2亚型禽流感病毒位于一进化分支，说明三株H3N8亚型流感病毒重排了H9N2亚型禽流感病毒的基因片段。结论不同亚型禽流感病毒在贮存宿主体内的重排以及重排病毒的新特点如鸭H3N8亚型流感病毒对禽的致病性，应当引起我们的高度重视。 展开更多
关键词 禽 流感病毒 H3N8 聚合酶pb1基因 序列分析 鸭
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1968-2014年中国甲型H3N2流感病毒PB1基因进化分析 被引量：4
4
作者 郭艳 颜文娟 +5 位作者 邓斐 余慧燕 王慎骄 汤奋扬 祁贤 卫平民 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期593-600,共8页
【目的】分析季节性H3N2流感病毒PB1基因序列的变异情况,揭示H3N2流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势。【方法】对1968-2014年中国地区82株人H3N2毒株、2012-2014年江苏省分离的81株甲型H3N2流感病毒、6株SIV和4株AIV H3N2亚型PB1、PB... 【目的】分析季节性H3N2流感病毒PB1基因序列的变异情况,揭示H3N2流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势。【方法】对1968-2014年中国地区82株人H3N2毒株、2012-2014年江苏省分离的81株甲型H3N2流感病毒、6株SIV和4株AIV H3N2亚型PB1、PB1-F2基因进行分子进化分析。【结果】1968-2014年中国H3N2流感毒株PB1核苷酸和氨基酸相似性分别为90.91%-100%和96.91%-100%。系统进化树分析,1968-2014年共173株H3N2流感病毒总体上分为4个分支,2002-2014年分离毒株位于第IV分支上,1968-1994年分离毒株位于第II和III分支;猪源H3N2亚型分布于第I、II、IV分支上;分子特征显示PB1氨基酸52、113、179、216、576、586、619、621、709位在2002年以后发生适应性改变,替换了原来的氨基酸;PB1-F2基因编码截断型蛋白长度有52、34、25、24、11 aa(猪源),PB1-F2蛋白毒力关键位点上未出现高致病性特征突变。【结论】自1968年起H3N2亚型PB1基因变异逐步趋于稳定,且PB1-F2截断型毒株正逐渐成为一类新的进化特征,但PB1基因与其他亚型之间发生重配以及关键毒力位点的变异仍应是监测的重点。 展开更多
关键词 H3N2流感病 pb1基因 pb1-F2蛋白 进化分析
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A型流感病毒H7N9株PB1和PB2基因的克隆和真核表达 被引量：1
5
作者 薛宇佳 杜江龙 +6 位作者 王晨 万雪梅 杨学财 王峰 贾骁晔 冉乾东 曹欣 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第6期1448-1451,共4页
【目的】本试验旨在构建A型H7N9流感病毒RNA聚合酶类蛋白PB1和PB2真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白。【方法】首先提取苏州分离株A型H7N9流感病毒的总RNA,通过RT-PCR技术获得了A型H7N9流感病毒PB1和PB2的全长基因,然后将其... 【目的】本试验旨在构建A型H7N9流感病毒RNA聚合酶类蛋白PB1和PB2真核表达载体,并在293T细胞中表达其编码的蛋白。【方法】首先提取苏州分离株A型H7N9流感病毒的总RNA,通过RT-PCR技术获得了A型H7N9流感病毒PB1和PB2的全长基因,然后将其克隆至真核表达载体pRK中构建pRK-Flag-PB1/PB2真核重组表达载体,经酶切及测序鉴定正确后将质粒转染到293T细胞中,通过Western blot鉴定PB1/PB2蛋白的表达。【结果】成功克隆了PB1和PB2全长基因,构建了A型H7N9流感病毒PB1和PB2蛋白真核表达载体pRK-Flag-PB1/PB2,并在293T细胞中转染表达,Western blot确定了PB1/PB2蛋白的成功表达。【结论】该表达载体的成功构建及在293T细胞中成功表达PB1和PB2蛋白,为后期开展流感病毒蛋白功能及与真核细胞中的蛋白相互作用的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 A型流感病毒 pb1基因 pb2基因 克隆 真核表达
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水稻中与穗稻瘟抗性基因Pb1紧密连锁的RFLP标记的鉴定
6
作者 郭元林 《国外作物育种》 2001年第2期1-3,共3页
关键词 水稻 穗稻瘟 抗性基因 pb1基因 基因连锁 PFLP分子标记 抗性鉴定
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流感病毒聚合酶PB1-1蛋白的表达与单克隆抗体的制备 被引量：7
7
作者 葛叶 邓国华 +1 位作者 李雪平 陈化兰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期726-729,共4页
为制备抗流感病毒(AIV)聚合酶PB1-1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用RT-PCR技术扩增H5N1亚型AIV聚合酶PB1部分基因片段,并将其克隆至载体pET-32a,转化至BL21细菌进行重组蛋白表达。靶蛋白经Ni+柱纯化后,western blot分析证实该重组蛋白... 为制备抗流感病毒(AIV)聚合酶PB1-1蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究采用RT-PCR技术扩增H5N1亚型AIV聚合酶PB1部分基因片段,并将其克隆至载体pET-32a,转化至BL21细菌进行重组蛋白表达。靶蛋白经Ni+柱纯化后,western blot分析证实该重组蛋白与AIV阳性血清具有良好的免疫反应性。用纯化的PB1-1蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,连续多次克隆纯化后获得2株能稳定分泌抗H5亚型PB1 MAb的细胞株CGFF10和FGFCE5,2株杂交瘤细胞的细胞培养上清及腹水效价分别为103、103和106、107。2株MAb的亚类均为IgG1。实验证明:所制备的MAb能与H5N1亚型PB1-1抗原发生特异反应,具有免疫活性,从而为PB1结构及功能的深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 pb1基因 原核表达 单克隆抗体
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野禽源AIV PB1-F2基因的遗传进化及部分氨基酸位点组成分析 被引量：1
8
作者 张进 李雁冰 +2 位作者 柴洪亮 张兰兰 华育平 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期674-680,共7页
在完成14株野禽源AIV PB1-F2基因克隆、测序的基础上,对其进行了同源性、遗传进化关系及氨基酸编码特征的比较分析。结果发现,H5N1亚型高致病性毒株A/lesser_kestrel/Harbin/194/2007(H5N1)PB1-F2的第37,48,50位氨基酸分别为精氨酸、脯... 在完成14株野禽源AIV PB1-F2基因克隆、测序的基础上,对其进行了同源性、遗传进化关系及氨基酸编码特征的比较分析。结果发现,H5N1亚型高致病性毒株A/lesser_kestrel/Harbin/194/2007(H5N1)PB1-F2的第37,48,50位氨基酸分别为精氨酸、脯氨酸、甘氨酸,与其他13个低致病性毒株均不相同(其分别为谷氨酰胺、谷氨酰胺、天冬氨酸)。为探讨这一现象,从NCBI Influenza Virus Resource中选取1 061个AIV毒株的PB1-F2基因序列进一步展开分析,结果表明:在第37,48,50位氨基酸位点上,97香港H5N1、其他H5N1及其他亚型AIV在此3个位点上氨基酸的构成存在着较为明显的差异,而且还呈现出了一定的规律和特点;并且研究还发现在此3个位点上,H9N2亚型毒株也表现出了较强的时间和空间分布特征。针对PB1-F2基因的遗传进化关系分析表明,H5N1及香港系毒株较其他AIV存在较远的遗传距离。随机的突变和重组似乎不足以解释这种差异及遗传距离形成的原因,其生物学意义有待于进一步探讨。 展开更多
关键词 野禽源禽流感病毒 pb1-F2基因 遗传进化 氨基酸组成
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深圳H7N9流感病毒PB1-F2基因分子特征 被引量：1
9
作者 董方圆 王昕 +5 位作者 彭博 武伟华 刘慧 丁小满 郑青 房师松 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 2015年第6期493-497,共5页
目的了解深圳20株H7N9流感病毒PB1-F2基因的分子特征。方法使用DNAstar、MEGA等生物软件对深圳地区H7N9流感病毒PB1-F2进行核苷酸、氨基酸序列同源性和系统进化分析。结果2014年底到2015年H7N9流感病毒爆发主要集中在广东省，以深圳居... 目的了解深圳20株H7N9流感病毒PB1-F2基因的分子特征。方法使用DNAstar、MEGA等生物软件对深圳地区H7N9流感病毒PB1-F2进行核苷酸、氨基酸序列同源性和系统进化分析。结果2014年底到2015年H7N9流感病毒爆发主要集中在广东省，以深圳居首。深圳20株H7N9流感病毒PB1-F2基因主要分为三个亚系。3株的PB1-F2基因的N端缺失编码52个氨基酸；1株PB1-F2基因的c端缺失编码57个氨基酸；1株PB1-F2基因的c端缺编码76个氨基酸；其余株PB1-F2基因编码90个氮基酸。各深圳株与A／Anhui／1-DEWH730／2013株相比核苷酸和氨基酸的同源性分别为96．0％-100％和89．O％～100％。各深圳株之间的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为94．9％～100％和85．7％～100％。结论深圳H7N9流感病毒PB1-F2基因具有独特的分子特征。 展开更多
关键词 甲型流感病毒H7N9 pb1-F2基因 进化分析
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