目的 探究驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)对肝癌细胞5-FU耐药的作用及其作用机制。方法 采用浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的方法诱导肝癌细胞BEL7402对5-FU耐药,以构建耐药株BEL7402/5-FU。采用慢病毒技术构建K...目的 探究驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)对肝癌细胞5-FU耐药的作用及其作用机制。方法 采用浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的方法诱导肝癌细胞BEL7402对5-FU耐药,以构建耐药株BEL7402/5-FU。采用慢病毒技术构建KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞。用Notch1/Hes1信号通路激动剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞进行干预。用CCK-8实验、蛋白印迹法、免疫荧光、流式细胞术检测细胞活性、细胞凋亡率、KIF2A、cleaved-caspase-3、Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 BEL7402/5-FU细胞具有强5-FU耐药性,其IC_(50)为344.2μmol/L,是BEL7402细胞的92倍(IC_(50)=3.730μmol/L)。与BEL7402细胞比较,BEL7402/5-FU细胞中KIF2A蛋白表达明显增加(P<0.001);与si-NC组比较,si-KIF2A组BEL7402/5-FU细胞活性明显下降(P<0.001)、凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.001),另外Notch1和Hes1蛋白表达明显减少(P<0.001);与si-NC+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU组BEL7402/5-FU细胞活性显著下降(P<0.001)、凋亡率显著增加(P<0.001);与si-KIF2A+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU+VPA组BEL7402/5-FU细胞活性明显提高(P<0.001)、凋亡率显著降低(P<0.001)、Notch1和Hes1蛋白表达量显著增加(P<0.001)。结论 KIF2A的沉默通过抑制Notch1/Hes1信号通路活性减弱BEL7402/5-FU细胞对5-FU的化疗耐药性。展开更多
目的探讨去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)、Notch1在子宫内膜异位症(EMs)中的表达及其与上皮-间质转化(EMT)的关系。方法选取2018年10月至2022年12月就诊于潍坊医学院附属医院患有EMs卵巢异位囊肿者病人40例,在行腹腔镜或开腹时剥除的囊...目的探讨去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)、Notch1在子宫内膜异位症(EMs)中的表达及其与上皮-间质转化(EMT)的关系。方法选取2018年10月至2022年12月就诊于潍坊医学院附属医院患有EMs卵巢异位囊肿者病人40例,在行腹腔镜或开腹时剥除的囊壁内侧的异位出血病灶作为EMs异位内膜组(n=40),术中收取其在位子宫内膜作为EMs在位内膜组(n=40),选取同期因妇科其他良性疾病来院就诊的病人40例,在行诊刮术或内膜活检时收取其子宫内膜作为正常子宫内膜组(对照组)。采用免疫组织化学染色法检测EMs异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜组中ADAM17、Notch1、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白的定位与表达情况;结果ADAM17、Notch1、N-钙黏蛋白在EMs异位内膜组表达评分5.00(4.00,6.00)分、4.5(4.0,5.0)分、6.0(5.0,7.0)分最高,EMs在位内膜组表达评分4.00(3.00,4.80)分、4.0(3.0,5.0)分、5.0(4.0,6.0)分次之,正常子宫内膜组表达评分2.00(2.00,3.00)分、3.0(2.0,4.0)分、2.5(2.0,3.0)分最低,均差异有统计学意义(P<0.05);E-钙黏蛋白在EMs异位内膜组表达评分1.0(1.0,2.0)分最低,EMs在位内膜组表达评分3.0(2.0,4.0)分次之,正常子宫内膜组表达评分5.5(5.0,6.0)分最高,均差异有◇临床医学◇·550·安徽医药Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2025 Mar,29(3)统计学意义(P<0.05);正常内膜组中各项表达评分均差异无统计学意义(P>0.05);EMs异位内膜组中ADAM17与Notch1的表达呈正相关(rs=0.46,P=0.003),Notch1与N-钙黏蛋白的表达呈正相关(rs=0.38,P=0.014),E-钙黏蛋白与ADAM17、Notch1的表达分别呈负相关(rs=-0.36,P=0.024;rs=-0.44,P=0.004),余下均差异无统计学意义(P>0.05);EMs在位内膜组中,ADAM17与Notch1、N-钙黏蛋白的表达分别呈正相关(rs=0.34,P=0.031;rs=0.61,P<0.001),Notch1与N-钙黏蛋白的表达呈正相关(rs=0.63,P<0.001);E-钙黏蛋白与ADAM17、Notch1、N-钙黏蛋白的表达均呈负相关(rs=-0.51,P=0.001;rs=-0.32,P=0.041;rs=-0.52,P<0.001);结论ADAM17及Notch1偏高表达可能是产生EMs的重要原因;ADAM17或靠激活EMT的过程促成EMs的发生。展开更多
目的:观察白藜芦醇(Res)对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)小鼠的影响,并进一步探讨其对Notch1信号通路的作用机制。方法:将25只6-8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、T-ALL组和Res组,其中Res组又进一步分为low-Res(L-Res)、middle-Re...目的:观察白藜芦醇(Res)对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)小鼠的影响,并进一步探讨其对Notch1信号通路的作用机制。方法:将25只6-8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、T-ALL组和Res组,其中Res组又进一步分为low-Res(L-Res)、middle-Res(M-Res)和high-Res(H-Res)3个浓度给药组。应用流式细胞术和瑞氏-吉姆萨染色法检测外周血及脾细胞悬液中白血病细胞百分比,HE染色法观察脾脏和骨髓组织病理形态,RT-q PCR法检测脾脏组织中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b和PTEN m RNA表达水平,Western blot法检测Notch1、Hes-1、c-Myc、p-PTEN和PTEN蛋白表达水平。结果:与对照组相比,T-ALL组小鼠外周血中白血病细胞明显增多,脾脏及骨髓组织中白血病细胞弥漫性浸润,脾脏中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b m RNA表达水平和Notch1、Hes-1、c-Myc蛋白表达水平均明显增高(P<0.01),PTEN m RNA及其蛋白水平显著降低(P<0.01),经白藜芦醇处理后,H-Res组以上各项指标较T-ALL组均获得逆转。结论:白藜芦醇具有抗小鼠T-ALL的作用,其机制可能通过抑制Notch1信号通路发挥作用。展开更多
目的 探讨MYB、Notch1免疫组化染色在经典型乳腺腺样囊性癌(classic adenoid cystic carcinoma of the breast, C-AdCC)、具有基底细胞样特征的实体型乳腺腺样囊性癌(solid-basaloid adenoid cystic carcinoma of the breast, SB-AdCC)...目的 探讨MYB、Notch1免疫组化染色在经典型乳腺腺样囊性癌(classic adenoid cystic carcinoma of the breast, C-AdCC)、具有基底细胞样特征的实体型乳腺腺样囊性癌(solid-basaloid adenoid cystic carcinoma of the breast, SB-AdCC)鉴别诊断中的应用价值。方法 收集病理科存档的20例C-AdCC、6例SB-AdCC及65例其他乳腺病变组织,分别行MYB、Notch1免疫组化染色,并对26例AdCC行FISH检测,6例SB-AdCC行NGS检测。结果 (1)MYB免疫组化染色显示:C-AdCC(20/20)弥漫中等或强阳性,SB-AdCC(4/6)弥漫中等或强阳性;胶原小体病(5/5)局灶或弥漫弱阳性;恶性腺肌上皮瘤(3/3)局灶中等或强阳性;8例产基质的癌、9例分泌性癌及40例非特殊型三阴型乳腺癌均阴性。(2)Notch1免疫组化显示:SB-AdCC(3/6)弥漫中等阳性,C-AdCC(20/20)均阴性;3例恶性腺肌上皮瘤、5例胶原小体病、8例产基质的癌、9例分泌性癌及40例非特殊型三阴型乳腺癌均阴性。(3)FISH检测显示C-AdCC(12/19)MYB基因断裂,NGS检测显示SB-AdCC(3/6)Notch1突变。结论 免疫组化MYB、Notch1中等或强的弥漫性表达,可辅助鉴别C-AdCC、SB-AdCC的分型;与恶性腺肌上皮瘤鉴别困难时,可借助分子检测进一步明确。展开更多
文摘目的 探究驱动蛋白家族成员2A(kinesin family member 2A,KIF2A)对肝癌细胞5-FU耐药的作用及其作用机制。方法 采用浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的方法诱导肝癌细胞BEL7402对5-FU耐药,以构建耐药株BEL7402/5-FU。采用慢病毒技术构建KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞。用Notch1/Hes1信号通路激动剂丙戊酸(valproic acid,VPA)对KIF2A沉默的BEL7402/5-FU细胞进行干预。用CCK-8实验、蛋白印迹法、免疫荧光、流式细胞术检测细胞活性、细胞凋亡率、KIF2A、cleaved-caspase-3、Notch1和Hes1的蛋白表达。结果 BEL7402/5-FU细胞具有强5-FU耐药性,其IC_(50)为344.2μmol/L,是BEL7402细胞的92倍(IC_(50)=3.730μmol/L)。与BEL7402细胞比较,BEL7402/5-FU细胞中KIF2A蛋白表达明显增加(P<0.001);与si-NC组比较,si-KIF2A组BEL7402/5-FU细胞活性明显下降(P<0.001)、凋亡率和cleaved-caspase-3蛋白表达明显增加(P<0.001),另外Notch1和Hes1蛋白表达明显减少(P<0.001);与si-NC+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU组BEL7402/5-FU细胞活性显著下降(P<0.001)、凋亡率显著增加(P<0.001);与si-KIF2A+5-FU组比较,si-KIF2A+5-FU+VPA组BEL7402/5-FU细胞活性明显提高(P<0.001)、凋亡率显著降低(P<0.001)、Notch1和Hes1蛋白表达量显著增加(P<0.001)。结论 KIF2A的沉默通过抑制Notch1/Hes1信号通路活性减弱BEL7402/5-FU细胞对5-FU的化疗耐药性。
文摘目的探讨去整合素-金属蛋白酶17(ADAM17)、Notch1在子宫内膜异位症(EMs)中的表达及其与上皮-间质转化(EMT)的关系。方法选取2018年10月至2022年12月就诊于潍坊医学院附属医院患有EMs卵巢异位囊肿者病人40例,在行腹腔镜或开腹时剥除的囊壁内侧的异位出血病灶作为EMs异位内膜组(n=40),术中收取其在位子宫内膜作为EMs在位内膜组(n=40),选取同期因妇科其他良性疾病来院就诊的病人40例,在行诊刮术或内膜活检时收取其子宫内膜作为正常子宫内膜组(对照组)。采用免疫组织化学染色法检测EMs异位内膜、在位内膜及正常子宫内膜组中ADAM17、Notch1、E-钙黏蛋白、N-钙黏蛋白的定位与表达情况;结果ADAM17、Notch1、N-钙黏蛋白在EMs异位内膜组表达评分5.00(4.00,6.00)分、4.5(4.0,5.0)分、6.0(5.0,7.0)分最高,EMs在位内膜组表达评分4.00(3.00,4.80)分、4.0(3.0,5.0)分、5.0(4.0,6.0)分次之,正常子宫内膜组表达评分2.00(2.00,3.00)分、3.0(2.0,4.0)分、2.5(2.0,3.0)分最低,均差异有统计学意义(P<0.05);E-钙黏蛋白在EMs异位内膜组表达评分1.0(1.0,2.0)分最低,EMs在位内膜组表达评分3.0(2.0,4.0)分次之,正常子宫内膜组表达评分5.5(5.0,6.0)分最高,均差异有◇临床医学◇·550·安徽医药Anhui Medical and Pharmaceutical Journal 2025 Mar,29(3)统计学意义(P<0.05);正常内膜组中各项表达评分均差异无统计学意义(P>0.05);EMs异位内膜组中ADAM17与Notch1的表达呈正相关(rs=0.46,P=0.003),Notch1与N-钙黏蛋白的表达呈正相关(rs=0.38,P=0.014),E-钙黏蛋白与ADAM17、Notch1的表达分别呈负相关(rs=-0.36,P=0.024;rs=-0.44,P=0.004),余下均差异无统计学意义(P>0.05);EMs在位内膜组中,ADAM17与Notch1、N-钙黏蛋白的表达分别呈正相关(rs=0.34,P=0.031;rs=0.61,P<0.001),Notch1与N-钙黏蛋白的表达呈正相关(rs=0.63,P<0.001);E-钙黏蛋白与ADAM17、Notch1、N-钙黏蛋白的表达均呈负相关(rs=-0.51,P=0.001;rs=-0.32,P=0.041;rs=-0.52,P<0.001);结论ADAM17及Notch1偏高表达可能是产生EMs的重要原因;ADAM17或靠激活EMT的过程促成EMs的发生。
文摘目的:观察白藜芦醇(Res)对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)小鼠的影响,并进一步探讨其对Notch1信号通路的作用机制。方法:将25只6-8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、T-ALL组和Res组,其中Res组又进一步分为low-Res(L-Res)、middle-Res(M-Res)和high-Res(H-Res)3个浓度给药组。应用流式细胞术和瑞氏-吉姆萨染色法检测外周血及脾细胞悬液中白血病细胞百分比,HE染色法观察脾脏和骨髓组织病理形态,RT-q PCR法检测脾脏组织中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b和PTEN m RNA表达水平,Western blot法检测Notch1、Hes-1、c-Myc、p-PTEN和PTEN蛋白表达水平。结果:与对照组相比,T-ALL组小鼠外周血中白血病细胞明显增多,脾脏及骨髓组织中白血病细胞弥漫性浸润,脾脏中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b m RNA表达水平和Notch1、Hes-1、c-Myc蛋白表达水平均明显增高(P<0.01),PTEN m RNA及其蛋白水平显著降低(P<0.01),经白藜芦醇处理后,H-Res组以上各项指标较T-ALL组均获得逆转。结论:白藜芦醇具有抗小鼠T-ALL的作用,其机制可能通过抑制Notch1信号通路发挥作用。
文摘目的 探讨MYB、Notch1免疫组化染色在经典型乳腺腺样囊性癌(classic adenoid cystic carcinoma of the breast, C-AdCC)、具有基底细胞样特征的实体型乳腺腺样囊性癌(solid-basaloid adenoid cystic carcinoma of the breast, SB-AdCC)鉴别诊断中的应用价值。方法 收集病理科存档的20例C-AdCC、6例SB-AdCC及65例其他乳腺病变组织,分别行MYB、Notch1免疫组化染色,并对26例AdCC行FISH检测,6例SB-AdCC行NGS检测。结果 (1)MYB免疫组化染色显示:C-AdCC(20/20)弥漫中等或强阳性,SB-AdCC(4/6)弥漫中等或强阳性;胶原小体病(5/5)局灶或弥漫弱阳性;恶性腺肌上皮瘤(3/3)局灶中等或强阳性;8例产基质的癌、9例分泌性癌及40例非特殊型三阴型乳腺癌均阴性。(2)Notch1免疫组化显示:SB-AdCC(3/6)弥漫中等阳性,C-AdCC(20/20)均阴性;3例恶性腺肌上皮瘤、5例胶原小体病、8例产基质的癌、9例分泌性癌及40例非特殊型三阴型乳腺癌均阴性。(3)FISH检测显示C-AdCC(12/19)MYB基因断裂,NGS检测显示SB-AdCC(3/6)Notch1突变。结论 免疫组化MYB、Notch1中等或强的弥漫性表达,可辅助鉴别C-AdCC、SB-AdCC的分型;与恶性腺肌上皮瘤鉴别困难时,可借助分子检测进一步明确。
