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槲皮素对小鼠体内和体外NIH-3T3细胞的抗氧化作用及其机理 被引量：5
1
作者 宫璀璀 郑乃刚 +2 位作者 吴景兰 何培霞 王一菱 《基础医学与临床》 CSCD 北大核心 2009年第1期52-58,共7页
目的比较槲皮素对小鼠体内和体外H2O2处理前/后的NIH-3T3细胞抗氧化效应的差异并探讨其作用机理。方法将NIH-3T3细胞分为4组,槲皮素前保护组(Qb)、槲皮素后保护组(Qa)、H2O2组(H2O2)和对照组(C)。用试剂盒检测细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px... 目的比较槲皮素对小鼠体内和体外H2O2处理前/后的NIH-3T3细胞抗氧化效应的差异并探讨其作用机理。方法将NIH-3T3细胞分为4组,槲皮素前保护组(Qb)、槲皮素后保护组(Qa)、H2O2组(H2O2)和对照组(C)。用试剂盒检测细胞内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、MDA、NOS和NO2-/NO3-的水平;MTT和TUNEL法检测细胞凋亡率和生存率;免疫印迹和免疫组化技术检测细胞的cyclin D1、PTEN、NF-κB、HSP-70、BCl-2、BAX、及caspase-3的表达。另将20只Wistar大鼠等分为对照组和实验组,检测槲皮素灌胃前、后1、2及24 h血浆内T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH、MDA、NOS和NO2-/NO3-的水平。结果H2O2组细胞凋亡率增高,cyclin D1、PTEN及BCl-2的表达下调;BAX、HSP-70、NF-κB及caspase-3的表达上调;T-AOC,SOD,GSH-Px及GSH水平降低,NOS、NO2-/NO3-及MDA增高。动物灌胃后1 h、2 h血浆中T-AOC、SOD、GSH-Px、GSH,NOS及NO2-/NO3-的水平增高,MDA降低;24 h后基本恢复。结论槲皮素在体内外皆可通过调节抗氧化酶体系发挥抗氧化作用,其效应依据H2O2处理与否和处理前/后等细胞的异质性而呈现一定差异。 展开更多
关键词 槲皮素 H2O2氧化应激 抗凋亡信号传导 nih-3t3细胞系 抗氧化酶体系
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槲皮素抗NIH-3T3细胞凋亡的作用
2
作者 宫璀璀 郑乃刚 +3 位作者 张成德 曹阳 孟明利 吴景兰 《河南医学研究》 CAS 2007年第2期108-110,共3页
目的:探讨槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用。方法:体外培养小鼠成纤维细胞,取对数生长期的成纤维细胞分成四个实验组。对照组(C):仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。槲皮素前保护组(Qb):先用含有50μmol/L的槲皮... 目的:探讨槲皮素对过氧化氢(H2O2)诱导NIH-3T3细胞凋亡的抑制作用。方法:体外培养小鼠成纤维细胞,取对数生长期的成纤维细胞分成四个实验组。对照组(C):仅加含有10%胎牛血清的DMEM培养基。槲皮素前保护组(Qb):先用含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h,再换含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in。槲皮素后保护组(Qa):先用0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换含有50μmol/L的槲皮素培养基作用24 h。H2O2实验组(H2):先用含有0.5 mmol/L H2O2作用细胞30 m in,再换仅含有10%胎牛血清的DMEM培养基作用24 h。取培养细胞提取DNA和制备1×107/m l细胞悬液的滴片,应用TUNEL和Ladder电泳检测细胞凋亡率;应用细胞免疫组化技术检测Bc l-2、Bax、Caspase-3蛋白质的表达。结果:由TUNEL和Ladder实验得出,Qb组的细胞凋亡率明显低于H2组和Qa组。由细胞免疫组化技术检测分析得出,Qb组与Qa、H2组相比,Bc l-2的表达增高,Bax、Caspase-3的表达减低。结论:槲皮素可能是通过上调Bc l-2的表达,下调Bax、Caspase-3的表达,对H2O2诱导NIH-3T3细胞的凋亡起到抑制作用。 展开更多
关键词 槲皮素 凋亡 nih-3t3细胞系
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诱导剂作用时间对3T3-L1前脂肪细胞系分化的影响 被引量：6
3
作者 刘新农 刘秀 +4 位作者 李天佳 王占启 倪冷 刘暴 刘昌伟 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期271-274,共4页
目的观察不同诱导剂作用时间对3T3-L1前脂肪细胞系分化的影响。方法参照传统鸡尾酒法,分别在作用时间为2 d(A组,传统法),3 d(B组)、4 d(C组,改良法)条件下诱导分化,采用倒置显微镜观察细胞形态,油红O染色及三酰甘油检测脂肪含量,台盼蓝... 目的观察不同诱导剂作用时间对3T3-L1前脂肪细胞系分化的影响。方法参照传统鸡尾酒法,分别在作用时间为2 d(A组,传统法),3 d(B组)、4 d(C组,改良法)条件下诱导分化,采用倒置显微镜观察细胞形态,油红O染色及三酰甘油检测脂肪含量,台盼蓝染色鉴定细胞活力。结果 A组3T3-L1前脂肪细胞转化率在80%以上的样本数(n=12)占该组所有样本数(n=18)的66%,而B、C两组中所有样本(n=18)的3T3-L1前脂肪细胞转化率均在80%以上。油红O染色定量检测结果显示,C组510nm处的OD值为2.59±0.17,明显高于A组的2.12±0.47(F=6.62,P=0.0001)和B组的2.20±0.17(F=5.15,P=0.0001),A、B两组间差异无统计学意义(F=1.14,P=0.74)。C组的三酰甘油含量为(1351.04±119.01)ng/ml,明显高于A组的(1077.88±272.75)ng/ml(F=6.73,P=0.001)和B组的(1089.38±115.39)ng/ml(F=5.78,P=0.001),A、B两组间差异无统计学意义(F=0.27,P=0.64)。台盼蓝染色结果显示,A、B、C 3组细胞的活力分别为(98.3±1.2)%、(98.5±1.8)%、(98.9±2.1)%,3组间差异无统计学意义(F=0.18,P=0.83)。结论改良法3T3-L1前脂肪细胞诱导法能提高脂肪细胞转化率,可作为高效诱导脂肪细胞模型的方法之一。推荐作用时间为3 d的改良法诱导方案。 展开更多
关键词 3t3-L1 前脂肪细胞系 脂肪细胞模型 转化率
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建立高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系的研究 被引量：2
4
作者 李雅慧 黎怀星 +2 位作者 吴丹 蔡东联 孙树汉 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第8期892-894,共3页
目的:建立一个组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。方法:(1)采用重组DNA技术将小鼠Retn基因的全长cDNA克隆到质粒pcDNA3的CMV启动子下面而获得一个能在真核细胞内组成性表达小鼠Resistin蛋白的表达载体pcDNA3-mRetn。(2)用电穿... 目的:建立一个组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。方法:(1)采用重组DNA技术将小鼠Retn基因的全长cDNA克隆到质粒pcDNA3的CMV启动子下面而获得一个能在真核细胞内组成性表达小鼠Resistin蛋白的表达载体pcDNA3-mRetn。(2)用电穿孔转染和G418筛选等方法建立能组成性地高表达小鼠Retn基因的3T3-L1细胞系。(3)诱导细胞分化为脂肪细胞,并用实时荧光RT-PCR法分析这些脂肪细胞内Retn基因mRNA的水平。结果:构建了一个能在真核细胞内表达小鼠Retn基因的表达载体;建立了一个携带有pcDNA3-mRetn载体并组成性地高表达小鼠Retn基因的细胞系。结论:成功地建立了一个组成性地高表达小鼠Retn基因细胞系,为进一步研究Retn基因的功能和小鼠Resistin蛋白的获得奠定了基础。 展开更多
关键词 Resistin蛋白 Retn基因 基因表达 3t3-L1细胞系
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稳定表达野生型和突变型DNA聚合酶β的NIH3T3细胞系的建立及其生长特性 被引量：2
5
作者 金戈 杨洪艳 +6 位作者 赵继敏 黄幼田 郑智敏 赵国强 赵勤 吴景兰 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第5期819-822,共4页
目的:建立稳定表达野生型及突变型DNA聚合酶β(polβ)的NIH3T3细胞系。方法:用脂质体转染法分别将野生型和突变型polβ真核表达载体pcDNA3.1-PW和pcDNA3.1-PM3转染入NIH3T3细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系。用RT-PCR、免疫印迹法检... 目的:建立稳定表达野生型及突变型DNA聚合酶β(polβ)的NIH3T3细胞系。方法:用脂质体转染法分别将野生型和突变型polβ真核表达载体pcDNA3.1-PW和pcDNA3.1-PM3转染入NIH3T3细胞,经G418筛选得到稳定转染细胞系。用RT-PCR、免疫印迹法检测转染细胞polβmRNA和POLB蛋白的表达水平,MTT法测转染细胞生长曲线,免疫组化法测增殖细胞核抗原(PCNA),并用流式细胞仪测细胞周期。结果与结论:成功建立了稳定表达野生型及突变型polβ的NIH3T3细胞系。野生型polβ对NIH3T3细胞生长无明显影响,突变型polβ则使NIH3T3细胞生长速度加快,细胞周期发生改变,细胞多被阻滞在S期。 展开更多
关键词 DNA聚合酶Β NIH3t3细胞系 细胞转染
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miR-433在NIH-3T3细胞纤维化和矽尘诱导的小鼠肺纤维化中的作用 被引量：2
6
作者 郭义威 孙春莉 王树兴 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第8期1458-1464,共7页
目的:本研究旨在探究微小RNA-433(miR-433)在纤维化中的作用及机制。方法:采用TargetScan预测miR-433的潜在靶基因。检测转化生长因子β1(TGF-β1)处理小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3细胞)24h后miR-433表达的变化。检测miR-433 mimic对TGF-... 目的:本研究旨在探究微小RNA-433(miR-433)在纤维化中的作用及机制。方法:采用TargetScan预测miR-433的潜在靶基因。检测转化生长因子β1(TGF-β1)处理小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3细胞)24h后miR-433表达的变化。检测miR-433 mimic对TGF-β1处理的NIH-3T3细胞中p-SMAD2、纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和结缔组织生长因子(CTGF)表达水平的影响。采用CCK-8法和流式细胞术检测转染miR-433 mimic对TGF-β1诱导的NIH-3T3细胞生长和S期阻滞的影响。构建矽尘诱导的小鼠肺纤维化模型并使用agomiR-433进行干预,HE染色和Masson染色观察miR-433对小鼠肺纤维化的影响,采用免疫组化检测小鼠肺组织中α-SMA的表达。结果:miR-433能特异性结合SMAD2的3’-UTR,并抑制其蛋白和mRNA的表达。TGF-β1能下调NIH-3T3细胞中miR-433的表达水平,上调p-SMAD2蛋白的水平,同时也增强FN、α-SMA和CTGF蛋白和mRNA的表达,并增强细胞活力,诱导S期细胞数量增加;而miR-433 mimic能逆转TGF-β1对NIH-3T3细胞活力和S期阻滞的影响。在矽尘诱导的小鼠肺纤维化模型中,agomiR-433能抑制肺纤维化进程,减少小鼠肺组织中α-SMA的表达。结论:miR-433可能通过靶向调控SMAD2干预TGF-β1/SMAD2信号通路,从而参与调节纤维化的病理过程。 展开更多
关键词 纤维化 微小RNA-433 nih-3t3细胞 tGF-β1/SMAD2信号通路
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小鼠gdnf基因在真核细胞NIH-3T3中的表达 被引量：1
7
作者 王庆忠 潘智芳 石玉强 《生命科学研究》 CAS CSCD 2009年第1期55-59,共5页
为了得到超量表达胶质细胞源神经营养因子(glial cell line-derived neuotrophic factor,GDNF)的NIH-3T3细胞株,用于制作精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)培养的饲养层,通过RT-PCR方法成功地从幼年小鼠睾丸中克隆了gdnf基因... 为了得到超量表达胶质细胞源神经营养因子(glial cell line-derived neuotrophic factor,GDNF)的NIH-3T3细胞株,用于制作精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSCs)培养的饲养层,通过RT-PCR方法成功地从幼年小鼠睾丸中克隆了gdnf基因,构建了真核表达载体pcDNA3.1-gdnf,并用其转染NIH-3T3细胞.对筛选出的阳性细胞克隆进行的免疫荧光染色、RT-PCR和Western blotting的结果表明,获得了超量表达gdnf基因的NIH-3T3细胞株,这为精原干细胞的培养奠定了基础. 展开更多
关键词 GDNF Rt-PCR nih-3t3 基因表达
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唾液对体外培养NIH-3T3及MEC-1细胞粘附的影响
8
作者 王江华 司徒镇强 +2 位作者 吴军正 刘斌 王石光 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第4期294-295,共2页
目的：探讨人唾液对正常及肿瘤细胞在体外粘附有无不同影响。方法：接种ＮＩＨ—３Ｔ３及ＭＥＣ－１细胞在预先涂有或未涂唾液的２４孔培养板上，用细胞计数法分别在接种后２、４、６和８ｈ计数贴壁细胞。结果：ＮＩＨ－３Ｔ３细胞及Ｍ... 目的：探讨人唾液对正常及肿瘤细胞在体外粘附有无不同影响。方法：接种ＮＩＨ—３Ｔ３及ＭＥＣ－１细胞在预先涂有或未涂唾液的２４孔培养板上，用细胞计数法分别在接种后２、４、６和８ｈ计数贴壁细胞。结果：ＮＩＨ－３Ｔ３细胞及ＭＥＣ－１细胞在涂有唾液的塑料底物上在２、４、６、和８ｈ其贴壁抑制率分别为３５％、４１％、２６％、３４％和１０％、９％、８％、４％。结论：人全唾液能抑制体外培养的ＮＩＨ－３Ｔ３细胞的粘附，但对ＭＥＣ－１细胞的影响不大。 展开更多
关键词 唾液 nih-3t3 MEC-1 细胞粘附 肿瘤细胞
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金钱鱼凋亡相关基因SaAR对NIH-3T3细胞凋亡的影响
9
作者 欧阳平 陈慧萍 +2 位作者 赖文岩 杨文利 徐安龙 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2003年第11期1137-1138,共2页
目的观察金钱鱼凋亡相关基因SaAR(Scatophagusargusapoptosis related gene)对成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养NIH-3T3细胞,应用脂质体将不同浓度的pcDNA3-SaAR真核表达质粒分别转染细胞并设立对照组进行比较,应用流式细胞术测定细... 目的观察金钱鱼凋亡相关基因SaAR(Scatophagusargusapoptosis related gene)对成纤维细胞增殖的影响。方法体外培养NIH-3T3细胞,应用脂质体将不同浓度的pcDNA3-SaAR真核表达质粒分别转染细胞并设立对照组进行比较,应用流式细胞术测定细胞凋亡率。结果SaAR基因可显著诱导NIH-3T3细胞凋亡,并呈现剂量依赖性(P<0.05)。结论SaAR基因对体外培养的血管外膜成纤维细胞凋亡有一定的诱导作用。 展开更多
关键词 金钱鱼 凋亡相关基因 SaAR nih-3t3 细胞凋亡 流式细胞术 基因转移 成纤维细胞 血管阻塞性疾病
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逆转录病毒载体介导的LacZ基因在NIH-3T3细胞中的稳定表达(英文)
10
作者 张学明 岳占碰 +6 位作者 杜崇涛 安铁洙 高丰 邓旭明 柳巨雄 成军 李德雪 《生物技术通讯》 CAS 2005年第2期124-127,共4页
精原干细胞(SSCs)介导的转基因技术很可能成为制作转基因动物及治疗雄性不育的一条新途径。为了研究逆转录病毒载体介导法转染体外培养SSCs的可行性,用脂质体介导法将携带LacZ基因的重组逆转录病毒载体pLNCL导入包装细胞PA317,用含G418... 精原干细胞(SSCs)介导的转基因技术很可能成为制作转基因动物及治疗雄性不育的一条新途径。为了研究逆转录病毒载体介导法转染体外培养SSCs的可行性,用脂质体介导法将携带LacZ基因的重组逆转录病毒载体pLNCL导入包装细胞PA317,用含G418的培养液筛选得到5株稳定转染的产毒细胞。收集这些克隆的产毒上清,过滤后进行倍比稀释,用NIH-3T3细胞通过X-gal染色测定其浓缩前病毒滴度。结果显示,PA3173培养上清中病毒的浓缩前滴度最高,达1.1×103CFU/mL。再将筛选到的稳定转染的NIH-3T3细胞培养至单层,进行X-gal染色检测β-半乳糖苷酶的表达。结果显示,大多数稳定转染的NIH-3T3细胞均为X-gal+,表明这些细胞成功表达了目的基因LacZ。本研究结果为后期工作中用该载体感染体外培养SSCs奠定了基础。 展开更多
关键词 LACZ基因 逆转录病毒载体 nih-3t3细胞 基因表达 精原干细胞
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对苯二甲酸对NIH-3T3细胞间隙连接通讯功能的影响
11
作者 张恒东 张正东 王心如 《中国工业医学杂志》 CAS 北大核心 2003年第5期264-267,共4页
目的　研究对苯二甲酸 (TPA)对NIH 3T3细胞间隙连接通讯 (GJIC)功能的影响。方法　采用噻唑蓝(MTT)比色法及划痕标记示踪技术 (scrape loadinganddyetransfer,SLDT) ,以 0、 12 5、 2 5 0、 5 0 0、 10 0 0、 2 0 0 0 μg/ml的剂量染毒... 目的　研究对苯二甲酸 (TPA)对NIH 3T3细胞间隙连接通讯 (GJIC)功能的影响。方法　采用噻唑蓝(MTT)比色法及划痕标记示踪技术 (scrape loadinganddyetransfer,SLDT) ,以 0、 12 5、 2 5 0、 5 0 0、 10 0 0、 2 0 0 0 μg/ml的剂量染毒细胞 ,同时设立溶剂对照及阳性对照 ,观察TPA对GJIC的影响。结果　TPA对细胞GJIC功能抑制随着染毒剂量增大和染毒时间延长而逐渐增强 ,呈现剂量 效应和时间 效应关系 ,在 2 5 0 μg/ml或更高剂量染毒 1h或更长时间时 ,细胞GJIC功能被明显抑制 ,在染毒 8h时各剂量组细胞GJIC功能抑制效应均最显著 ;去除TPA后 ,GJIC功能有恢复倾向 ,但在 12h内仍不能恢复至正常水平 ;加入哺乳动物肝脏微粒体酶 (S9)能加重TPA对细胞GJIC功能抑制作用。结论　TPA原形及其代谢产物对NIH 展开更多
关键词 对苯二甲酸 nih-3t3细胞间隙 tPA 噻唑蓝比色法 Mtt比色法 间隙连接通讯 致癌性 安全低毒
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稳定整合pMCLacI／Neo载体的NIH3T3细胞系的建立
12
作者 卢洋 黎怀星 傅继梁 《上海预防医学》 CAS 1998年第11期508-508,共1页
关键词 pMCLacI/Neo载体 NIH3t3细胞系 质粒 基因表达
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煤尘抽提物诱发BALB/3T3 A31—1—13细胞系形态学转化的研究
13
作者 吴中亮 陈家堃 +1 位作者 翁炯满 黄文溶 《癌变．畸变．突变》 CAS CSCD 1990年第4期14-18,88-89,共7页
本文用BALB/3T3 A31—1—13细胞系研究了煤尘抽提物的转化活性。亚硝化和未亚硝化的煤尘抽提物都能诱发细胞发生转化且有剂量反应关系。但亚硝化煤尘抽提物的转化活性比未亚硝化者高。从转化集落分离出来的细胞具有赘生转化的一些特征,... 本文用BALB/3T3 A31—1—13细胞系研究了煤尘抽提物的转化活性。亚硝化和未亚硝化的煤尘抽提物都能诱发细胞发生转化且有剂量反应关系。但亚硝化煤尘抽提物的转化活性比未亚硝化者高。从转化集落分离出来的细胞具有赘生转化的一些特征,如细胞生长迅速、接触抑制消失和停泊不依赖性生长等。本文结果看来支持煤矿工胃癌高发的原因的煤尘假说。 展开更多
关键词 煤尘抽提物 BALB/3t3 A31—1—13细胞系 细胞转化
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煤尘抽提物诱发BALB/3T3A31-1-13细胞系形态转化的研究
14
作者 吴中亮 陈家堃 +1 位作者 翁炯满 黄文溶 《广州医学院学报》 1990年第4期1-5,共5页
本文用 BALB/3T3 A31-1-13细胞系研究了煤尘抽提物的转化活性。亚硝化和未亚硝化的煤尘抽提物都能诱发细胞发生转化且有剂量反应关系.但亚硝化煤尘抽提物的转化活性比未亚硝化者高。从转化集落分离出来的细胞具有赘生转化的一些特征,如... 本文用 BALB/3T3 A31-1-13细胞系研究了煤尘抽提物的转化活性。亚硝化和未亚硝化的煤尘抽提物都能诱发细胞发生转化且有剂量反应关系.但亚硝化煤尘抽提物的转化活性比未亚硝化者高。从转化集落分离出来的细胞具有赘生转化的一些特征,如细胞生长迅速、接触抑制消失和停泊不依赖性生长等.本文结果看来支持煤矿工胃癌高发原因的煤尘假说。 展开更多
关键词 煤尘抽提物 BALB/3t3 A31-1-13细胞系 细胞转化
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人胰岛素原基因在体外培养的NIH3T3细胞系中的瞬时表达研究
15
作者 白然 谷玲 等 《中华国际医学杂志》 2002年第5期394-396,共3页
目的：研究人胰岛素原基因在体外培养的NIH3T3中的瞬时表达情况。方法：采用脂质体转染法将携带大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）启动子－人胰岛素原基因的质粒转染到体外培养的小鼠成纤维细胞系NIH3T3中，转染后48h，用放射免疫分... 目的：研究人胰岛素原基因在体外培养的NIH3T3中的瞬时表达情况。方法：采用脂质体转染法将携带大鼠磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）启动子－人胰岛素原基因的质粒转染到体外培养的小鼠成纤维细胞系NIH3T3中，转染后48h，用放射免疫分析方法（RIA）分别测定NIH3T3细胞内外的胰岛素水平。结果：NIH3T3细胞外的胰岛素水平于转染前后无显著性变化（P＞0．05），而细胞内的胰岛素水平则于转染后明显升高（P＜0．05）。结论：转染后48h的人胰岛素原基因在NIH3T3细胞内有较高的胰岛素表达水平，使I型糖尿病的基因治疗成为可能。 展开更多
关键词 人胰岛素原基因 体外培养 NIH3t3细胞系 瞬时表达 脂质体转染 糖尿病
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华泽兰根部乙酸乙酯萃取物基于NF-κB及NLR-P3炎症小体信号通路对NIH-3T3小鼠胚胎成纤维细胞功能的影响 被引量：2
16
作者 杜冯 邹坤 黄文峰 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2023年第4期144-150,I0040,I0041,共9页
目的探讨华泽兰乙酸乙酯萃取物对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)功能的影响。方法从炎症因子一氧化氮(NO)及氧化应激重要因素活性氧(ROS)介入,通过核因子κB(NF-κB)及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLR-P3)炎症小体等信号通路角度... 目的探讨华泽兰乙酸乙酯萃取物对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)功能的影响。方法从炎症因子一氧化氮(NO)及氧化应激重要因素活性氧(ROS)介入,通过核因子κB(NF-κB)及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLR-P3)炎症小体等信号通路角度阐明其作用机制。体外培养NIH-3T3细胞,分为空白对照组(Control)、不同浓度华泽兰根部乙酸乙酯萃取物组,检测不同浓度下华泽兰根部乙酸乙酯萃取物对NIH-3T3细胞Toll增殖活性(MTT法)、细胞迁移(细胞划痕实验)、分泌NO及胞内ROS生成的影响,Western blot法检测其对Toll样受体4(TLR-4)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、NLR-P3、NF-κB、髓样分化因子(Myd88)、核因子抑制蛋白α(IκBα)、白细胞介素-18(IL-18)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、环氧化酶-2(COX-2)蛋白表达的影响。结果细胞增殖与细胞划痕实验表明,华泽兰根部乙酸乙酯萃取物对于NIH-3T3细胞的增殖与划痕愈合影响具有双向性。与对照组相比在低浓度下(<6.25μg·mL^(-1)),萃取物有促进NIH-3T3细胞增殖与迁移的作用,而高浓度(>25μg·mL^(-1))反而表现出对NIH-3T3细胞的增殖与迁移抑制作用,且不同阶段呈现出相应的剂量依赖性,与对照组相比有统计学意义(P<0.05)。在萃取物浓度为6.25μg·mL^(-1)时,NO生成量相较于低浓度组差异有显著统计学意义(P<0.01),而高浓度组(>12.5μg·mL^(-1))相较对照组差异无统计学意义(P>0.05)。细胞内ROS生成实验表明,经华泽兰根部乙酸乙酯萃取物处理后ROS生成量显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。Western blot实验表明,与对照组相比,萃取物作用浓度为6.25μg·mL^(-1)时,细胞内NF-κB、TLR-4、Myd88、NLR-P3、ASC表达显著升高(P<0.01),IκBα表达升高(P<0.05),IL-18表达显著降低(P<0.01),Caspase-3表达降低(P<0.05)。结论华泽兰乙酸乙酯萃取物对小鼠胚胎成纤维细胞(NIH-3T3)增殖的影响具有双向性,即低浓度促进细胞增殖而高浓度抑制细胞增殖。其作用机制可能与NF-κB及NLR-P3炎症小体信号通路和细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 华泽兰 nih-3t3细胞 细胞功能 NF-ΚB 炎症小体
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3T3-L1脂肪细胞诱导分化的研究进展 被引量：3
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作者 刘秀 刘新农 +1 位作者 李天佳 刘暴 《中国医学科学院学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期733-737,共5页
随着脂肪代谢性疾病的增多,有关脂肪细胞的体外研究成为近年来研究热点。3T3-L1前脂肪细胞系是建立成熟脂肪细胞模型最为常用的细胞系之一,但经典的脂肪细胞诱导方案存在转化率低、转化不均匀等问题。近年来,诸多学者通过改变诱导剂作... 随着脂肪代谢性疾病的增多,有关脂肪细胞的体外研究成为近年来研究热点。3T3-L1前脂肪细胞系是建立成熟脂肪细胞模型最为常用的细胞系之一,但经典的脂肪细胞诱导方案存在转化率低、转化不均匀等问题。近年来,诸多学者通过改变诱导剂作用时间、增加新的诱导药物等方法,即改良诱导法,进行脂肪细胞模型的建立。本文主要从传统诱导法和改良诱导法两方面,总结了3T3-L1脂肪细胞诱导分化的研究进展。 展开更多
关键词 3t3-L1前脂肪细胞系 脂肪细胞模型 转化率 传统法 改良法
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Dlx2在MC3T3-E1细胞成骨分化过程中的作用 被引量：6
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作者 孙昊 王旭东 +4 位作者 沈国芳 蒋欣泉 张秀丽 代杰文 卢境婷 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2011年第3期189-194,共6页
目的:探讨Dlx2(distal-less homeobox 2)基因过表达对体外培养的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1向成骨方向分化的影响。方法:构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序验证。体外病毒转染MC3T3-E1后,以嘌呤霉素行抗性筛选稳定细胞株,以RT-PCR和We... 目的:探讨Dlx2(distal-less homeobox 2)基因过表达对体外培养的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1向成骨方向分化的影响。方法:构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序验证。体外病毒转染MC3T3-E1后,以嘌呤霉素行抗性筛选稳定细胞株,以RT-PCR和Western印迹检测转染后细胞中Dlx2的表达。应用实时定量PCR(RT-PCR)检测Dlx2过表达对部分成骨相关基因(ALP、OCN、Runx2、Msx2)表达的影响。以碱性磷酸酶(ALP)活性测定和茜素红染色法检测Dlx2过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响。采用SAS 6.04软件包对数据进行随机设计的方差分析。结果:本实验成功构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序正确。体外转染后筛选出Dlx2稳定高表达细胞株MC3T3-E1-Dlx2,其mRNA和蛋白表达量显著高于对照组。在成骨诱导过程中,MC3T3-E1-Dlx2细胞ALP值在第4、7、14d均高于对照组细胞,茜素红染色显示实验组较对照组和空白组染色深。Dlx2过表达在成骨诱导早期能显著促进ALP和Msx2的表达(P<0.05),晚期则上调OCN表达(P<0.05),而Runx2表达无明显变化(P>0.05)。结论:Dlx2过表达上调ALP、OCN等成骨相关基因的表达,促进MC3T3-E1细胞的成骨分化。 展开更多
关键词 Dlx2基因 成骨分化 MC3t3-E1细胞系 同源盒基因
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稳定表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞株的建立及其免疫原性分析 被引量：2
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作者 江秀玲 毕富勇 +4 位作者 王华茂 石必枝 张捷 汪茗 李宗海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期612-615,共4页
目的:建立表皮生长因子突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅡ-Iex)的NIH3T3稳定细胞系并分析其免疫原性。方法:将编码EGFRvⅢex基因的表达质粒pLNCX2-EGFRvⅢex转染NIH3T3细胞后,用G418筛选阳性克隆,得到多个细胞克隆。采用免疫组化和Western blot法... 目的:建立表皮生长因子突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅡ-Iex)的NIH3T3稳定细胞系并分析其免疫原性。方法:将编码EGFRvⅢex基因的表达质粒pLNCX2-EGFRvⅢex转染NIH3T3细胞后,用G418筛选阳性克隆,得到多个细胞克隆。采用免疫组化和Western blot法鉴定这些细胞克隆。选取高表达EG-FRvⅢex的细胞株(命名为3T3-vⅢex)免疫BALB/c小鼠,制备抗血清。用ELISA、Western blot和免疫荧光分别检测抗血清的效价和特异性。结果:成功地构建了真核表达载体pLNCX2-EGFRvⅢex并获得了稳定高表达EGFRvⅢex的NIH3T3细胞系3T3-vⅢex。用3T3-vⅢex免疫小鼠所获得的抗血清效价为10-5。Western blot和免疫荧光鉴定证明抗血清可以与EGFR-vⅢex特异结合。结论:人EGFRvⅢex可在NIH3T3细胞内获得稳定表达,以其免疫小鼠可以获得高效价、高特异性的抗血清。 展开更多
关键词 NIH3t3 表皮生长因子受体突变体Ⅲ 稳定细胞系 免疫原性 抗体
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小鼠NGF基因真核表达载体的构建及其在NIH3T3细胞中的表达 被引量：7
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作者 宋玫 陈绍宗 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期124-126,129,共4页
目的 :构建小鼠 β NGF基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH 3T3细胞系中NGF的表达情况。方法 :用基因重组技术 ,将小鼠 β NGF的成熟cDNA序列及其前导序列 ,克隆到真核表达载体 pcDNA3.1+中 ,用限制性内切酶酶切鉴定重组体。利用脂... 目的 :构建小鼠 β NGF基因真核表达载体并观察其稳定转染的NIH 3T3细胞系中NGF的表达情况。方法 :用基因重组技术 ,将小鼠 β NGF的成熟cDNA序列及其前导序列 ,克隆到真核表达载体 pcDNA3.1+中 ,用限制性内切酶酶切鉴定重组体。利用脂质体FuGENETM6方法 ,转染NIH 3T3细胞。转染后 72h ,用G4 18筛选阳性克隆并培养至 2 0d。对阳性克隆培养上清中NGF的表达用Westernblot分析并观察该上清中NGF对PC12细胞突起生长的作用。结果 :β NGF基因在NIH 3T3细胞中获得表达。阳性克隆培养上清能促进PC12细胞突起生长。结论 :重组真核表达载体 pcDNA3.1+/NGF构建成功 ,NGF蛋白在NIH 3T3细胞中表达 ,并具有良好的生物学活性 。 展开更多
关键词 Β-神经生长因子 真核表达载体 NIH3t3细胞系 基因转染 脂质体FuGENE^tM6
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