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nesprins基因在胚胎干细胞分化为心肌细胞过程中的表达 被引量：1
1
作者 王芳洁 易岂建 +3 位作者 郭鹏飞 刘晓燕 张秋萍 Shanahan C 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期652-656,共5页
目的:探讨nesprins基因在小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)分化为心肌细胞过程中的表达及作用。方法:体外培养小鼠ESC,采用5-氮杂胞苷为诱导剂诱导ESC分化为心肌细胞,并进行心肌细胞鉴定;RT-PCR检测分化过程中各时间点(d7、d7+3... 目的:探讨nesprins基因在小鼠胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)分化为心肌细胞过程中的表达及作用。方法:体外培养小鼠ESC,采用5-氮杂胞苷为诱导剂诱导ESC分化为心肌细胞,并进行心肌细胞鉴定;RT-PCR检测分化过程中各时间点(d7、d7+3、d7+6、d7+9、d7+20)nesprin-1、nesprin-2基因mRNA的表达;免疫荧光检测各时间点nesprin-1蛋白的细胞定位。结果:nesprin-1、nesprin-2基因mRNA在ESC分化为心肌细胞过程中均有表达;nesprin-1基因mRNA在d7、d7+3、d7+6均表达较高,无显著性差异,随后表达呈下降趋势,在d7+20时表达最低(P<0.05);nesprin-2基因mRNA在d7时表达最高,与d7+3、d7+6组间均有显著性差异(P<0.05),且随着分化时间的延长表达逐渐下降,在d7+20时表达最低;nesprin-1蛋白在ESC分化过程中均有表达,定位于核被膜及核周间隙。结论:nesprin-1、nesprin-2基因表达高峰在生心细胞的诱导和特化时期,推测nesprins对维持心肌细胞发育,使ESC更完全的向心肌细胞分化起重要作用。 展开更多
关键词 nesprins 胚胎干细胞 心肌细胞 分化 小鼠
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nesprins与某些人类疾病研究进展 被引量：2
2
作者 高放(综述) 易岂建(审校) 《国际儿科学杂志》 2011年第5期465-467,共3页
nesprins是新发现的-组核膜蛋白，有nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3和nesprin-4四种表型，在保持细胞核的形态与细胞器的迁移中起重要作用。其与emerin及laminA／C相连，共同定位于核膜上。在各种组织中广泛表达，尤其在心肌、骨骼肌... nesprins是新发现的-组核膜蛋白，有nesprin-1、nesprin-2、nesprin-3和nesprin-4四种表型，在保持细胞核的形态与细胞器的迁移中起重要作用。其与emerin及laminA／C相连，共同定位于核膜上。在各种组织中广泛表达，尤其在心肌、骨骼肌、平滑肌及神经系统中高度表达，提示其在这些组织中可能具有重要作用，并可能与这些组织疾病发生有关，如Emery—Dreifuss肌营养不良综合征、Meckel—Gruber综合征等。 展开更多
关键词 nesprins 核膜蛋白 疾病
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MSC体外诱导分化为心肌样细胞的鉴定及Nesprin蛋白表达研究 被引量：2
3
作者 杨文钢 薛松 +7 位作者 汪铮 连锋 徐根兴 刘沙 李金辉 王园园 黄日太 朱洪生 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期180-185,共6页
目的体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化并进行相关鉴定,观察分化过程中细胞Nesprin蛋白表达的变化。方法大鼠MSC经Ficoll密度梯度离心法分离获得后贴壁传代培养,流式细胞术鉴定第2代MSC表面抗原表达。以10μmol/L 5-氮... 目的体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化并进行相关鉴定,观察分化过程中细胞Nesprin蛋白表达的变化。方法大鼠MSC经Ficoll密度梯度离心法分离获得后贴壁传代培养,流式细胞术鉴定第2代MSC表面抗原表达。以10μmol/L 5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导第2代MSC向心肌细胞分化,观察细胞形态学改变;RT-PCR、免疫组织化学法和免疫荧光细胞化学染色鉴定心肌细胞相关蛋白Desmin、α-sarcomeric actin、cardiac TroponinⅠ(cTnⅠ)mRNA和蛋白表达;Westernblotting检测MSC分化前后Nesprin蛋白表达。结果经5-Aza诱导分化后的MSC细胞及细胞核增大,形态渐趋一致,大部分呈长梭形;细胞Desmin、α-sarcomeric actin、cTnⅠmRNA和蛋白呈阳性表达。免疫荧光细胞化学染色显示Nesprin蛋白定位于核膜,Western blotting分析发现诱导分化后细胞Nesprin蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论成功诱导大鼠MSC向心肌细胞分化;Nesprin蛋白在分化后细胞中的表达明显增加,提示Nesprin可能参与MSC向心肌细胞样变化的过程。 展开更多
关键词 NESPRIN 骨髓间充质干细胞 心肌细胞 分化
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骨髓间充质干细胞在梗死心肌移植再生后nesprin蛋白表达的实验研究 被引量：1
4
作者 杨文钢 薛松 +6 位作者 汪铮 连锋 徐根兴 刘沙 黄日太 朱洪生 张谷兰 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2010年第2期148-152,I0002,共6页
目的:研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植到急性心肌梗死区心肌样细胞再生后ne-sprin蛋白的表达情况。方法:大鼠16只,随机分为实验组和对照组,每组8只。利用密度梯度分离法和贴壁培养MSCs,流式细胞仪检测MSCs表面... 目的:研究骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植到急性心肌梗死区心肌样细胞再生后ne-sprin蛋白的表达情况。方法:大鼠16只,随机分为实验组和对照组,每组8只。利用密度梯度分离法和贴壁培养MSCs,流式细胞仪检测MSCs表面相关抗原、DAPI标记MSCs备用;SD大鼠开胸手术结扎心脏冠脉左前降支建立心肌梗死模型,并在实验组梗死区注射MSCs,对照组注射DMEM;术后3周取梗死区心肌,利用免疫细胞学化学方法鉴定肌节肌动蛋白和肌钙蛋白的表达,免疫荧光技术和蛋白质印迹鉴定nesprin蛋白在MSCs移植后的表达。结果:MSCs移植到梗死缺血区3周后可以用DAPI示踪、并有心肌细胞特异蛋白呈阳性表达;免疫荧光和蛋白质印迹鉴定在MSCs移植前后有nesprin蛋白的表达,移植后出现nesprin蛋白表达量的增加。结论:MSCs在梗死心肌内移植具有分化再生的能力,nesprin蛋白在MSCs移植后出现表达量的增加,可能在MSCs分化为心肌细胞样过程中起到一定的作用。 展开更多
关键词 nesprin蛋白 间充质干细胞 细胞移植 心肌细胞再生
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Nesprin基因RNAi慢病毒载体的构建
5
作者 杨文钢 薛松 +3 位作者 连锋 汪永义 黄日太 朱洪生 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2011年第40期7541-7544,共4页
背景:Nesprin蛋白缺失将影响细胞骨架组织和动态平衡,引起细胞骨架刚性丧失或导致细胞过早成熟老化,其对间充质干细胞的作用如何?目的:构建Nesprin蛋白siRNA慢病毒载体,并转染骨髓间充质干细胞。方法:针对Nesprin靶基因序列设计并合成4... 背景:Nesprin蛋白缺失将影响细胞骨架组织和动态平衡,引起细胞骨架刚性丧失或导致细胞过早成熟老化,其对间充质干细胞的作用如何?目的:构建Nesprin蛋白siRNA慢病毒载体,并转染骨髓间充质干细胞。方法:针对Nesprin靶基因序列设计并合成4对miRNA oligo,将4种miRNA干扰质粒转入大鼠血管平滑肌细胞,筛选最有效干扰序列;将最佳干扰序列和pDONR221载体进行重组反应,获得含干扰序列的入门载体,再将入门载体和慢病毒表达目的载体pLenti6/V5-DEST进行重组反应,获得含干扰序列的慢病毒表达载体,转染包装细胞293T细胞,包装慢病毒,以293T细胞GFP蛋白水平测定病毒滴度。慢病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞。结果与结论:测序证实合成的4对miRN Aoligo正确,RT-PCR和western-blot筛选出最佳干扰miRNA质粒为SR-3,成功构建了Nesprin siRNA的慢病毒载体LV-siN esprin。包装慢病毒,浓缩病毒悬液的活性滴度为106TU/mL。慢病毒成功了转染骨髓间充质干细胞细胞。 展开更多
关键词 慢病毒载体 Nesprin蛋白 骨髓间充质干细胞 病毒滴度 干扰载体
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多种癌细胞Nesprin 1蛋白的表达
6
作者 胡继宏 贾佳 +3 位作者 路娟 王秋萍 赵静苗 侯茜 《中国医药科学》 2016年第11期31-33,共3页
目的通过比较Nesprin 1在不同癌细胞中的表达程度,为Nesprin 1与多种癌细胞之间的关系做初步探讨。方法采用Western blotting方法检测Nesprin 1在人宫颈癌细胞(Hela)、人肺癌细胞(H-125)、人乳腺癌细胞(HCC-1937)、人膀胱癌细胞(5637)... 目的通过比较Nesprin 1在不同癌细胞中的表达程度,为Nesprin 1与多种癌细胞之间的关系做初步探讨。方法采用Western blotting方法检测Nesprin 1在人宫颈癌细胞(Hela)、人肺癌细胞(H-125)、人乳腺癌细胞(HCC-1937)、人膀胱癌细胞(5637)、人肝癌细胞(Hep G2)、人胃癌细胞(BGC-823)、人结肠癌细胞(HCT 116)、人食管癌细胞(Eca-109)、小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(Raw 2647)等癌细胞当中的表达。结果各癌细胞组GAPDH均有表达,Nesprin 1各组表达量不同,从强到弱顺序为HCC-1937>H-125>HCT116=Eca-109>RAW2647>BGC-823>Hep G2>Hela>5637,其中人膀胱癌细胞5637的表达不明显。结论 Nesprin 1蛋白可在多种癌细胞中表达,膀胱癌细胞中表达不明显。 展开更多
关键词 NESPRIN 癌症 肺癌 肝癌 胃癌 HELA HCC-1937
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Nesprin蛋白对骨髓间充质干细胞的影响
7
作者 杨文钢 薛松 +3 位作者 连锋 汪永义 胡振雷 朱洪生 《中国胸心血管外科临床杂志》 CAS 2012年第4期408-413,共6页
目的构建nesprin蛋白siRNA慢病毒载体(LV-siNesprin),感染骨髓间充质干细胞(MSCs),观察nesprin蛋白对MSCs的影响。方法针对nesprin靶基因序列设计并合成4对miRNA oligo,并将4对oligo退火成双链DNA,测序鉴定。将4种miRNA干扰质粒(SR-1、S... 目的构建nesprin蛋白siRNA慢病毒载体(LV-siNesprin),感染骨髓间充质干细胞(MSCs),观察nesprin蛋白对MSCs的影响。方法针对nesprin靶基因序列设计并合成4对miRNA oligo,并将4对oligo退火成双链DNA,测序鉴定。将4种miRNA干扰质粒(SR-1、SR-2、SR-3、SR-4)转入大鼠血管平滑肌细胞,用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白印迹法(Western blotting)检测干扰效应,筛选最佳干扰序列;将最佳干扰序列和pDONR221载体进行重组反应,获得含干扰序列的入门载体,再将入门载体和慢病毒表达的目的载体pLenti6/V5-DEST进行重组反应获得含干扰序列的LV-siNesprin+绿色荧光蛋白(GFP),包装慢病毒,测定病毒滴度。LV-siNesprin+GFP转染MSCs,Western blotting鉴定比较nesprin蛋白表达情况(分为LV-siNesprin+GFP组、GFP对照组和正常细胞组),用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色观察细胞核形态改变和四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测MSCs感染LV-siNesprin后24 h、48 h、72 h和96 h的增殖情况(分为LV-siNesprin+GFP组、GFP对照组和正常细胞组)。结果测序证实合成的4对miRNA oligo正确,RT-PCR和Western blotting筛选出最佳干扰miRNA质粒SR-3,成功构建LV-siNesprin,包装慢病毒,病毒悬液的活性滴度为1×106ifu/ml。LV-siNesprin转染MSCs后,nesprin蛋白表达明显下降,出现细胞核融合、核碎裂等形态学改变;MTT法检测显示,LV-siNesprin+GFP组MSCs增殖速度较GFP对照组和正常细胞组减慢。结论 Nesprin蛋白对MSCs核膜稳定维持核膜空间结构起作用,并利于细胞增殖更新。 展开更多
关键词 Nesprin蛋白 骨髓间充质干细胞 细胞增殖 慢病毒载体
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Nesprin2在小鼠睾丸各级生精细胞中的表达及其原核表达与纯化 被引量：1
8
作者 曾娇辉 伍勇 +2 位作者 蒋金泉 王静芳 邢晓为 《现代生物医学进展》 CAS 2015年第16期3001-3005,共5页
目的:研究Nesprin2在小鼠睾丸各级生精细胞中的表达变化,并对Nesprin2进行原核表达和纯化,为进一步研究该蛋白在精子发生中的作用奠定基础。方法:制备小鼠睾丸细胞涂片,用Nesprin2特异性抗体进行细胞免疫荧光染色,观察Nesprin2在各级生... 目的:研究Nesprin2在小鼠睾丸各级生精细胞中的表达变化,并对Nesprin2进行原核表达和纯化,为进一步研究该蛋白在精子发生中的作用奠定基础。方法:制备小鼠睾丸细胞涂片,用Nesprin2特异性抗体进行细胞免疫荧光染色,观察Nesprin2在各级生精细胞中的表达;应用RT-PCR技术扩增Nesprin2 C端包含KASH domain的编码85个氨基酸的目的片段,将PCR产物插入到PUCm-T载体中测序,将测序验证后的目的片段亚克隆至原核表达载体PGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达。对GST-Nesprin2 C85融合蛋白进行纯化,Western blot进行验证。结果:免疫荧光检测结果发现,Nesprin2在小鼠睾丸各级生精细胞中均有表达,主要分布在核膜及其周围,在减数分裂过程中Nesprin2可能参与核膜重塑。构建了PGEX-4T-1-Nesprin2 C85重组质粒,经IPTG诱导后成功表达了GST-Nesprin2 C85融合蛋白。对GST-Nesprin2 C85融合蛋白进行纯化后,Western blot进行检测,结果发现,原核诱导表达的融合蛋白为GST-Nesprin2 C85融合蛋白。结论:Nesprin2在小鼠各级生精细胞中均有表达,在减数分裂过程中可能参与核膜的重塑。 展开更多
关键词 Nesprin2 免疫荧光 减数分裂 原核表达 精子发生
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Nesprin：细胞内一个新的重要的蛋白质 被引量：1
9
作者 李小莉(综述) 易岂建(审校) 《国际儿科学杂志》 2008年第5期413-415,共3页
Nesprin是近年来发现的一个新的蛋白家族，在多种组织中均有表达。其结构由N端的肌动蛋白结合区、棒状区和C端跨膜区组成，这样的结构能更好地协调细胞膜和细胞骨架间的信号传递。在核被膜上nesprin与核纤层蛋白A、C及emerin结合并定位... Nesprin是近年来发现的一个新的蛋白家族，在多种组织中均有表达。其结构由N端的肌动蛋白结合区、棒状区和C端跨膜区组成，这样的结构能更好地协调细胞膜和细胞骨架间的信号传递。在核被膜上nesprin与核纤层蛋白A、C及emerin结合并定位于核被膜上，因而nesprin突变可能导致各种人类疾病，如核纤层蛋白病。 展开更多
关键词 核纤层蛋白质类 突变 NESPRIN 肌动蛋白
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