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猪生长激素基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及产物的N-糖基化分析
被引量：
6
1
作者
欧阳菁
杨林
+3 位作者
龙綮新
王珣章
邢珂
魏平华
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期520-525,共6页
利用含有强启动子PAOX 1 和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA pST。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X 33菌中 ,并筛选Mut+ 表型的重组菌。表...
利用含有强启动子PAOX 1 和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA pST。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X 33菌中 ,并筛选Mut+ 表型的重组菌。表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大 ,而胞内的PST蛋白分子量与天然PST大小相同。将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST再次转化重组酵母细胞X 33 pPICZαA pST(Mut+ ) ,所得表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果显示 ,PST基因的表达水平明显提高 ,且表达产生的蛋白均可发生正确的抗原 抗体结合反应 ,表达量达 95 6mg L。将发酵液上清进行N 糖基化分析 ,显示rPST无N
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关键词
猪生产激素
巴斯德毕赤酵母
表达载体系统
基因表达
高效分泌表达
n-糖基化分析
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职称材料
外源前列腺特异性膜抗原纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析
2
作者
杜文倩
张萌
+3 位作者
唐语彤
林晓蕊
潘慕垚
刘宝琴
《中华肿瘤防治杂志》
CAS
北大核心
2021年第23期1792-1797,1804,共7页
目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性N-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1...
目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性N-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1基因连接到真核表达载体pcDNA3;双酶切鉴定及测序无误后,利用转染技术将真核表达载体转染进293细胞系,肽-N-糖苷酶F(PNGase F)酶切鉴定PSMA蛋白;免疫沉淀技术纯化293细胞系外源过表达PSMA蛋白,质谱分析位点特异性N-糖基化修饰谱。结果成功构建PSMA蛋白真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1;293细胞系中外源过表达PSMA蛋白,PNGase F未处理PSMA蛋白相对分子质量为100×10^(3),酶切处理之后其相对分子质量约为85×10^(3),符合预期。免疫纯化获得外源过表达PSMA蛋白之后,LC-MS揭示重组PSMA蛋白中的大多数N-糖基化修饰位点都有寡糖链占位,且高甘露糖型、杂合型及复合型组成有一定差异。结论成功完成PSMA蛋白真核表达载体的构建、表达、纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析,为后续靶向PSMA的肿瘤治疗提供基础科研数据。
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关键词
前列腺特异性膜抗原
n-
糖基化
修饰
叶酸水解酶1
位点特异性
n-
糖基化
修饰
分析
前列腺癌
原文传递
猪生长激素基因在昆虫细胞中的分泌表达
被引量：
8
3
作者
欧阳菁
龙綮新
+1 位作者
杨林
王珣章
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第5期482-485,共4页
将PCR扩增得到的 pGH基因插入到带有 polh启动子和 gp6 7强信号肽序列的杆状病毒转移载体pAcGP6 7 A中 ,构建重组质粒 pGP6 7pGH ,并与线性化致死缺失型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (AcMNPV OCC-)基因组DNA共转染Sf9细胞 ,构建出重组病毒A...
将PCR扩增得到的 pGH基因插入到带有 polh启动子和 gp6 7强信号肽序列的杆状病毒转移载体pAcGP6 7 A中 ,构建重组质粒 pGP6 7pGH ,并与线性化致死缺失型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (AcMNPV OCC-)基因组DNA共转染Sf9细胞 ,构建出重组病毒AcMNPV pGP6 7 pGH OCC-。感染重组病毒的Hi5细胞的表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,细胞可溶蛋白和培养液上清中均有一条分子量约为 2 2kDa的猪生长激素特异性反应带 ,且培养液上清中的目的蛋白分子量比天然pGH略大一些。薄层扫描仪扫描估测可知 ,重组pGH分别占细胞可溶蛋白的 8 98%和培养液上清总蛋白的 3 6 1%。将表达 96h的培养液上清浓缩液进行N 糖基化分析 ,结果显示重组 pGH无N 糖基化加工修饰。
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关键词
猪
生长激素基因
昆虫细胞
杆状病毒表达载体系统
基因表达
n-糖基化分析
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职称材料
题名
猪生长激素基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及产物的N-糖基化分析
被引量：
6
1
作者
欧阳菁
杨林
龙綮新
王珣章
邢珂
魏平华
机构
中山大学生物防治国家重点实验室
广东省农业科学院
出处
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第5期520-525,共6页
基金
广东省自然科学基金资助 (96 30 0 7)&&
文摘
利用含有强启动子PAOX 1 和α MF信号肽序列的巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA构建出含PST基因的重组质粒pPICZαA pST。通过电击将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST质粒转化到巴斯德毕赤酵母X 33菌中 ,并筛选Mut+ 表型的重组菌。表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,分泌于胞外的PST蛋白分子量比天然PST分子量稍大 ,而胞内的PST蛋白分子量与天然PST大小相同。将经SacⅠ酶切后线性化的pPICZαA pST再次转化重组酵母细胞X 33 pPICZαA pST(Mut+ ) ,所得表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果显示 ,PST基因的表达水平明显提高 ,且表达产生的蛋白均可发生正确的抗原 抗体结合反应 ,表达量达 95 6mg L。将发酵液上清进行N 糖基化分析 ,显示rPST无N
关键词
猪生产激素
巴斯德毕赤酵母
表达载体系统
基因表达
高效分泌表达
n-糖基化分析
Keywords
porcine somatoropin, Pichia pastoris expression vector system, gene expression, N\|glycosylation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
TQ467.2 [化学工程—制药化工]
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职称材料
题名
外源前列腺特异性膜抗原纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析
2
作者
杜文倩
张萌
唐语彤
林晓蕊
潘慕垚
刘宝琴
机构
中国医科大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室
中国医科大学临床二系
出处
《中华肿瘤防治杂志》
CAS
北大核心
2021年第23期1792-1797,1804,共7页
基金
国家自然科学基金(81872257)。
文摘
目的构建前列腺特异性膜抗原(PSMA)真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1,293细胞系中过表达PSMA蛋白,纯化外源过表达PSMA蛋白,分析其位点特异性N-糖基化修饰谱。方法聚合酶链式反应(PCR)扩增叶酸水解酶1(FOLH1)全长基因,利用重组技术将FOLH1基因连接到真核表达载体pcDNA3;双酶切鉴定及测序无误后,利用转染技术将真核表达载体转染进293细胞系,肽-N-糖苷酶F(PNGase F)酶切鉴定PSMA蛋白;免疫沉淀技术纯化293细胞系外源过表达PSMA蛋白,质谱分析位点特异性N-糖基化修饰谱。结果成功构建PSMA蛋白真核表达重组载体pcDNA3-FOLH1;293细胞系中外源过表达PSMA蛋白,PNGase F未处理PSMA蛋白相对分子质量为100×10^(3),酶切处理之后其相对分子质量约为85×10^(3),符合预期。免疫纯化获得外源过表达PSMA蛋白之后,LC-MS揭示重组PSMA蛋白中的大多数N-糖基化修饰位点都有寡糖链占位,且高甘露糖型、杂合型及复合型组成有一定差异。结论成功完成PSMA蛋白真核表达载体的构建、表达、纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析,为后续靶向PSMA的肿瘤治疗提供基础科研数据。
关键词
前列腺特异性膜抗原
n-
糖基化
修饰
叶酸水解酶1
位点特异性
n-
糖基化
修饰
分析
前列腺癌
Keywords
prostate specific membrane antigen
n-
glycosylation
folate hydrolase 1
site specific
n-
glycosylation analysis
Prostate cancer
分类号
R737.25 [医药卫生—肿瘤]
原文传递
题名
猪生长激素基因在昆虫细胞中的分泌表达
被引量：
8
3
作者
欧阳菁
龙綮新
杨林
王珣章
机构
中山大学生物防治国家重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第5期482-485,共4页
文摘
将PCR扩增得到的 pGH基因插入到带有 polh启动子和 gp6 7强信号肽序列的杆状病毒转移载体pAcGP6 7 A中 ,构建重组质粒 pGP6 7pGH ,并与线性化致死缺失型苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒 (AcMNPV OCC-)基因组DNA共转染Sf9细胞 ,构建出重组病毒AcMNPV pGP6 7 pGH OCC-。感染重组病毒的Hi5细胞的表达产物的SDS PAGE和Westernblot结果表明 ,细胞可溶蛋白和培养液上清中均有一条分子量约为 2 2kDa的猪生长激素特异性反应带 ,且培养液上清中的目的蛋白分子量比天然pGH略大一些。薄层扫描仪扫描估测可知 ,重组pGH分别占细胞可溶蛋白的 8 98%和培养液上清总蛋白的 3 6 1%。将表达 96h的培养液上清浓缩液进行N 糖基化分析 ,结果显示重组 pGH无N 糖基化加工修饰。
关键词
猪
生长激素基因
昆虫细胞
杆状病毒表达载体系统
基因表达
n-糖基化分析
Keywords
Porcine growth hormone
Baculovirus expression vector system
Gene expression
n-
glycosylation
分类号
S852.23 [农业科学—基础兽医学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪生长激素基因在巴斯德毕赤酵母中的高效分泌表达及产物的N-糖基化分析
欧阳菁
杨林
龙綮新
王珣章
邢珂
魏平华
《生物工程学报》
CAS
CSCD
北大核心
2001
6
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
外源前列腺特异性膜抗原纯化及位点特异性N-糖基化修饰谱分析
杜文倩
张萌
唐语彤
林晓蕊
潘慕垚
刘宝琴
《中华肿瘤防治杂志》
CAS
北大核心
2021
0
原文传递
3
猪生长激素基因在昆虫细胞中的分泌表达
欧阳菁
龙綮新
杨林
王珣章
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
8
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