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周期性张应变对面颌部肌细胞Na^+/K^+-ATPaseα亚单位蛋白表达的影响
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作者 刘丽娟 孙仙蕊 +6 位作者 阎潇 张强 王爽玉 李建平 贾萍萍 姚如永 袁晓 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第10期1861-1865,共5页
目的:研究周期性张应变对面颌肌细胞Na+/K+-ATPaseα亚单位蛋白表达的影响以确定其作用及机制。方法:在建立面颌肌细胞的力学刺激--细胞体外培养模型的基础上,采用Western blot法分析周期性张应变对Na+/K+-ATPaseα1和α2亚单位蛋白表... 目的:研究周期性张应变对面颌肌细胞Na+/K+-ATPaseα亚单位蛋白表达的影响以确定其作用及机制。方法:在建立面颌肌细胞的力学刺激--细胞体外培养模型的基础上,采用Western blot法分析周期性张应变对Na+/K+-ATPaseα1和α2亚单位蛋白表达的影响,加力组分别给予1、2、12、24和48h的力学刺激,施加力值为15%的细胞形变,频率为10cycles/min。以静态组为对照组。对照组及实验组各包含4个实验样本。Western blot检测Na+/K+-ATPaseα1和α2亚单位蛋白的表达。结果:α1亚单位的蛋白表达量除加力1h组与对照组之间、加力24 h与48 h之间无统计学差异外,其余各组之间以及各组与对照组之间均有显著的统计学意义。α2亚单位蛋白表达量除加力24 h与48 h组之间无统计学差异外,其余各组之间以及各组与对照组之间均有显著的统计学意义。结论:在一定时间范围内,周期性张应变可刺激α1和α2亚单位蛋白表达增加,随作用时间的延长蛋白表达受抑制。提示在肌能力的刺激下,面颌肌细胞的相关酶蛋白的功能及表达将发生适应性改建,但其功能亚基的调控机制可能不同。这为选择不同的方法和手段进行临床干预提供了理论依据,因而具有重要的参考意义。 展开更多
关键词 周期性张应力 面颌肌细胞 Na+ k+-atpaseα单位蛋白
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产肠毒素大肠杆菌K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素b亚单位的原核表达及其鼻腔免疫效果 被引量:1
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作者 姜柯安 贺志良 +1 位作者 宋方洲 马永平 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第9期1091-1094,共4页
目的原核表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)b亚单位(LTb),并评价其鼻腔免疫效果。方法采用PCR技术分别扩增不含信号肽的K88和LTb基因,克隆... 目的原核表达产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K88菌毛蛋白与大肠杆菌不耐热肠毒素(Heat-labile enterotoxin,LT)b亚单位(LTb),并评价其鼻腔免疫效果。方法采用PCR技术分别扩增不含信号肽的K88和LTb基因,克隆至表达载体pQE30中,构建重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb,转化大肠杆菌M15,IPTG诱导表达。表达的重组K88和LTb蛋白纯化、复性后,进行SDS-PAGE分析。分别用K88单独、K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠,以生理盐水作为对照,每次间隔1周,共4次,末次免疫后10 d,分离血清,并收集鼻腔和小肠黏膜冲洗液,间接ELISA法检测各组血清特异性IgG和黏膜sIgA抗体水平。结果重组表达质粒pQE30-K88和pQE30-LTb经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组K88和LTb蛋白相对分子质量分别为28 100和12 500,表达量分别约占菌体总蛋白的35%和40%,主要以包涵体形式存在;纯化复性后的重组蛋白纯度均可达95%以上。K88联合LTb滴鼻免疫组血清特异性IgG及鼻腔、小肠黏膜冲洗液中特异性SIgA水平均较K88单独免疫组和对照组明显增高,且差异有统计学意义(P<0.01)。结论在大肠杆菌中高效表达并纯化了重组K88和LTb蛋白,K88联合LTb滴鼻免疫BALB/c小鼠后,可增强特异性血清抗体反应,且诱导了黏膜免疫应答,为将来开发新型的ETEC基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠杆菌 k88菌毛蛋白 大肠杆菌不耐热肠毒素b单位 原核细胞 基因表达 黏膜免疫
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PIK3CA基因突变与人类肿瘤关系的研究进展
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作者 陈德行 李建中 《浙江临床医学》 2014年第11期1833-1835,共3页
人类癌症关于PIK3CA基因产物p110a-磷脂酰基醇3激酶(PI3K)催化亚单位的研究已进行15年余。研究表明, PI3K家族尤其是p110α的激酶活性与关键癌基因蛋白密切相关,对肿瘤形成起重要作用[1]。而PIK3常有PIK3CA突变,PIK3扩增等激活[... 人类癌症关于PIK3CA基因产物p110a-磷脂酰基醇3激酶(PI3K)催化亚单位的研究已进行15年余。研究表明, PI3K家族尤其是p110α的激酶活性与关键癌基因蛋白密切相关,对肿瘤形成起重要作用[1]。而PIK3常有PIK3CA突变,PIK3扩增等激活[2]。有报道30%的人类实体瘤中存在PIK3CA基因突变,并且靶向PIK3CA的抑制剂如NVP-BKM120、XL147等已开始临床试验[3]。PIK3CA有望成为心新的治疗靶点。本文将对PIK3CA基因突变在人类肿瘤中的突变情况进行综述。 展开更多
关键词 基因突变 人类肿瘤 PI3k 激酶活性 催化单位 癌基因蛋白 基因产物 肿瘤形成
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PTEN缺失的前列腺癌细胞中P13K的激活机理
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作者 蒋新农 Steve E Balk 《中国药理通讯》 2009年第2期21-22,共2页
研究目的:根据底物及产物的不同,PI3K可分为3类。I类PI3K的产物是3,4,5-三磷酸肌醇(PIP3),该产物可与蛋白中的PH domain结合,从而将蛋白招募到细胞膜附近。I类PI3K可进一步被分为IA和IB两个亚类,IA类PI3K由调节亚单位p85和催... 研究目的:根据底物及产物的不同,PI3K可分为3类。I类PI3K的产物是3,4,5-三磷酸肌醇(PIP3),该产物可与蛋白中的PH domain结合,从而将蛋白招募到细胞膜附近。I类PI3K可进一步被分为IA和IB两个亚类,IA类PI3K由调节亚单位p85和催化亚单位p110(包括p110α,β和δ)组成,其中p85亚单位的SH2domain可与Tyr磷酸化的受体或adaptor蛋白结合,该类P13K由受体Tyr蛋白激酶(RTK)所激活。IB类P13K则由调节亚单位p101和催化亚单位p110γ组成,由G蛋白偶联受体(GPCR)所激活。近期有研究表明p110β也可通过GPCR激活Pi3K信号通路。正常细胞中,Pi3K信号通路被PIP3的磷酸酶PTEN所拮抗。许多研究表明,由PTEN缺失所导致的P13K信号通路的激活在成胶质神经细胞瘤和前列腺癌(prostatecancer;VCa)中起着主要作用,并在其他一些肿瘤中起着一定作用。对于PTEN突变的鉴定以及PTEN蛋白的研究表明,在大部分转移性PCa及许多侵袭性的原发性PCa中,PTEN的活性发生丢失。 展开更多
关键词 PTEN缺失 前列腺癌细胞 P13k 激活 PI3k信号通路 G蛋白偶联受体 催化单位 PI3k
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周期性张应力对面颌肌细胞Na^+/K^+-ATPase的影响
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作者 孙仙蕊 刘丽娟 +6 位作者 阎潇 王爽玉 张强 李建平 贾萍萍 姚如永 袁晓 《现代生物医学进展》 CAS 2013年第12期2230-2235,共6页
目的:研究周期性张应力对Na+/K+-ATPase功能活性及其表达的影响,明确Na+/K+-ATPase在功能矫形中面颌肌肉适应性改建的生物和分子机制。方法:构建面颌肌细胞体外培养-力学刺激模型;应用多通道细胞牵张应力加载系统,对面颌肌细胞施加不同... 目的:研究周期性张应力对Na+/K+-ATPase功能活性及其表达的影响,明确Na+/K+-ATPase在功能矫形中面颌肌肉适应性改建的生物和分子机制。方法:构建面颌肌细胞体外培养-力学刺激模型;应用多通道细胞牵张应力加载系统,对面颌肌细胞施加不同时段的张应力刺激,测定Na+/K+-ATPase的功能活性;运用实时荧光定量PCR研究周期性张应力刺激对Na+/K+-ATPase功能亚基α亚单位mRNA的影响。结果:Na+/K+-ATPaseα1,α2亚单位随着加力时间延长,表达增强,同对照组比较,呈一致性上调(P<0.001);细胞加力1小时,α1的mRNA表达不受影响;加力2小时后,α1和α2的mRNA表达呈现逐渐增强趋势,48 h时达到最大值。张应力刺激对α2亚单位的mRNA表达似乎更为敏感,加力1 h时α2亚单位的mRNA表达水平即增加,增加量约为对照组的37.74%,具有显著的统计学意义。结论:周期性的机械牵张作用于培养的骨骼肌细胞,可诱导α1和α2亚单位mRNA的表达量增加;α1和α2亚单位对周期性张应力刺激的作用时间反应不同,α2亚单位的反应可能更为敏感。周期性张力刺激的增加所产生的压力可能是转录调节的主要因素;周期性张应力对骨骼肌细胞Na+/K+-ATPase水解亚的调节作用不同,可能在面颌肌肉对功能矫形力的适应性改建中具有重要作用。 展开更多
关键词 面颌肌细胞 功能矫形 Na+ k+-atpase α亚单位 张应力刺激
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肠道病毒A71型亚单位蛋白对RD细胞自噬活化的影响
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作者 麻雯熠 孙萍萍 +3 位作者 王佳慧 杨世昭 王蒋丽 谢广成 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期720-728,共9页
肠道病毒A71型(Enterovirus-A71, EV-A71)能够活化宿主细胞的自噬并依赖自噬促进其复制,然而EV-A71的亚单位蛋白对自噬的活化目前仍不清楚。为探讨EV-A71亚单位蛋白对人横纹肌肉瘤(Human rhabdomyosarcoma, RD)细胞自噬活化的影响,将EV-... 肠道病毒A71型(Enterovirus-A71, EV-A71)能够活化宿主细胞的自噬并依赖自噬促进其复制,然而EV-A71的亚单位蛋白对自噬的活化目前仍不清楚。为探讨EV-A71亚单位蛋白对人横纹肌肉瘤(Human rhabdomyosarcoma, RD)细胞自噬活化的影响,将EV-A71的亚单位蛋白重组真核质粒转染至RD细胞,采用抑制剂MK-2206阻断PI3K/Akt途径,共聚焦显微镜和免疫印迹检测自噬活化。过表达EV-A71亚单位蛋白的RD细胞中PI3K/Akt途径、p38、JNK和ERK途径均呈现不同程度活化,同时RD细胞呈现出绿色荧光表明自噬发生活化,特别是EV-A71的VP2和2A。EV-A71亚单位蛋白使LC3-II/LC3-I的转化水平提升,EV-A71亚单位蛋白(VP2、VP3、VP4、2A、2B和2C)显著提升p62的表达水平,EV-A71 VP1显著下调p62的表达水平但显著上调LAMP-1和LAMP-2的表达水平。阻断PI3K/Akt途径后,过表达EV-A71亚单位蛋白的RD细胞绿色荧光强度显著减弱、自噬被阻断,同时LC3-II/LC3-I的转化水平显著降低而p62的表达水平提升,过表达EV-A71 VP1能提升p62表达水平但降低LAMP-1表达水平。因此,EV-A71亚单位蛋白能够不同程度依赖PI3K/Akt途径活化细胞自噬。 展开更多
关键词 肠道病毒A71型 自噬 单位蛋白 PI3k/AkT途径
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定志小丸对卒中后认知障碍模型小鼠PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α通路的影响
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作者 张晗 王宇 +3 位作者 钟晓琴 宁振求 胡达峰 邓敏贞 《中国实验方剂学杂志》 北大核心 2025年第5期1-11,共11页
目的:研究定志小丸(DZXW)对卒中后认知障碍(PSCI)模型小鼠的作用机制。方法:小鼠脑缺血再灌注损伤模型建立采用大脑中动脉闭塞法。将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、DZXW低剂量组(1.43 g·kg^(-1))和DZXW高剂量组(2.... 目的:研究定志小丸(DZXW)对卒中后认知障碍(PSCI)模型小鼠的作用机制。方法:小鼠脑缺血再灌注损伤模型建立采用大脑中动脉闭塞法。将40只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型组、DZXW低剂量组(1.43 g·kg^(-1))和DZXW高剂量组(2.56 g·kg^(-1)),每组10只。假手术组和模型组都进行等量的生理盐水灌胃处理,上述4组小鼠连续30 d灌胃,每天1次。采用Morris水迷宫实验评价小鼠学习记忆能力;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中淀粉样前体蛋白(APP)、淀粉样蛋白42(Aβ_(42))、乙酰胆碱酯酶(AChE)和超氧化物歧化酶(SOD)水平;原位末端标记法(TUNEL)检测小鼠海马神经元的细胞凋亡程度;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马组织中磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、缺氧诱导因子-1α亚单位(HIF-1α)、自噬效应蛋白1(Beclin1)、螯合体1(p62)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;普鲁士蓝染色检测海马组织的铁沉积情况;透射电镜观察小鼠海马神经元超微结构。结果:与假手术组比较,模型组的潜伏期、APP、Aβ_(42)、AChE、TUNEL阳性率、铁离子沉积、HIF-1α、Beclin1、Bax和LC3Ⅱ/Ⅰ显著增加(P<0.01),而穿越平台次数、SOD、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62和Bcl-2显著减少(P<0.01)。与模型组比较,DZXW各剂量组的潜伏期、APP、Aβ_(42)、AChE、TUNEL阳性率、铁离子沉积、HIF-1α、Beclin1、Bax和LC3Ⅱ/Ⅰ明显减少(P<0.05),而穿越平台次数、SOD、p-PI3K、p-Akt、p-mTOR、p62和Bcl-2明显增加(P<0.05)。结论:DZXW可以通过调节PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α自噬信号通路来减缓PSCI模型小鼠因氧化应激加重海马神经元损伤诱导的认知障碍。 展开更多
关键词 定志小丸 痴呆 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3k)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)/缺氧诱导因子-1α亚单位(HIF-1α)通路 缺血性中风 缺血再灌注
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产肠毒素大肠埃希菌K99-987P-F41融合蛋白在小鼠体内免疫效果的评价
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作者 王欣 郎秀艳 +1 位作者 张洋龙 倪宏波 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2016年第9期897-902,共6页
目的评价产肠毒素大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41融合蛋白在小鼠体内的免疫效果。方法制备ETEC融合蛋白K99-987P-F41亚单位疫苗、ETEC全菌体灭活疫苗、ETEC天然菌毛K99-987P-F41混合蛋白亚单位疫苗及E... 目的评价产肠毒素大肠埃希菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)K99-987P-F41融合蛋白在小鼠体内的免疫效果。方法制备ETEC融合蛋白K99-987P-F41亚单位疫苗、ETEC全菌体灭活疫苗、ETEC天然菌毛K99-987P-F41混合蛋白亚单位疫苗及ETEC重组菌毛K99-987P-F41混合蛋白亚单位疫苗,分别免疫小鼠,同时以免疫PBS的小鼠作为对照。ELISA法检测小鼠血清中IgG、IL-4和IFNγ的水平及小鼠粪便和小肠冲洗液中分泌型免疫球蛋白A(secreted immunogobulin A,sIgA)的含量;MTT法检测小鼠脾淋巴细胞增殖情况,并进行攻毒试验。结果 ETEC融合蛋白K99-987P-F41重组亚单位疫苗组小鼠血清中的抗ETEC的特异性IgG抗体、IL-4、IFNγ、粪便和小肠冲洗液中的sIgA、小鼠脾脏B和T淋巴细胞增殖能力均显著高于PBS对照组(P<0.05);ETEC融合蛋白K99-987PF41重组亚单位疫苗对小鼠的保护率为80%,与其他3种疫苗的小鼠保护率相近,而PBS对照组为0。结论 ETEC融合蛋白K99-987P-F41可有效诱导小鼠产生较高滴度的特异性抗体,可作为ETEC重组亚单位疫苗候选蛋白。 展开更多
关键词 产肠毒素大肠埃希菌 融合蛋白k99-987P-F41 免疫效果 单位疫苗
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KCNJ11基因单核苷酸多态性E23K与2型糖尿病遗传易感性相关性分析 被引量:2
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作者 陈庆隆 朱咏瑶 +1 位作者 周敏华 李雯翀 《中华实用诊断与治疗杂志》 2016年第2期143-145,共3页
目的探讨钾离子内向整流通道蛋白亚单位11(potassium ion inward rectifying channel protein subunit 11,KCNJ11)基因E23K多态性与2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)遗传易感性的关系。方法100例确诊T2DM患者为观察组,体检健康者... 目的探讨钾离子内向整流通道蛋白亚单位11(potassium ion inward rectifying channel protein subunit 11,KCNJ11)基因E23K多态性与2型糖尿病(type 2 diabetes,T2DM)遗传易感性的关系。方法100例确诊T2DM患者为观察组,体检健康者100例为对照组,采用PCR-限制性片段长度多态性检测2组外周血有核细胞基因组DNA中KCNJ11基因E23K位点多态性,比较2组KCNJ11基因频率和等位基因频率,分析T2DM的相关危险因素。结果观察组体质量指数、腰臀比、三酰甘油、总胆固醇、空腹血糖、空腹胰岛素、胰岛素抵抗指数和非酯化游离脂肪酸高于对照组,高密度脂蛋白胆固醇、胰岛0细胞功能指数低于对照组(P〈0.05);观察组KCNJ11基因E23K位点EE、EK、KK3种基因频率(38%、44%、18%)和E、K等位基因频率(60%、40%)与对照组(EE为33%、EK为52%、KK为15%,E为59%、K为41%)比较差异均无统计学意义(P〉0.05);胰岛β细胞功能指数(OR=0.096,95%CI:0.316~0.441,P=0.000)、高密度脂蛋白胆固醇(OR=0.084,95%CI:0.039~0.268,P=0.000)是T2DM的保护因素,三酰甘油(OR=1.382,95%CI:1.082~1.964,P=0.041)、腰臀比(OR:2.765,95%CI:1.182~7.562,P=0.040)是T2DM的危险因素。结论KCNJ11基因E23K多态性与T2DM遗传易感性关系无明显相关性,胰岛β细胞功能指数和高密度脂蛋白胆固醇是T2DM的保护因素,三酰甘油和腰臀比是T2DM的危险因素。 展开更多
关键词 2型糖尿病 钾离子内向整流通道蛋白单位11 遗传易感性 E23k
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