GFP-hDaxx融合蛋白在真核细胞中的表达与鉴定 被引量：4

1

作者 刘安元 谭立志 +3 位作者 万艳平 吴移谋 余敏君 粟盛梅 《南华大学学报（医学版）》 2003年第1期9-11,共3页

目的构建GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx,并在HeLa细胞中表达,为进一步研究hDaxx在细胞凋亡、病毒感染中的作用提供实验基础。方法 用T4DNA连接酶将hDaxx亚克隆入载体pEGFP,筛选阳性克隆。将质粒pEGFP/hDaxx转染HeLa细胞,We... 目的构建GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx,并在HeLa细胞中表达,为进一步研究hDaxx在细胞凋亡、病毒感染中的作用提供实验基础。方法 用T4DNA连接酶将hDaxx亚克隆入载体pEGFP,筛选阳性克隆。将质粒pEGFP/hDaxx转染HeLa细胞,Western—Blotting鉴定表达产物,荧光显微镜观察GFP—hDaxx融合蛋白在细胞内的定位。结果成功构建了GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx,GFP—hDaxx融合蛋白成功表达并定位HeLa细胞核。结论GFP—hDaxx融合蛋白成功地在真核细胞表达并定位于细胞核。 展开更多

关键词 融合蛋白 真核细胞 鉴定 细胞核 GFP-hdaxx hdaxx 早幼粒细胞白血病

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx及其删除突变体在真核细胞中的表达与鉴定 被引量：1

2

作者 唐旭红 何爱桃 万艳平 《南华大学学报（医学版）》 2002年第4期325-327,共3页

目的　构建N端融合有Gal4DBD的hDaxx及 6种删除突变体 (△hDaxx)真核细胞表达质粒 ,并在HT1 0 80细胞中表达。方法　将hDaxx及△hDaxxcDNA酶切片段连接到载体pM1或pM2相应位点 ,构建真核细胞表达质粒pM hDaxx或pM △hDaxx。用SuperFect... 目的　构建N端融合有Gal4DBD的hDaxx及 6种删除突变体 (△hDaxx)真核细胞表达质粒 ,并在HT1 0 80细胞中表达。方法　将hDaxx及△hDaxxcDNA酶切片段连接到载体pM1或pM2相应位点 ,构建真核细胞表达质粒pM hDaxx或pM △hDaxx。用SuperFectTM 脂转染试剂将质粒转染HT1 0 80细胞 ,细胞裂解液经SDS -PAGE及转硝酸纤维素膜后作Westernblot。结果　构建的pM hDaxx及 6种pM △hDaxx能在HT1 0 80细胞中高度表达hDaxx或△hDaxx。结论　N端融合有Gal4DBD的hDaxx及6种△hDaxx在真核细胞中成功表达。 展开更多

关键词 hdaxx hdaxx删除突变体 真核细胞 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx及其删除突变体在原核细胞中的表达与鉴定

3

作者 万艳平 尹卫国 +3 位作者 余敏君 粟盛梅 杨长胜 吴移谋 《南华大学学报（医学版）》 2001年第5期435-438,共4页

目的　将人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)及其 6种删除突变体 (△hDaxx)在原核细胞大肠杆菌BL2 1(E .coli)中表达 ,以便在体外探索hDaxx的生物学活性。方法　用PCR方法从Hela细胞cDNAs文库中扩增全序列hDaxxcDNA ,利用载体pQE3x构建了hDaxx及... 目的　将人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)及其 6种删除突变体 (△hDaxx)在原核细胞大肠杆菌BL2 1(E .coli)中表达 ,以便在体外探索hDaxx的生物学活性。方法　用PCR方法从Hela细胞cDNAs文库中扩增全序列hDaxxcDNA ,利用载体pQE3x构建了hDaxx及其△hDaxx质粒 ,通过异丙基 - β -D -硫代半乳糖苷(IPTG)诱导E .coli表达相应蛋白质 ,并将其纯化。结果　IPTG能诱导hDaxx及其△hDaxx在E .coli中表达 ,表达产物纯化率达 85 %以上。结论　hDaxx及其 6种△hDaxx能在E .coli中表达。 展开更多

关键词 hdaxx hdaxx删除突变体 原核细胞 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx与细胞肿瘤抑制子p53在体内外的相互作用 被引量：9

4

作者 谭立志 万艳平 +4 位作者 吴移谋 刘传爱 余敏君 尹卫国 廖端芳 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期32-34,共3页

与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocyticleukemiaprotein ,PML)在体内相互作用共定位于细胞核PML致癌结构域 (PMLoncogenicdomains,PODs)的人Daxx(humanDaxx ,hDaxx) ,能结合Fas死亡结构域诱导细胞凋亡。细胞肿瘤抑制子p5 3抑制... 与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocyticleukemiaprotein ,PML)在体内相互作用共定位于细胞核PML致癌结构域 (PMLoncogenicdomains,PODs)的人Daxx(humanDaxx ,hDaxx) ,能结合Fas死亡结构域诱导细胞凋亡。细胞肿瘤抑制子p5 3抑制细胞及病毒转录 ,提高细胞内Fas的表达并调节细胞凋亡。为了探索hDaxx与 p5 3在诱导细胞凋亡中有无相互作用及其作用效果 ,利用酵母双杂交体系测定发现p5 3通过C端与hDaxx结合 ,共免疫沉淀反应及Westernblot结果显示hDaxx与 p5 3能在体内外直接结合。hDaxx与 p5 展开更多

关键词 hdaxx P53 相互作用 肿瘤抑制子

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒E1B55ku癌蛋白打破hDaxx与PML在细胞核的共定位 被引量：8

5

作者 万艳平 谭立志 +3 位作者 刘传爱 吴移谋 Colosimo April 廖代清 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2001年第4期46-48,共3页

利用间接免疫荧光试验 ,通过Confocal激光扫描生物荧光显微镜和图像软件分析腺病毒 (adenovirus,Ad)E1B 5 5ku癌蛋白 (AdE1B 5 5ku)与人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)在细胞核的定位关系 ,研究它对早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocyticleuke... 利用间接免疫荧光试验 ,通过Confocal激光扫描生物荧光显微镜和图像软件分析腺病毒 (adenovirus,Ad)E1B 5 5ku癌蛋白 (AdE1B 5 5ku)与人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)在细胞核的定位关系 ,研究它对早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocyticleukemiaprotein ,PML)与hDaxx在细胞核定位关系的影响。实验结果表明 ,AdE1B 5 5ku与hDaxx共定位细胞核 ,并打破hDaxx与PML共定位于细胞核PML致癌结构域 (PMLoncogenicdomains,PODs) 展开更多

关键词 腺病毒E1B55ku癌蛋白 hdaxx PML 细胞核 共定位 感染

在线阅读 下载PDF 职称材料

GFP-hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中的表达与定位 被引量：2

6

作者 谭立志 刘传爱 +1 位作者 刘安元 万艳平 《实用预防医学》 CAS 2003年第2期135-136,共2页

目的　构建GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx并在巨噬细胞中表达 ,为研究hDaxx对巨噬细胞凋亡及分泌活性的影响提供实验基础。　方法　将hDaxxcDNA片段亚克隆入载体pEGFP ,构建GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体。将质粒pEGFP/h... 目的　构建GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx并在巨噬细胞中表达 ,为研究hDaxx对巨噬细胞凋亡及分泌活性的影响提供实验基础。　方法　将hDaxxcDNA片段亚克隆入载体pEGFP ,构建GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体。将质粒pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,Westernblotting鉴定表达产物 ,荧光显微镜观察GFP -hDaxx融合蛋白在细胞内的表达与定位。　结果　成功构建了GFP -hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP/hDaxx ,GFP -hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核。　结论　pEGFP/hDaxx在巨噬细胞中即时高表达GFP 展开更多

关键词 hdaxx 巨噬细胞 表达 定位

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒E1B55kD癌蛋白与hDaxx的相互作用 被引量：2

7

作者 万艳平 吴移谋 +1 位作者 谭立志 廖端芳 《中国病毒学》 CSCD 2002年第3期230-233,共4页

为了探讨腺病毒 (adenovirus,Ad)E1B 5 5kD癌蛋白 (AdE1B 5 5kD)打破hDaxx和PML共定位细胞核的作用机制 ,本文利用体内外共免疫沉淀反应研究AdE1B 5 5kD与hDaxx的结合反应 ,并通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用及其作用的氨... 为了探讨腺病毒 (adenovirus,Ad)E1B 5 5kD癌蛋白 (AdE1B 5 5kD)打破hDaxx和PML共定位细胞核的作用机制 ,本文利用体内外共免疫沉淀反应研究AdE1B 5 5kD与hDaxx的结合反应 ,并通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用及其作用的氨基酸残基序列。结果显示 :Ad2E1B 5 5kD通过C端 5 8个氨基酸 (aa)与hDaxx结合并发生相互作用。Ad12E1B 5 5kD与hDaxx结合需全序列aa及其构象。共免疫沉淀反应和Westernblot结果证实Ad2 / 5或Ad12E1B 5 展开更多

关键词 腺病毒 E1B55KD癌蛋白 hdaxx 相互作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

HPV16 E6蛋白与hDaxx的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响

8

作者 王鑫 朱翠明 +4 位作者 刘安元 尹卫国 李金丽 蔡恒玲 万艳平 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期293-296,共4页

目的:研究HPV16 E6(human papillomavirus type16 E6)蛋白与hDaxx(human death domain associated protein)的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响,为探索HPV16 E6蛋白的致癌机制提供实验依据。方法:构建pGADT7-E6和pGBKT7-hDaxx重组载体... 目的:研究HPV16 E6(human papillomavirus type16 E6)蛋白与hDaxx(human death domain associated protein)的相互作用及其对HeLa细胞凋亡的影响,为探索HPV16 E6蛋白的致癌机制提供实验依据。方法:构建pGADT7-E6和pGBKT7-hDaxx重组载体,利用酵母双杂交系统检测HPV16 E6蛋白与hDaxx的相互作用,并用Western印迹法检测二者在酵母菌中的表达。将E6与hDaxx的真核表达载体共转染HeLa细胞,用5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导凋亡,FCM法检测凋亡率。结果:E6蛋白与hDaxx在细胞内存在相互作用。共转染pcDNA3.1(-)/E6和pcDNA3.1(-)/hDaxx的HeLa细胞,随pcDNA3.1(-)/hDaxx转染量的增加凋亡率上升,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:HPV16 E6蛋白与hDaxx在细胞内相互作用,hDaxx过表达可提高表达E6蛋白的HeLa细胞对5-FU的敏感性,且这种关系存在剂量依赖性。E6蛋白可能通过和hDaxx的相互作用抑制细胞凋亡。 展开更多

关键词 乳头瘤病毒E6蛋白质类 HELA细胞 双杂交系统技术 细胞凋亡 蛋白hdaxx

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx基因转染抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡

9

作者 刘安元 万艳平 +2 位作者 谭立志 吴移谋 余敏君 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期276-278,共3页

利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在巨噬细胞中高表达hDaxx ,研究hDaxx对巨噬细胞凋亡的影响。将pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,Westernblot鉴定Daxx的表达 ,荧光显微镜观察GFP hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位 ,用地塞米松诱导巨噬细胞凋亡 ... 利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在巨噬细胞中高表达hDaxx ,研究hDaxx对巨噬细胞凋亡的影响。将pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,Westernblot鉴定Daxx的表达 ,荧光显微镜观察GFP hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位 ,用地塞米松诱导巨噬细胞凋亡 ,细胞用Giemsa染色后 ,观察细胞形态变化并计算巨噬细胞凋亡率。结果显示 :GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中成功表达并定位于细胞核 ,且GFP hDaxx融合蛋白不影响Daxx的特异性 ;地塞米松对照组与pEGFP对照组凋亡率无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,而pEGFP/hDaxx组凋亡率显著降低 (P <0 0 1) ,即hDaxx即时高表达降低地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡率。Daxx为调控蛋白 ,GFP hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核 ,且hDaxx即时高表达可抑制地塞米松诱导的巨噬细胞凋亡。 展开更多

关键词 hdaxx 高表达 巨噬细胞 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx与乙型肝炎病毒X蛋白的相互作用 被引量：1

10

作者 周艺 李金丽 万艳平 《南华大学学报（医学版）》 2008年第3期279-281,共3页

目的采用酵母双杂交法研究HBVX蛋白与hDaxx蛋白的相互作用，为探讨HBVX蛋白的致癌机制奠定实验基础。方法构建pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBX重组质粒，分四组转化酵母AHl09，A组为pGADT7和pGBKT7，B组为pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBX，C组为pGAD... 目的采用酵母双杂交法研究HBVX蛋白与hDaxx蛋白的相互作用，为探讨HBVX蛋白的致癌机制奠定实验基础。方法构建pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBX重组质粒，分四组转化酵母AHl09，A组为pGADT7和pGBKT7，B组为pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBX，C组为pGADT7-T和pG-BKT7-Lam，D组为pGADT7-T和pGBKT7-p53。将转化菌落接种于SD／-Tip-ku（二缺）固体平板，长出克隆后再接种于SD／-Tip-Leu-His（三缺）和SD／-Tip-Leu-His-Ade（四缺）平板，30℃培养36～72h。裂解酵母菌，提取蛋白，经SDS-PAGE、Western blot检测hDaxx和X蛋白在酵母中的表达。结果仅有共转化pGBKT7-hDaxx和pGADT7-HBx的AHl09可以在三缺及四缺平板上生长。Western blot检测到hDaxx和X蛋白均能在酵母中表达。结论HBV X蛋白与hDaxx能在酵母细胞内发生相互作用。 展开更多

关键词 hdaxx 乙型肝炎病毒X蛋白 酵母双杂交

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx高表达抑制地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡

11

作者 刘安元 谭立志 +3 位作者 万艳平 吴移谋 刘传爱 余敏君 《实用预防医学》 CAS 2005年第2期219-222,共4页

目的　利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在HeLa细胞中高表达hDaxx ,研究hDaxx对HeLa细胞凋亡的影响。　方法　将pEGFP/hDaxx转染HeLa细胞,Western -blotting鉴定GFP -hDaxx融合蛋白的表达,荧光显微镜观察GFP -hDaxx融合蛋白在细胞内的表达... 目的　利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在HeLa细胞中高表达hDaxx ,研究hDaxx对HeLa细胞凋亡的影响。　方法　将pEGFP/hDaxx转染HeLa细胞,Western -blotting鉴定GFP -hDaxx融合蛋白的表达,荧光显微镜观察GFP -hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位,用地塞米松诱导HeLa细胞凋亡,细胞用Giemsa染色后,观察细胞形态变化并计算HeLa细胞凋亡率。　结果　GFP -hDaxx融合蛋白在HeLa细胞中成功表达并定位于细胞核。地塞米松对照组与pEGFP对照组凋亡率无显著性差异(P >0 .0 5 ) ,而pEGFP/hDaxx组凋亡率显著降低(P <0 .0 1) ,即hDaxx即时高表达降低地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡率。　结论　Daxx为调控蛋白,GFP -hDaxx融合蛋白在HeLa细胞中表达并定位于细胞核,且hDaxx即时高表达抑制地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡。 展开更多

关键词 hdaxx 高表达 HELA细胞 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx与12型腺病毒E1B 55KD癌蛋白在体内外的结合反应

12

作者 万艳平 吴移谋 +3 位作者 粟盛梅 余敏君 尹卫国 杨长顺 《实用预防医学》 CAS 2002年第4期293-295,共3页

目的　研究 12型腺病毒 (Adenovirus12 ,Ad12 ) E1B5 5 KD癌蛋白 (Ad12 E1B5 5 KD)打破 h Daxx与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocytic leukemia protein,PML)在细胞核共定位的机制。　方法　构建 h Daxx原核细胞表达质粒 p QE30 ... 目的　研究 12型腺病毒 (Adenovirus12 ,Ad12 ) E1B5 5 KD癌蛋白 (Ad12 E1B5 5 KD)打破 h Daxx与急性早幼粒细胞性白血病蛋白 (promyelocytic leukemia protein,PML)在细胞核共定位的机制。　方法　构建 h Daxx原核细胞表达质粒 p QE30 / h Daxx,并在大肠杆菌 (E.coli) BL2 1中诱导表达 ,用镍—氮基三乙酸 (Ni- NTA)琼脂糖加以纯化。通过体内外共免疫沉淀反应 ,Western blot方法研究 h Daxx与 Ad12 E1B5 5 KD直接结合反应。　结果　质粒 p QE30 / h Daxx在E.coli BL2 1中成功诱导表达了 h Daxx,其 N端有 6个组氨酸分子附着 (6 His- h Daxx)。Western blot结果显示 h Daxx在体内外与 Ad12 E1B5 5 KD发生直接结合反应。　结论　表达并获得纯化的 6 His- h Daxx,h Daxx能在体内外与 Ad12 E1B5 5 KD直接结合。 展开更多

关键词 hdaxx 12型腺病毒E1B 55KD癌蛋白 共免疫沉淀反应 急性早幼粒细胞性白血病

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒2型E1B55KD癌蛋白与hDaxx相互作用

13

作者 万艳平 吴移谋 谭立志 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 2003年第2期10-12,共3页

目的 :研究腺病毒 (adenovirus ,Ad) 2型E1B 5 5KD癌蛋白 (Ad2E1B 5 5KD)与人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)的相互作用及作用部位。方法 :利用共免疫沉淀反应研究Ad2 / 5E1B 5 5KD与hDaxx的结合反应 ,通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互... 目的 :研究腺病毒 (adenovirus ,Ad) 2型E1B 5 5KD癌蛋白 (Ad2E1B 5 5KD)与人Daxx(humanDaxx ,hDaxx)的相互作用及作用部位。方法 :利用共免疫沉淀反应研究Ad2 / 5E1B 5 5KD与hDaxx的结合反应 ,通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用。结果 :酵母双杂交试验结果显示Ad2E1B 5 5KD通过C端 5 8个氨基酸 (aminoacid ,aa)与hDaxx结合并发生相互作用。共免疫沉淀反应和Westernblot结果证实Ad2 / 5E1B 5 5KD能在细胞内外与hDaxx直接结合。结论 :Ad2E1B 5 5KD与hDaxx结合并发生相互作用。 展开更多

关键词 腺病毒2型E1B 55KD癌蛋白 hdaxx 酵母双杂交测定 相互作用

在线阅读 下载PDF 职称材料

GST-hDaxx蛋白的构建及其原核表达产物的鉴定

14

作者 唐旭红 朱翠明 万艳平 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 2004年第3期133-135,共3页

目的　构建GST hDaxx蛋白并在原核细胞中诱导表达GST hDaxx融合蛋白 ,并研究其与 p5 3的结合能力。方法　构建GST hDaxx融合蛋白原核细胞表达载体pGEX 4T/hDaxx ,在大肠杆菌 (E .col i)中用异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。... 目的　构建GST hDaxx蛋白并在原核细胞中诱导表达GST hDaxx融合蛋白 ,并研究其与 p5 3的结合能力。方法　构建GST hDaxx融合蛋白原核细胞表达载体pGEX 4T/hDaxx ,在大肠杆菌 (E .col i)中用异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达。表达产物用亲和层析柱加以纯化后 ,Westernblot鉴定表达产物与纯化物。通过共免疫沉淀反应与Westernblot观察hDaxx与p5 3的结合反应。结果　在原核细胞中成功表达了GST hDaxx融合蛋白 ,hDaxx与 p5 3可发生共免疫沉淀反应。 结论　 1.GST hDaxx融合蛋白成功表达 ;2 .hDaxx和 p5 3的相互结合提示它们可能与肿瘤的发生有关。 展开更多

关键词 GST-hdaxx蛋白 原核表达产物 鉴定 原核细胞 纯化 WESTERN BLOT法 融合蛋白 P53蛋白 肿瘤生成

在线阅读 下载PDF 职称材料

腺病毒12型E1B55kD蛋白增强hDaxx转录抑制活性

15

作者 钟飞 万艳平 +3 位作者 石君 肖政 粟盛梅 唐双阳 《南华大学学报（医学版）》 2004年第3期286-289,共4页

目的　研究腺病毒 1 2型E1B 5 5kD蛋白 (Ad1 2E1B)对hDaxx转录调控的影响作用。方法　利用酵母双杂交法分析hDaxx与Ad1 2E1B的相互作用 ;共免疫沉淀试验和Westernblotting测定两种蛋白质在细胞内外的结合反应 ;通过虫荧光素酶报道基因系... 目的　研究腺病毒 1 2型E1B 5 5kD蛋白 (Ad1 2E1B)对hDaxx转录调控的影响作用。方法　利用酵母双杂交法分析hDaxx与Ad1 2E1B的相互作用 ;共免疫沉淀试验和Westernblotting测定两种蛋白质在细胞内外的结合反应 ;通过虫荧光素酶报道基因系统 ,分析hDaxx对其转录活性的影响。结果hDaxx在细胞内外直接与Ad1 2E1B结合 ,并与全序列Ad1 2E1B发生相互作用 ;Ad1 2E1B显著增加hDaxx的转录抑制活性 (P <0 .0 1 )。结论　Ad1 2E1B与hDaxx相互作用并增强hDaxx的转录抑制活性。 展开更多

关键词 腺病毒12型 hdaxx 转录

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx融合蛋白高表达降低活化巨噬细胞分泌IL-1β

16

作者 余敏君 钟飞 +2 位作者 刘安元 朱翠明 万艳平 《南华大学学报（医学版）》 2004年第1期29-30,34,共3页

目的　研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌IL - 1 β的影响。方法　将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,利用Westernblotting检测表达产物。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定... 目的　研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌IL - 1 β的影响。方法　将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞 ,利用Westernblotting检测表达产物。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定LPS刺激巨噬细胞后 0 .5h、4h、1 2h时 ,活化巨噬细胞分泌细胞因子IL - 1 β的含量。结果　pEGFP/hDaxx在巨噬细胞内成功表达GFP -hDaxx融合蛋白。GFP -hDaxx在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β量明显降低 (在4h及 1 2h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1 )。结论　hDaxx即时高表达降低活化的巨噬细胞分泌IL - 1 β。 展开更多

关键词 hdaxx 巨噬细胞 IL-1Β

在线阅读 下载PDF 职称材料

GFP-hDaxx融合蛋白高表达抑制活化巨噬细胞分泌TNFα

17

作者 何爱桃 唐旭红 +3 位作者 周艺 杨露清 刘安元 万艳平 《南华大学学报（医学版）》 2003年第4期383-385,共3页

目的　研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌TNFα的影响。方法　将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP hDaxx转染巨噬细胞 ,用荧光显微镜观察GFP -hDaxx在巨噬细胞内的表达与定位。通过hDaxx在巨噬细胞内的... 目的　研究GFP -hDaxx融合蛋白 (GFP -hDaxx)即时高表达对激活巨噬细胞分泌TNFα的影响。方法　将GFP -hDaxx真核细胞表达载体pEGFP hDaxx转染巨噬细胞 ,用荧光显微镜观察GFP -hDaxx在巨噬细胞内的表达与定位。通过hDaxx在巨噬细胞内的即时高表达 ,测定LPS诱导激活巨噬细胞后 ,在 0 .5、4、1 2h时 ,活化巨噬细胞分泌细胞因子TNFα的含量。结果　GFP -hDaxx在巨噬细胞内即时高表达且定位于细胞核。GFP -hDaxx在巨噬细胞内的高表达 ,使LPS诱导活化的巨噬细胞分泌TNFα量明显降低 (在 4h及 1 2h时与对照组差异有显著性 ,P <0 .0 0 1 )。结论　hDaxx即时高表达降低活化的巨噬细胞分泌TNFα。 展开更多

关键词 GFP-hdaxx融合蛋白 巨噬细胞 TNFΑ

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx及其删除突变体在酵母菌中的表达及与p53的结合反应

18

作者 万艳平 吴移谋 《美国中华临床医学杂志》 2002年第3期191-193,共3页

目的：研究hDaxx与细胞肿瘤抑制子p53相互作用的结构部位，以便探索两种蛋白质相互作用后的生物学效应，方法：利用pGBDU-C及pGAD-C载体构建Daxx(human Daxx,hDaxx)及其删除突变体（ΔhDaxx)酵母菌表达质粒，利用Western blot检测它们... 目的：研究hDaxx与细胞肿瘤抑制子p53相互作用的结构部位，以便探索两种蛋白质相互作用后的生物学效应，方法：利用pGBDU-C及pGAD-C载体构建Daxx(human Daxx,hDaxx)及其删除突变体（ΔhDaxx)酵母菌表达质粒，利用Western blot检测它们在酵母菌中的表达产物，通过酵母双杂交试验测定hDaxx与p53结合并发生相互作用的结构部位，结果pGBDU-C或pGAD-C/hDaxx与ΔhDaxx能在PJ69－4酵母菌株表达目的蛋白，hDaxx及3种ΔhDaxx与p53结合并发生相互作用，2种ΔhDaxx不与p53结合发生相互作用。结论：hDaxx通过第396－499位氨基酸（aa)或C端241个aa残基与p53发生结合。 展开更多

关键词 表达 结合反应 hdaxx 酵母菌 P53

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx融合蛋白在原核细胞中表达与纯化

19

作者 唐旭红 万艳平 等 《美国中华临床医学杂志》 2002年第4期267-268,274,共3页

目的：GST－hDaxx融合蛋白在原核细胞中表达并纯化，以便进一步在体外探讨hDaxx的生物学活性。方法：构建GST－hDaxx融合蛋白原核细胞表达载体pGEX-4T/hDaxx，在大肠杆菌（E.coli）中用异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。... 目的：GST－hDaxx融合蛋白在原核细胞中表达并纯化，以便进一步在体外探讨hDaxx的生物学活性。方法：构建GST－hDaxx融合蛋白原核细胞表达载体pGEX-4T/hDaxx，在大肠杆菌（E.coli）中用异丙基－β－D－硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达。表达产物用亲和层析柱加以纯化后，Western blot鉴定表达产物及其纯化物。结果：pGEX-4T/hDaxx能用IPTG在E.coli中诱导表达GST－hDaxx融合蛋白。结论：原核细胞表达了GST－hDaxx融合蛋白。 展开更多

关键词 hdaxx 融合蛋白 原核细胞 纯化 亲和层析柱

在线阅读 下载PDF 职称材料

hDaxx的克隆及其与Pin1之间的相互作用

20

作者 陈明谅 王继锋 +2 位作者 贺颖 李勤喜 叶志云 《细胞生物学杂志》 CSCD 2007年第4期545-549,共5页

克隆了hDaxx全长的cDNA,并证实hDaxx与肽基脯氨酰异构酶Pin1之间存在相互作用,它们共定位于细胞核内。同时发现它们能够协同激活p53的转录活性,揭示Pin1可能在hDaxx调节细胞凋亡的过程中发挥了重要作用。

关键词 hdaxx PINL 相互作用

在线阅读 下载PDF 职称材料