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靶向沉默DNMT3A对小鼠肺成纤维细胞胶原沉积、增殖及迁移活性的影响
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作者 汪先晨 尤峻柏 +4 位作者 凌辉 范家好 陈齐 陶辉 沙纪名 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第1期66-72,共7页
目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml T... 目的探讨靶向沉默DNA甲基化转移酶3A(DNMT3A)对小鼠肺成纤维细胞(PFs)胶原沉积、增殖与迁移活性的作用。方法为保证原代成纤维细胞的增殖迁移活性取新生C57乳鼠肺组织,剪碎后提取PFs,在显微镜下观察并鉴定形态。细胞贴壁后使用5 ng/ml TGF-β_(1)作用24 h诱导PFs细胞活化,并用小干扰RNA构建DNMT3A沉默模型;实验分为Control组、TGF-β_(1)组、TGF-β_(1)+siRNA-NC组和TGF-β_(1)+siRNA-DNMT3A组。应用Western blot方法检测DNMT3A、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白表达变化;应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)方法检测DNMT3A、α-SMA、CollagenⅠ的mRNA表达变化;CCK-8与EdU染色检测PFs增殖能力;划痕实验与Transwell迁移实验检测PFs迁移能力。结果与Control组相比,TGF-β_(1)诱导活化的PFs细胞组中DNMT3A升高(P<0.01),纤维化与增殖相关指标α-SMA、CollagenⅠ的蛋白及mRNA水平也升高(均P<0.05),同时PFs的增殖与迁移能力升高(均P<0.0001)。而与siRNA-NC组相比,在DNMT3A沉默组中通过Western blot法检测DNMT3A(P<0.0001)及相关指标α-SMA(P<0.01)、CollagenⅠ(P<0.01)的蛋白表达水平均降低,同时通过RT-qPCR法检测DNMT3A、α-SMA及CollagenⅠ的mRNA水平也均降低(P<0.001),并且PFs细胞的增殖(P<0.01)和迁移能力(P<0.05)较对照组下降。结论沉默DNMT3A能够抑制胶原的沉积及PFs的增殖,DNMT3A可以促进PFs的增殖和迁移能力,进而促进PFs的活化以及肺纤维化的发展,这一过程可能受到DNA甲基化修饰的调控。 展开更多
关键词 dnmt3A DNA甲基化 肺成纤维细胞 增殖 迁移 肺纤维化
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甲状腺癌组织中DNMT3B、FAM111B表达与临床病理特性及预后的关系
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作者 黄颖楠 王晨 +1 位作者 丁彩霞 戚新春 《中国医药导报》 2025年第4期122-127,共6页
目的分析甲状腺癌(TC)组织中DNMT3B、FAM111B表达与临床病理特性及预后的关系。方法选取2017年2月至2019年2月陕西省肿瘤医院诊治的98例TC患者,收集患者的临床资料;比较癌组织与癌旁正常组织中DNMT3B、FAM111B mRNA和蛋白阳性表达的差异... 目的分析甲状腺癌(TC)组织中DNMT3B、FAM111B表达与临床病理特性及预后的关系。方法选取2017年2月至2019年2月陕西省肿瘤医院诊治的98例TC患者,收集患者的临床资料;比较癌组织与癌旁正常组织中DNMT3B、FAM111B mRNA和蛋白阳性表达的差异;分析癌组织中DNMT3B mRNA与FAM111B mRNA的相关性;比较不同病理特征TC患者癌组织中DNMT3B、FAM111B蛋白阳性率;随访5年,比较TC患者DNMT3B、FAM111B阳性与阴性表达的无进展生存率的差异;分析TC患者无进展生存预后的影响因素。结果癌组织中DNMT3B、FAM111B mRNA表达高于癌旁正常组织(P<0.05)。癌组织中DNMT3B mRNA与FAM111B mRNA表达呈正相关(r=0.784,P<0.05)。癌组织中DNMT3B、FAM111B蛋白阳性率高于癌旁正常组织(P<0.05)。不同TNM分期、淋巴结转移情况的DNMT3B、FAM111B阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同DNMT3B、FAM111B蛋白表达的TC患者无进展生存曲线比较,差异有统计学意义(P<0.05)。TNM分期(Ⅲ~Ⅳ期)(HR=1.766),淋巴结转移(HR=1.868),DNMT3B蛋白表达阳性(HR=1.659),FAM111B蛋白表达阳性(HR=1.602)是TC患者无进展生存预后的危险因素(P<0.05)。结论TC组织中DNMT3B、FAM111B上调,与TNM分期、淋巴结转移有关联,是评估TC无进展生存预后的标志物。 展开更多
关键词 甲状腺癌 dnmt3B FAM111B 预后
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新生儿缺氧缺血性脑病患儿血清DNMT1、DNMT3a和BDNF检测对预后评估的临床价值
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作者 颜海峰 霍开明 +1 位作者 吴小红 周家仍 《四川医学》 CAS 2024年第8期886-890,共5页
目的探讨血清DNA甲基化转移酶(DNMT)1、DNMT3a和脑源性神经营养因子(BDNF)检测在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿预后评估中的价值。方法选取2016年1月至2023年1月在我院诊治的84例新生儿HIE患儿为观察组,并选取同期84例于我院出生的健... 目的探讨血清DNA甲基化转移酶(DNMT)1、DNMT3a和脑源性神经营养因子(BDNF)检测在新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)患儿预后评估中的价值。方法选取2016年1月至2023年1月在我院诊治的84例新生儿HIE患儿为观察组,并选取同期84例于我院出生的健康新生儿为对照组。根据患儿病情程度分为轻度组36例、中度组28例、重度组20例。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清DNMT1、DNMT3a和BDNF水平;多因素Logistic回归分析新生儿HIE患儿预后的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清DNMT1、DNMT3a和BDNF水平对新生儿HIE患儿预后的预测价值。结果与对照组相比,轻度、中度、重度组新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平依次升高(P<0.05),BDNF水平依次降低(P<0.05);与预后良好组相比,预后不良组新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平升高(P<0.05),BDNF水平降低(P<0.05);多因素Logistic回归分析发现,病情程度、DNMT1、DNMT3a是影响新生儿HIE患儿预后的危险因素(P<0.05),新生儿Apgar评分、BDNF是影响患儿预后的保护因素(P<0.05);血清DNMT1、DNMT3a、BDNF联合检测预测新生儿HIE患儿预后的ROC曲线下面积(AUC)为0.955,均优于其各自单独预测(Z_(联合检测-DNMT1)=2.046,P=0.020;Z_(联合检测-DNMT3a)=3.046,P=0.001;Z_(联合检测-BDNF)=2.073,P=0.019)。结论新生儿HIE患儿血清DNMT1、DNMT3a水平升高,BDNF水平降低,在新生儿HIE患儿预后评估中具有一定价值。 展开更多
关键词 新生儿缺氧缺血性脑病 DNMT1 dnmt3a BDNF 预后
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hSOD1-G93A突变的肌萎缩侧索硬化症转基因小鼠脊髓中5-mC水平以及DNMT1、DNMT3A和DNMT3B表达的变化
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作者 鲍炜炜 管英俊 +5 位作者 陈晓素 吕舒畅 陈燕春 张皓云 刘金梦 闫秋鹏 《中国组织化学与细胞化学杂志》 CAS CSCD 2024年第2期111-117,共7页
目的探讨5-甲基胞嘧啶(5-mC)水平以及DNA甲基转移酶1、3A和3B(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)蛋白表达变化与肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)之间的关系。方法选用发病前期(70 d)、发病早期(95 d)、发病中期(108 d)和发... 目的探讨5-甲基胞嘧啶(5-mC)水平以及DNA甲基转移酶1、3A和3B(DNMT1、DNMT3A和DNMT3B)蛋白表达变化与肌萎缩侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis,ALS)之间的关系。方法选用发病前期(70 d)、发病早期(95 d)、发病中期(108 d)和发病晚期(122 d)的hSOD1-G93A突变的ALS转基因小鼠,以同窝野生型(wild type,WT)小鼠作为对照,应用ELISA和Dot blot技术检测ALS小鼠脊髓中5-mC水平的变化规律,采用Western blot和免疫荧光双标染色技术检测ALS小鼠不同时期的脊髓中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B的蛋白水平变化以及定位。结果ELISA和Dot blot结果显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平升高;Western blot分析显示,与WT小鼠相比,ALS转基因小鼠脊髓中DNMT1蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高;DNMT3A蛋白水平在70 d、95 d和108 d升高,在122 d无显著性变化;DNMT3B蛋白水平在70 d无显著性变化,在95 d、108 d和122 d显著升高。结论ALS转基因小鼠脊髓中5-mC水平及关键DNA甲基转移酶DNMT1、DNMT3A和DNMT3B的蛋白水平异常升高与ALS发病密切相关。 展开更多
关键词 肌萎缩侧索硬化症 5-mC DNMT1 dnmt3A dnmt3B
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基于lncGAS5/DNMT3A通路探讨心康冲剂对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响 被引量:2
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作者 郭冰 毛以林 +4 位作者 余意 王敏 李园 贺璇 刘蓉芳 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2024年第3期82-86,I0004,I0005,共7页
目的 探讨心康冲剂调控长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(long non-coding RNA growth arrest specific transcript 5,lncGAS5)/DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)通路抗慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的机制。方法 62... 目的 探讨心康冲剂调控长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(long non-coding RNA growth arrest specific transcript 5,lncGAS5)/DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)通路抗慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的机制。方法 62只SD大鼠,其中随机取6只大鼠为正常组,余56只经腹腔注射阿霉素药物建立慢性心力衰竭模型,将造模成功的52只大鼠随机分为模型组12只(注射PBS+生理盐水灌胃),GAS5沉默组(注射AAV9-GAS5-RNAi病毒+生理盐水灌胃)、阴性对照组(注射AAV NC病毒+生理盐水灌胃)、心康冲剂组(注射AAV9-GAS5-RNAi病毒+心康冲剂溶液灌胃)、缬沙坦组(注射AAV9-GAS5-RNAi病毒+缬沙坦溶液灌胃)各10只。分组处理后,心脏超声检测各组大鼠心功能;Masson染色观察心脏组织形态;免疫荧光染色检测各组大鼠左心室纤维化蛋白α-SMA表达;酶联免疫吸附法检测大鼠血清Col I表达;实时荧光定量PCR法检测各组大鼠心尖组织lncGAS5、DNMT3A mRNA;Western blot法检测DNMT3A、第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten, PTEN)、磷酸化蛋白质激酶蛋白B(phosphorylated protein kinase B,AKT)各蛋白表达量。结果 与正常组相比,模型组大鼠左室射血分数(left ventricular ejection fractions, LVEF)、左心室短轴缩短率(left ventricular fractional shortening, LVFS)均明显降低(P<0.05);染色结果显示心肌纤维化严重;血液中I型胶原(type I collagen, Col I)明显升高(P<0.05);lncGAS5 mRNA表达降低,DNMT3A mRNA及蛋白表达升高,PTEN蛋白表达降低,AKT蛋白表达升高(P<0.05);与模型组相比,GAS5沉默组染色或指标结果进一步降低或升高;与GAS5沉默组相比,染色结果显示心康冲剂、缬沙坦组干预后心肌纤维化减轻,LVEF、LVFS都不同程度地增加(P<0.05);血清中Col I水平降低;lncGAS5mRNA表达升高,DNMT3AmRNA表达降低;DNMT3A、AKT蛋白表达降低,PTEN蛋白表达升高(P<0.05)。结论 心康冲剂可通过调控lncGAS5/DNMT3A/PTEN/AKT通路及下游纤维化因子,从而改善慢性心力衰竭之心肌纤维化。 展开更多
关键词 心康冲剂 慢性心力衰竭 心肌纤维化 lncGAS5 dnmt3A
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DNMT3A:A Multifunctional Mediator of Cancer Progression
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作者 Zijie WEI Jiaji ZHANG +1 位作者 Ziqian KOU Yu CHENG 《Medicinal Plant》 2024年第3期75-78,共4页
The advances in the research on the structure and function of DNMT3A and the role of DNMT3A in tumorigenesis and development were reviewed,including gynecologic cancers,hematologic tumors,melanoma,amelanoma,colorectal... The advances in the research on the structure and function of DNMT3A and the role of DNMT3A in tumorigenesis and development were reviewed,including gynecologic cancers,hematologic tumors,melanoma,amelanoma,colorectal cancer and other cancers,to provide new ideas for the treatment of cancer. 展开更多
关键词 dnmt3A CANCER METHYLATION
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散发性乳腺癌中DNMT3a、DNMT3b表达与ERα基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系 被引量:10
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作者 王勇 王晓东 +4 位作者 陈文捷 于兆进 吴慧哲 赵琳 魏敏杰 《天津医药》 CAS 2015年第5期500-504,共5页
目的探讨散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶(DNMT)3a、DNMT3b蛋白表达情况及其与雌激素受体(ER)α基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系。方法选取180例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化法检测组织中DNMT3a、DNMT3b蛋... 目的探讨散发性乳腺癌中DNA甲基转移酶(DNMT)3a、DNMT3b蛋白表达情况及其与雌激素受体(ER)α基因启动子甲基化状态及蛋白表达的关系。方法选取180例散发性乳腺癌与30例乳腺纤维腺瘤组织,采用免疫组化法检测组织中DNMT3a、DNMT3b蛋白的表达情况,甲基化特异性PCR检测97例散发性乳腺癌中ERα基因启动子的甲基化状态。结果乳腺纤维腺瘤与乳腺癌组织中的DNMT3a、DNMT3b蛋白阳性表达率差异无统计学意义;Ⅲ-Ⅳ期乳腺癌组织的DNMT3a、DNMT3b水平高于Ⅰ-Ⅱ期,有淋巴结转移者的DNMT3a表达水平高于无淋巴结转移者(均P〈0.05);97例乳腺癌中有39例(40.2%)发生ERα基因启动子甲基化,DNMT3a蛋白阳性表达与ERα基因甲基化呈正相关(rs=0.250);DNMT3a蛋白表达对患者的总体生存期(OS)有显著影响(P=0.035),对无病生存期(DFS)无明显影响(P=0.064),DNMT3b蛋白表达对患者的OS和DFS无影响(P分别为0.914、0.961)。结论DNMT3a、DNMT3b阳性表达与乳腺癌侵袭转移、病程进展、预后相关;DNMT3a与ERα基因启动子甲基化状态呈正相关;抑制DNMT3a、DNMT3b蛋白可能有利于散发性乳腺癌的预防和治疗。 展开更多
关键词 散发性乳腺癌 dnmt3a dnmt3B ERΑ DNA甲基化 启动区(遗传学)
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年龄因素对小鼠肺纤维化模型中DNMT3a DNMT3b及CDH1表达的影响 被引量:1
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作者 袁耀 钱力 《中国药物与临床》 CAS 2018年第10期1684-1685,共2页
特发性肺纤维化(IPF)是一类原因未明的慢性进展性间质性肺疾病。目前,DNA甲基化通过调控IPF中关键基因的表达而对IPF的发生发展起重要作用,已经成为研究IPF的分子机制、临床诊断与治疗的新方向。DNA甲基化通过DNA甲基转移酶(DNMT)催... 特发性肺纤维化(IPF)是一类原因未明的慢性进展性间质性肺疾病。目前,DNA甲基化通过调控IPF中关键基因的表达而对IPF的发生发展起重要作用,已经成为研究IPF的分子机制、临床诊断与治疗的新方向。DNA甲基化通过DNA甲基转移酶(DNMT)催化,DNMT3a和DNMT3b主要催化重新甲基化作用。DNMT3a、DNMT3b也被认为是DNA甲基化的关键限速因子[1]。 展开更多
关键词 肺纤维化 dnmt3a dnmt3B IPF 年龄因素
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人工注射Dnmt3 siRNA对意大利蜜蜂雌蜂发育的影响 被引量:14
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作者 石元元 曾志将 +2 位作者 吴小波 颜伟玉 王子龙 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期272-278,共7页
为了研究人工注射DNA甲基化转移酶3(DNA methyltransferase3,Dnmt3)siRNA对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica雌蜂的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及蜜蜂形态指标之间的影响和关系,分别给3组3日龄的... 为了研究人工注射DNA甲基化转移酶3(DNA methyltransferase3,Dnmt3)siRNA对意大利蜜蜂Apis mellifera ligustica雌蜂的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及蜜蜂形态指标之间的影响和关系,分别给3组3日龄的意大利蜜蜂幼虫人工注射50ng Ringer,uth siRNA和Dnmt3 siRNA溶液。在幼虫的发育过程中,测定每组幼虫头部的Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量、dynactin p62基因甲基化水平以及刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、前翅长、前翅宽、吻长、第3背板长等形态指标。结果表明:人工注射Dnmt3 siRNA不仅可以显著降低意大利蜜蜂幼虫头部Dnmt3酶活性、Dnmt3 mRNA表达量和dynactin p62基因整体甲基化水平,同时显著提高了刚羽化雌性蜜蜂的初生重、体长、第3背板长。结果说明Dnmt3的改变可以影响雌性意蜂幼虫的发育。 展开更多
关键词 意大利蜜蜂 蜂王 工蜂 SIRNA dnmt3 dynactin P62
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DNMT3A调控Drp1对肝星状细胞活化增殖和迁移能力的影响 被引量:6
10
作者 王娟 孙峰 +1 位作者 杨晶晶 鲁超 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1542-1547,共6页
目的探讨DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)调控动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)介导的线粒体裂变对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化增殖和迁移能力的影响。方法应用5μg·L^(-1)TGF-... 目的探讨DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)调控动力相关蛋白1(dynamin-related protein 1,Drp1)介导的线粒体裂变对肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)活化增殖和迁移能力的影响。方法应用5μg·L^(-1)TGF-β1作用24 h诱导HSC-T6细胞活化,DNMT3A慢病毒感染构建DNMT3A沉默模型;实验分为Control组、TGF-β1组、TGF-β1+LV5-NC组和TGF-β1+LV5-DNMT3A组。分别用RT-qPCR和Western blot检测DNMT3A对相关mRNA和蛋白表达的影响;用CCK-8检测细胞活化增殖的情况;分别用细胞划痕、Transwell迁移实验观察DNMT3A对HSCs细胞迁移能力的影响。结果慢病毒感染成功构建DNMT3A沉默模型。与Control组比较,TGF-β1刺激后DNMT3A水平明显升高,纤维化标志物CollagenⅠ和α-SMA的mRNA和蛋白水平明显升高,线粒体裂变标志物Drp1的mRNA和蛋白水平明显升高,同时HSCs细胞的增殖和迁移能力明显增加;而与NC组比较,DNMT3A沉默组DNMT3A水平明显降低,CollagenⅠ、α-SMA和Drp1表达明显被抑制,HSCs细胞的增殖和迁移能力也明显被抑制。结论沉默DNMT3A可抑制Drp1的水平,同时抑制了HSCs细胞的增殖和迁移能力。提示DNMT3A介导低水平的DNA甲基化修饰可能通过抑制Drp1的水平来抑制线粒体裂变的发生,进而抑制HSCs活化,影响肝纤维化疾病的发生发展。 展开更多
关键词 肝纤维化 线粒体裂变 HSCS dnmt3A Drp1 增殖 迁移
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急性髓系白血病中DNMT3a基因突变的研究 被引量:7
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作者 乔纯 孙超 +6 位作者 张苏江 钱思轩 钱锡峰 缪扣荣 朱华渊 洪鸣 李建勇 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2011年第2期303-307,共5页
本研究探讨急性髓系白血病(AML)患者DNMT3a基因突变情况及临床特征。采用PCR扩增产物直接测序法检测77例AML患者DNMT3a基因第882位氨基酸的突变情况,分析突变阳性患者的临床特征。结果表明,59例初诊AML患者中7例(11.9%)具有DNMT3a基因突... 本研究探讨急性髓系白血病(AML)患者DNMT3a基因突变情况及临床特征。采用PCR扩增产物直接测序法检测77例AML患者DNMT3a基因第882位氨基酸的突变情况,分析突变阳性患者的临床特征。结果表明,59例初诊AML患者中7例(11.9%)具有DNMT3a基因突变,突变类型分别为4例DNMT3a R882C、2例DNMT3aR882H和1例DNMT3a Y874C。7例DNMT3a基因突变患者中2例为M2、1例为M4、4例为M5。27例正常核型中5例(22.7%)发生突变,而21例异常核型中无1例发生突变。CEBPA阳性患者发生DNMT3a突变率明显高于CEBPA阴性患者(p=0.002)。突变患者中有4例(4/7,57.1%)伴有淋系抗原CD4和/或CD7的表达。DNMT3a突变组患者的年龄、性别、骨髓原始细胞数、白细胞数、血小板数、血红蛋白、完全缓解(CR)率、FLT3-ITD、NPM1和c-kit突变与DNMT3a野生型组相比均无统计学意义(p>0.05)。结论:DNMT3a基因突变多见于正常染色体核型AML伴NPM1和/或CEBPA突变阳性患者,其在AML患者预后中的预测价值有待于进一步的深入研究。 展开更多
关键词 dnmt3a基因 基因突变 急性髓系白血病
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急性髓系白血病中DNMT3A p.R882的共存基因突变分析 被引量:5
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作者 刘洁 华海应 +5 位作者 晁红颖 蔡晓辉 张修文 陈梅玉 卢绪章 刘建芳 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1331-1337,共7页
目的:探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)p.R882的共存基因突变及其与部分临床参数间的相关性。方法:采用高通量DNA测序技术检测49种靶基因;采用基因组DNA-PCR联合... 目的:探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者中DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferase 3A,DNMT3A)p.R882的共存基因突变及其与部分临床参数间的相关性。方法:采用高通量DNA测序技术检测49种靶基因;采用基因组DNA-PCR联合Sanger测序法检测患者中DNMT3A p.R882、CALR基因9号外显子、NPM1基因12号外显子、FLT3-ITD,及CEBPA的TAD、BZIP两个功能结构域的突变发生情况。结果:①301例患者中共检出41例携带DNMT3A p.R882突变,最常见为M5亚型;97.6%(40/41)DNMT3A p.R882突变患者同时携带其他基因突变,每例患者平均突变3.17次;其中双基因突变9例,3个基因突变共存12例,≥4个基因突变共存19例。②DNMT3A p.R882伴随基因突变最常见的为NPM1(n=27,65.9%),其他依次为:FLT3-ITD(n=18,43.9%)、IDH1(n=9,22.0%)、TET2(n=8,19.5%)及NRAS(n=6,14.6%)等;③≥4个基因突变患者的白细胞水平虽然高于双基因及3个基因突变者,但差异无统计学意义(P>0.05),同样血红蛋白及血小板水平差异亦无统计学意义(P>0.05),共存基因突变为FLT3-ITD者的外周白细胞水平高于野生型(P=0.034),但在年龄、血红蛋白及血小板水平方面的差异无统计学意义。伴NPM1、IDH1或TET2突变者与野生型相比,在中位年龄、外周血白细胞水平间的差异均无统计学意义。④与野生型相比,伴NPM1突变者具有更高的初次诱导完全缓解(complete remission,CR)率,而伴IDH1突变者CR率较低,差异均有统计学意义(P=0.010,0.025);伴FLT3-ITD与TET2突变者与野生型相比,在CR率方面的差异无统计学意义。结论:95%以上的DNMT3A p.R882突变AML均伴有额外基因突变,共存基因突变种类及个数对患者的临床特征有一定影响。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 突变 dnmt3A NPM1
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大黄对ICH模型大鼠microRNA-29b/DNMT3b/MMP-9信号通路的调节作用研究 被引量:5
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作者 汪坤 赵旭 +1 位作者 杨艳华 崔应麟 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1604-1608,共5页
目的探讨大黄对ICH模型大鼠的血脑屏障保护作用机制。方法将50只Wistar雄性大鼠随机分成5组:空白组、假手术组、ICH组、安宫牛黄丸组(0.27 g/kg)、大黄组(3.60 g/kg)。除空白组外,其他组采用胶原酶注射尾状核的方法构建大鼠脑出血(ICH)... 目的探讨大黄对ICH模型大鼠的血脑屏障保护作用机制。方法将50只Wistar雄性大鼠随机分成5组:空白组、假手术组、ICH组、安宫牛黄丸组(0.27 g/kg)、大黄组(3.60 g/kg)。除空白组外,其他组采用胶原酶注射尾状核的方法构建大鼠脑出血(ICH)模型。术后连续灌肠3 d后,采集样本,免疫组化法检测ICH模型大鼠出血侧海马组织和皮层组织中ZO-1、VE-cadherin-2表达水平;蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测ICH模型大鼠出血侧脑组织MMP-9、DNMT3b的表达;实时荧光定量PCR检测ICH模型大鼠出血侧脑组织中microRNA-29b的表达。结果与ICH组相比,大黄干预后可明显上调大鼠出血侧海马组织中ZO-1(P<0.01)、VE-cadherin-2(P<0.05)和皮层组织中ZO-1(P<0.01)、VE-cadherin-2(P<0.01)的表达,显著降低microRNA-29b(P<0.05)、DNMT3b(P<0.05)、MMP-9(P<0.01)的表达。结论大黄可以通过上调与血脑屏障相关的黏附蛋白和连接蛋白的表达发挥血脑屏障保护作用,这种作用可能与大黄调节microRNA-29b/DNMT3b/MMP-9信号通路有关。 展开更多
关键词 大黄 脑出血 血脑屏障 MicroRNA-29b dnmt3B MMP-9
原文传递
绵羊卵母细胞体外成熟过程中VEGF对DNMT3a表达的影响 被引量:2
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作者 曹忻 邹云龙 +4 位作者 蔡勇 周平 李明 石国庆 康相涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期484-492,共9页
旨在探究血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在绵羊卵母细胞体外成熟过程中对DNMT3a的影响。本研究采用RNA干扰和显微注射技术将针对VEGF两个受体FLT1和KDR/Flk-1的有效干扰片段导入到绵羊卵丘-卵母细胞复合... 旨在探究血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)在绵羊卵母细胞体外成熟过程中对DNMT3a的影响。本研究采用RNA干扰和显微注射技术将针对VEGF两个受体FLT1和KDR/Flk-1的有效干扰片段导入到绵羊卵丘-卵母细胞复合体(Cumulus-oocytes complexes,COCs)中,检测体外成熟培养各时间卵母细胞和颗粒细胞中DNMT3amRNA和蛋白表达水平的变化。结果表明,COCs体外成熟培养过程中,无论是否添加VEGF,卵母细胞内DNMT3amRNA表达量都随着培养时间延续而降低,培养至8h时DNMT3amRNA表达量急速下降,之后下降速度放缓,至24h后各组趋于一致,且未注射干扰片段对照组的下降速度快于其他干扰组(P〈0.01)。添加VEGF组DNMT3amRNA表达量的下降速度快于未添加组。干扰片段导入后发现,FLT1-siRNA和KDR-siRNA复合干扰组干扰效果优于KDR-siRNA干扰组,FLT1-siRNA干扰组干扰效果最弱(P〈0.01)。无论是否添加VEGF,在COCs体外成熟培养过程中,颗粒细胞DNMT3amRNA表达量都随着培养时间延续而降低,且各组表达量差别不大。其中未注射干扰片段对照组的下降速度在COCs成熟培养中期快于其他干扰组(P〈0.05或P〈0.01),FLT1-siRNA干扰效果较好。无论是否添加VEGF卵母细胞内DNMT3a蛋白表达量从0~4h上升,之后匀速下降,至16h急速下降,24h为零。未导入干扰片段对照组下降速度最快。其中16h对照组、FLT1-siRNA干扰组、KDR-siRNA干扰组和FLT1-siRNA&KDR-siRNA复合干扰组DNMT3a蛋白表达量,添加VEGF后,分别下降到培养初期的23.12%、31.07%、41.47%和37.90%,未添加VEGF的组则分别下降到培养初期的37.38%、54.60%、57.58%和82.75%。颗粒细胞中,添加VEGF组DNMT3a蛋白表达量呈现逐渐下降趋势,至20h时,已无DNMT3a蛋白表达;未添加VEGF组从0~4h有略微上升,之后呈现逐渐均速下降趋势,20h时,急速下降,至24h时,无DNMT3a蛋白表达,且干扰片段对DNMT3a蛋白表达影响不大,而本身颗粒细胞中DNMT3a蛋白表达量也不高。结果提示,绵羊COCs体外成熟培养过程中,VEGF加快了卵母细胞中DNMT3a mRNA和蛋白表达量的下降速度。而干扰片段的导入则使DNMT3amRNA和蛋白表达量下降速度放缓;颗粒细胞内VEGF的添加和受体干扰片段的导入,对DNMT3amRNA和蛋白表达影响效果不明显。 展开更多
关键词 血管内皮生长因子 dnmt3a 卵母细胞 绵羊 体外培养
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DNMT3B基因在肝细胞癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭迁移的影响 被引量:2
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作者 李雅睿 王梦瑶 +5 位作者 卢桂芳 任牡丹 卢新兰 张丹 赵艳 和水祥 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期380-385,共6页
目的探讨DNA甲基转移酶3b(DNMT3B)基因在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及机制。方法收集46例肝癌患者的癌组织与对应癌旁组织,qRT-PCR法检测DNMT3B在肝癌组织及对应癌旁组织中的表达,并分析其与临床病... 目的探讨DNA甲基转移酶3b(DNMT3B)基因在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及其对肝癌细胞增殖、侵袭迁移的影响及机制。方法收集46例肝癌患者的癌组织与对应癌旁组织,qRT-PCR法检测DNMT3B在肝癌组织及对应癌旁组织中的表达,并分析其与临床病理特征之间的关系;应用RNA干扰(RNAi)技术合成针对DNMT3B的siRNA并转染MHCC97-H细胞,qRT-PCR和Western blot检测相关基因mRNA和蛋白表达;MTT法检测细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果 46例肝癌患者中,DNMT3B基因在肝癌组织中的表达较对应癌旁组织升高者占73.91%,其高表达与肝癌的病理分化类型和肿瘤大小有关(P均<0.05);在细胞水平,抑制DNMT3B基因表达使MHCC97-H细胞增殖及侵袭迁移能力降低;干扰DNMT3B基因可以增加抑癌相关基因RASSFA1、APC、MTSS1mRNA和蛋白表达水平。结论 DNMT3B与肝癌的进展密切相关,它可能通过调控下游抑癌基因甲基化水平影响其表达,从而抑制肝癌细胞的增殖及侵袭迁移能力。 展开更多
关键词 肝细胞癌 DNA甲基转移酶3b(dnmt3B) 增殖 侵袭 迁移
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miR-124通过靶向调控DNMT3B抑制胃癌细胞增殖 被引量:4
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作者 谢黎明 贺荣芳 +1 位作者 张志伟 贺修胜 《中南医学科学杂志》 CAS 2013年第1期10-12,共3页
目的明确miR-124是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达而抑制胃癌细胞增殖能力,从而揭示miR-124的抑瘤分子机制。方法采用MTT检测miR-124对人胃癌MKN-45细胞的增殖能力;构建DNMT3B 3'UTR-荧光... 目的明确miR-124是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶3B(DNA methyltransferase 3B,DNMT3B)表达而抑制胃癌细胞增殖能力,从而揭示miR-124的抑瘤分子机制。方法采用MTT检测miR-124对人胃癌MKN-45细胞的增殖能力;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-124对DNMT3B3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-124 mimics转染胃癌细胞MKN-45,采用Western blot检测DNMT3B表达水平。结果 MTT结果显示,在转染miR-124 mimics 24、48和72 h后OD值(0.264±0.023、0.377±0.041、0.524±0.029)分别与对照组(0.414±0.051、0.619±0.065、0.898±0.072)比较,差异均有显著性(均P<0.05),且具有时间依赖性;荧光素报告载体系统证实DNMT3B是miR-124直接调控的靶基因。Western blot结果显示,miR-124可抑制DNMT3B蛋白的表达。结论 miR-124通过靶向调控DNMT3B的表达而抑制胃癌细胞增殖能力。 展开更多
关键词 胃癌 miR-124 dnmt3B 细胞增殖
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DNMT3b基因在骨髓瘤RPMI 8226细胞株中的表达及其生物学意义 被引量:2
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作者 王晓宁 姚建娜 +5 位作者 王晓娟 孙春红 郭彩利 陈颖 贺鹏程 张梅 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期1431-1435,共5页
目的:研究多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226中DNMT3b基因的表达情况并分析其生物学意义。方法:ELISA方法检测RPMI 8226中DNA甲基转移酶的活性;半定量RT-PCR及实时荧光定量PCR方法检测RPMI 8226细胞中DNMT3b基因mRNA的表达;不同浓度地西他滨... 目的:研究多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226中DNMT3b基因的表达情况并分析其生物学意义。方法:ELISA方法检测RPMI 8226中DNA甲基转移酶的活性;半定量RT-PCR及实时荧光定量PCR方法检测RPMI 8226细胞中DNMT3b基因mRNA的表达;不同浓度地西他滨干预RPMI8226细胞24 h后观察细胞增殖及DNMT3b基因mRNA表达水平的变化。结果:RPMI8226细胞中DNMT活性升高,DNMT3b基因mRNA表达水平升高。不同浓度地西他滨干预24 h后RPMI8226细胞增殖抑制,发生凋亡,DNMT3b基因mRNA表达水平降低。结论:骨髓瘤RPMI8226细胞中DNMT3b基因表达水平升高,地西他滨可能通过抑制DNMT3b表达从而抑制RPMI8226细胞增殖并诱导其凋亡。因此,DNMT3b有望作为骨髓瘤治疗的新靶点。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 RPMI8226细胞株 dnmt3b基因 地西他滨
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DNMT3A、FLT3-ITD突变与AML患者不良预后的相关性 被引量:8
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作者 马娟 沈立松 +1 位作者 Jennifer Dunlap Fan Guang 《检验医学》 CAS 2017年第9期784-790,共7页
目的探讨FLT3-ITD及DNMT3A突变对细胞遗传学中等风险的急性髓系白血病(AML)患者预后评估的价值。方法选取2010—2016年美国俄勒冈州健康与科学大学附属医院收治的AML初诊患者132例,根据细胞遗传学分析结果将患者分为预后良好细胞遗传学... 目的探讨FLT3-ITD及DNMT3A突变对细胞遗传学中等风险的急性髓系白血病(AML)患者预后评估的价值。方法选取2010—2016年美国俄勒冈州健康与科学大学附属医院收治的AML初诊患者132例,根据细胞遗传学分析结果将患者分为预后良好细胞遗传学组(简称预后良好组)24例、中等风险细胞遗传学组(简称中等风险组)79例、不良风险细胞遗传学组(简称不良风险组)27例,另有细胞遗传学信息不详2例。使用下一代测序(NGS)技术检测与血液系统肿瘤发病相关的42个基因突变。结果 132例AML患者中有120例(91%)至少发生1个基因突变,多基因(≥2)突变占61%。Kaplan-Meier生存曲线显示,在中等风险组中,FLT3-ITD突变阳性组的总体生存期与FLT3-ITD突变阴性组比较,差异有统计学意义(P<0.001)。进一步分析发现,FLT3-ITD突变阳性+DNMT3A突变组的中位生存期明显短于FLT3-ITD突变阴性组(P<0.001),FLT3-ITD突变阳性+DNMT3A野生型组的中位生存期与FLT3-ITD突变阴性组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。FLT3-ITD突变阳性+DNMT3A突变组的总生存期明显短于FLT3-ITD突变阴性组(P<0.001)和FLT3-ITD突变阳性+DNMT3A野生型组(P=0.003)。结论在细胞遗传学中等风险的AML患者中,如果同时存在FLT3-ITD及DNMT3A突变,提示预后不良。检测FLT3-ITD及DNMT3A突变状态有助于对AML进行预后评估。 展开更多
关键词 FLT3-ITD基因 dnmt3A基因 突变 急性髓系白血病 预后因素
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DNMT1和DNMT3B基因多态性与食管癌发病风险的关联分析 被引量:4
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作者 李菡 林夏雯 +1 位作者 陈宇 张兰芳 《标记免疫分析与临床》 CAS 2015年第12期1214-1220,共7页
目的探讨DNMTl基因多态性位点(rsl6999593,rs2228611)和DNMT3B基因多态性位点(rs2424908)的基因型与食管癌及其病理参数的关联。方法采用病例对照研究,使用MassARRAY检测技术对258例食管癌患者和260例健康对照的3个多态性位点基... 目的探讨DNMTl基因多态性位点(rsl6999593,rs2228611)和DNMT3B基因多态性位点(rs2424908)的基因型与食管癌及其病理参数的关联。方法采用病例对照研究,使用MassARRAY检测技术对258例食管癌患者和260例健康对照的3个多态性位点基因型分布进行分析。采用Logistic回归模型分析各基因型与食管癌发生的关系并比较不同基因型与食管癌病理参数的关系。结果DNMT1基因rs16999593位点TC基因型(OR=0.69,95%CI:0.47—1.00)和rs2228611位点GA基因型(OR=0.67,95%CI:0.46—0.98)与食管癌的低风险相关,rs16999593TC、CC基因型与食管癌分化程度相关(中分化:TCvs.TT:OR=0.53,95%CI:0.33—0.86;低分化:CCVS.1Tr:OR=2.79,95%CI:1.12—6.91),rs2228611GA基因型与高分化食管癌(GAVS.GG:OR=0.47,95%CI:0.25~0.88)和无周围淋巴结转移(GAVS.GG:OR=0.62,95%CI:0.39—0.98)有关,DNMT3B基因rs2424908CC基因型与肿瘤Ⅲ-Ⅳ分期(CCVS.Tr:OR=0.38,95%CI:0.15~0.92)及远端淋巴结转移(CCvs.TT:OR=0.18,95%CI:0.40—0.80)相关。结论本研究发现rs16999593和rs2228611位点与食管癌的发生及分化程度相关,rs2228611和rs2424908位点和淋巴结转移相关,rs2424908位点和肿瘤分期有相关性。 展开更多
关键词 食管癌 DNMT1 dnmt3B 基因多态性
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DNMT3a在氢醌致造血干细胞毒性中的作用研究 被引量:1
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作者 武坤 聂波 +5 位作者 杨金荣 贺振新 程沈菊 李艳红 晋臻 史明霞 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期607-612,共6页
目的:探讨DNA甲基转移酶3A(DNMT3a)在氢醌(HQ)致造血干细胞毒性中的调控作用及其机制。方法:人造血干细胞HSPC-1随机分为4组,A组:正常HSPC-1;B组:HQ干预HSPC-1;C组:B组+转染pcDNA3空载体;D组:B组+pcDNA3-DNMT3a。采用RT-qPCR法检测DNMT3... 目的:探讨DNA甲基转移酶3A(DNMT3a)在氢醌(HQ)致造血干细胞毒性中的调控作用及其机制。方法:人造血干细胞HSPC-1随机分为4组,A组:正常HSPC-1;B组:HQ干预HSPC-1;C组:B组+转染pcDNA3空载体;D组:B组+pcDNA3-DNMT3a。采用RT-qPCR法检测DNMT3a、PARP-1 mRNA表达情况;免疫印迹法检测DNMT3a、PARP-1蛋白表达水平。显微镜下观察细胞形态;MTT、流式细胞术分别检测细胞活力和凋亡率。结果:与A组相比,B组细胞DNMT3a mRNA及蛋白表达降低、PARP-1 mRNA及蛋白水平升高(P<0.05);C组与B组相比上述指标差异无统计学意义(P>0.05);D组HSPC-1转染DNMT3a后,DNMT3a mRNA及蛋白水平较B组升高,PARP-1 mRNA及蛋白水平降低(P<0.05)。各组细胞转染DNMT3a后继续培养24 h, A组HSPC-1高密度生长,呈现的单核融合生长,B组及C组HSPC-1数目减少、生长缓慢;与B组和C组相比,D组细胞生长速度加快。MTT分析显示,B组各时间点HSPC-1细胞活力均明显低于A组(P<0.05),与C组比较无明显差异(P>0.05);转染24、48、72 h后D组细胞活力均明显高于B组(P<0.05)。B组细胞凋亡率明显高于A组(P<0.001),与C组无显著差异(P>0.05),D组细胞凋亡率明显低于B组(P<0.001)。结论:DNMT3a可能参与氢醌所致造血干细胞损伤过程,氢醌细胞损伤作用的发挥可能与DNMT3a表达受抑后对PARP-1活性的调节有关。 展开更多
关键词 造血干细胞 dnmt3a 氢醌 PARP-1 形态 凋亡
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