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转chit42基因柠檬的分子鉴定及抗炭疽病研究 被引量：1
1
作者 谢玉明 马先锋 +1 位作者 韩健 邓子牛 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期695-698,共4页
以转chit42基因柠檬为试材,对其进行了分子鉴定和抗炭疽病研究。用PCR和Southern杂交证实外源基因chit42已经整合到转化植株基因组中,chit42基因在转基因柠檬SR23株系中为3个拷贝,在SR24株系中为2个拷贝。对转基因柠檬进行离体和活体抗... 以转chit42基因柠檬为试材,对其进行了分子鉴定和抗炭疽病研究。用PCR和Southern杂交证实外源基因chit42已经整合到转化植株基因组中,chit42基因在转基因柠檬SR23株系中为3个拷贝,在SR24株系中为2个拷贝。对转基因柠檬进行离体和活体抗炭疽病试验表明转基因柠檬抗炭疽病能力得到明显提高。利用半定量RT-PCR技术检测chit42基因在柠檬中的表达,结果表明用炭疽病病菌接种处理24h后,chit42基因表达量开始增加;接种48h后,chit42基因表达量进一步明显增大;接种72h后,表达量开始有所下降,但仍然高于正常情况下chit42基因的表达量。 展开更多
关键词 转基因柠檬 chit42基因 Southenl杂交 半定量RT—PCR 炭疽病
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农杆菌介导甜橙遗传转化的初步研究 被引量：15
2
作者 谢玉明 邓子牛 +3 位作者 郭琛 焦徕 胡春华 熊兴耀 《湖南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期627-630,655,共5页
为改良柑桔品种,以普通溆浦甜橙(CitrussinensiscvXupu)实生苗上胚轴为外植体,建立了农杆菌介导的遗传转化体系,并把chit42基因和phyB基因导入其中.上胚轴经农杆菌工程菌液浸染后,在共培培养基(MS+3mg/LBA)上培养3d,然后分别转移到含有1... 为改良柑桔品种,以普通溆浦甜橙(CitrussinensiscvXupu)实生苗上胚轴为外植体,建立了农杆菌介导的遗传转化体系,并把chit42基因和phyB基因导入其中.上胚轴经农杆菌工程菌液浸染后,在共培培养基(MS+3mg/LBA)上培养3d,然后分别转移到含有100mg/LKan(卡那霉素,Kanamycin)和500mg/LCef(头孢噻肟霉素,Cefotaxime)的选择培养基上培养14d后,上胚轴开始分化抗性芽,chit42基因和phyB基因的抗性芽再生率分别为27.8%和35.6%.将抗性芽在筛选培养基上培养30d后用茎尖微芽嫁接成苗.目前,嫁接苗在温室中生长良好,经PCR鉴定为转化植株. 展开更多
关键词 甜橙 农杆菌介导 chit42基因 phyB基因
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Error-prone PCR致哈茨木霉几丁质酶突变的条件优化 被引量：2
3
作者 王傲雪 李微 +1 位作者 陈秀玲 李景富 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期134-138,共5页
运用Error-prone PCR对哈茨木霉几丁质酶基因(Chit42)进行人工突变。在常规PCR基础上,通过提高体系中Mg2+浓度,适当加入一定浓度Mn2+,调节四种dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dGTP)浓度,得到产生明显突变效果的试验条件。在Error-prone PCR中,... 运用Error-prone PCR对哈茨木霉几丁质酶基因(Chit42)进行人工突变。在常规PCR基础上,通过提高体系中Mg2+浓度,适当加入一定浓度Mn2+,调节四种dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dGTP)浓度,得到产生明显突变效果的试验条件。在Error-prone PCR中,使用5.0 mmol·L-1Mg2+,0.5 mmol·L-1Mn2+,0.04 mmol·L-1dATP和dGTP,1.5 mmol·L-1dTTP和dCTP进行扩增后,随机挑选10个克隆测序,累积13 370个碱基,检测到57个突变,平均突变率为0.4%。为产生优良突变株、酶分子定向进化奠定基础。 展开更多
关键词 Error—prone PCR 哈茨木霉几丁质酶 chit42 突变
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纽荷尔脐橙成年态节间茎段遗传转化研究 被引量：1
4
作者 谢玉明 郭琛 +3 位作者 张家银 杨丽 胡春华 邓子牛 《分子植物育种》 CAS CSCD 2008年第5期1019-1024,共6页
建立柑橘成年态节间茎段的离体再生和遗传转化系统是实现柑橘转基因育种实用化的前提基础。本试验以纽荷尔脐橙成年态节间茎段为试材,初步建立了脐橙成年态节间茎段的离体再生和遗传转化系统。结果表明采用改良的预处理灭菌法对成年态... 建立柑橘成年态节间茎段的离体再生和遗传转化系统是实现柑橘转基因育种实用化的前提基础。本试验以纽荷尔脐橙成年态节间茎段为试材,初步建立了脐橙成年态节间茎段的离体再生和遗传转化系统。结果表明采用改良的预处理灭菌法对成年态茎段进行消毒处理,污染率明显降低。节间茎段在MS+3mg/L6-BA的培养基上,不定芽再生率较高。采用根癌农杆菌介导法将外源抗真菌病基因chit42导入其中,抗性芽通过二次嫁接后获得再生植株,PCR检测4株抗性植株中有2株扩增出该特异性条带,RT-PCR分析进一步确认外源基因chit42能够在转基因植株的基因组中表达。 展开更多
关键词 纽荷尔脐橙 成年态节间茎段 遗传转化 chit42基因
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