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基于CP基因的中国云南省烟草TMV群体遗传多样性分析
1
作者 赵正婷 盖晓彤 +4 位作者 张俊蕾 夏振远 刘弟 姜宁 刘雅婷 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期48-60,共13页
为探明云南烟草上烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)的群体遗传多样性特征,本研究使用TMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的特异性引物对采自云南各烟区的疑似烟草花叶病样品进行检测,通过克隆测序获得138个TMV CP基因序列,对其进... 为探明云南烟草上烟草花叶病毒(tobacco mosaic virus,TMV)的群体遗传多样性特征,本研究使用TMV外壳蛋白(coat protein,CP)基因的特异性引物对采自云南各烟区的疑似烟草花叶病样品进行检测,通过克隆测序获得138个TMV CP基因序列,对其进行了一致性比对,及系统发育、错配分布、遗传变异、群体多样性等分析。变异分析显示,138条CP基因序列共有变异位点数122个,占总位点数的25.42%,变异类型只有核苷酸替换,核酸多样性为0.018,单倍型多样性为0.970;一致性比对结果显示,138条序列的核苷酸和氨基酸序列一致性均为96%~100%;重组分析未检测到重组信号;对来自云南烟草,NCBI上其他地区烟草及云南地区其他寄主的TMV分离物的CP基因进行系统发育分析,结果显示,所有TMV分离物在进化上可分为4个组,本试验获得的分离物分布在1、2、3组,其中只有来源昭通地区的分离物倾向于聚成簇,表明云南烟草TMV分离物的适应性进化受地理适应性所驱动,与寄主适应性基本无关;错配分布分析显示,云南烟草TMV群体呈多峰分布,表明该群体近期未经历群体扩张事件;群体间遗传分化分析结果表明,除昭通和曲靖烟草TMV群体与其他TMV群体之间很容易发生遗传漂变促使群体发生遗传分化外,其余大部分TMV群体之间的基因流都可以抵制遗传漂变。本研究首次报道了云南各烟区TMV分离物群体遗传变异情况,研究结果可为TMV的抗病育种和制定更为有效的防治策略提供重要参考。 展开更多
关键词 烟草 云南 烟草花叶病毒 cp基因 遗传多样性
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基于CP基因的云南烟草花叶病毒RT-LAMP快速检测体系的构建 被引量：1
2
作者 赵正婷 盖晓彤 +3 位作者 张俊蕾 卢灿华 姜宁 刘雅婷 《山东农业科学》 北大核心 2024年第5期154-162,共9页
为快速检测云南烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),本研究根据来自云南烟草TMV分离物的外壳蛋白(CP)基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对反应的温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度及内、外引... 为快速检测云南烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV),本研究根据来自云南烟草TMV分离物的外壳蛋白(CP)基因保守核苷酸序列,设计了5组引物进行筛选,并采用单一变量法对反应的温度、时间、甜菜碱浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度及内、外引物浓度比等进行逐一优化,建立了云南烟草TMV逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系。结果表明,最佳引物组为第4组,最适反应温度为60℃,甜菜碱、dNTPs、Mg^(2+)的最佳反应浓度分别为0.6、0.4、2.0 mmol/L,最佳内、外引物浓度比为4∶1,最佳反应时间40 min。优化后的RT-LAMP经SYBR Green I染色可肉眼判断结果,特异性高,灵敏度是常规RT-PCR的10倍。RT-LAMP检测体系的建立为云南烟草TMV的检测提供了一种便捷、高效、可靠的方法。 展开更多
关键词 烟草花叶病毒 cp基因 RT-LAMP 特异性 灵敏度
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烟草花叶病毒南瓜分离物CP基因的克隆、序列分析及其原核表达 被引量：13
3
作者 刘金亮 王凤婷 +2 位作者 魏毅 潘洪玉 张世宏 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2010年第5期6-10,共5页
为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原。采用RT-PCR的方法,用TMV外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,克隆到的基因序列进行分析,并使其在大肠杆菌中表达。结果表明,从该样品... 为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原。采用RT-PCR的方法,用TMV外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,克隆到的基因序列进行分析,并使其在大肠杆菌中表达。结果表明,从该样品中扩增到了TMV的CP基因,说明该样品受到TMV的侵染,首次发现TMV自然侵染南瓜。对CP基因序列测定及分析表明,与GenBank上其他TMV分离物CP基因核苷酸序列的同源性为86.5%～99.0%,推导的氨基酸序列同源性为93.7%～99.4%。根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:32个TMV分离物可分为5个组,其中TMV-liaocheng与Nakron Pathom、Fujian、017等分离物属于Ⅳ组。TMV-liaocheng可能发生过重组。将TMV-liaocheng CP基因与原核表达载体pET-22b(+)连接,在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS诱导表达出分子量约20kDa的融合蛋白,并用Ni2+-NTA His·Bind树脂纯化,纯化后的蛋白可直接用于制备特异性的抗血清,为准确、快速地检测TMV奠定了基础。 展开更多
关键词 南瓜 烟草花叶病毒 cp基因 序列分析 原核表达
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马铃薯Y病毒CP基因RNAi载体构建与干涉效果测定 被引量：11
4
作者 李奇科 陶刚 +4 位作者 邱又彬 邱礽 迟胜起 朱英 刘作易 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期460-464,共5页
RNA沉默(RNAi)介导的植物抗病毒研究是近年来引起广泛关注的一项植物抗病毒基因工程策略。马铃薯Y病毒(PVY)在世界范围内引起马铃薯、烟草等重要经济作物的病害,并且造成严重的经济损失。本文以PVY的外壳蛋白(CP)基因为模板扩增300bp和3... RNA沉默(RNAi)介导的植物抗病毒研究是近年来引起广泛关注的一项植物抗病毒基因工程策略。马铃薯Y病毒(PVY)在世界范围内引起马铃薯、烟草等重要经济作物的病害,并且造成严重的经济损失。本文以PVY的外壳蛋白(CP)基因为模板扩增300bp和354bp两个片段,正向和反向分别插入植物表达载体pROKⅡ的35S启动子下游,从而构建了以PVY的CP基因为靶标的RNAi植物表达载体pROKY300,转入农杆菌EHA105中,以农杆菌渗入法在本氏烟中瞬时表达与PVYCP同源的hairpin RNA。结果表明,瞬时表达的hairpinRNA有效干涉了PVY侵染。 展开更多
关键词 马铃薯Y病毒 cp基因 RNAI 载体构建 农杆菌渗入法
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潍坊萝卜中芜菁花叶病毒分离物的分子特性及CP基因的表达 被引量：9
5
作者 刘金亮 于晓庆 +4 位作者 田延平 都杰 竺晓平 李向东 严敦余 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期84-88,共5页
从表现红心病的潍坊萝卜块根上得到一芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus, TuMV）分离物（TuMV-Ra），通过RT-PCR获得了该分离物的外壳蛋白（CP）基因，对其进行了序列测定，并将其核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中登录的其... 从表现红心病的潍坊萝卜块根上得到一芜菁花叶病毒（Turnip mosaic virus, TuMV）分离物（TuMV-Ra），通过RT-PCR获得了该分离物的外壳蛋白（CP）基因，对其进行了序列测定，并将其核苷酸序列及推导出的氨基酸序列与GenBank中登录的其它20个TuMV萝卜分离物的相应序列进行比较和分析。结果表明，TuMV-Ra与这20个分离物CP基因核苷酸序列的同源性为89．9％～99．O％，CP氨基酸序列同源性为94．8％～99．7％；其中与中国浙江杭州萝卜的两个分离物HZLB1、HZLB2同源性最高，核苷酸序列的同源性为98．7％和99．0％，氨基酸序列同源性为99．0％和99．7％。TuMV-Ra与1999年从表现相同症状的潍坊萝卜得到的分离物CHINA-WF CP基因核苷酸同源性为93．66％，氨基酸同源性为96．53％，说明病毒发生了比较大的变异，而且变异的位点主要在CP的N末端。将TuMV-Ra CP基因克隆到原核表达载体pET-22b（＋），在大肠杆菌BL21（DE3）中表达出分子量为38kD的融合蛋白。Western blotting分析证明TuMV-RaCP在大肠杆菌中得到了正确表达。 展开更多
关键词 芜菁花叶病毒 萝卜 cp基因 分子特性 基因表达
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CP基因转化的线辣椒抗卡那霉素和抗CMV特性的遗传 被引量：25
6
作者 商鸿生 王旭 徐秉良 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2001年第5期103-106,共4页
利用根癌土壤杆菌 ,采用叶盘法转化线辣椒 (Capsicum annuum var.longunt)优良品种陕 82 12 ,建成了能同时表达 CMV和 TMV外壳蛋白基因 (CP基因 )的 T1 代纯合系。以其自交 T2 ～ T4代 ,以及 T2 代植株与未转化陕 82 12杂交的 F1 代和 ... 利用根癌土壤杆菌 ,采用叶盘法转化线辣椒 (Capsicum annuum var.longunt)优良品种陕 82 12 ,建成了能同时表达 CMV和 TMV外壳蛋白基因 (CP基因 )的 T1 代纯合系。以其自交 T2 ～ T4代 ,以及 T2 代植株与未转化陕 82 12杂交的 F1 代和 F2 代群体为试材 ,研究了抗卡那霉素和抗黄瓜花叶病毒 (CMV)特性的遗传传递规律。结果发现 ,抗卡那霉素标记基因和抗病性基因在自交和杂交各代都能稳定地高效表达 ;两者在自交各代纯合 ;在杂交 F1 代抗药性和抗病性都表现为显性 ;在杂交 F2 代 ,抗药植株对敏感植株 ,以及抗病植株对感病植株的分离比都符合 3∶ 1的理论比例。 展开更多
关键词 转基因线辣椒 cp基因 CMV 卡那霉素 抗病性 遗传规律 育种
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CP基因遗传转化甘蔗品种Badila与福农91-4621的抗病性差异分析 被引量：12
7
作者 郭莺 阮妙鸿 +3 位作者 姚伟 陈荔 陈如凯 张木清 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2008年第1期7-12,共6页
利用含甘蔗花叶病病毒E株系外壳蛋白基因(CP)的质粒pUbi-SCMV-CP,用基因枪轰击法遗传转化不同甘蔗品种,所获得的转基因无性系经过3代的抗病性鉴定和H2O2代谢的分析.结果表明,Badila(TB1)转基因植株具有较强的抗花叶病能力,而福农91-462... 利用含甘蔗花叶病病毒E株系外壳蛋白基因(CP)的质粒pUbi-SCMV-CP,用基因枪轰击法遗传转化不同甘蔗品种,所获得的转基因无性系经过3代的抗病性鉴定和H2O2代谢的分析.结果表明,Badila(TB1)转基因植株具有较强的抗花叶病能力,而福农91-4621在转基因无性系T1、T2中表现出较强的抗病性,但在T3中其抗病性开始退化,发病率高达68%;抗病生理分析表明,转基因无性系的抗病性与H2O2清除和积累有关.经RT-PCR克隆和测序分析,福农91-4621所感染的SrMV-H的CP基因氨基酸序列与转化的SCMV-E的同源性较低,仅为73.2%,福建Badila所感染的是SCMV-D,与SCMV-E同源性高达97.8%.说明CP基因对本身所来源的病毒或是与原病毒亲缘关系较近的病毒可能具有较强的抗性,而对同属于SCMV的其他病毒虽有抗性,但抗性较弱,且随着转基因世代数的增加而降低. 展开更多
关键词 甘蔗花叶病 cp基因 转基因 抗病性
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部分蔬菜CMV分离物CP基因的克隆及序列分析 被引量：9
8
作者 陈伟 罗静 +6 位作者 庄木 李艳红 冯兰香 王晓武 谢丙炎 刘玉梅 方智远 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期1011-1014,共4页
对来自国内不同地区、不同蔬菜作物上的8个黄瓜花叶病毒分离物，采用一步法RT-PCR扩增得到CP基因全长片段，分别克隆到pMD-18T载体并测序。结果表明，本研究8个分离物的CP基因均为657个碱基，可编码218个氨基酸，它们之间的核苷酸序列... 对来自国内不同地区、不同蔬菜作物上的8个黄瓜花叶病毒分离物，采用一步法RT-PCR扩增得到CP基因全长片段，分别克隆到pMD-18T载体并测序。结果表明，本研究8个分离物的CP基因均为657个碱基，可编码218个氨基酸，它们之间的核苷酸序列同源性较高，达92．8％-99．1％；将它们与GenBank中部分CMVCP基因序列比较，显示出与CMV亚组Ⅰ株系的核苷酸序列同源性达90．7％-98．0％，而与亚组Ⅱ株系的核苷酸序列同源性仅有75．8％-78．1％。因此，这8个分离物应归属于CMV亚组Ⅰ。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 cp基因 RT—PCR 序列分析
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侵染百合的黄瓜花叶病毒亚组Ⅱ分离物cp基因克隆和序列分析 被引量：6
9
作者 赵丹 孔宝华 +3 位作者 李凡 蔡红 王连春 陈海如 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期456-460,共5页
从云南大理的东方型百合上得到黄瓜花叶病毒分离物（CMV-DL）,ELISA检测初步确定为CMV亚组Ⅱ分离物,设计并合成CMV亚组Ⅱ的特异引物,RT-PCR扩增得到1条约800 nt的特异片段,经克隆及序列测定,该片段长828 nt,包含的外壳蛋白（CP）基因由6... 从云南大理的东方型百合上得到黄瓜花叶病毒分离物（CMV-DL）,ELISA检测初步确定为CMV亚组Ⅱ分离物,设计并合成CMV亚组Ⅱ的特异引物,RT-PCR扩增得到1条约800 nt的特异片段,经克隆及序列测定,该片段长828 nt,包含的外壳蛋白（CP）基因由657 nt组成。将该分离物的cp基因与其它14个CMV分离物进行同源性比较,在核苷酸水平上与CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的同源性分别为76.8%-78.1%和98.6%-99.2%;在氨基酸水平上与CMV亚组Ⅰ和亚组Ⅱ的同源性分别为82.0%-84.3%和95.9%-100.0%。结果表明CMV-DL为CMV亚组Ⅱ成员。 展开更多
关键词 黄瓜花叶病毒 百合 RT-PCR cp基因
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香蕉束顶病毒海口分离物CP基因的原核表达、纯化及其抗血清制备 被引量：8
10
作者 余乃通 冯团诚 +2 位作者 王健华 张雨良 刘志昕 《热带作物学报》 CSCD 2010年第5期767-771,共5页
用PCR方法从感染香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增外壳蛋白(coat protein,CP)基因。回收目的片段,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样酶切的质粒载体pET30a(+)相连接,酶切验证及测序结果获... 用PCR方法从感染香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)的香蕉植株幼嫩假茎和叶片总DNA中扩增外壳蛋白(coat protein,CP)基因。回收目的片段,经XhoⅠ和BamHⅠ双酶切后与同样酶切的质粒载体pET30a(+)相连接,酶切验证及测序结果获得了含BBTV CP基因的重组质粒pET30a-CP。将重组质粒转化Codon plus表达菌,在25℃、0.4mmol/L IPTG条件下诱导6h或过夜,经12%SDS-PAGE电泳分析可知,该重组菌表达了一个与预期分子量大小一致的His-CP融合蛋白,约为30ku,且主要以包涵体的形式存在。多次洗涤包涵体后得到高纯度的融合蛋白,用其免疫家兔,获得BBTV CP蛋白抗血清。间接ELISA法测定抗血清效价大于51200。Western blot分析表明,抗血清能与融合蛋白特异性结合。 展开更多
关键词 香蕉束顶病毒 cp基因 原核表达 纯化 抗血清
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侵染南瓜的西瓜花叶病毒和黄瓜花叶病毒CP基因的克隆和序列分析 被引量：8
11
作者 刘金亮 王凤婷 +2 位作者 魏毅 张世宏 潘洪玉 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第16期262-266,共5页
为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原,采用RT-PCR的方法,用马铃薯Y病毒属病毒3′-末端序列的简并引物和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品... 为从分子水平鉴定山东聊城的一表现明显花叶、黄化、蕨叶及果实畸形的南瓜病毒病的病原,采用RT-PCR的方法,用马铃薯Y病毒属病毒3′-末端序列的简并引物和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)外壳蛋白(CP)基因的特异引物,对该样品进行了检测,并对克隆到的基因序列进行分析。结果表明,该样品受西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)和CMV2种病毒的复合侵染,分别命名为WMV-liaocheng和CMV-liaocheng,与其他相应病毒分离物CP基因核苷酸序列的同源性分别为91.2%～98.0%和77.0%～97.9%,推导的氨基酸序列同源性分别为96.4%～98.5%和81.2%～99.1%。根据完整CP基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:18个WMV分离物可分为3组,其中WMV-liaocheng与HLJ、CHN及Habenaria等分离物表现出较近的亲缘关系,形成Ⅲ组;30个CMV分为2个亚组,其中CMV-liaocheng属于亚组I,CMV-liaocheng可能发生过重组。 展开更多
关键词 南瓜 西瓜花叶病毒 黄瓜花叶病毒 复合侵染 cp基因
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甘蔗黄叶病毒与花叶病毒CP基因RNAi载体构建与转化甘蔗研究 被引量：9
12
作者 陈利平 陈平华 +6 位作者 陈忠伟 王恒波 许莉萍 刘迪 高三基 郭晋隆 陈如凯 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2016年第1期99-106,共8页
甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分... 甘蔗黄叶病和甘蔗花叶病是我国甘蔗最主要的病毒病,感病品种产量下降和品质变劣,传统方法难以防治。RNA干扰技术使培育抗病毒甘蔗品种成为可能。本研究根据甘蔗黄叶病毒和侵染甘蔗的高粱花叶病毒结构与功能特性,广泛收集不同来源病毒分离物CP基因序列,经过比对选取保守序列作为干扰序列。通过在序列两端添加酶切位点,合成并连接成双价甘蔗黄叶病和花叶病毒干扰序列,然后构建到中间载体p HANNIBAL上,形成双价RNAi干扰结构,最后插入到p ART27上形成干扰表达载体。利用基因枪轰击甘蔗品种福农15号愈伤组织进行转化,经G418筛选获得抗性再生植株。通过提取DNA和RNA分析,证实双价RNAi干扰结构不仅以不同拷贝整合到甘蔗基因组中,而且得到了转录表达。 展开更多
关键词 甘蔗黄叶病毒 甘蔗花叶病毒 cp基因 双价RNAi表达载体构建 遗传转化
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侵染中国甘蔗和玉米的SCMV CP基因序列多样性分析 被引量：9
13
作者 周国辉 许东林 陈晓琴 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期84-91,共8页
【目的】揭示侵染中国甘蔗及玉米的甘蔗花叶病毒(Sugarcanemosaicvirus,SCMV)的遗传多样性,为抗病品种培育及病害综合防治提供依据。【方法】以病株叶组织总RNA抽提物为模板,通过RT-PCR扩增及扩增产物直接测序获得了华南地区SCMV26个甘... 【目的】揭示侵染中国甘蔗及玉米的甘蔗花叶病毒(Sugarcanemosaicvirus,SCMV)的遗传多样性,为抗病品种培育及病害综合防治提供依据。【方法】以病株叶组织总RNA抽提物为模板,通过RT-PCR扩增及扩增产物直接测序获得了华南地区SCMV26个甘蔗及玉米田间分离物的近全长CP基因序列,结合GenBank中已公布的部分相应序列,采用序列比对及分子系统进化树重建方法,对SCMVCP基因序列的变异性进行分析。【结果】中国SCMV可分为3个分子组群,各组群分别对应于各自来源的寄主,即杂种甘蔗(糖用甘蔗,Saccharuminterspecifichybrids)、玉米(Zeamays)和高贵甘蔗(果用甘蔗,Saccharumofficinarum)。CP基因核苷酸同一性,不同组群之间为78%～84%,同一组群内部各分离物之间大于91%。在分子系统进化树中,这3个分子组群各自聚集成簇,前两个组群分别隶属于Alegria等(2003)建立的甘蔗组(sugarcanegroup,SCE组)和玉米组(maizegroup,MZ组),第3个组群为本研究首次发现,命名为高贵甘蔗组(noblesugarcanegroup,NSCE组)。侵染杂种甘蔗的SEC组不存在明显的地域分化,而侵染玉米和高贵甘蔗的MZ组和NSEC组则可对应地理来源分为若干亚组,前者可分为华东华中亚组、西北西南亚组及华南亚组,后者至少包括华南亚组和浙江亚组。在玉米、杂种甘蔗及高贵甘蔗混栽区,不同作物上的SCMV可以通过蚜虫传播而交叉侵染,但各组群间依寄主种类存在相对隔离现象。本研究还发现中国华南地区,SCMV可自然侵染甘蔗近缘属杂草河八王(Narengasp.)和芒(Miscanthussp.)。【结论】在中国,SCMV存在丰富的遗传多样性,其分化与寄主类型密切相关,可分为杂种甘蔗组、玉米组和高贵甘蔗组,其中玉米组和高贵甘蔗组又可根据地理来源分为若干亚组。在抗病品种的选育及病害综合防治中,必须充分考虑到病毒的这种分化现象。 展开更多
关键词 甘蔗花叶病毒 cp基因 序列分析 遗传分化
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百合无症病毒云南分离物的CP基因克隆和序列分析 被引量：9
14
作者 王继华 丁元明 王丽花 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期562-563,共2页
百合无症病毒Lily symptomless virus(LSV)为麝香石竹潜隐病毒属(carlavirus)成员,是为害百合的主要病毒之一.
关键词 百合无症病毒 LSV 百合科 病毒来源 cp基因 序列分析 基因克隆
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壳寡糖诱导对烟草体内TMV-CP基因表达的抑制作用 被引量：6
15
作者 商文静 吴云锋 +2 位作者 商鸿生 赵小明 杜昱光 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期637-641,共5页
采用实时荧光定量PCR方法，研究了壳寡糖诱导对烟草体内TMV—CP基因表达量的影响。结果表明，壳寡糖诱导后烟草表达了对TMV侵染的系统获得抗病性，植株显症推迟4—7d，症状减轻，平均严重度比对照降低了82．9％。同时烟草叶片中cP基因... 采用实时荧光定量PCR方法，研究了壳寡糖诱导对烟草体内TMV—CP基因表达量的影响。结果表明，壳寡糖诱导后烟草表达了对TMV侵染的系统获得抗病性，植株显症推迟4—7d，症状减轻，平均严重度比对照降低了82．9％。同时烟草叶片中cP基因的表达量显著降低。壳寡糖诱导处理的植株在接种病毒时（0h），CP基因的表达量（拷贝数／2μL）为0．918，接种后168h增加到167．730。而在不诱导对照植株内，CP基因的表达量在0h为1.218，接种后168h猛增到648．623。换言之，不处理对照的表达量在此期间增长了532．53倍，而壳寡糖诱导处理植株中仅增长了182．71倍。试验证明壳寡糖诱导的系统获得抗病性强烈抑制了烟草体内TMV—CP基因的表达。 展开更多
关键词 壳寡糖 系统获得抗病性 TMV—cp基因 实时荧光定量PCR
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番木瓜环斑病毒畸叶株系的CP基因克隆和序列分析 被引量：6
16
作者 贺国安 肖火根 +2 位作者 张曙光 李华平 范怀忠 《中国病毒学》 CAS CSCD 2001年第4期369-372,共4页
采用RT PCR方法合成了本研究室保存的番木瓜畸叶病毒 (PMaLV)的外壳蛋白 (CP)基因 ,将其CP基因克隆进Promega公司的pGEM -TandpGEM -TEasyVectorSystem(简称T -载体 ) ,并进行了序列分析。结果表明 ,PMaLVCP基因核苷酸序列全长为 86 1nt... 采用RT PCR方法合成了本研究室保存的番木瓜畸叶病毒 (PMaLV)的外壳蛋白 (CP)基因 ,将其CP基因克隆进Promega公司的pGEM -TandpGEM -TEasyVectorSystem(简称T -载体 ) ,并进行了序列分析。结果表明 ,PMaLVCP基因核苷酸序列全长为 86 1nt,推导其编码 2 87个氨基酸。与番木瓜环斑病毒 (PRSV)美国夏威夷HA株系和澳大利亚W株系的CP基因相比 ,在第 6 6nt处开始连续缺失 3个核苷酸。与PRSV的华南Ys、Sm和G株系以及夏威夷的HA和澳大利亚的W株系相比 ,其CP基因序列同源率分别为 96 %、98%、95 %、89%和 89%。其推导的氨基酸序列同源率分别为 98%、97%、97%、96 %和 95 %。此结果表明 ,PMaLV属于PRSV的一个株系 ,不是一种新病毒。因此 ,我们称其为番木瓜环斑病毒畸叶株系 (ML株系 )。 展开更多
关键词 番木瓜畸叶病毒 番木瓜环斑病毒 番木瓜环斑病毒畸叶株系 cp基因克隆 序列分析
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转ScMV-CP基因甘蔗对土壤微生物的影响 被引量：8
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作者 阮妙鸿 许燕 +5 位作者 郑瑶 杨川毓 张积森 阙友雄 陈如凯 张木清 《热带作物学报》 CSCD 2008年第2期187-191,共5页
通过盆栽、田间种植及人工残体掩埋,利用BIOLOG EcoplateTM微平板(BIOLOG Inc.,USA)结合微生物的平板培养及相关的土壤酶活性分析研究了转ScMV-CP基因甘蔗对根际土壤微生物的影响。结果表明:在盆栽和田间种植时,转基因甘蔗根际土壤的细... 通过盆栽、田间种植及人工残体掩埋,利用BIOLOG EcoplateTM微平板(BIOLOG Inc.,USA)结合微生物的平板培养及相关的土壤酶活性分析研究了转ScMV-CP基因甘蔗对根际土壤微生物的影响。结果表明:在盆栽和田间种植时,转基因甘蔗根际土壤的细菌总数增加,但差异不明显。转基因甘蔗对根际土壤放线菌总数没有影响,但显著提高了根际土壤真菌总数。在转基因甘蔗根际土壤中的脲酶活性显著比非转基因甘蔗的高;土壤蔗糖酶的活性比对照的低,但差异不显著。转基因甘蔗对磷酸单脂酶的活性影响很小。转基因甘蔗残体掩埋对土壤微生物和土壤酶活性没有影响;BIOLOG Ecoplate接种96h后土壤微生物多样性指数分析显示,除了在田间种植时,转基因甘蔗根际细菌生理群分布的均匀度显著下降(p<0.01)外,土壤微生物的Simpson指数(D')、Shannon-Wiener指数(H')、Mclntosh指数(DMc)等多样性指数均差异不明显。初步研究结果表明,转基因甘蔗对土壤微生物的数量和均匀度有一定影响,但对其活性和多样性则影响不明显。 展开更多
关键词 转基因甘蔗 ScMV—cp基因 土壤微生物 BIOLOG生态板 土壤细菌多样性
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大豆花叶病毒CP基因密码子使用偏性分析 被引量：7
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作者 黄赛花 袁瑗 +3 位作者 王成坤 任锐 何卓伟 智海剑 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期148-153,共6页
大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)外壳蛋白(coat protein,CP)是SMV基因组的结构蛋白,在SMV侵染大豆的过程中发挥着重要的作用。运用CUSP和Codon W等软件分析了大豆花叶病毒外壳蛋白的密码子的偏性,并与SMV基因组的密码子偏性进... 大豆花叶病毒(soybean mosaic virus,SMV)外壳蛋白(coat protein,CP)是SMV基因组的结构蛋白,在SMV侵染大豆的过程中发挥着重要的作用。运用CUSP和Codon W等软件分析了大豆花叶病毒外壳蛋白的密码子的偏性,并与SMV基因组的密码子偏性进行了比较。结果表明,SMV CP偏好于以A/T结尾的密码子;与SMV基因组密码子偏性相比,发现只有8种氨基酸密码子偏性完全一致。ENC与GC3的相关性分析结果显示,CP的密码子使用偏好性受碱基组成等多种因素共同影响。聚类分析显示基于基因CDS序列的聚类结果与基于密码子偏性参数相对密码子使用度(RSCU)的聚类结果基本一致。通过分析CP密码子使用特性,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多
关键词 大豆花叶病毒 cp基因 密码子偏好性
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侵染浙贝母的百合斑驳病毒CP基因的原核表达及抗血清制备 被引量：4
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作者 韦传宝 姚厚军 +1 位作者 杨宇 刘春云 《中药材》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1182-1186,共5页
目的:制备抗百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)CP血清,为研究侵染不同植物LMoV之间的血清学关系以及大田检测LMoV奠定基础。方法:根据Genbank报道的百合斑驳病毒CP基因序列设计引物,扩增其外壳蛋白基因并分析序列。将LMoV CP基因插... 目的:制备抗百合斑驳病毒(Lily mottle virus,LMoV)CP血清,为研究侵染不同植物LMoV之间的血清学关系以及大田检测LMoV奠定基础。方法:根据Genbank报道的百合斑驳病毒CP基因序列设计引物,扩增其外壳蛋白基因并分析序列。将LMoV CP基因插入表达载体pSBET,转化大肠杆菌BL21(DE3)Plys E菌株,通过IPTG诱导表达。经12%SDS-PAGE和5%～20%梯度SDS-PAGE两次纯化CP,免疫小鼠获得抗CP血清,采用Western blot分析抗体的特异性,采用ELISA分析抗体能否与天然LMoV病毒结合。结果:LMoV的CP与目前已报道的LMoV不同分离物CP基因核苷酸序列同源性为95%～99%,氨基酸序列同源性为98%～100%。制备的抗体对CP具有高度特异性,且能够与天然LMoV病毒离子结合。结论:本研究制备的抗血清可以作为百合斑驳病毒的检测。 展开更多
关键词 浙贝母 百合斑驳病毒 cp基因 原核表达 抗血清制备
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来源于桃和苹果的苹果褪绿叶斑病毒的部分分子生物学特性和cp基因的原核表达 被引量：5
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作者 郑银英 王国平 +2 位作者 洪霓 宋艳苏 游红 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期356-361,共6页
从桃和苹果上分离得到苹果褪绿叶斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C2个分离物,采用RT-PCR法进行扩增,所获扩增片段经序列测定,其全长分别为1768nt(ACLSV-HBP)和1751nt(ACLSV-C)。这2个分离物扩增片段全长的同源性为83%,mp基因片段核苷酸和推导... 从桃和苹果上分离得到苹果褪绿叶斑病毒ACLSV-HBP和ACLSV-C2个分离物,采用RT-PCR法进行扩增,所获扩增片段经序列测定,其全长分别为1768nt(ACLSV-HBP)和1751nt(ACLSV-C)。这2个分离物扩增片段全长的同源性为83%,mp基因片段核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为82.6%和87.1%;cp基因均由582nt组成,其核苷酸和推导编码氨基酸序列同源性分别为87.8%和95.9%。将2个分离物的cp基因与已报道ACLSV分离物进行序列同源性比较,结果显示ACLSV-HBP与SX/2的cp基因核苷酸序列及推导编码氨基酸序列同源性最高,分别为94.0%和96.4%。将ACLSV-HBP分离物的cp基因克隆到原核表达载体pGEX-KG,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,SDS-PAGE分析表明,融合蛋白大小约为46kDa。Western-blot分析表明,该基因在大肠杆菌内得到高效表达,融合蛋白具有抗原性。 展开更多
关键词 苹果褪绿叶斑病毒 原核表达载体 cp基因 分子生物学特性 SDS-PAGE分析 序列同源性 核苷酸序列 RT-PCR法
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