髓样分化蛋白-2模拟肽抑制巨噬细胞吞噬革兰阴性菌

1

作者 王虎 杨俊霞 +5 位作者 黄家君 周运江 随何欢 朱江 吴友莉 段光杰 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期805-810,共6页

目的探讨髓样分化蛋白-2模拟肽(MD-2 mimetic peptide,MDMP)对巨噬细胞吞噬革兰阴性菌的影响及所致炎症因子分泌的抑制效应。方法采用PCR从p EGFP-C3质粒中扩增出表达EGFP的基因片段,通过基因重组构建原核表达载体p ET-32a(+)-EGFP,经... 目的探讨髓样分化蛋白-2模拟肽(MD-2 mimetic peptide,MDMP)对巨噬细胞吞噬革兰阴性菌的影响及所致炎症因子分泌的抑制效应。方法采用PCR从p EGFP-C3质粒中扩增出表达EGFP的基因片段,通过基因重组构建原核表达载体p ET-32a(+)-EGFP,经测序鉴定后,转化至大肠杆菌BL21(DE3)PLys S中筛选出稳定表达的重组菌p ET-32a(+)-EGFP-BL21(DE3)PLys S(简称为EGFPBL21)。以IPTG诱导重组质粒表达后,通过免疫荧光和流式细胞术检测RAW264.7细胞对EGFP-BL21的吞噬能力以验证EGFP-BL21的构建情况。进一步检测RAW264.7细胞对经不同浓度MDMP(1.0、10、100μg/m L)预处理后的EGFP-BL21的吞噬效应;采用ELISA检测细胞培养上清液中TNF-α和IL-6的分泌水平。结果筛选获得稳定表达EGFP的重组大肠杆菌BL21(DE3)PLys S,重组菌经巨噬细胞RAW264.7吞噬后流式和激光共聚焦检测结果显示细胞内出现明显的绿色荧光。MDMP预处理后,流式检测结果显示RAW264.7细胞对EGFP-BL21的吞噬能力受到明显抑制,预处理组(10、100μg/m L)的吞噬系数(PI)显著低于经血清调理的阳性对照组(P<0.01),且细胞培养上清TNF-α和IL-6的分泌水平显著降低(P<0.01)。结论 MDMP预处理可明显抑制RAW264.7细胞对革兰阴性菌的吞噬作用,并降低该过程中炎症因子TNF-α和IL-6的分泌。 展开更多

关键词 髓样分化蛋白-2模拟肽 革兰阴性菌 吞噬

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性别差异对脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4及髓样分化蛋白-2基因表达的影响 被引量：10

2

作者 杜晓辉 姚咏明 +2 位作者 李荣 申传安 尹会男 《中国危重病急救医学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第12期726-728,共3页

目的 探讨性别差异对脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白-2(MD-2)和 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响。方法 脂多糖(LPS)刺激前后留取雌性和雄性大鼠肺组织标本, 提取总RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR... 目的 探讨性别差异对脓毒症大鼠肺组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化蛋白-2(MD-2)和 肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响。方法 脂多糖(LPS)刺激前后留取雌性和雄性大鼠肺组织标本, 提取总RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定TLR4、MD-2和TNF-α的基因表达情况, 采用放射免疫测定法检测大鼠血浆雌二醇(E2)含量。结果 正常雌性和雄性大鼠肺组织均可表达少量 TLR4、MD-2和TNF-α基因,性别间差异均无显著性(P均>0．05),但脓毒症雌性大鼠各项指标表达均明 显弱于雄性(P均<0．01)。相关分析表明,雌性和雄性脓毒症大鼠肺组织TLR4、TNF-α的mRNA表达与血 浆E2含量均呈显著负相关(P均<0．05)。结论 LPS诱导的肺组织TLR4信号转导通路活化存在性别差异, 内源性雌激素作用可能导致雌性脓毒症大鼠对LPS的反应性弱于雄性。 展开更多

关键词 TOLL样受体4 髓样分化蛋白-2 肿瘤坏死因子-α 脂多糖 脓毒症 性别差异

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宣肺通腑方对脂多糖致急性肺损伤大鼠肺组织髓样分化蛋白-2、核因子-κB表达的影响 被引量：8

3

作者 阮琼 张海英 +4 位作者 杨爱东 王利霞 吴中华 符胜光 庞慧芳 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2014年第6期65-68,75,共5页

目的观察宣肺通腑方对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织髓样分化蛋白-2(MD-2)、核因子-κB(NF-κB)蛋白及其基因表达的影响,并探讨其作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和宣肺通腑方大、中、小剂... 目的观察宣肺通腑方对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织髓样分化蛋白-2(MD-2)、核因子-κB(NF-κB)蛋白及其基因表达的影响,并探讨其作用机制。方法 Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组和宣肺通腑方大、中、小剂量组,每组8只。尾静脉注射LPS 6 mg/kg制备大鼠ALI模型。宣肺通腑方各组于造模前以15.12、7.56、3.78 g原药材/kg宣肺通腑方水煎液灌胃,1次/d,连续3 d;地塞米松组在造模前1 h按5 mg/kg腹腔注射地塞米松。造模后9 h麻醉取材,采用免疫组化ABC法和实时荧光定量聚合酶链反应检测MD-2、NF-κB蛋白及其基因表达,光镜下观察大鼠肺组织病理变化。结果与正常组比较,模型组MD-2、NF-κB蛋白及其基因表达均明显上调(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,地塞米松组和宣肺通腑方各组MD-2、NF-κB蛋白及其基因表达明显降低(P<0.05,P<0.01);地塞米松组和宣肺通腑方各剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。病理观察结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,炎症细胞大量浸润;宣肺通腑方各剂量组和地塞米松组大鼠肺组织病理改变明显轻于模型组,肺细支气管偶见炎症改变,水肿较轻,炎性细胞渗出较少。结论宣肺通腑方能减轻ALI大鼠肺组织损伤,对肺损伤有保护作用,其机制可能与其降低ALI大鼠MD-2、NF-κB蛋白及其基因表达有关。 展开更多

关键词 宣肺通腑方 急性肺损伤 髓样分化蛋白-2 蛋白表达 基因表达 大鼠 MD-2

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脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化规律 被引量：5

4

作者 杜晓辉 姚咏明 +2 位作者 李荣 申传安 尹会男 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期870-872,共3页

目的探讨脓毒症大鼠肝脏组织内毒素复合受体--Toll样受体4 (TLR4)/髓样分化蛋白-2(MD-2)mRNA的表达变化,研究其与肝脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的关系.方法腹腔注射内毒素(LPS)5mg/kg制作大鼠脓毒症模型.动物分为正常对照组... 目的探讨脓毒症大鼠肝脏组织内毒素复合受体--Toll样受体4 (TLR4)/髓样分化蛋白-2(MD-2)mRNA的表达变化,研究其与肝脏组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的关系.方法腹腔注射内毒素(LPS)5mg/kg制作大鼠脓毒症模型.动物分为正常对照组(20只)及内毒素注射后1h、2h、6h组(各20只),检测肝脏组织TLR4/MD-2以及TNF-α mRNA的表达.结果 LPS注射后1h,TLR4/MD-2及TNF-α mRNA表达开始升高并达高峰,伤后2～6h逐渐下降,各时间点的表达量均显著高于对照组(P<0.01),TLR4与MD-2 mRNA的表达呈明显正相关(P<0.05),且分别与TNF-α mRNA的表达呈显著正相关(P<0.05).结论 LPS可迅速上调肝脏组织TLR4/MD-2的基因表达并诱导早期炎症细胞因子TNF-α的基因表达.脓毒症时TLR4识别LPS是可能以TLR4/MD-2复合体的形式完成的,且在识别过程中MD-2是TLR4必需的作用分子. 展开更多

关键词 TOLL样受体4 髓样分化蛋白-2 胀毒症 肿瘤坏死因子

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乙醇性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症肝组织Toll样受体及髓样分化蛋白-2的表达变化 被引量：3

5

作者 卢中秋 李萌芳 +5 位作者 梁欢 邱俏檬 杨光田 周铁丽 洪广亮 吴斌 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期133-136,共4页

目的:探讨乙醇性肝病大鼠创伤弧菌(VV)脓毒症肝组织Toll样受体及髓样分化蛋白-2的表达及其动态变化。方法:制作乙醇性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症模型。大鼠随机分为正常对照组、乙醇性肝病对照组和乙醇性肝病创伤弧菌脓毒症组。观察乙醇性... 目的:探讨乙醇性肝病大鼠创伤弧菌(VV)脓毒症肝组织Toll样受体及髓样分化蛋白-2的表达及其动态变化。方法:制作乙醇性肝病大鼠创伤弧菌脓毒症模型。大鼠随机分为正常对照组、乙醇性肝病对照组和乙醇性肝病创伤弧菌脓毒症组。观察乙醇性肝病创伤弧菌脓毒症组大鼠在染菌后各时点脓毒症表现,并采用逆转录聚合酶链(RT-PCR)技术检测各时点大鼠肝组织TLR2、TLR4、MD-2 mRNA表达及其动态变化。结果:乙醇性肝病创伤弧菌脓毒症组大鼠染菌后6 h开始出现较明显的毒血症状,随着时间的延长毒血症状加剧。乙醇性肝病大鼠在染菌后2 h,TLR2、TLR4、MD-2 mRNA表达开始升高,12 h达峰值,染菌后24 h下降。染菌后各时点TLR2、TLR4、MD-2 mRNA表达较正常对照组及乙醇性肝病对照组显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论:乙醇性肝病大鼠VV脓毒症肝组织TLR2、TLR4、MD-2 mRNA表达水平随脓毒症病情的进展而升高,其与脓毒症的发生、发展密切相关,动态监测其改变对创伤弧菌脓毒症发病过程具有一定的意义。 展开更多

关键词 肝疾病 乙醇性 创伤弧菌 脓毒症 受体 Toll样 髓样分化蛋白-2

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髓样分化蛋白-2在识别和转导内毒素信号中的作用 被引量：7

6

作者 钟田雨 刘靖华 姜勇 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第5期460-464,共5页

脂多糖(LPS)通过TLR4介导细胞炎症反应.研究表明,髓样分化蛋白-2(MD-2)通过与TLR4形成复合物参与LPS诱导的细胞信号过程.TLR4/MD-2复合物中的MD-2结合LPS后,引起TLR4低聚化,进而激发下游信号.MD-2合成后,大部分在内质网/高尔基体和TLR4... 脂多糖(LPS)通过TLR4介导细胞炎症反应.研究表明,髓样分化蛋白-2(MD-2)通过与TLR4形成复合物参与LPS诱导的细胞信号过程.TLR4/MD-2复合物中的MD-2结合LPS后,引起TLR4低聚化,进而激发下游信号.MD-2合成后,大部分在内质网/高尔基体和TLR4结合,然后以TLR4/MD-2复合物的形式在细胞表面表达.这既能调节TLR4的胞内分布,又能辅助TLR4识别LPS.还有一部分MD-2释放到血浆中,形成可溶性的MD-2(sMD-2).sMD-2在CD14参与下,能结合血浆中的LPS,形成LPS-sMD-2复合物从而辅助只表达TLR4而不表达MD-2的细胞识别LPS,但过度表达的sMD-2又能抑制LPS信号.MD-2在TLR4介导的内毒素识别和信号转导过程中发挥了重要的调控作用. 展开更多

关键词 髓样分化蛋白-2(MD-2) TLR4 脂多糖(LPS) 信号转导

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性别差异对脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的影响 被引量：3

7

作者 杜晓辉 李荣 +2 位作者 姚咏明 申传安 尹会男 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2006年第3期196-198,共3页

目的:探讨性别差异对脓毒症大鼠心肌Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白-2(MD-2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响。方法:取40只清洁级Wistar大鼠,雌雄各半,分为正常雌雄性对照组(各10只),雌雄性脓毒症组(各10只)。采用腹腔注射5m... 目的:探讨性别差异对脓毒症大鼠心肌Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白-2(MD-2)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的影响。方法:取40只清洁级Wistar大鼠,雌雄各半,分为正常雌雄性对照组(各10只),雌雄性脓毒症组(各10只)。采用腹腔注射5mg/kg内毒素(LPS)制作脓毒症大鼠模型,无菌留取大鼠心肌组织标本,利用RT-PCR法检测心肌组织TLR4、MD-2以及TNF-α基因表达,利用放免法检测大鼠血浆雌二醇含量。结果:正常雌雄性大鼠心肌组织均可表达少量TLR4、MD-2及TNF-α基因,两组差异无统计学意义(P>0.05),但是注射LPS后雌性大鼠心肌组织各项指标明显低于雄性大鼠(P<0.01)。相关分析表明,雌性及雄性脓毒症大鼠心肌组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0.05)。结论:LPS注射后大鼠心肌组织TLR4、MD-2及TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠心肌组织对LPS的反应性弱于雄性。 展开更多

关键词 TOLL样受体4 髓样分化蛋白-2 肿瘤坏死因子Α 脂多糖类

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中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2 cDNA的克隆与原核表达 被引量：2

8

作者 焦寒伟 王洪梅 +7 位作者 刘晓 杜丽 雷明 张冬琳 郝永昌 成鹰 何洪彬 王凤阳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第2期20-24,共5页

本试验旨在克隆并表达中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)基因,并用West-ern blotting进行鉴定。采用RT-PCR技术从中国荷斯坦奶牛外周血白细胞中扩增MD-2cDNA,并将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组... 本试验旨在克隆并表达中国荷斯坦奶牛髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)基因,并用West-ern blotting进行鉴定。采用RT-PCR技术从中国荷斯坦奶牛外周血白细胞中扩增MD-2cDNA,并将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经测序鉴定后,构建pET28a-MD-2重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blotting分析。结果表明,目的基因含有1个483bp的开放阅读框,编码161个氨基酸;与黄牛、黑猩猩和小鼠MD-2的cDNA序列同源性分别为99.38%、77.02%、68.12%,氨基酸同源性分别为98.75%、65.00%和58.13%。融合蛋白以包涵体的形式存在,分子质量约为25ku。说明本研究成功克隆并表达了中国荷斯坦奶牛MD-2cDNA,为其进一步的功能研究提供了理论依据。 展开更多

关键词 中国荷斯坦奶牛 髓样分化蛋白-2 克隆 原核表达

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髓样分化蛋白-2在天然免疫中的作用 被引量：5

9

作者 徐发良 李磊 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期139-142,共4页

Toll样受体 (Toll likereceptor ,TLR)家族作为模式识别受体 ,在天然免疫中具有重要作用。髓样分化蛋白 2 (myeloiddifferentialprotein 2 ,MD 2 )可能含有两个相对独立的功能结构域 ,既能与Toll样受体家族中的TLR4、TLR2结合 ,也能与... Toll样受体 (Toll likereceptor ,TLR)家族作为模式识别受体 ,在天然免疫中具有重要作用。髓样分化蛋白 2 (myeloiddifferentialprotein 2 ,MD 2 )可能含有两个相对独立的功能结构域 ,既能与Toll样受体家族中的TLR4、TLR2结合 ,也能与多种配体结合 (包括lipopolysaccharide ,LPS)。这种特殊的结构可能与其三方面的主要功能有关 :(1)MD 2与TLR4结合 ,赋予TLR4对各种配体 (包括LPS)的反应性 ;(2 )MD 2与TLR2结合 ,赋予TLR2对LPS的反应性 ,并增强TLR2对细菌及其胞壁成分的反应性 ;(3)MD 2能促进TLR4和TLR2的表达 ,并且与TLR4在细胞内的分布密切相关。这表明MD 2可以通过两种方式直接或间接调控TLRs的功能 :与TLR2 /TLR4结合 ,或调控TLR2 /TLR4的表达与分布。因而MD 2不仅仅是TLR4的辅助分子 ,而且还是天然免疫中的调控分子 ,可能在感染、炎症。 展开更多

关键词 髓样分化蛋白-2 天然免疫 信号转导 生物学功能

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人类髓样分化蛋白-2的原核表达 被引量：1

10

作者 徐发良 顾长国 +1 位作者 胡承香 李磊 《第四军医大学学报》 北大核心 2004年第14期1256-1259,共4页

目的 :在大肠杆菌DH 5α中表达人类髓样分化蛋白 2 (humanmyeloiddifferentiatonprotein 2 ,hMD 2 )与谷胱甘肽巯基转移酶 (glutathione s transferase ,GST)的融合蛋白 (GST/hMD 2 ) ,并对融合蛋白进行免疫学鉴定及初步的变性复性处理 ... 目的 :在大肠杆菌DH 5α中表达人类髓样分化蛋白 2 (humanmyeloiddifferentiatonprotein 2 ,hMD 2 )与谷胱甘肽巯基转移酶 (glutathione s transferase ,GST)的融合蛋白 (GST/hMD 2 ) ,并对融合蛋白进行免疫学鉴定及初步的变性复性处理 .方法 :建立GST/hMD 2表达菌 ,在不同温度下以不同浓度IPTG诱导不同时间后采样 ,用SDS PAGE分析各种组合条件下融合蛋白的表达量和溶解性 ;用Western Blot鉴定融合蛋白免疫性 ;用尿素变性和透析法对融合蛋白进行初步纯化 .结果 :在 37℃经 0 .4mmol/LIPTG诱导 4h后 ,GST/hMD 2可获最高表达量 (约占菌体总蛋白的 2 0 % ) ,未见可溶性表达 ;Western Blot证实GST/hMD 2能与抗MD 2单克隆抗体特异性结合 ;GST/hMD 2溶于 8mol/L尿素 ,梯度透析后纯度提高至4 0 % .结论 :hMD 2可在大肠杆菌DH 展开更多

关键词 髓样分化蛋白-2 基因表达 重组融合蛋白质类 谷胱甘肽转移酶

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TOLL样受体-4和髓样分化蛋白-2在血吸虫病小鼠肝脏的表达及意义 被引量：1

11

作者 李岽健 杨镇 +2 位作者 牛丽文 张爱龙 肖亮 《微循环学杂志》 2007年第3期7-9,F0002,共4页

目的:探讨血吸虫病小鼠肝脏TOLL样受体-4(TLR-4)和髓样分化蛋白-2(MD-2)的表达及其在肝脏损害中的作用。方法:将40只健康小鼠随机分成正常对照组(N组,20只)与模型组(M组,20只),M组采用腹部敷贴法制作血吸虫病模型,造模150天后处死动物,... 目的:探讨血吸虫病小鼠肝脏TOLL样受体-4(TLR-4)和髓样分化蛋白-2(MD-2)的表达及其在肝脏损害中的作用。方法:将40只健康小鼠随机分成正常对照组(N组,20只)与模型组(M组,20只),M组采用腹部敷贴法制作血吸虫病模型,造模150天后处死动物,鲎试验法测定血清内毒素水平;免疫组化和RT-PCR方法检测肝脏中TLR-4和MD-2的表达。结果:M组血清内毒素水平高于N组(P<0.01);M组小鼠肝脏TLR-4/MD-2表达水平高于N组(P<0.01);M组小鼠肝脏TLR-4/MD-2高表达主要位于肝窦内皮细胞及肝窦区周围细胞。结论:血吸虫病肝硬化可发生肠源性内毒素易位、内毒素血症;脂多糖通过其信号转导蛋白TLR-4和MD-2在肝脏的高表达,激活一系列促炎基因的转录,可能是引起血吸虫病肝脏损害的原因之一。 展开更多

关键词 髓样分化蛋白-2 TOLL样受体-4 血吸虫病 小鼠肝脏 肠源性内毒素血症 信号传导蛋白 肝脏损害 内源性感染

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髓样分化蛋白-2在内毒素与内皮细胞结合中的作用

12

作者 熊建琼 朱佩芳 +1 位作者 王正国 蒋建新 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第24期2235-2238,共4页

目的　探讨髓样分化蛋白 2 (myeloiddifferentiationprotein 2 ,MD 2 )在人内皮细胞中的表达及其在内毒素 (LPS)与内皮细胞结合中的作用。方法　分离、培养人脐静脉内皮细胞 ,RT PCR和Westernblot方法检测内皮细胞MD 2的表达以及LPS对... 目的　探讨髓样分化蛋白 2 (myeloiddifferentiationprotein 2 ,MD 2 )在人内皮细胞中的表达及其在内毒素 (LPS)与内皮细胞结合中的作用。方法　分离、培养人脐静脉内皮细胞 ,RT PCR和Westernblot方法检测内皮细胞MD 2的表达以及LPS对其表达的影响 ;流式细胞仪检测在有或无血清时LPS与内皮细胞的结合以及TLR4、MD 2抗体对其结合的影响。结果　内皮细胞有MD 2mRNA及相关蛋白的表达 ,LPS能明显上调其表达水平 ,并呈一定的时间和剂量依赖性 ;血清能明显促进不同剂量LPS与HUVEC的结合 ,尤其是小剂量LPS ;TLR4、MD 2单克隆抗体分别能阻断LPS与内皮细胞的结合 ,且阻断程度与抗体剂量呈依赖关系。结论　TLR4、MD 2是内皮细胞上与LPS结合的主要受体 ,MD 2在LPS与内皮细胞的结合中起着重要的作用。 展开更多

关键词 髓样分化蛋白-2(MD-2) 内毒素类 内皮

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地塞米松对早期脂多糖大鼠肝组织髓样分化蛋白2及核因子-κB表达的影响

13

作者 雷贤英 李雨昕 +3 位作者 雷贤蓉 甘辞海 胡丽蓉 薛钰婷 《海南医学》 CAS 2015年第21期3121-3123,共3页

目的观察地塞米松对脂多糖大鼠早期急性肝损伤时肝组织髓样分化蛋白2(MD-2)基因及核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法 15只雄性SD大鼠被随机分为正常组、脂多糖组和治疗组(脂多糖+地塞米松组),每组各5只。自大鼠尾静脉穿刺置留置... 目的观察地塞米松对脂多糖大鼠早期急性肝损伤时肝组织髓样分化蛋白2(MD-2)基因及核因子-κB(NF-κB)蛋白表达的影响。方法 15只雄性SD大鼠被随机分为正常组、脂多糖组和治疗组(脂多糖+地塞米松组),每组各5只。自大鼠尾静脉穿刺置留置针以备给药,正常组自大鼠尾静脉注射生理盐水10 ml;脂多糖组静脉注射脂多糖10 mg/kg(10 min以上注射完);治疗组静脉注射脂多糖10 mg/kg(10 min以上注射完)和地塞米松0.1 mg/kg。所有大鼠均于注射后1 h被处死,抽取左心室血行生化检测谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)。剪取部分肝右叶制成肝组织匀浆液(保存于-20℃条件下以备用),以检测肝组织MD-2基因,另取部分肝组织检测NF-κB蛋白的表达水平。结果 (1)正常组大鼠转氨酶值波动于正常范围,脂多糖组大鼠ALT、AST明显增高,与脂多糖组比较,治疗组转氨酶值明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);(2)正常的肝组织中可见少量MD-2基因、NF-κB蛋白表达;与正常组比较,脂多糖组和治疗组肝组织MD-2基因及NF-κB蛋白的表达水平均明显,差异均有统计学意义(P<0.05),但治疗组MD-2基因及NF-κB蛋白的表达较脂多糖组明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论早期脂多糖大鼠发生急性肝损伤时,地塞米松对其有明显的治疗作用,其治疗机制可能与MD-2基因和NF-κB蛋白表达水平的减少有关。 展开更多

关键词 脂多糖 髓样分化蛋白2 核因子-κB(NF-κB) 急性肝损伤 地塞米松

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髓样分化蛋白-2及Toll样受体4在星形细胞瘤中的表达及临床意义

14

作者 方亮 李得生 《临床内科杂志》 CAS 2021年第8期546-548,共3页

目的检测不同级别星形细胞瘤中髓样分化蛋白-2(MD2)和Toll样受体4(TLR-4)的表达,并探讨其临床意义。方法收集2019年1月~2020年8月于山东国欣颐养集团新汶中心医院接受手术切除治疗的低级别星形细胞瘤(LGA)患者50例及高级别星形细胞瘤(H... 目的检测不同级别星形细胞瘤中髓样分化蛋白-2(MD2)和Toll样受体4(TLR-4)的表达,并探讨其临床意义。方法收集2019年1月~2020年8月于山东国欣颐养集团新汶中心医院接受手术切除治疗的低级别星形细胞瘤(LGA)患者50例及高级别星形细胞瘤(HGA)患者50例,所有患者的肿瘤组织样本于术中离体后立刻保存于液氮中,采用免疫组化法检测肿瘤组织中TLR4、MD2、髓样分化因子88(MYD88)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达水平,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测肿瘤组织中TLR4、MD2、MYD88和TNF-α的mRNA表达水平。采用Pearson线性相关分析探讨TLR4、MD2与下游因子MYD88和TNF-α的相关性。结果HGA组患者肿瘤组织中TLR4、MD2、MYD88、TNF-α及其mRNA的表达水平均高于LGA组(P<0.01)。星型细胞瘤患者MYD88和TNF-α的表达水平与TLR4、MD2均呈正相关(P<0.05)。结论MD2、TLR-4在HGA中表达水平高于LGA,同时下游关键信号因子MYD88和TNF-α表达水平也高于LGA,且MD2、TLR-4的表达水平与MYD88和TNF-α的表达水平显著相关,提示MD2、TLR-4在星形细胞瘤发生发展中具有重要的作用。 展开更多

关键词 髓样分化蛋白-2 TOLL样受体4 星形细胞瘤 髓样分化因子88 肿瘤坏死因子Α

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宣白承气汤对内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织MD-2mRNA、MyD88蛋白及其mRNA表达的影响 被引量：11

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作者 张海英 王利霞 +4 位作者 杨爱东 苏中昊 吴中华 符胜光 庞慧芳 《辽宁中医药大学学报》 CAS 2013年第9期36-39,共4页

目的:探讨宣白承气汤对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)mRNA、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)蛋白及其mRNA表达的影响。方法:将32只雄性... 目的:探讨宣白承气汤对脂多糖(LPS)诱导的急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织髓样分化蛋白-2(myeloid differentiation protein-2,MD-2)mRNA、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)蛋白及其mRNA表达的影响。方法:将32只雄性Wistar大鼠随机分为:正常对照组、模型对照组、地塞米松组、宣白承气汤组,每组8只。尾静脉注射LPS 6 mg/kg制备大鼠ALI模型。宣白承气汤组在造模前灌胃3 d,按7.56g生药/kg宣白承气汤水煎液灌胃,1次/d;地塞米松组在造模前1 h按5 mg/kg腹腔注射地塞米松,造模6 h后麻醉取材。采用免疫组化ABC法和实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测MD-2mRNA、MyD88蛋白及其mRNA的表达,并于光镜下观察大鼠肺组织病理变化。结果:与正常对照组相比,模型组MD-2mRNA、MyD88蛋白及其mRNA的表达均明显上调(P<0.01);与模型组相比,地塞米松组和宣白承气汤组MD-2mRNA、MyD88蛋白及其mRNA表达明显降低(P<0.01);地塞米松组和宣白承气汤组相比无显著差异(P>0.05)。病理学观察,与正常组相比,模型对照组大鼠肺组织出现大片出血及坏死,宣白承气汤组和地塞米松组大鼠肺组织病理改变明显轻于模型对照组,肺细支气管偶见炎症改变,水肿较轻,炎性细胞渗出较少。结论:宣白承气汤能减轻内毒素致ALI大鼠肺组织损伤,对肺损伤有保护作用,其机制可能与其能降低内毒素致ALI大鼠MD-2mRNA、MyD88蛋白及其mRNA的表达有关。 展开更多

关键词 宣白承气汤 急性肺损伤 髓样分化蛋白-2 髓样分化因子88

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人MD-2/GST融合蛋白在大肠杆菌的表达 被引量：3

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作者 徐发良 顾长国 +1 位作者 胡承香 李磊 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期206-208,共3页

构建人髓样分化蛋白 2 (humanmyeloiddifferentiatonprotein 2 ,hMD 2 )与谷胱甘肽巯基转移酶 ( glutathione S transferase,GST)的融合蛋白(hMD 2 /GST)表达载体PGEX 4T 1/hMD 2 ,在大肠杆菌中融合表达hMD 2 /GST。以真核表达载体PEF B... 构建人髓样分化蛋白 2 (humanmyeloiddifferentiatonprotein 2 ,hMD 2 )与谷胱甘肽巯基转移酶 ( glutathione S transferase,GST)的融合蛋白(hMD 2 /GST)表达载体PGEX 4T 1/hMD 2 ,在大肠杆菌中融合表达hMD 2 /GST。以真核表达载体PEF BOS/hMD 2为模板 ,用PCR法在MD 2编码序列上下游引入酶切位点和终止密码子 ;将hMD 2编码序列克隆入原核表达载体PGEX 4T 1的相应酶切位点 ;用PCR和酶切筛选、鉴定重组质粒PGEX 4T 1/hMD 2 ,并对插入基因片断测序 ;重组质粒PGEX 4T 1/hMD 2转化大肠杆菌 ,经IPTG诱导后用SDS PAGE分析表达产物。结果PCR、酶切鉴定和序列测定证实MD 2编码序列正向插入原核表达载体PGEX 4T 1的相应酶切位点 ,片断与PCR扩增产物大小相同、序列无误、阅读框架正确 ;SDS PAGE证实hMD 2 /GST在大肠杆菌中表达 ,表达量约占菌体总蛋白的 3 0 %。说明成功构建了PGEX 4T 1/hMD 2载体 ,hMD 2 /GST融合蛋白在大肠杆菌中得到初步表达 ,为MD 展开更多

关键词 重组融合蛋白类 谷胱甘肽巯基转移酶 人髓样分化蛋白-2 遗传载体

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分化诱导剂PMA对THP-1源性巨噬细胞膜表面受体MD-2表达的影响 被引量：3

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作者 许建华 段光杰 +2 位作者 朱江 徐小明 刘友生 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期121-125,共5页

目的探索豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)对诱导分化后THP-1细胞膜表面受体髓样分化蛋白-2(MD-2)表达和分布的影响及其与炎症因子TNF-α、IL-6分泌的关系。方法采用PMA梯度剂量(0、1、5、10、50、100 ng/ml... 目的探索豆蔻酸-佛波醇-乙酸酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)对诱导分化后THP-1细胞膜表面受体髓样分化蛋白-2(MD-2)表达和分布的影响及其与炎症因子TNF-α、IL-6分泌的关系。方法采用PMA梯度剂量(0、1、5、10、50、100 ng/ml)诱导THP-1细胞48 h后观察贴壁细胞形态并计算贴壁率;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测贴壁细胞膜表面受体MD-2、CD14 mRNA相对表达量,ELISA检测细胞培养上清中分泌性MD-2(sMD-2)、TNF-α和IL-6的分泌水平;进一步通过Western blot检测贴壁细胞的MD-2蛋白表达、激光扫描共聚焦显微镜观察MD-2在贴壁细胞的分布和定位。结果梯度PMA剂量(1~100 ng/ml)48 h成功诱导悬浮THP-1细胞贴壁;激光扫描共聚焦显微镜观察显示PMA诱导后MD-2主要表达于胞膜和胞浆,诱导质量浓度增加对MD-2的表达和分布均无显著影响;RT-qPCR检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1~100 ng/ml)诱导后MD-2和CD14 mRNA相对表达量较诱导前均显著升高(P<0.01),诱导剂量组之间无显著差异(P>0.05);ELISA检测THP-1细胞经PMA梯度剂量(1~100 ng/ml)诱导后,细胞培养上清中的TNF-α、IL-6分泌水平依次显著增加(P<0.01),sMD-2仅诱导前后有明显统计学差异(P<0.01);Western blot检测显示梯度剂量PMA诱导后细胞内MD-2蛋白表达较诱导前显著增加,诱导剂量组之间无显著差异。结论 1~100 ng/ml PMA均可将THP-1细胞诱导分化为成熟巨噬细胞,增加诱导质量浓度可显著提高炎症因子TNF-α、IL-6的分泌水平,但对其膜表面受体MD-2表达和分布无明显影响。 展开更多

关键词 巨噬细胞 膜受体 髓样分化蛋白-2 炎症因子

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TLR4在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨 被引量：10

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作者 严一红 周红 +3 位作者 周保成 文海平 许国莹 周芳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期396-401,共6页

目的:探讨TLR4及相关信号分子在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-timePCR)检测anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ诱导THP-1细胞TFmRNA表达,采用试剂盒检测细胞TF活性;利用自制的... 目的:探讨TLR4及相关信号分子在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-timePCR)检测anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ诱导THP-1细胞TFmRNA表达,采用试剂盒检测细胞TF活性;利用自制的β2GPⅠ胶联亲和层析柱(β2GPⅠ-Affi-Gel)分析β2GPⅠ与THP-1细胞表面相应受体结合情况;Real-timePCR及Western蛋白印迹检测anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导细胞表达TLR4、MyD88、MD-2情况;观察TLR4途径抑制物——紫杉醇是否干预anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的作用。结果:Anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞TF表达显著增加(P<0.05);THP-1细胞表面的TLR4能够结合于β2GPⅠ-Affi-Gel柱;Anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达TLR4、MyD88、MD-2显著升高(P<0.05);紫杉醇(1μmol/L)能够抑制anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应。结论:TLR4及相关信号分子在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF中具有重要作用。 展开更多

关键词 抗磷脂综合征 anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ Toll受体4 髓样分化蛋白-2 髓样分化因子88 组织因子

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性别差异对脓毒症大鼠肝脏Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的影响 被引量：7

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作者 杜晓辉 李荣 +3 位作者 徐迎新 姚咏明 申传安 尹会男 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期552-553,共2页

目的探讨性别差异对脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白- 2(MD-2)基因表达的影响。方法以脂多糖(LPS)按5 mg/kg体重由大鼠腹腔注射制作脓毒症动物模型,注射后2 h留取肝脏组织检测TLR4、MD-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)... 目的探讨性别差异对脓毒症大鼠肝脏组织Toll样受体4(TLR4)和髓样分化蛋白- 2(MD-2)基因表达的影响。方法以脂多糖(LPS)按5 mg/kg体重由大鼠腹腔注射制作脓毒症动物模型,注射后2 h留取肝脏组织检测TLR4、MD-2和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达,同时测定各组大鼠血浆中丙氨酸氨基转移酶(ALT)及雌二醇含量。结果正常雌雄性大鼠肝脏组织均可表达少量TLR4、MD-2、TNF-α基因,其中雌性组分别为0．175±0．034、0．211±0．044、0．201±0．068; 雄性组分别为0．205±0．061、0．243±0．049、0．243±0．063,两组数据差异无统计学意义(P> 0．05),但LPS刺激后雌性大鼠肝脏组织上述指标分别为0．615±0．089、0．708±0．181、0．730± 0．118,血浆中ALT含量为(81．07±10．72)U／L;雄性组分别为0．723±0．091、1．123±0．272、 0．881±0．156,ALT含量为(106．39±14．21)U／L,雌性组各项指标均明显低于雄性大鼠(P< 0．05)。相关分析表明雌性及雄性脓毒症大鼠肝脏组织TLR4及TNF-α基因表达与相应性别大鼠血浆中雌二醇含量呈显著负相关(P<0．05)。结论 LPS刺激后大鼠肝脏组织TLR4、MD-2及 TNF-α基因表达存在性别差异,内源性雌激素的作用可能导致雌性脓毒症大鼠肝脏组织损伤较雄性轻。 展开更多

关键词 TOLL样受体4 髓样分化蛋白-2 脓毒症 肝脏 基因表达

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脓毒症大鼠心肌Toll样受体4和髓样分化蛋白-2基因表达的变化和意义 被引量：7

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作者 杜晓辉 李荣 +3 位作者 徐迎新 姚咏明 申传安 尹会男 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期312-313,共2页

目的探讨脓毒症大鼠心肌组织内毒素信号转导复合受体Toll样受体4(TLR4)／髓样分化蛋白-2(MD-2)基因表达的变化情况,研究其与心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的关系。方法采用腹腔注射5 mg／kg体重内毒素(LPS)制作大鼠脓毒症模... 目的探讨脓毒症大鼠心肌组织内毒素信号转导复合受体Toll样受体4(TLR4)／髓样分化蛋白-2(MD-2)基因表达的变化情况,研究其与心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)基因表达的关系。方法采用腹腔注射5 mg／kg体重内毒素(LPS)制作大鼠脓毒症模型。动物分为正常对照组(10只),内毒素注射后1、2、6 h组(各10只),利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测心肌组织TLR4／MD-2以及TNF-α的基因表达。结果LPS注射后1 h,TLR4／MD-2及TNF-α基因表达开始升高,2 h达高峰,6 h逐渐下降,各时间点的表达均显著高于对照组(P<0．01)。相关分析表明,心肌TLR4／MD-2基因表达分别与TNF-α基因表达呈显著正相关(P<0．05)。结论LPS 可上调心肌组织TLR4／MD-2基因表达并诱导早期炎症细胞因子TNF-α基因表达。TLR4识别 LPS信号是以TLR4／MD-2复合受体的形式完成的,而且在识别过程中,MD-2是TLR4必需的作用分子。 展开更多

关键词 TOLL样受体4 髓样分化蛋白-2 脓毒症 基因表达

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